專利名稱：一種檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型屬于病毒檢測的技術(shù)領(lǐng)域，更詳細(xì)說涉及一種檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒。
背景技術(shù)：
高致病性禽流感是高致病性禽流感病毒所引起的禽類烈性傳染病，發(fā)病急、傳播快、致死率高，對養(yǎng)殖業(yè)可造成致命性打擊，高致病性禽流感病毒的亞型通常為H5和H7，2004年發(fā)生于中國和亞洲其他國家和地區(qū)的禽流感病毒為H/N1亞型，由于該亞型不僅對亞洲養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，而且在泰國、越南還造成了人的死亡，因而又具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義，在禽流感控制環(huán)節(jié)中最重要的是快速診斷，及時劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)并采取封鎖等控制措施，防止疫情擴(kuò)散，因此建立一種靈敏、快速的診斷方法具有重要意義。
禽流感病毒檢測目前主要采用的技術(shù)方法有HA、HI、ELISA、瓊脂擴(kuò)散試驗、免疫熒光技術(shù)、RT-PCR、熒光RT-PCR以及病毒的分離鑒定等。比較快速準(zhǔn)確的技術(shù)是ELISA和熒光RT-PCR，但這兩種技術(shù)都需要特殊的儀器設(shè)備，并且檢測時間在2小時以上，檢測價格較貴。所有這些技術(shù)方法都不能在基層生產(chǎn)場、檢疫站和臨床等現(xiàn)場使用，必須有專門的實(shí)驗室；免疫金膠體層析技術(shù)雖然是一種較成熟的技術(shù)，但對不同的抗原抗體系統(tǒng)的應(yīng)用有差異，包括原料來源、試劑配制、生產(chǎn)工藝等都不同，需要新的設(shè)計和試驗。

發(fā)明內(nèi)容
本實(shí)用新型的目的是根據(jù)免疫金膠體層析技術(shù)特點(diǎn)和禽流感抗原抗體系統(tǒng)特點(diǎn)，設(shè)計一種檢測雞血液中禽流感病毒抗體的裝置為達(dá)到本實(shí)用新型的目的采用如下技術(shù)方案一種檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒，包括盒底、試劑條、盒蓋，其特征是試劑條由在PVC板上用不干膠且相互之間按次序首尾搭接固定有A，B，E，D四部分吸水材料A，在吸水材料A一側(cè)設(shè)置由含有抗雞IgG抗體標(biāo)記的金膠體顆粒和鼠IgG標(biāo)記的金膠體顆粒的液體物質(zhì)干燥脫水而成的膠體金墊B，在膠體金墊B一側(cè)設(shè)置硝酸纖維素膜區(qū)E，硝酸纖維素膜區(qū)E其中包被有禽流感病毒特異的抗原物質(zhì)(T線)和用于實(shí)驗對照用的羊抗鼠IgG抗體(C線)，在硝酸纖維素膜區(qū)E一側(cè)設(shè)置吸水材料D組成；試劑條放入盒底上的支撐肋上，試劑條的吸水材料A對應(yīng)盒蓋上的S，盒蓋上的凸柱嵌入盒底上的凸起孔中，在盒蓋上面印有C、T、S字母，C代表對照用的羊抗鼠IgG抗體的質(zhì)控線；T代表包被有禽流感病毒特異的抗原物質(zhì)的反應(yīng)線；S代表與試劑條的玻璃纖維膜區(qū)對齊用于指示加樣位置；C/T窗口用于顯示檢測結(jié)果構(gòu)成。
所述的檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒，其特征在于，試劑條吸水材料A可選擇玻璃纖維膜、無紡布或其它類似吸水材料；吸水材料D可選擇吸水紙、無紡布或其它類似吸水材料。
所述的檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒，其特征在于，盒蓋是采用塑料注塑一體形成的，盒蓋的長、寬、高以試劑條的長、寬、高配合設(shè)置，在盒蓋位于其中心線左側(cè)上設(shè)置長形孔為反應(yīng)區(qū)孔，在反應(yīng)區(qū)孔一側(cè)設(shè)置圓形孔為加樣孔，在反應(yīng)區(qū)孔、加樣孔兩側(cè)對應(yīng)有間隔地設(shè)置多個凸柱，以便與盒底上的凸起孔配合連接，在盒蓋上反應(yīng)區(qū)孔上面印有C、T字母，加樣孔上面印有S字母，C代表對照用的羊抗鼠IgG抗體的質(zhì)控線；T代表包被有禽流感病毒特異的抗原物質(zhì)的反應(yīng)線；S代表與試劑條的A區(qū)對齊用于指示加樣位置；C/T窗口用于顯示檢測結(jié)果；盒底是采用塑料注塑一體形成的，盒底的長、寬、高以試劑條的長、寬、高配合設(shè)置，在盒底位于其中心線上設(shè)置類似“[”形狀的凸起框為限位板10，限位板10的寬度以試劑條的寬度為限，限位板10的凸起框以高于支撐肋低于凸起孔為限，在限位板10一側(cè)設(shè)置多條低于限位板10能滿足于可放置試劑條的長、寬、高的支撐肋，在支撐肋另一端的兩側(cè)設(shè)置限位板8，限位板8的高與限位板10一樣高，長度有一段即可，也可設(shè)置與限位板10連通的形式，在限位板8兩側(cè)對應(yīng)有間隔地設(shè)置多個凸起孔，以便與盒蓋上的凸柱配合連接試劑盒的組裝將檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑條放入盒底的支撐肋上，盒蓋上S孔與試劑條的A區(qū)對齊，然后再將盒蓋上的凸柱插入盒底上的凸起孔中，即為完成試劑盒的組裝。
所述的檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒，其特征在于，樣品稀釋液是由不影響裝置反應(yīng)，但能很好的溶解樣本和膠體金的緩沖液，比如PBS，生理鹽水等裝入塑料滴瓶中。
此試劑盒不需要任何儀器設(shè)備，簡便快速；適用于現(xiàn)場快速測定禽流感疫情。反應(yīng)即靈敏又反應(yīng)完全、可靠。


圖1是本實(shí)用新型的檢測血液抗體試劑條的結(jié)構(gòu)示意圖。
圖2是本實(shí)用新型的檢測血液抗體試劑盒的盒蓋俯視圖。
圖3是本實(shí)用新型的檢測血液抗體試劑盒的陰性反應(yīng)狀態(tài)示意圖。
圖4是本實(shí)用新型的檢測血液抗體試劑盒的陽性反應(yīng)狀態(tài)示意圖。
圖5是本實(shí)用新型的檢測血液抗體試劑盒的反應(yīng)無效狀態(tài)示意圖。
圖6是本實(shí)用新型的檢測血液抗體試劑盒的盒蓋仰視圖。
圖7是本實(shí)用新型的檢測血液抗體試劑盒的盒底俯視圖。
1盒蓋 2加樣孔3凸柱 4反應(yīng)區(qū)孔5盒底 6凸起孔7吸水材料槽8限位板9支撐肋10限位板C/T檢測顯示區(qū) S加樣孔C質(zhì)控線T反應(yīng)線A樣品加入?yún)^(qū)B膠體金墊E膜區(qū) D吸水材料具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖詳細(xì)說明本實(shí)用新型的檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒結(jié)構(gòu)。如圖1-圖7所示，本實(shí)用新型的檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒是由盒蓋1、盒底5、抗體膠體金快速試劑條、樣品稀釋液構(gòu)成。盒蓋1是采用塑料注塑一體形成的，盒蓋1的長、寬、高以試劑條的長、寬、高配合設(shè)置，在盒蓋1位于其中心線左側(cè)上設(shè)置長形孔為反應(yīng)區(qū)孔4，在反應(yīng)區(qū)孔4一側(cè)設(shè)置圓形孔為加樣孔2，在反應(yīng)區(qū)孔4、加樣孔2兩側(cè)對應(yīng)有間隔地設(shè)置多個凸柱3，以便與盒底5上的凸起孔6配合連接，在盒蓋1上反應(yīng)區(qū)孔4上面印有C、T、S字母，C代表對照用的羊抗鼠IgG抗體的質(zhì)控線；T代表包被有禽流感病毒特異的抗原物質(zhì)的反應(yīng)線；S代表與試劑條的A區(qū)對齊用于指示加樣位置；C/T窗口用于顯示檢測結(jié)果。
盒底5是采用塑料注塑一體形成的，盒底5的長、寬、高以試劑條的長、寬、高配合設(shè)置，在盒底5位于其中心線上設(shè)置類似“[”形狀的凸起框為限位板10，限位板10的寬度以試劑條的寬度為限，限位板10的凸起框以高于支撐肋9低于凸起孔6為限，在限位板10一側(cè)設(shè)置多條低于限位板10能滿足于可放置試劑條的長、寬、高的支撐肋9，在支撐肋9另一端的兩側(cè)設(shè)置限位板8，限位板8的高與限位板10一樣高，長度有一段即可(也可設(shè)置與限位板10連通的形式)，在限位板8兩側(cè)對應(yīng)有間隔地設(shè)置多個凸起孔6，以便與盒蓋1上的凸柱3配合連接。
試劑條的結(jié)構(gòu)如圖1所示，由A，B，E，D四部分組成，樣品加入?yún)^(qū)A可選擇玻璃纖維膜、無紡布或其它類似吸水材料，本實(shí)施例由玻璃纖維膜構(gòu)成。膠體金墊B由含有抗雞IgG抗體標(biāo)記的金膠體顆粒和鼠IgG標(biāo)記的金膠體顆粒的液體物質(zhì)干燥脫水而成。膜區(qū)E為硝酸纖維素膜區(qū)，其中包被有禽流感病毒特異的抗原物質(zhì)(T線)和用于實(shí)驗對照用的羊抗鼠IgG抗體(C線)。D為吸水材料區(qū)，本實(shí)施例由吸水紙構(gòu)成。各部分用不干膠固定在PVC板上，且相互之間按次序首尾搭接，以保證液體在虹吸作用下從A流向D。
試劑盒的組裝將檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑條放入盒底5的支撐肋9上，S孔與試劑條的A區(qū)對齊，然后再將盒蓋1上的凸柱3插入盒底5上的凸起孔6中，即為完成試劑盒的組裝。
樣品稀釋液是由不影響裝置反應(yīng)，但能很好的溶解樣本和膠體金的緩沖液比如PBS，生理鹽水等用塑料滴瓶裝。
實(shí)施例檢測過程通過S孔向A區(qū)加入10μl的雞血清、血漿或全血液，再滴加50～100μl稀釋液進(jìn)入S孔。
稀釋液將樣品稀釋后首先流向B區(qū)，與其中的金膠體等物質(zhì)溶解，然后流向E區(qū)的硝酸纖維薄膜。樣品中的雞IgG將首先與金膠體標(biāo)記的抗雞IgG形成復(fù)合物雞IgG-抗雞IgG-金膠體顆粒。
當(dāng)以上復(fù)合物液體流經(jīng)膜區(qū)時，如果雞IgG中有特異的抗禽流感病毒IgG抗體，則會在T線處形成紅色的沉淀線，復(fù)合物液體繼續(xù)流向T線，則其中的鼠IgG標(biāo)記的金膠體會與T線中的羊抗鼠IgG抗體結(jié)合而形成紅色沉淀線。
由于雞感染禽流感病毒后，短期即會在血液中生成抗禽流感病毒抗體，因而該裝置可方便快速地檢測雞是否感染禽流感病毒。
抗體快速檢測板采用高度特異性的抗體抗原反應(yīng)及免疫層析技術(shù)定性檢測及血清中是否含有禽流感抗體。檢測時，將10μl雞血或血清加入檢測板加樣孔(S)中，再加一滴稀釋液，樣本中的禽流感抗體與標(biāo)記的羊抗雞膠體金相結(jié)合，在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。在反應(yīng)區(qū)(T)與包被在膜上的特異性禽流感抗原反應(yīng)，呈現(xiàn)出一條紫紅色反應(yīng)線(T)。反應(yīng)區(qū)同時包被有一條質(zhì)控線(C)作為對照。故當(dāng)出現(xiàn)一條紫紅色質(zhì)控線(C)和一條反應(yīng)線T時該檢測結(jié)果為陽性。如樣本中無禽流感抗體，僅出現(xiàn)一條質(zhì)控線(C)，此檢測結(jié)果為陰性。
此方法不需要任何儀器設(shè)備，簡便快速；適用于現(xiàn)場快速測定禽流感疫情，反應(yīng)即靈敏又反應(yīng)完全、可靠。
權(quán)利要求1.一種檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒，包括盒底、試劑條、盒蓋，其特征是試劑條由在PVC板上用不干膠且相互之間按次序首尾搭接固定有(A)，(B)，(E)，(D)四部分吸水材料(A)，在吸水材料(A)一側(cè)設(shè)置由含有抗雞IgG抗體標(biāo)記的金膠體顆粒和鼠IgG標(biāo)記的金膠體顆粒的液體物質(zhì)干燥脫水而成的膠體金墊(B)，在膠體金墊(B)一側(cè)設(shè)置硝酸纖維素膜區(qū)(E)，硝酸纖維素膜區(qū)(E)其中包被有禽流感病毒特異的抗原物質(zhì)(T線)和用于實(shí)驗對照用的羊抗鼠IgG抗體(C線)，在硝酸纖維素膜區(qū)(E)一側(cè)設(shè)置吸水材料(D)組成；試劑條放入盒底上的支撐肋上，試劑條的吸水材料(A)對應(yīng)盒蓋上的(S)，盒蓋上的凸柱嵌入盒底上的凸起孔中，在盒蓋上面印有(C)、(T)、(S)字母，(C)代表對照用的羊抗鼠IgG抗體的質(zhì)控線；(T)代表包被有禽流感病毒特異的抗原物質(zhì)的反應(yīng)線；(S)代表與試劑條的玻璃纖維膜區(qū)對齊用于指示加樣位置；(C/T)窗口用于顯示檢測結(jié)果構(gòu)成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒，其特征在于，試劑條吸水材料(A)可選擇玻璃纖維膜、無紡布或其它類似吸水材料；吸水材料(D)可選擇吸水紙、無紡布或其它類似吸水材料。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒，其特征在于，盒蓋是采用塑料注塑一體形成的，盒蓋的長、寬、高以試劑條的長、寬、高配合設(shè)置，在盒蓋位于其中心線左側(cè)上設(shè)置長形孔為反應(yīng)區(qū)孔，在反應(yīng)區(qū)孔一側(cè)設(shè)置圓形孔為加樣孔，在反應(yīng)區(qū)孔、加樣孔兩側(cè)對應(yīng)有間隔地設(shè)置多個凸柱，以便與盒底上的凸起孔配合連接，在盒蓋上反應(yīng)區(qū)孔上面印有C、T字母，加樣孔上面印有S字母，C代表對照用的羊抗鼠IgG抗體的質(zhì)控線；T代表包被有禽流感病毒特異的抗原物質(zhì)的反應(yīng)線；S代表與試劑條的A區(qū)對齊用于指示加樣位置；C/T窗口用于顯示檢測結(jié)果；盒底是采用塑料注塑一體形成的，盒底的長、寬、高以試劑條的長、寬、高配合設(shè)置，在盒底位于其中心線上設(shè)置類似“[”形狀的凸起框為限位板(10)，限位板(10)的寬度以試劑條的寬度為限，限位板(10)的凸起框以高于支撐肋低于凸起孔為限，在限位板(10)一側(cè)設(shè)置多條低于限位板(10)能滿足于可放置試劑條的長、寬、高的支撐肋，在支撐肋另一端的兩側(cè)設(shè)置限位板(8)，限位板(8)的高與限位板(10)一樣高，長度有一段即可，也可設(shè)置與限位板(10)連通的形式，在限位板(8)兩側(cè)對應(yīng)有間隔地設(shè)置多個凸起孔，以便與盒蓋上的凸柱配合連接試劑盒的組裝將檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑條放入盒底的支撐肋上，盒蓋上(S)孔與試劑條的(A)區(qū)對齊，然后再將盒蓋上的凸柱插入盒底上的凸起孔中，即為完成試劑盒的組裝。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種檢測雞血液中禽流感病毒抗體的試劑盒，其試劑條由在PVC板上用不干膠按次序首尾搭接固定有四部分吸水材料(A)，在吸水材料(A)一側(cè)設(shè)置由含有抗雞IgG抗體標(biāo)記的金膠體顆粒和鼠IgG標(biāo)記的金膠體顆粒的液體物質(zhì)干燥脫水而成的膠體金墊(B)，在膠體金墊(B)一側(cè)設(shè)置硝酸纖維素膜區(qū)(E)，硝酸纖維素膜區(qū)(E)其中包被有禽流感病毒特異的抗原物質(zhì)和用于實(shí)驗對照用的羊抗鼠IgG抗體，在硝酸纖維素膜區(qū)(E)一側(cè)設(shè)置吸水材料(D)組成；試劑條放入盒底上的支撐肋上，盒蓋上的凸柱嵌入盒底上的凸起孔中構(gòu)成，此試劑盒簡便快速；適用于現(xiàn)場快速測定禽流感疫情，反應(yīng)即靈敏又反應(yīng)完全、可靠。
文檔編號G01N33/544GK2862033SQ20062002517
公開日2007年1月24日 申請日期2006年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月19日
發(fā)明者李洲, 許誠, 劉輝 申請人:天津中新科炬生物制藥有限公司