專利名稱：快速檢測美沙酮的膠體金試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種利用膠體金免疫分析方法來檢測美沙酮(MTD)的試紙。
背景技術(shù)：
美沙酮，又作美散痛、非那痛、阿米酮，是一種人工合成的麻醉藥品。其鹽酸鹽為無色或白色的結(jié)晶形粉末，無嗅、味苦，溶解于水，常見劑型為膠囊，口服使用。美沙酮在臨床上用作鎮(zhèn)痛麻醉劑，止痛效果略強(qiáng)于嗎啡，毒性、副作用較小，成癮性也比嗎啡小。
美沙酮是阿片受體激動劑，屬麻醉性鎮(zhèn)痛藥，第二次世界大戰(zhàn)期間由德國化學(xué)家最先合成。美沙酮屬麻醉性鎮(zhèn)痛藥，因而能成癮，具有生理依賴性、心理依賴性和耐受性。因此美沙酮要合理使用，不能濫用，否則能導(dǎo)致海洛因一樣的后果。美沙酮也是吸毒者追逐的對象，因此對其必須要嚴(yán)格管理，以免流失成為毒品。美沙酮已被國家和國際禁毒公約列入麻醉藥品的范圍中進(jìn)行嚴(yán)格管制。
目前，對美沙酮(MTD)快速檢測的方法和儀器較多，主要是依靠氣相色譜(GS)、高效液相色譜(HPLC)、質(zhì)譜(MS)和毛細(xì)管電泳等方法進(jìn)行檢測，但存在儀器昂貴、檢測時(shí)間太長，并且需要專業(yè)的技術(shù)人員進(jìn)行操作，因此急需一種能快速、準(zhǔn)確、方便的檢測方法。
膠體金試紙的原理是利用抗原抗體的特異結(jié)合反應(yīng)和免疫層析技術(shù)，利用特定的顯色反應(yīng)在試紙上準(zhǔn)確的顯示測試的結(jié)果，具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，精確度高，操作簡單，檢測快速準(zhǔn)確的特點(diǎn)，無須復(fù)雜的設(shè)備。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供了一種利用膠體金免疫分析方法來檢測美沙酮(MTD)的試紙。
為了達(dá)到所述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的在美沙酮(MTD)檢測試紙底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條美沙酮(MTD)合成免疫原試驗(yàn)和一條抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水層，另一端端頭為玻璃纖維樣品層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水層和抗美沙酮(MTD)單抗金標(biāo)墊相互交疊連接，在抗美沙酮(MTD)單抗金標(biāo)墊上壓有玻璃纖維樣品層。
把美沙酮(MTD)檢測試紙的樣品層放入被檢測尿液中(液面不得超過MAX線)由于毛細(xì)管作用樣品將沿著試紙條向吸水層端移動，當(dāng)移動至抗美沙酮(MTD)單抗金標(biāo)墊時(shí)，樣品中的美沙酮(MTD)與抗美沙酮(MTD)金標(biāo)探針發(fā)生特異反應(yīng)，當(dāng)移動至固定有美沙酮(MTD)合成免疫原試驗(yàn)時(shí)，由于抗美沙酮(MTD)單抗金標(biāo)墊中的抗體會與樣品中美沙酮(MTD)結(jié)合而失去其與美沙酮(MTD)合成免疫原結(jié)合位點(diǎn)，因此其膠體金不能滯留于試驗(yàn)上；相反，如果樣品中沒有與抗美沙酮(MTD)單抗金標(biāo)墊中的抗體結(jié)合的美沙酮(MTD)，抗美沙酮(MTD)單抗金標(biāo)探針就會與試驗(yàn)上的美沙酮(MTD)合成免疫原發(fā)生特異結(jié)合，使膠體金滯留于試驗(yàn)上，這就是免疫競爭法原理。所以試驗(yàn)的顏色深淺與樣品中美沙酮(MTD)含量高低成反比。設(shè)定界限值為300ng/ml，出現(xiàn)兩條紅線代表尿樣中MTD低于300ng/ml，為陰性；出現(xiàn)一條紅線表示尿樣中MTD超過界限值300ng/ml，為陽性。
當(dāng)移動至抗鼠多克隆抗體控制線時(shí)，無論樣品中美沙酮(MTD)含量多少，金標(biāo)探針都會與已包被在硝酸纖維素膜上的鼠IgG結(jié)合滯留，使控制線顯示紅色。因此控制線無色帶產(chǎn)生則代表操作有誤(檢測時(shí)，樣品液面超過MAX線)或試紙已經(jīng)過期。
在用試紙檢測尿液后，將其試驗(yàn)與檢測色標(biāo)進(jìn)行比色，按顏色深淺判斷為陽性，可疑或陰性，進(jìn)而確定所測尿液中美沙酮(MTD)含量是否超標(biāo)。
由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明所提供的檢測美沙酮(MTD)的試紙及其檢測方法具有這樣的有益效果，即特異性強(qiáng)，靈敏度高，易儲存，無須專門技術(shù)人員操作，不需要儀器設(shè)備，而且結(jié)果易讀。


圖一為美沙酮(MTD)檢測試紙的主視結(jié)構(gòu)圖。
圖二為美沙酮(MTD)檢測試紙的俯視剖視結(jié)構(gòu)圖。
圖三為美沙酮(MTD)檢測試紙應(yīng)用于測試時(shí)顯示為陽性結(jié)果圖。
圖四為美沙酮(MTD)檢測試紙應(yīng)用于測試時(shí)顯示為陰性結(jié)果圖。
具體實(shí)施方式
1.應(yīng)用活化脂法，將半抗原美沙酮(MTD)結(jié)合牛血清白蛋白(BSA)制備美沙酮(MTD)合成免疫原。
2.抗美沙酮(MTD)單克隆抗體的制備。
(1)將制備的美沙酮(MTD)合成免疫原免疫小鼠。
(2)提取小鼠腹水，分離純化以得到抗美沙酮(MTD)單克隆抗體。
3.膠體金的制備及與抗美沙酮(MTD)單克隆抗體的結(jié)合。
(1)10％氯化金(0.5ml)+10％檸檬酸三鈉(0.75ml)+無離子水(500ml)→膠體金。
(2)膠體金500ml+0.1M磷酸緩沖液pH7.4(50ml)+抗美沙酮(MTD)單克隆抗體抗美沙酮(MTD)單抗膠體金。
(3)抗美沙酮(MTD)單抗膠體金+吸水紙→金標(biāo)記抗體吸附吸水紙上備用。
4.選擇硝酸纖維素膜做為底物覆著處，利用毛細(xì)管原理使膠體金朝向底物處移動。
5.特種制膜機(jī)制膜機(jī)器特制，利用電腦控制傳動速度，保證每單位膜上包被的抗體量相等。
控制線選用羊抗鼠IgG，濃度2-10mg/ml試驗(yàn)選用美沙酮(MTD)合成免疫原，濃度2-10mg/ml6.組合(1)塑料條+薄膜+膠體金墊(2)切條7.使用方法(1)除去外包裝，取出試劑條。將試劑條插入尿樣中，尿液界面物超過紙條上的“Max”線。如為試劑盒，則將尿液滴入樣品孔中。
(2)15秒后取出試紙條或繼續(xù)插在尿液中，5分鐘時(shí)觀察結(jié)果；如為試劑盒，則在5分鐘后直接在觀察孔中觀察結(jié)果。
(3)結(jié)果判斷僅在控制區(qū)出現(xiàn)一條紅色線為陽性；如在檢測區(qū)及控制區(qū)出現(xiàn)兩條紅色線，則為陰性?？刂茀^(qū)未出現(xiàn)紅色線，表面試紙無效。
8.注意事項(xiàng)(1)僅供定性篩檢。
(2)稀釋及不潔掙的尿樣或操作不當(dāng)，均可產(chǎn)生錯誤結(jié)果。
(3)密封保存，在有效期12個(gè)月內(nèi)使用。
權(quán)利要求1.一種快速檢測美沙酮的膠體金試紙，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜(2)、美沙酮單抗金標(biāo)墊(5)、玻璃纖維樣品吸液層(6)組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗(yàn)線(4)和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線(3)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測美沙酮的膠體金試紙，其特征在于控制線是由羊抗鼠多克隆抗體包被制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測美沙酮的膠體金試紙，其特征在于試驗(yàn)線是由美沙酮合成免疫原包被制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測美沙酮的膠體金試紙，其特征在于金標(biāo)墊是由美沙酮單克隆抗體作為膠體金標(biāo)記。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于吸水紙用雙層吸水紙。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種快速檢測美沙酮(MTD)的試紙，屬于膠體金免疫檢測領(lǐng)域。試紙是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、單抗金標(biāo)墊、玻璃纖維樣品吸液層組成，是一種用于檢測美沙酮(MTD)的試紙。底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有美沙酮(MTD)合成免疫原試驗(yàn)線和一條多克隆抗體控制線，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層，通過膠體金免疫競爭方法制成試紙。其原理是利用抗原抗體的特異結(jié)合反應(yīng)和免疫層析技術(shù)，在試紙上出現(xiàn)特定的顯色結(jié)果。具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，精確度高，操作簡單，檢測快速準(zhǔn)確的特點(diǎn)，無須復(fù)雜的設(shè)備。
文檔編號G01N33/544GK2914089SQ20062000430
公開日2007年6月20日 申請日期2006年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月22日
發(fā)明者萬志靜, 萬志強(qiáng) 申請人:萬華普曼生物工程有限公司