專利名稱：：用于檢測(cè)抗豬繁殖呼吸綜合征病毒抗體的肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及采用PRRSV多肽檢測(cè)和定量豬繁殖呼吸綜合征病毒(PRRSV)抗體和抗體片段的方法和組合物。
背景技術(shù)：
：豬繁殖和呼吸綜合征病毒(PRRSV)屬于動(dòng)脈炎病毒屬(RNA包膜病毒)，它引起豬繁殖和呼吸綜合征(PRRS)。該病毒可在成年豬中引起較多的繁殖問(wèn)題，導(dǎo)致流產(chǎn)。在生長(zhǎng)豬中，該癥狀包括死亡率增加、食欲減退、發(fā)熱、呼吸問(wèn)題、肺炎、繼發(fā)細(xì)菌感染以及萎縮性鼻炎增加。在新生豬中，該病毒可導(dǎo)致呼吸窘迫、生長(zhǎng)停滯以及繼發(fā)細(xì)菌感染增加。該病毒主要在豬之間傳播。該病毒也可通過(guò)感染的糞^更、尿和乳汁傳至缺乏初乳抗體的幼豬。此外，通過(guò)針頭、昆蟲(chóng)和空氣的傳播也是可能的?，F(xiàn)有技術(shù)中需要檢測(cè)PRRSV的方法。PRRS抗體檢測(cè)試劑盒例如HerdChekPRRSAntibody2XRTestKit(IDEXXLabs,Inc.,Westbrook,ME)是可購(gòu)得的。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了物質(zhì)組合物，包含基本上由SEQIDNO:l或SEQIDNO:12組成的純化多肽。所述純化多肽還可在任一端包含一個(gè)或多個(gè)不與PRRSVORF7天然鄰接的氨基酸。所述純化多肽可為多聚體形式。所述組合物還可包含載體。所述純化多肽可被連接到指示劑、氨基酸間隔物、氨基酸接頭、信號(hào)序列、終止轉(zhuǎn)移序列、跨膜結(jié)構(gòu)域、蛋白純化配體或其組合。所述純化多肽可基本上由SEQIDNO:2或SEQIDNO:13以及一種或多種不與SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18、或SEQIDNO:13天然鄰接的多肽組成。所述一種或多種不與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18、或SEQIDNO:13天然鄰接的多肽可為非PRRSV多肽。本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了純化的融合多肽，所述融合多肽包含基本上由SEQIDNO:l或SEQIDNO:18以及一種或多種不與SEQIDNO:l或SEQIDNO:18天然鄰接的多肽組成的多肽。所述一種或多種不與SEQIDNO:l或SEQIDNO:18天然鄰^妻的多肽可為非PRRSV多肽。SEQIDNO:l或SEQIDNO:18可為多聚體形式。所述純化的融合多肽可包含指示劑、氨基酸間隔物、氨基酸接頭、信號(hào)序列、終止轉(zhuǎn)移序列、跨膜結(jié)構(gòu)域、蛋白純化配體或其組合。所述純化多肽可基本上由SEQIDNO:2或SEQIDNO:13組成。本發(fā)明的又一實(shí)施方案提供了編碼本發(fā)明所述純化多肽和純化的融合多肽的純化的多核苷酸。本發(fā)明的再一實(shí)施方案提供了檢測(cè)特異性結(jié)合繁殖呼吸綜合征病毒(PRRSV)或PRRSV多肽的抗體的方法。所述方法包括在允許形成多肽/抗體復(fù)合物的條件下使基本上由SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18、SEQIDNO:13或其組合組成的純化多肽與懷疑包含有PRRSV特異性抗體的測(cè)試樣品接觸，并且檢測(cè)多肽/抗體復(fù)合物。檢測(cè)到多肽/抗體復(fù)合物表明PRRSV特異性抗體存在于所述測(cè)試樣品中，而不存在多肽/抗體復(fù)合物則表明PRRSV特異性抗體不存在于所述測(cè)試樣品中。所述方法還包括在^^測(cè)所述多肽/抗體復(fù)合物之前使它們與指示劑接觸。所述抗體可為抗體片段?？纱_定所述抗體在測(cè)試樣品中的量。所述多肽可被附著到基質(zhì)。所述多肽可為多聚體形式。所述多肽可為包含SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQIDNO:13或其組合以及一種或多種不與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQIDNO:]3天然鄰接的多肽的融合蛋白。所述一種或多種不與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQIDNO:13天然鄰4妄的多肽可為非PRRSV多肽。所述測(cè)試樣品可包括來(lái)自哺乳動(dòng)物的生物樣品。所述方法可包括選自逆流層析結(jié)合測(cè)定、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、放射免疫測(cè)定、紅細(xì)胞凝集測(cè)定、western印跡測(cè)定、熒光極化免疫測(cè)定以及間接的免疫熒光測(cè)定的測(cè)定。本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了在哺乳動(dòng)物中檢測(cè)PRRSV感染的方法。所述方法包括從懷疑具有PRRSV感染的哺乳動(dòng)物獲得生物樣品；在允許多肽/抗體復(fù)合物形成的條件下使基本上由SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQIDNO:13或其組合組成的純化多肽與所述生物樣品接觸；以及檢測(cè)多肽/抗體復(fù)合物。檢測(cè)到多肽/抗體復(fù)合物表明所述哺乳動(dòng)物具有PRSSV感染，而不存在多肽/抗體復(fù)合物表明所述哺乳動(dòng)物不具有PRSSV感染。所述方法還包括在檢測(cè)之前使所述多肽/抗體復(fù)合物與產(chǎn)生可測(cè)量信號(hào)的指示劑接觸。所述多肽可為基本上由SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQIDNO:13或其組合以及一種或多種不與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQIDNO:13天然鄰4妄的多肽組成的融合蛋白。本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了特異性結(jié)合PRRSV多肽至少一個(gè)表位的抗體，其中所述多肽為SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQIDNO:13。所述抗體可單克隆抗體、多克隆抗體或抗體片段。本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了檢測(cè)樣品中PRRSV多肽或PRRSV的方法。所述方法包括在允許形成多肽/抗體復(fù)合物的條件下，使一種或多種特異性結(jié)合PRRSV多肽至少一個(gè)表位的抗體與所述樣品接觸，其中所述多肽包括SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQIDNO:13;檢測(cè)多肽/抗體復(fù)合物。檢測(cè)到多肽/抗體復(fù)合物表明PRRSV或PRRSV多肽存在于所述樣品中，而不存在多肽/抗體復(fù)合物表明PRRSV或PRRSV多肽不存在于所述樣品中。所述一種或多種抗體為單克隆抗體、多克隆抗體或抗體片段。所述樣品可為血清、全血、痰、乳、肉汁、肺灌洗液、肺組織、扁桃體組織或淋巴結(jié)組織。本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了在檢測(cè)PRRSVORF7特異性PRRSV抗體的診斷測(cè)定中減少假陽(yáng)性出現(xiàn)率的方法。所述方法包括在所述診斷測(cè)定中采用包含約19至約28個(gè)N末端氨基酸缺失的PRRSVORF7多肽作為抗體捕獲抗原。所述PRRSVORF7多肽可為SEQIDNO:1或SEQIDNO:18。所述多肽還可在^壬一端包含一個(gè)或多個(gè)不與PRRSVORF7天然鄰接的氨基酸。因此，本發(fā)明提供了采用多肽可靈敏和特異地檢測(cè)PRRSV抗體和抗體片段的方法和組合物。發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明PRRSV多肽多肽是三個(gè)或更多個(gè)通過(guò)酰胺鍵共價(jià)連接的氨基酸的聚合物。多肽可以是被翻譯后修飾的。純化多肽為這樣的多肽制劑，它基本上無(wú)細(xì)胞物質(zhì)、其它類型的多肽、化學(xué)前體、用于合成該多肽的化學(xué)品或它們的組合?；旧蠠o(wú)細(xì)胞物質(zhì)、培養(yǎng)基、化學(xué)前體、用于合成該多肽的化學(xué)品的多肽制劑含有少于約30%、20%、10%、5%、1%或更少的其它多肽、培養(yǎng)基、化學(xué)前體和/或用在合成中的其它化學(xué)品。因此，純化多肽的純度為約70%、80%、90%、95%、99%或更高。本發(fā)明純化多肽可以為全長(zhǎng)多肽或多肽的片段。表1中比較了PRRSV的三種USORF7毒抹的序列VR-2332(黑體)(美國(guó)專利號(hào)5,998,601)(SEQIDNO:8);ISU-12(下劃線)(SEQIDNO:9);以及US-A(斜體)(SEQIDNO:10)。ypy5n"sTQG一2GGy3o352ssA5A4syssAVspA即0>uu,4.11GG,3D-5一9psAhHPIso扭us說(shuō)油b50>oSSIpsKwyO-GccyorA*5sgEGsso7GGAMyEGVVsspcr1TTNT一^Q3rAppppVVNAo2KsTTsNARhNVVEu3FpFpss,I-oppMMppNAnCI、oPA5sHISH恥；sAMTTRR表2中顯示了這三個(gè)病毒抹的相對(duì)同一性。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>共有序列顯示在SEQIDNO:ll中MPNNXGKQXXEKKGDGQPVNQ;LCQM!LGK工工MQNQSRG.KG40PGKKNK咖PEKPHFPIATEDDVRHHFTPSERQIiCLSSIQ80TAFNQGAGTCTLSDSGRISYTVEFSLPT朋TVRL工RVTAXPSA1235位的X可為N或T。在另一實(shí)施方案中，5位的X可為任何氨基酸。9位的X可為Q或T。在另一實(shí)施方案中，9位的X可為任何氨基酸。IO位的X可為E或K。在另一實(shí)施方案中，]O位的X可為任何氨基酸。ll位的X可為E、R或K。在另一實(shí)施方案中，ll位的X可為任何氨基酸。32位的X可為Q或H。在另一實(shí)施方案中，32位的X可為任何氨基酸。120位的X可為S或P。在另一實(shí)施方案中，120位的X可為任4可氨基酸。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，多肽包含U.S.血清型PKRSVORF7的一部分LCQXLGKIIAXQNQSRGKGPGKKNKKKNPEKPHFPLATEDDVRHHFTPSERQLCLSSIQTAFNQGAGTCTLSDSGRISYTVEFSLPTHHTVRLIRVTAXPSA(SEQIDNO:l).11位的X可為任何氨基酸。在另一實(shí)施方案中，ll位的X可為Q或H。99位的X可為任何氨基酸。在另一實(shí)施方案中，99位的X可為P或S。4位的X可為任何氨基酸。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，多肽包含U.S.血清型PRRSVORF7的一部分和組氨酸標(biāo)簽MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDHPFTGSLCQXLGKHAXQNQSRGKGPGKKNKKKNPEKPHFPLATEDDVRHHFTPSERQLCLSSIQTAFNQGAGTCTLSI)SGRISYTVEFSLPTHHTVRLIRVTAXPSA(SEQIDNO:2).42位的X代表任何氨基酸。在某些實(shí)施方案中，42位的X可為M或I。49位的X代表任何氨基酸。在某些實(shí)施方案中，49位的X代表Q或H。137位的X代表任何氨基酸。在某些實(shí)施方案中，137位的X代表P或S。另一實(shí)施方案提供了N末端截短的PRRSVLelystadORF7多肽。CQLLGAXIKSQRQQPRGGQAKKKKPEKPHFPLAAEDDIRHHLTQTERSLCLQSIQTAFNQGAGTASLSSSGEVSFQVEFMLPVAHTVRLIRVTSTSASQGAS(SEQIDNO:12).7位的X代表任何氨基酸。在某些實(shí)施方案中，7位的X可為M或I。另一實(shí)施方案為CQLLGAXIKSQRQQPRGGQAKKKKPEKPHFPLAAEDDIRHHLTQTERSLCLQSIQTAFNQGAGTASLSSSGEVSFQVEFMLPVAHTVRLIRVTSTSASQGAS(SEQIDNO:18).7位的X可為任何氨基酸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，7位的X為M或I。另一實(shí)施方案提供了帶有His標(biāo)簽的N末端截短的PRRSVLelystadORF7多肽MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDHPFTGSCQLLGAXIKSQRQQPRGGQAKKKKPEKPHFPLAAEDDIRHHLTQTERSLCLQSIQTAFNQGAGTASLSSSGEVSFQVEFMLPVAHTVRLIRVTSTSASQGAS(SEQIDNO:13).45位的X代表任何氨基酸。在某些實(shí)施方案中，45位的X可以為M或I。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:12和/或SEQIDNO:13比包含全長(zhǎng)PRRSVORF7的多肽更易溶解。此外，本發(fā)明的多肽特異性結(jié)合PRRSV特異性抗體。因此，本發(fā)明多肽的基本的和新的特征在于它們比全長(zhǎng)PRRSVORF7更易溶解，在PRRSV檢測(cè)測(cè)定中它們比全長(zhǎng)PRRSVORF7有更好的特異性，以及它們特異性結(jié)合抗PRRSV抗體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供小于全長(zhǎng)PRRSVORF7的多肽。具體地，該P(yáng)RRSVORF7多肽在N末端截短。即，該多肽乂人N末端移除約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、或43個(gè)氨基酸。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，PRRSVORF7多肽從N末端移除了約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31或32個(gè)氨基酸。在其它實(shí)施方案中，PRRSVORP7多肽在N末端移除了約16至約31個(gè)氨基酸；在N末端移除了約17至約30個(gè)氨基酸；在N末端移除了約18至約29個(gè)氨基酸；在N末端移除了約19至約28個(gè)氨基酸；在N末端移除了約20至約27個(gè)氨基酸；或在N末端移除了約21至約26個(gè)氨基酸。如果存在的話，在USPRRSVORF7中出現(xiàn)在約25位和LelystadPRRSV約33位的M可被另一氨基酸所置換。參見(jiàn)，例如SEQIDNO:l和SEQIDN〇.18。本發(fā)明多肽的片段可包含本發(fā)明多肽的約5、10、15、20、30、40、50、60、70、80或更多的氨基酸。變體多肽與顯示在SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13中的多肽序列有至少約80或約90、96、98或99%的同一性，并且也為本發(fā)明的多肽。變體多肽具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸改變或其它小的修飾并保留生物學(xué)活性，即為生物功能等同物。在與相應(yīng)的野生型多肽相比較時(shí)，生物活性等同物具有基本上相同的功能。同一性百分比具有本領(lǐng)域/^認(rèn)的含義，有很多測(cè)定兩個(gè)多肽或多核苦臥復(fù)序歹'J之間同——寸生的方'法。參見(jiàn)，例^口Lesk,Ed.,Cow/wto〃ow"/Mo/ecw/"rBzo/ogy,OxfordUniversityPress,NewYork,(1988);Smith,Ed.,Wo"，/W/7g..//7/owz她.c5Ge/7cwe尸;-o/e加,AcademicPress,NewYork,(1993);Griffin&Griffin,Eds.,Com/^er爿冊(cè)/jas、"、Q/"5"e認(rèn)wceZ)"to,尸aW/,HumanaPress,NewJersey,(1994);vonHemje,5"e《we/ceJwa/jAvz'yM/ecw/arWo/ogy,AcademicPress,(1987);以及Gribskov&Devereux，Eds.,Segwewcev4t7—^'/Vz膨。MStocktonPress,NewYork,(1991)。比對(duì)多核苷酸或多肽的方法在計(jì)算機(jī)程序中系統(tǒng)化，包括GCG程序包(Devereux等人，Wwc.12:387(1984))、BLASTP、BLASTN、FASTA(Atschul等人，丄M/ec.Bw/215:403(1990))、以及采用Smith和Waterman的局部同源性算法的Bestfit程序(Wisconsin序列分析包，Version8forUnix,GeneticsComputerGroup，UniversityResearchPark,575ScienceDrive，Madison,WI53711)。例如，可采用利用FASTA算法的計(jì)算機(jī)程序ALIGN,仿射空位查詢(affmegapsearch)中空位開(kāi)放罰分(gapopenpenalty)為-12,空^f立延伸罰分(gapextensionpenalty)為-2。例如，當(dāng)采用任何序列比對(duì)程序確定特定序列是否與參比序列有約95%同一性時(shí)，設(shè)置參數(shù)以使得在參比多核苷酸的全長(zhǎng)基礎(chǔ)上計(jì)算同一性百分比并且同一性中的空位允許多至參比多核普酸中總核苷酸數(shù)量的5%。通?？赏ㄟ^(guò)如下方式來(lái)鑒別變體以確定其是否為生物學(xué)等同物修飾本發(fā)明多肽序列之一并且評(píng)估修飾的多肽的特性。如果變體在諸如免疫組化測(cè)定、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、放射免疫測(cè)定(RIA)、免疫酶測(cè)定或western印跡測(cè)定的測(cè)定法中與本發(fā)明的多肽基本相同地反應(yīng)，例如具有原始多肽90-110%的活性，則該變體為生物學(xué)等同物。在一個(gè)實(shí)施方案中，該測(cè)定為竟?fàn)帨y(cè)定，其中生物學(xué)上等同的多肽能夠?qū)⒈景l(fā)明的多肽與對(duì)應(yīng)的反應(yīng)性抗原或抗體的結(jié)合減少約80、95、99、或100%。特異結(jié)合對(duì)應(yīng)的野生型多肽的抗體也特異結(jié)合該變體多肽。本發(fā)明的變體多肽可包含約l、2、3、4、5或6個(gè)保守氨基酸置換。保守置換為這樣的置換其中某個(gè)氨基酸由另一具有類似特性的氨基酸所置換，使得肽化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員可預(yù)料該多肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)和親水性基本無(wú)變化。通常，以下的氨基酸組代表了保守改變(l)ala,pro,gly,glu,asp,gin,asn,ser,thr,(2)cys,ser,tyr,thr;(3)val,lie,leu,met,ala,phe;(4)lys,arg，his;以及(5)phe,tyr,tip,his。本發(fā)明的多肽還可包含在翻譯時(shí)或翻譯后指導(dǎo)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移的信號(hào)(或前導(dǎo))序列。該多肽還可包含接頭或其它序列(如多聚His)，以方便合成、純化或鑒定該多肽，或增強(qiáng)該多肽與固體支持物的結(jié)合。例如，多肽可被綴合到免疫球蛋白Fc區(qū)或牛血清白蛋白。多肽可被共價(jià)或非共價(jià)連接到該多肽并非通常天然連接的氨基酸序列。此外，多肽可共價(jià)或非共價(jià)連接到化合物或分子而非氨基酸。例如，多肽可連接到指示劑、氨基酸間隔物、氨基酸接頭、信號(hào)序列、終止轉(zhuǎn)移序列、跨膜結(jié)構(gòu)域、蛋白純化配體或其組合。氨基酸接頭是通常不與本發(fā)明的多肽天然地鄰接結(jié)合的氨基酸序列。氨基酸接頭可包含約1、5、10、20、]00、l，OOO個(gè)或更多的氨基酸。如果需要，多肽可為融合蛋白，它還可含有其它氨基酸序列，例如氨基酸接頭、氨基酸間隔物、信號(hào)序列、TMR終止轉(zhuǎn)移序列、跨膜結(jié)構(gòu)域以及可用于蛋白純化的配體，如谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、組氨酸標(biāo)簽和葡萄球菌蛋白A,或其組合。不止一種本發(fā)明的多肽可存在于融合蛋白中。本發(fā)明的多肽片段可存在于本發(fā)明的融合蛋白中。本發(fā)明的融合蛋白可包含SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13中的一個(gè)或多個(gè)，其片段或其組合。本發(fā)明的多肽可以以多聚體的形式存在。即，多肽可包含SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:12和/或SEQIDNO:13的一個(gè)或多個(gè)拷貝。多聚體多肽可為多抗原肽(MAP)。參見(jiàn)，例如Tarn,J.Immunol.Methods,196:17-32(1996)。本發(fā)明的多肽可包含由與PRRSV有反應(yīng)性的抗體識(shí)別的抗原。該抗原可包含一個(gè)或多個(gè)表位(即抗原決定簇)。表位可為線性表位、順序表位或構(gòu)象表位。本發(fā)明多肽中的表位可用幾種方法鑒別。參見(jiàn)，例如美國(guó)專利4,554,101;Jameson&Wolf,181-186(1988)。例如，本發(fā)明的多肽可被分離和篩選?？赏ㄟ^(guò)蛋白水解切割制備一系列的短肽，它們合起來(lái)跨越整個(gè)多肽序列。例如，從20-mer多肽片段開(kāi)始，可對(duì)每一片段是否存在在ELISA中被識(shí)別的表位進(jìn)行測(cè)試。例如，在ELISA測(cè)定中，諸如20-mer多肽片段的PRRSV多肽被連接到固體支持物，例如塑料多孔板的孔。將抗體群標(biāo)記、添加至固體支持物并使其與未標(biāo)記它蛋白洗滌除去。例如通過(guò)將無(wú)色底物轉(zhuǎn)化為有顏色的反應(yīng)產(chǎn)物的反應(yīng)來(lái)沖全測(cè)抗體結(jié)合。逐漸地，接著從已鑒定的20-mer測(cè)試更小和交疊的片段來(lái)定位目的表位。本發(fā)明的多肽可通過(guò)重組產(chǎn)生。編碼本發(fā)明多肽的多核苷酸可被引入到重組表達(dá)載體中，采用本領(lǐng)域公知的技術(shù)該表達(dá)載體可在適合的表達(dá)宿主細(xì)胞體系中表達(dá)。本領(lǐng)域中可獲得多種細(xì)菌、酵母、植物、哺乳動(dòng)物和昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)，并且任何這樣的表達(dá)系統(tǒng)都可使用。任選地，編碼多肽的多核苷酸可在無(wú)細(xì)胞翻i奪系統(tǒng)中翻i爭(zhēng)。多肽也可化學(xué)合成或從PRRSV培養(yǎng)物中獲得。PRRSV多核苷酸本發(fā)明的多核苷酸含有小于整個(gè)微生物基因組，可為單鏈或多鏈核酸。多核苷酸可為RNA、DNA、cDNA、基因組DNA、化學(xué)合成的RNA或DNA或其組合。該多核苷酸可被純化，無(wú)其它組分，如蛋白、脂質(zhì)和其它多核苷酸。例如，多核苷酸的純度可為50%、75%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。本發(fā)明的多核苷酸編碼以上描述的多肽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該多核苷酸編碼SEQIDNO.l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或其組合所示的多肽。本發(fā)明的多肽可包含其它核苷酸序列，例如編碼連接物、間隔物、信號(hào)序列、TMP終止轉(zhuǎn)移序列、跨膜結(jié)構(gòu)域或可用于蛋白純化的配體如谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、組氨酸標(biāo)簽和葡萄球菌蛋白A的序列。本發(fā)明的多核苷酸可被分離。分離的多核苷酸為天然存在的多核苷酸，它不與其天然連接的5'和3'側(cè)翼基因組序列中的一個(gè)或兩個(gè)緊接。分離的多核苷酸例如可為任何長(zhǎng)度的重組DNA分子，前提是天然地緊接該重組DNA分子側(cè)翼的核酸序列被移除或不存在。分離的多核苷酸還可包括非天然存在的核酸分子。存在于數(shù)百至數(shù)百萬(wàn)其它核酸分子中的核酸分子，例如存在于cDNA或基因組文庫(kù)或含有基因組DNA限制性酶切產(chǎn)物的凝膠塊中的核酸分子，不被認(rèn)為是分離的多核苷酸。本發(fā)明的多核苷酸還可包含編碼免疫原性多肽的片段。本發(fā)明的多核苦酸可編碼全長(zhǎng)多肽、多肽片^&和變體或融合多肽。編碼本發(fā)明多肽的簡(jiǎn)并核苷酸序列以及與本發(fā)明的多核苷酸序列及其互補(bǔ)序列有至少約80或約卯、96、98或99%同一性的同源核苷酸序列也是本發(fā)明的多核苷酸。序列同一性百分比可以按描述在"多肽"部分的方法計(jì)算。簡(jiǎn)并核苷酸序列為編碼本發(fā)明多肽或其片段的多核苷酸，但由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性而與野生型多核苷酸序列在核酸序列上不同。編碼生物學(xué)上有功能的PRRSV多肽的PRRSV多核苷酸的互補(bǔ)DNA(cDNA)分子、種間同源物或變體也為PRRSV多核苷酸。本發(fā)明的多核苦酸可從存在于例如生物樣品，如唾液、血、乳、肉汁、血清、肺灌洗液、痰、肺、扁桃體、、淋巴結(jié)或其它組織樣品、尿、糞便、腦脊液、羊水、或傷口滲出物中的核酸序列分離。多核苷酸也可在實(shí)驗(yàn)室合成，例如采用自動(dòng)合成儀。諸如PCR的擴(kuò)增方法可用于從編碼多肽的基因組DNA或cDNA擴(kuò)增多核苦酸。本發(fā)明的多核苷酸可包含天然存在的多肽的編碼序列或可編碼非天然存在的經(jīng)改變的序列。如果需要，多核苷酸可被克隆進(jìn)包含表達(dá)控制元件的表達(dá)載體中，所述表達(dá)控制元件例如包括復(fù)制起點(diǎn)、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子或其它促進(jìn)本發(fā)明的多核苷酸在宿主細(xì)胞中表達(dá)的調(diào)節(jié)元件。表達(dá)載體例如可為質(zhì)粒，例如pBR322、pUC、或ColEl,或腺病毒載體，例如2型或5型腺病毒載體。任選地，可使用其它載體，包括但不限于Smdbis病毒、猿猴病毒40、a病毒載體、痘病毒載體以及巨細(xì)胞病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，如鼠肉瘤病毒、小鼠乳&泉瘤病毒、Moloney鼠白血病病毒以及Rous肉瘤病毒。還可以使用諸如MC和MC1的孩i型染色體、噬菌體、噬菌粒、酵母人工染色體、細(xì)菌人工染色體、病毒顆粒、病毒樣顆粒、粘粒(插入了噬菌體Xcoy位點(diǎn)的質(zhì)粒)以及復(fù)制子(在細(xì)胞中在它們自身控制下能復(fù)制的遺傳元件)。制備可操作地連接到表達(dá)控制序列的多核苷酸并在宿主細(xì)胞中表達(dá)它們的方法在本領(lǐng)域是公知的。參見(jiàn)，例如美國(guó)專利4,366，246。當(dāng)本發(fā)明的多核苦酸被置于臨近或接近一個(gè)或多個(gè)指導(dǎo)該多核苷酸的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯的表達(dá)控制元件時(shí)，它是被可操作地連接的。本發(fā)明的多核苷酸例如可用作探針或引物(如PCR引物)，以檢測(cè)PRRSV多核苷酸在諸如生物樣品的樣品中的存在。這類探針和引物特異性雜交PRRSV多核苷酸序列的能力使得它們可用于在給定的樣品中檢測(cè)互補(bǔ)序列的存在。本發(fā)明的多核苷酸探針和引物可雜交至諸如生物樣品的樣品中的互補(bǔ)序列，這些樣品包括唾液、血、血清、乳、肉汁、肺灌洗液、痰、肺、扁桃體、淋巴結(jié)或其它組織樣品、尿、糞便、腦脊液、羊水、或傷口滲出物。來(lái)自該樣品的多核苦酸可例如4妄受凝月交電泳或其它尺寸分離技術(shù)，或在無(wú)尺寸分離情況下被固定。多核苷酸探針或引物可浮皮標(biāo)記。適合的標(biāo)記物和標(biāo)記探針和引物的方法在本領(lǐng)域是已知的，例如包括通過(guò)缺口平移或激酶并入的放射性標(biāo)記物，或生物素標(biāo)記物、熒光標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物、生物發(fā)光標(biāo)記物、金屬螯合標(biāo)記物和酶標(biāo)記物。來(lái)自樣品的多核苷酸在適當(dāng)嚴(yán)緊的雜交條件下與探針或引物接觸。同程度的選擇性。對(duì)于需要高選擇性的應(yīng)用，可使用相對(duì)嚴(yán)緊的條件，例如由低鹽和/或高溫度條件，例如約0.02M至約0.15M鹽的鹽濃度和約5crc至約7crc的溫度所提供的嚴(yán)緊條件。對(duì)于需要較小選擇性的應(yīng)用，可使用較不嚴(yán)緊的雜交條件。例如，約0.14M至約0.9M鹽的鹽濃度和約2CTC至約5(TC的溫度。包含探針或引物和測(cè)試樣品中互補(bǔ)多核苦酸的雜交復(fù)合物的存在表明樣品中存在PRRSV或PRRSV多核苷酸序列?？贵w本發(fā)明的抗體為特異并穩(wěn)定結(jié)合本發(fā)明的PRRSV多肽或其片段的抗體分子。本發(fā)明的抗體可為多克隆抗體、單克隆抗體、單鏈抗體(scFv)或抗體片段?？贵w片段為包含抗原結(jié)合位點(diǎn)或完整抗體可變區(qū)的完整抗體的一部分，其中該部分無(wú)完整抗體Fc區(qū)的恒定重鏈結(jié)構(gòu)域。抗體片段的實(shí)例包括Fab、Fab，、Fab，-SH、F(ab')2和Fv片段。本發(fā)明的抗體可為任何抗體種類，例如包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。抗體或其片段結(jié)合本發(fā)明多肽的表位?？稍谶m合的實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物體內(nèi)或在體外采用重組DNA技術(shù)制備抗體。制備和表征抗體的手段在本領(lǐng)域是公知的。參見(jiàn)，例如Dean,Mo/.80:23-37(1998);Dean,Mw/zoA/kfo/.32:361-79(1994);Baileg,M"/^A7Wo/.32:381-88(1994);Gullick,MeAodvMo/.32:389-99(1994);DrenckhahnW<a/.A^^/zods'Ce〃.izc/.37:7-56(1993》Morrison,爿w".T^ev./附mwwo/.10:239-65(1992);WrightC>".Zev./附mw/o/.12:125-68(1992)。例如，多克隆抗體可通過(guò)將本發(fā)明的多肽給予諸如人或其它靈長(zhǎng)類、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、山羊、豬、狗、牛、綿羊、驢或馬的動(dòng)物而產(chǎn)生。收集來(lái)自經(jīng)免疫的動(dòng)物的血清，并乂人血清中通過(guò)用例如碌l酸銨沉淀以及隨后的層析(如親和層析)純化該抗體。產(chǎn)生和加工多克隆抗體的技術(shù)在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。"特異性結(jié)合"或"特異性"指第一抗原(例如多肽)識(shí)別并以比與其它非特異性分子更大的親和力結(jié)合本發(fā)明的抗體。非特異性分子是與該第一抗原無(wú)共同表位的抗原。例如，針對(duì)抗原(例如多肽)產(chǎn)生的抗體與該抗原較與非特異性抗原結(jié)合更為有效可被描述為特異性結(jié)合該抗原。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)抗體或其抗原結(jié)合部分以1071/mol或更高Ka的結(jié)合親和力結(jié)合時(shí)，則該抗體或其抗原結(jié)合部分特異性結(jié)合由SEQIDNO:1、2、12或13(或本發(fā)明的其它序列)組成的多肽。特異結(jié)合可利用本領(lǐng)域熟知的方法通過(guò)采用例如酶聯(lián)免疫測(cè)定(ELISA)、反射免疫測(cè)定(RIA)或western印跡測(cè)定來(lái)測(cè)試。此外，針對(duì)存在于本發(fā)明多肽上的表位的單克隆抗體也可容易地產(chǎn)生。例如，來(lái)自諸如小鼠的哺乳動(dòng)物(經(jīng)本發(fā)明的多肽免疫)的正常B細(xì)胞可與例如HAT敏感的小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞?？刹捎肦IA或ELISA鑒別產(chǎn)生PRRSV特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞并通過(guò)在半固體瓊脂中克隆或通過(guò)有限稀釋來(lái)分離。通過(guò)另一輪的篩選來(lái)分離產(chǎn)生PRRSV特異性抗體的克隆?？刹捎脴?biāo)準(zhǔn)技術(shù)，例如通過(guò)將本發(fā)明的多肽結(jié)合到微量滴定板并通過(guò)ELISA測(cè)定法測(cè)定該單克隆抗體的結(jié)合，來(lái)篩選單克隆抗體。產(chǎn)生和加工單克隆抗體的技術(shù)在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。參見(jiàn)，例如Kohler&Milstem,Nature,256:495(1975)。單克隆抗體的特定同種型可直接通過(guò)從最初的融合物選擇來(lái)制備，或間接通過(guò)采用同胞選擇技術(shù)從分泌不同同種型單克隆抗體的親本雜交瘤細(xì)胞來(lái)制備，以分離類別轉(zhuǎn)換變體來(lái)準(zhǔn)備。參見(jiàn)Steplewski等人，尸HS.fH82:86531985;Spna""/.,,/,//w/wwo/og.74:307,1984。本發(fā)明的單克隆#元體也可為重組單克隆抗體。參見(jiàn)，例如美國(guó)專利4,474,893;美國(guó)專利4,816,567。本發(fā)明的抗體也可在化學(xué)上構(gòu)建。參見(jiàn)，例如美國(guó)專利4,676,980。本發(fā)明的抗體可為嵌合抗體(參見(jiàn)，例如美國(guó)專利5,482,856)、人源化抗體(參見(jiàn)，例如Jones等人，Atowre321:522(1986);Reichmann等人,Nature332:323(1988);Presta,Oi/r.O/xBw/.2:593(1992))或人抗體?？赏ㄟ^(guò)例如直接永生化、噬菌體展示、轉(zhuǎn)基因小鼠或Trimera方法制備人抗體，參見(jiàn)，例如Reisener等人，7'簡(jiǎn)AS,她c/箭/.16:242-246(1998)。特異性結(jié)合PRRSV抗原(例如PRRSV多肽)的抗體在檢測(cè)PRRSV或PRRSV抗原是否存在于樣品中尤其有用，該樣品例如為來(lái)自PRRSV感染的動(dòng)物如豬的唾液、血、血清、乳、肉汁、肺灌洗液、痰、肺、扁桃體、淋巴結(jié)或其它組織樣品、尿、糞<更、腦脊液、羊水、或傷口滲出物樣品。PRRSV或PRRSV抗原的免疫測(cè)定可采用一種抗體或幾種抗體。PRRSV或PRRSV抗原的免疫測(cè)定例如可使用針對(duì)PRRSV表位的單克隆抗體、針對(duì)一種PRRSV多肽的一些表位的單克隆抗體組合、針對(duì)不同PRRSV多肽的表位的單克隆抗體、針對(duì)相同PRRSV抗原的多克隆抗體、針對(duì)不同PRRSV抗原的多克隆抗體、或單克隆抗體和多克隆抗體的組合。免疫測(cè)定方案可例如基于竟?fàn)?、直接反?yīng)或采用例如標(biāo)記抗體的夾心測(cè)定法。本發(fā)明的抗體可標(biāo)記有本領(lǐng)域中已知的任何標(biāo)i己物類型，例如包括熒光、化學(xué)發(fā)光、放射性、酶、膠體金屬、放射性同位素以及生物發(fā)光的標(biāo)記物。本發(fā)明的抗體或其片段可被結(jié)合到支持物并用于檢測(cè)PRRSV或PRRSV抗原是否存在。支持物包括例如玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龍、淀粉酶、天然和改性纖維素、聚丙烯酰胺、瓊脂糖和magletite。本發(fā)明的抗體還可用于通過(guò)免疫親和柱分離PRRSV或PRRSV抗原。通過(guò)例如吸附或共價(jià)連接使抗體附著到固體支持物，以使得抗體保留它們的免疫選擇活性。任選地，可包括進(jìn)間隔物基團(tuán)以便使抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)可接近。該固定的抗體隨后可用于結(jié)合諸如生物樣品的樣品中的PRRSV或PRRSV抗原，該樣品包括唾液、血、血清、乳、肉汁、肺灌洗液、痰、肺、扁桃體、淋巴結(jié)或其它組織樣品、尿、糞便、腦脊液、羊水、或傷口滲出物。結(jié)合的PRRSV或PRRSV抗原通過(guò)例如改變pH/人柱基質(zhì)上回收。本發(fā)明的抗體也可用在免疫定位研究中，以分析多種細(xì)胞事件或生理?xiàng)l件中本發(fā)明多肽的存在和分布?？贵w也可用于鑒別參與被動(dòng)免疫的分子和鑒別參與非蛋白抗原的生物合成的分子。對(duì)這類分子的鑒別可用于疫苗開(kāi)發(fā)。包括例如單克隆抗體和單鏈抗體在內(nèi)的本發(fā)明抗體可用于監(jiān)測(cè)PRRSV引起的疾病的改善進(jìn)程。通過(guò)測(cè)量動(dòng)物測(cè)試樣品中針對(duì)PRRSV抗原的PRRSV抗體的增加或減少，可確定旨在改善該病癥的特定治療方案是否有效。采用例如直接結(jié)合測(cè)定法如RIA、ELISA、或western測(cè)定可沖全測(cè)和/或定量抗體。氺僉測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的方法可用于檢測(cè)測(cè)試樣品中PRRSV特異性抗體或抗體片段，該樣品例如為生物樣品、環(huán)境樣品或?qū)嶒?yàn)室樣品。生物樣品例如可包括來(lái)自諸如馬、貓、狗、豬或人的唾液、血、血清、乳、肉汁、肺灌洗液、痰、肺、扁桃體、淋巴結(jié)或其它組織樣品、尿、糞便、腦脊液、羊水或傷口滲出物。測(cè)試樣品在與本發(fā)明的多肽混合前可以是未經(jīng)處理的、經(jīng)沉淀的、經(jīng)分級(jí)的、經(jīng)分離的、經(jīng)稀孝奪的、經(jīng)濃縮的或經(jīng)純化的。該方法包括使本發(fā)明的多肽與測(cè)試樣品在允許多肽/抗體復(fù)合物形成的條件下接觸。即，本發(fā)明的多肽特異性結(jié)合樣品中的PRRSV特異性抗體。在該實(shí)施方案中，本發(fā)明的多肽用作抗體捕獲劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉用于檢測(cè)抗體/多肽復(fù)合物結(jié)合的測(cè)定法和條件。檢測(cè)多肽與樣品中抗PRRSV抗體復(fù)合物的形成。本發(fā)明的抗體可用在通過(guò)獲得懷疑具有PRRSV感染的人或動(dòng)物的測(cè)試樣品的PRRSV診斷方法中。使該測(cè)試樣品與本發(fā)明的抗體在能形成抗體-抗原復(fù)合物(即免疫復(fù)合物)的條件下接觸?？赏ㄟ^(guò)現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法來(lái)確定抗體-抗原復(fù)合物的量。比對(duì)照樣品中形成的水平高表明具有PRRSV感染。或者，使本發(fā)明的多肽與測(cè)試樣品接觸。陽(yáng)性身體樣品中的PRRSV抗體將在適合的條件下形抗原-抗體復(fù)合物。可通過(guò)現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法來(lái)確定抗體-抗原復(fù)合物的量。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)結(jié)合到抗體的指示劑如酶催化可檢測(cè)的反應(yīng)時(shí)，多肽/抗體復(fù)合物被檢測(cè)。任選地，將包含信號(hào)生成化合物的指示劑在允許形成多肽/抗體/指示劑復(fù)合物的條件下應(yīng)用到多肽/抗體復(fù)合物。檢測(cè)多肽/抗體/指示劑復(fù)合物。任選地，多肽或抗體可在形成多肽/抗體復(fù)合物之前被標(biāo)記有指示劑。該方法可任選地包含陽(yáng)性或陰性對(duì)照。本發(fā)明的測(cè)定法包括但不限于基于竟?fàn)?、直接反?yīng)或夾心型測(cè)定法的那些測(cè)試法，包括但不限于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)、western印跡、IFA、放射免疫測(cè)定法(RIA)、血細(xì)胞凝集(HA)以及熒光極化免疫測(cè)定法(FPIA)。本發(fā)明的一個(gè)測(cè)定法包括逆流層析測(cè)定法，例如SNAP測(cè)定。參見(jiàn)美國(guó)專利5,726,010。測(cè)定可采用固相或基質(zhì)或通過(guò)免疫沉淀或不使用固相的任何其它方法進(jìn)行。當(dāng)使用固相或基質(zhì)時(shí)，使本發(fā)明的多肽直接或間接附著到固體支持物或基質(zhì)，例如微量滴定孔、磁珠、無(wú)磁珠、柱、基質(zhì)(matnx)、膜、由合成或天然纖維(例如，玻璃或基于纖維素的材料或熱塑性聚合物如聚乙烯、聚丙烯或聚酯)構(gòu)成的纖維、由顆粒物質(zhì)構(gòu)成的燒結(jié)結(jié)構(gòu)(例如玻璃或各種熱塑性聚合物)、或由硝酸纖維素尼龍、聚砜等構(gòu)成的澆鑄膜片(通常本質(zhì)上是合成的)。在一個(gè)實(shí)施方案中，基質(zhì)是聚乙烯的燒結(jié)的細(xì)顆粒，通常稱為多孑L聚乙烯，例如來(lái)自ChromexCorporation(Albuquerque,NM)的10-15微米多孔聚乙烯。所有這些基質(zhì)材料可以以諸如膜、片或板的適合形狀使用，或者它們被包被或鍵合或?qū)訅涸谶m合的惰性載體上，這載體例如為紙、玻璃、塑料膜或織物。適合的使肽固定在固相上的方法包括離子、疏水、共價(jià)相互作用等。在一種類型的測(cè)定方式中，將一種或多種多肽包被在固相或基質(zhì)上。使懷疑含有抗PRRSV抗體或其片段的測(cè)試樣品與綴合到PRRSV特異性抗體或抗體片段的指示劑(包含信號(hào)產(chǎn)生化合物)在足以形成抗原/抗體復(fù)合物的條件下孵育一段時(shí)間，所述抗原/抗體復(fù)合物為測(cè)試樣品的抗體與所述固相上的多肽的復(fù)合物，或者為綴合冇PRRSV特異性抗體的指示劑化合物與所述固相上的多肽的復(fù)合物。綴合有抗PRRSV抗體的指示劑對(duì)固相結(jié)合的減少可被定量測(cè)定。相對(duì)于經(jīng)確認(rèn)的陰'性PRRSV測(cè)試樣品所形成的信號(hào)，信號(hào)的可測(cè)量的減少表明在測(cè)試樣品中存在抗PRRSV抗體。這種類型的測(cè)定可對(duì)樣品中的抗PRRSV抗體的量進(jìn)行量化。在另一類型的測(cè)定形式中，使一種或多種本發(fā)明的多肽包被到支持物或基質(zhì)上。本發(fā)明的多肽與指示劑綴合并加入至測(cè)試樣品中。將該混合物加至支持物或基質(zhì)。如果PRRSV抗體存在于測(cè)試樣品中，則它們將結(jié)合綴合有指示劑的多肽以及固定在支持物上的多肽。然后可檢測(cè)多肽/抗體/指示劑復(fù)合物。這種類型的測(cè)定可定量測(cè)試樣品中的抗PRRSV抗體的量。在另一類型的測(cè)定形式中，本發(fā)明的一種或多種多肽被包被在支持物或基質(zhì)上。將測(cè)試樣品加至支持物或基質(zhì)并孵育。通過(guò)用洗滌溶液洗滌固體支持物將未結(jié)合的組分從樣品中洗去。如果PRRSV抗體存在于測(cè)試樣品中，則它們可結(jié)合包被到固相上的多肽。這種多肽/抗體復(fù)合物可采用綴合有指示劑的物種特異性第二抗體來(lái)檢測(cè)。然后可檢測(cè)該多肽/抗體/抗物種抗體指示劑復(fù)合物。這種類型的測(cè)定可在測(cè)試樣品中定量抗PRRSV抗體的量。多肽/抗體復(fù)合物或多肽/抗體/指示劑復(fù)合物的形成可通過(guò)輻射測(cè)量法、比色法、熒光測(cè)量法、尺寸分離法或沉淀方法檢測(cè)。任選地，對(duì)多肽/抗體復(fù)合物的檢測(cè)是通過(guò)添加偶聯(lián)有包含信號(hào)生成化合物的指示劑的第二抗體來(lái)完成的。與多肽/抗體復(fù)合物結(jié)合的包含信號(hào)生成化合物(標(biāo)記物)的指示劑可采用以上描述的方法檢測(cè)，并包括顯色劑、催化劑如酶、熒光化合物如熒光素和羅丹明、化學(xué)發(fā)光化合物如二氧雜環(huán)丁烷(dioxetane)、吖咬(acridinmm)、菲咬(phenanthridiniums)、釕(ruthenium)和魯米諾(lummol)、》文射元素、直接牙見(jiàn)覺(jué)標(biāo)記物，以及輔因子、抑制劑、磁性顆粒等。酶的實(shí)例包括堿性磷酸酶、辣根過(guò)氧化物酶、P-半乳糖苷酶等。選擇具體標(biāo)記物并不重要，但是它應(yīng)能夠自己產(chǎn)生信號(hào)或聯(lián)合一種或多種其它物質(zhì)產(chǎn)生信號(hào)。復(fù)合物的形成表明在測(cè)試樣品中存在抗PRRSV抗體。因此，本發(fā)明的方法可用于診斷患者中的PRRSV感染。本發(fā)明的方法也可用于指示存在于測(cè)試樣品中的抗PRRSV抗體的量。對(duì)于很多指示劑如酶來(lái)說(shuō)，所存在的抗體的量與產(chǎn)生的信號(hào)成比例。#4居測(cè)試樣品的類型，它可由適合的緩沖試劑稀釋、濃縮、或不經(jīng)任何處理而與固相接觸。例如，通常優(yōu)選測(cè)試之前被稀釋的血清或血漿樣品或諸如尿的濃縮樣品，以便確定抗體是否存在和/或抗體的量。本發(fā)明進(jìn)一步包括用于檢測(cè)樣品中抗PRRSV抗體或抗體片段或PRRSV多肽的測(cè)定試劑盒(例如制品)。試劑盒包括一種或多種本發(fā)明多肽以及用于確定該多肽與樣品中抗PRRSV抗體或抗體片段結(jié)合的工具。試劑盒或制品也可包括一種或多種本發(fā)明的抗體或抗體片段以及用于確定該抗體或抗體片段與樣品中PRRSV或PRRSV多肽結(jié)合的工具。試劑盒可包含含有一種或多種本發(fā)明的多肽或抗體的裝置和一種或多種多肽或抗體在例如鑒定哺乳動(dòng)物中的PRRSV感染的使用說(shuō)明書。該試劑盒還可包含含有標(biāo)簽的包裝材料，該標(biāo)簽標(biāo)明該試劑盒的一種或多種多肽或抗體可用于鑒定PRRSV感染。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其它組分，如緩沖劑、對(duì)照等可包括在這類測(cè)試試劑盒中。本發(fā)明的多肽、抗體、測(cè)定法和試劑盒例如可用于診斷患者中的PRRSV感染個(gè)例，并可用于PRRSV爆發(fā)的流行病學(xué)研究。本發(fā)明的多肽和測(cè)定法可與其它的多肽或測(cè)定法聯(lián)合以檢測(cè)PRRSV以及其它有機(jī)體的存在。這里描述的本發(fā)明可在缺乏未在本文中明確/〉開(kāi)的任何一個(gè)或多個(gè)元件、一種或多種限制下合適地實(shí)施。因此，例如在本文的各實(shí)例中，術(shù)語(yǔ)"包含"、"主要由......組成"以及"由......組成"中的任一個(gè)可:故其它兩個(gè)術(shù)語(yǔ)中的任一個(gè)替換。所<吏用的術(shù)語(yǔ)和表達(dá)^又用作-說(shuō)明而非限制，使用這類術(shù)語(yǔ)和表達(dá)并不排除所顯示和描述的特征或其部分的任何等同物，而是應(yīng)意識(shí)到在本發(fā)明所要求保護(hù)的范圍內(nèi)作出各種修改是可能的。因此，應(yīng)理解盡管本發(fā)明已經(jīng)通過(guò)優(yōu)選的實(shí)施方案明確地進(jìn)4亍了說(shuō)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可采用任選的特征、這里公開(kāi)的概念的修改和變化，并且這些修改和變化被認(rèn)為是落入說(shuō)明書和所附的權(quán)利要求書所定義的本發(fā)明的范圍內(nèi)。描述時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到本發(fā)明也因此是以馬庫(kù)什組或其它組的任何個(gè)體成員或部分成員的方式描述的。以下提供的內(nèi)容僅是出于舉例說(shuō)明的目的，無(wú)意限制6描述的本發(fā)明的范圍。入本文。實(shí)施例實(shí)施例1按以前的描述(EMBOJ.1984,3:1429-1434)表達(dá)和純化PEXUSorf7。采用制造商(EMDBiosciences,Ind.,Madison,WI53719)描述的方法，采用StudierpET表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組全長(zhǎng)U.S.ORF7、U.S.ORF7的N末端缺失衍生物和U.S.ORF7的羧基末端缺失衍生物蛋白。采用制造商描述的方法將以下描述的編碼蛋白的核酸克隆進(jìn)pET200表達(dá)系統(tǒng)。重組蛋白表達(dá)為在氨基末端具有組氨酸標(biāo)簽，所述組氨酸標(biāo)簽是該載體編碼的，使得能快速親和純化。采用制造商(EMDBiosciences)描述的方法從E.coli菌抹BL21(star)表達(dá)和純化所述蛋白。采用SDS-PAGE凝膠分離E.coli的粗裂解物，分離的蛋白被轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素，并采用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)封閉硝酸纖維素印跡。參見(jiàn)，例如SambrookandRussell,"MolecularCloning:ALaboratoryManual"(3rdEdition,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,2001)。采用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)以山羊抗豬IgGHRP綴合物(JacksonImmunoResearchLaboratoriesInc.,WestGrove,PA，19390)檢測(cè)豬抗體是否存在。PRSSV(U.S.血清型)開(kāi)放閱讀框7(ORF7)的序列長(zhǎng)123個(gè)氨基酸，并顯示如下豬繁殖與呼吸綜合征病毒，U.S.血清型MPNNNGKQQKKKKGDGQPVNQLCQMLGKIIAQQNQSRGKGPGKKNKKKNPEKP鵬LATEDDVRHHFTPSERQLCLSSIQTAFNQGAGTCTLSDSGRISYTVEFSLPTHOTVRLIRVTAPPSA(SEQIDNO:3)PEXUSorf7的氨基酸序列顯示在SEQIDNO:4中。來(lái)自PRRSORF7,U.S.血清型的氨基酸為黑體和下劃線表示。ORF7的全部123個(gè)氨基酸都存在。MEQRITLKEAWDRSGAWLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPRALADSLMQLARQVSRLNKLAAHPPFASWNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWRFAWFPAPEAVPESWLECDLPEADTVVWSNWQMHGYDAPIYTNVTYPITVNPPFVPTENPTGCYSLTFNVDESWLQEGQTRIIFDGVNSAFHLWCNGRWVGYGQDSRL艦FDLS肌RAGENRIAVMVLRWSDGSYLEDQDMWRMSGIFRDVSLLHKFrTQISOTHVATRFNDDFSRAVLEAEVQMCGELRDYLRVTVSLWQGETQVASGTAPFGGEIIDERGGYADRVTLRLNVENPKLWSAEIPNLYRAWELHTADGTL正AEACDVGFREVRIENGLLLLNGKPLLIRGVNRHEHHPLHGOVMDEOTMVODGDPMPIVWNGKOOKKKKGDGOPVNROLCLSSIOTAFNOGAGTCTLSDSGRISYTVEFSLPTHHTVRLIRVTAPPSASEQIDNO:4.U.S.血清型ORF7的第2至123個(gè)氨基酸存在于SEQIDNO:5中并以黑體和下劃線表示。該重組蛋白采用來(lái)自Novagen的pET200表達(dá)載體表達(dá)。37個(gè)氨基酸的融合物標(biāo)簽被連接到蛋白的氨基末端。MRGSHHHHHHGMASMTGGOOMGRDLYDDDDKDHPPTGSLPNNNGKOOKKKKGDGOFVNOLCOMLGKHAOONOSRGKGPGKKNKKKNPEKPHFPLATEDDVRHHFTPSEROLCLSSIOTAFNOGAGTCTLSDSGRISYTVEFSLPTHHTVRLIRVTAPPSASEQIDNO:5.從ORF7氨基末端除去21個(gè)氨基酸。第22至123個(gè)氨基酸(U.S.血清型ORF7的氨基酸)存在于SEQIDNO:6中并以黑體和下劃線表示。采用來(lái)自Novagen的pET700表達(dá)載體表達(dá)重組蛋白。(全長(zhǎng)PRRS蛋白)的第25位氨基酸甲硫氨酸(M)被轉(zhuǎn)化為異亮氨酸(I)以除去非正常的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)。該蛋白具有連接到蛋白氨基末端的相同的37個(gè)氨基酸融合物標(biāo)簽。MRGSHHHHHHGMASMTGGOOMGRDLYDDDDKD鵬TGSLCQTLGKnAOONOSRGKGrGKKNKKKNPEKPHFPLATEDDVRHHFTPSEROLCLSSIQTAFNOGAGTCTLSDSGRISYTVEFSLPTHHTVRLIRVTAPPSASEQIDNO:6.從U.S.0RF7的羧基端除去30個(gè)氨基酸。U.S.ORF7的第2至93個(gè)氨基酸存在于SEQIDNO:7中并以黑體和下劃線表示。采用來(lái)自Novagen的pET200表達(dá)載體表達(dá)重組蛋白。該蛋白具有連接到蛋白氨基末端的相同的37個(gè)氨基酸融合物標(biāo)簽。該蛋白還具有連接到羧基端的另一30個(gè)氨基酸的標(biāo)簽，所述標(biāo)簽由載體編碼，而不是來(lái)自PRRS病毒。MRGSHHHHHHGMASMTCGOOMGRDLYPDDDKDHPFTGSLPNNNGKOOKKKKGDGOPYNOLCOMLGKHAOONOSRGKGPGKKNKKKNPEKPHFPLATEDDVRHHFTPSEROLCLSSIOTAFNOGAGTCTLSLESLEKGELNDPAANKARKEAELAAATAEQSEQIDNO:7實(shí)施例2Western印跡中的反應(yīng)性該數(shù)據(jù)證實(shí)U.S.ORF7的C末端缺失衍生物(SEQIDNO:7)在Western印跡中不與陽(yáng)性豬血清反應(yīng)，然而全長(zhǎng)U.S.ORF7和U.S.ORF7的N末端(a.k.a氨基末端)缺失衍生物二者都和陽(yáng)性豬血清反應(yīng)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>實(shí)施例3在ELISA中的反應(yīng)性按照制造商(EMDBiosciences,Ind.,Madison,WI53719)描述的方法采用StudierpET表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組蛋白。按照制造商描述的方法將編碼上述蛋白的基因克隆進(jìn)pET200表達(dá)系統(tǒng)。重組蛋白表達(dá)為在氨基末端帶有組氨酸標(biāo)簽，該組氨酸標(biāo)簽由載體編碼，使得能快速親和純化。采用制造商(EMDBiosciences)描述的方法從E.coli菌抹BL21(star)表達(dá)和純化所述蛋白。Immulon1板在4。C用溶于碳酸鹽緩沖液(pH9.5)、濃度為1jig/ml的純化重組蛋白包被。通過(guò)"輕彈"和拍打干來(lái)將板空干。采用含有2.5%BSA的PBS過(guò)夜封閉板。將板"輕彈"和拍打干，并用含有2.5%蔗糖的10mMTns緩沖液(pH7.5)重復(fù)包被(over-coated)。在輕彈和拍打干后，將板真空干燥4小時(shí)并在干燥劑存在下保存。采用來(lái)自"豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體測(cè)試試劑盒"(IDEXXLaboratoriesInc.,WestbrookME,分類號(hào)06-04404-00)的商購(gòu)試劑以及方法在這些ELISA板上測(cè)試樣品。結(jié)果顯示U.S.ORF7蛋白的N末端缺失衍生物(SEQIDNO:6)在ELISA測(cè)定中以類似于全長(zhǎng)蛋白(SEQIDNO:5)的方式反應(yīng)。實(shí)施例4采用現(xiàn)有4支術(shù)中已知的技術(shù)來(lái)制備以下的LelystadPRRSVORF7多肽。來(lái)自LelystadORF7蛋白的序列以黑體和下劃線表示。其它氨基酸為添加到這些重組蛋白中的融合伙伴/標(biāo)簽。卩gal-ORF7Lelystad的序列通過(guò)pEX4載體表達(dá)MEQRlTLKEAWDRSGAWLLPVSLVKRKmAPNTQTASPRALADSLMQLARQVSRLNRL緣IPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWRFAWFPAPEAVPESWLECDLPEADTWVPSNWQMHGYDAPIYTNVTYPITVNPPFVPTENPTGCYSLTFNVDESWLQEGQTRHFDGVNSAFHLWCNGRWVGYGQDSRLPSEFDLSAFLRAGENRLAVMVLRWSDGSYLEDQDMWRMSGIFRDVSIXHKPTTQISDFHVATRFNDDFSRAVLEAEVQMCGELRDYLRVrVSLWQGETQVASGTAPFGGEIIDERGGYADRV7LRLNVENPKLWSAEIPNLYRAWELHTADGTL正AEACDVGFREVRIENGLL1XNGKPLL腦VymHEHHPLHGOVMDEOIMVODGDPKG卿ELGTLAGKNOSOKKKKSTAPMGNGOPVNOLCOIXGAMIKSOROOPRGGOAKKKKPEKPHFPLAAEDDIRHHLTOTERSLCLOSIOTAFNOGAGTASLSSSGKVSFOVEFMIJPVAHTVRLIRVTSTSASOGARDPLE(SEQIDNO:14)His-orf7Lelystad的序列由pET200載體表達(dá)。MRGSHHHHHHGMASMTGGOOMGRDLYDDDDKD鵬TGLAGKNOSOKKKKSTAPMGNGOPVNOLCOIXGAM1KSOROOPRGGOAKKKKPEKPHFPLAAEDDIRHHLTOTERSLCLOSIOTAFNOGAGTASLSSSGKVSFOVEFMLPVAHTVRLIRVTSTSASOGASfSEOIDNO:15)His-N末端截短的ORF7Lelystad序列由pET200載體表達(dá)。這種N末端缺失的肽在氨基末端去除了26個(gè)氨基酸VTOGSHHffimHfiMASMTGGOOMGRDLYDDDDKDHPFTGSCOLLGAHKSOROASLSSSGEVSFOVEFMLPVAHTVRLIRVTSTSASOGAS(SEOIDNO:16)His羧基截短的ORF7Lelystad序列由pET200載體表達(dá)。這種C末端缺失的肽在羧基末端去除了34個(gè)氨基酸MrJSHHTTTTHHnMASMTGGOO固RDDDDKDHPFTGLAGKNOSOKKKKSTAPMGNGOPVNOLCOLLGAMIKSOROOPRGGOAKKKKPEKPHFPLAAEDDIRHHLTOTERSLCLOSIOTAFNOGAGTASLS〖SEOIDNO:17).采用Western印跡測(cè)試了這些多肽的反應(yīng)性。結(jié)果顯示在表4中。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>該數(shù)據(jù)顯示LelystadORF7的C末端缺失衍生物在Western印跡中不與陽(yáng)性豬血清反應(yīng)，而全長(zhǎng)Lelystad0RF7和LelystadORF7的N末端缺失衍生物二者都與陽(yáng)性豬血清反應(yīng)。實(shí)施例5在ELISA中的反應(yīng)性按照制造商(EMDBiosciences,Ind.,Madison,WI53719)描述的方法采用StudierpET表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組蛋白。按照制造商描述的方法將編碼上述多肽的核酸克隆進(jìn)pET200表達(dá)系統(tǒng)。重組蛋白表達(dá)為在氨基末端帶有組氨酸標(biāo)簽，所述組氨酸標(biāo)簽由載體編碼，使得能快速親和純化。采用制造商(EMDBiosciences)描述的方法從E.coll菌才朱BL21(star)表達(dá)和純化所述蛋白。Immulon1板在4。C用溶于碳酸鹽緩沖液(pH9.5)、濃度為1Mg/ml的純化重組蛋白包被。通過(guò)"輕彈"和拍打干來(lái)將板空干。采用含有2.5%BSA的PBS封閉板。將板"輕彈"和拍打干，并用含有2.5%蔗糖的10mMTns緩沖液(pH7.5)重復(fù)包被。在輕彈和拍打干后，將板真空干燥4小時(shí)并在干燥劑存在下保存。采用來(lái)自"豬繁殖與呼吸綜合;f正病毒抗體測(cè)試試劑盒"(IDEXXLaboratoriesInc.,WestbrookME,catalognumber06-04404-00)的商購(gòu)試劑以及方法在這些ELISA板上測(cè)試樣品。該數(shù)據(jù)表明LelystadORF7蛋白的N末端缺失衍生物在ELISA測(cè)定中的反應(yīng)性與全長(zhǎng)蛋白的相似。實(shí)施例6采用截短的U.S.orf7抗原改善抗體檢測(cè)的特異性以ELISA方式中測(cè)試通過(guò)重組蛋白表達(dá)產(chǎn)生的USOrf7N末端截短的多肽(SEQIDNO:6)的反應(yīng)性，并與全長(zhǎng)USOrf7(SEQIDNO:5)進(jìn)行比較。SEQIDNO:5和6的重組蛋白按之前的描述(實(shí)施例3)表達(dá)和純化。ImmulonI板按之前的描述(實(shí)施例3)用所述多肽包被。優(yōu)化板的包被和第二抗體的稀釋度以產(chǎn)生與采用陽(yáng)性對(duì)照豬血清的IDEXX對(duì)所選的豬血清的反應(yīng)性(參見(jiàn)表7)。篩選的血清樣品被包括IFA和PCR在內(nèi)的其它方法指定為PRRSV在2XR板上存在非特異性信號(hào)。具有這些特征的血清樣品在IDEXXHerdCheck2XRELISA上為假陽(yáng)性，通常被PRRS診斷領(lǐng)域技術(shù)人員稱為"singleton"。從USOrf7除去N末端的26個(gè)氨基酸得到了免疫反應(yīng)性抗原，與全長(zhǎng)USOrf7相比，所述免疫反應(yīng)性抗原顯示出反應(yīng)性減弱和特異性增強(qiáng)(分別為79%特異性和69%特異性)。S0.200的OD65o值被確定為截?cái)嘀担驗(yàn)橐圆捎藐?yáng)性和陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)IDEXXHerdCheck2XR優(yōu)化為基礎(chǔ)，則認(rèn)為該樣本為陰性。U.S.orf7抗原氨基末端部分的截短導(dǎo)致豬血清非特異性信號(hào)的顯著降低。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>79%特異性實(shí)施例7來(lái)自PRRS病毒Lelystad株的全長(zhǎng)Orf7(SEQIDNO:15)以及N末端截短形式(SEQIDNO:16)在Eco/z中被表達(dá)，并且按之前的描述(實(shí)施例5)分離，用于針對(duì)所選的豬血清的ELISA分析。優(yōu)化板的包被和第二抗體(偶聯(lián)物)的稀釋度以產(chǎn)生與釆用陽(yáng)性對(duì)照血清的IDEXXHerdCheck2XRELISA測(cè)定基本相等的特異性信號(hào)。篩選的血清樣品被包括IFA和PCR在內(nèi)的其它方法指定為PRRSV陰性，然而在IDEXXHerdCheck2XRELISA上顯示出反應(yīng)性。與全長(zhǎng)Lelystadorf7蛋白相比，N末端截短的Lelystadorf7蛋白顯示出反應(yīng)性減弱和特異性增強(qiáng)(分別為62%特異性對(duì)42%特異性)。^0.200的OD65o值被確定為截?cái)嘀?，因?yàn)橐圆捎藐?yáng)性和陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)IDEXXHerdCheck2XR優(yōu)化為基礎(chǔ)，則認(rèn)為該樣本為陰性。Lelystadorf7抗原N末端部分的截短導(dǎo)致豬血清非特異性信號(hào)的顯著降低。表6Lelystad抗原NTrn陽(yáng)性陰性全長(zhǎng)陽(yáng)性陰性42%特異性<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>42%特異性表7"smgleton"血清樣品與全長(zhǎng)和截短的orf7多肽在ELISA中的反應(yīng)性。示出全長(zhǎng)(FL)和N末端截短(Trn)多肽的OD65o值。OD>0.2為陽(yáng)性(加粗的值)。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>41423-130.0950.0870.1010.P8639852-30.0660.0690.0810.0734057:80-10.1240.1150.1350.305019H20.1050.0890.1210.1274057:80-20.1510.2430,2050.177019523-130.0930.0980.1510.145019323-40.0840.0760.1090.33642958-440.4410.3380.2870.16139470-310.W70.1920.1600,205019278-290.2780.2410.4030.343019972-280.S22D.3820.4370.28841134-100.0860,0740.0920.257020570-170.1070.0941.1760.635022081-550.1590.1310.203.0.222022081-530.2080.9390.2430.224P-5000-l0.1410.0990.1910.4074057:80-50.1350.1520.2070.163P-50040.1070識(shí)0.141CU1639472-80.S930.6790.0800.07739852-70.0640.0690廁0.09740860-240.4490.6070.2420.171022081-37O."O0.7890.1700-531022060-220.1040.0950.1540.5364057:80-40.5950.5940.2100.185019278-440.1790.1400.1430.125P5003-30.1060.5140.141o.mP5003-l0.1180.5920.1510.116018911-131.344U270.1520.143PS003-2o.m0.5780.1540.115034916-260.0770.0660.1400.287021687-80.0740.0800.1210.7634057:80-30.2480.2"0.2820.40641423-250.0860扁0.0950.073P-5000-20.1020.0930.1450.11941932-80惑0.071O.O卯0.7540簡(jiǎn)S-300.1370.1451.0040.675028676-580.0920扁0.1070.13142945-560.1241.3470.1580.1454057:80-71.1631.2170.4540.674021378-5130.1460.1480.1580.2804057:80-80.2090.1960.1420.1850簡(jiǎn)6-27o.o卯0.0811.1061.22742635-101.5021.5850.1550.099018912-110.1240.1350.1082,074024177-30.1200.1040.1550.34權(quán)利要求1.一種物質(zhì)組合物，包含基本上由SEQIDNO1或SEQIDNO18組成的純化多肽。2.如權(quán)利要求1的物質(zhì)組合物，其中所述純化多肽為多聚體形式。3.如權(quán)利要求1的物質(zhì)組合物，還包含載體。4.如權(quán)利要求1的物質(zhì)組合物，其中所述純化多肽被連接到指示劑、氨基酸間隔物、氨基酸接頭、信號(hào)序列、終止轉(zhuǎn)移序列、跨膜結(jié)構(gòu)域、蛋白純化配體或其組合。5.如權(quán)利要求4的物質(zhì)組合物，其中所述純化多肽基本上由SEQIDNO:2或SEQIDNO:13組成。6.—種純化的融合蛋白，包含基本上由SEQIDNO:1或SEQIDNO:18組成的多肽以及一種或多種不與SEQIDNO:1或SEQIDNO:18天然鄰^接的多肽。7.如權(quán)利要求6的純化的融合蛋白，其中SEQIDNO:1或SEQIDNO:18為多聚體形式。8.如;R利要求6的純化的融合蛋白，其中所述純化的融合蛋白包含指示劑、氨基酸間隔物、氨基酸接頭、信號(hào)序列、終止轉(zhuǎn)移序列、跨膜結(jié)構(gòu)域、蛋白純化配體或其組合。9.如權(quán)利要求6的純化的融合蛋白，其中所述純化多肽基本上由SEQIDNO:2或SEQIDNO:13組成。10.—種純化的多核苦酸，編碼權(quán)利要求1所迷的純化多肽。11.一種純化的多核苷酸，編碼4又利要求6所述的純化的融合多肽。12.—種檢測(cè)特異性結(jié)合繁殖呼吸綜合征病毒(PRRSV)或PRRSV多肽的抗體的方法，包括(a)在允許形成多肽/抗體復(fù)合物的條件下，使基本上由SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18、SEQIDNO:13或其組合組成的純化多肽與懷疑包含有PRRSV特異性抗體的測(cè)試樣品接觸；(b)才全測(cè)多肽/抗體復(fù)合物；試樣品中，并且其中不存在多肽/抗體復(fù)合物表明PRRSV特異性抗體不存在于所述測(cè)試樣品中。13.如權(quán)利要求12的方法，還包括在進(jìn)行(b)之前使(a)的復(fù)合物與包含的指示劑接觸。14.如權(quán)利要求12的方法，15.如權(quán)利要求12的方法量。16.如權(quán)利要求12的方法，17.如權(quán)利要求12的方法，18.如權(quán)利要求12的方法，SEQIDNO:2、SEQIDNO:18、SEQIDNO:13或其組合以及一種或多種不與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQIDNO:13天然鄰接的多肽的融合蛋白。19.如權(quán)利要求12的方法，其中所述測(cè)試樣品包括從哺乳動(dòng)物獲得的生物樣品。20.如權(quán)利要求12的方法，其中所述方法包括選自逆流層析結(jié)合測(cè)定、酶if關(guān)免疫吸附測(cè)定、》t射免疫測(cè)定、紅細(xì)力包凝集測(cè)定、western印跡測(cè)定、熒光極化免疫測(cè)定以及間接的免疫熒光測(cè)定的測(cè)定。21.—種在哺乳動(dòng)物中檢測(cè)PRRSV感染的方法，包括(a)從懷疑具有PRRSV感染的哺乳動(dòng)物獲得生物樣品；(b)在允許形成多肽/抗體復(fù)合物的條件下，使基本上由SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18、SEQIDNO:13或其組合組成的純化多肽與所述生物樣品接觸；(c)4全測(cè)多肽/抗體復(fù)合物；其中檢測(cè)到多肽/抗體復(fù)合物表明所述哺乳動(dòng)物具有PRSSV感染，并且其中不存在多肽/抗體復(fù)合物表明所述哺乳動(dòng)物不具有PRSSV感22.如權(quán)利要求21的方法，還包括在進(jìn)行(c)之前使(b)的多肽/抗體復(fù)合物與形成可測(cè)量信號(hào)的指示劑接觸。23.如權(quán)利要求22的方法，其中所述多肽為基本上由SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18、SEQIDNO:13或其組合以及一種或多種不與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18、SEQIDNO:13天然鄰4妻的多肽組成的融合多肽。24.—種特異性結(jié)合PRRSV多肽的至少一個(gè)表位的抗體，其中所述多肽為SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQ其中所述抗體為抗體片段。,其中確定所述測(cè)試才羊品中所述抗體的其中所述多肽被附著到基質(zhì)。其中所述多肽為多聚體形式。其中所述多肽為包含SEQIDNO:l、IDNO:13。25.如權(quán)利要求24的抗體，其中所述抗體為單克隆抗體、多克隆抗體或抗體片段。26.—種檢測(cè)樣品中PRRSV多肽或PRRSV的方法，包括(a)在允許形成多肽/抗體復(fù)合物的條件下，使一種或多種特異性結(jié)合PRRSV多肽至少一個(gè)表位的抗體與所述樣品接觸，其中所述多肽包括SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:18或SEQIDNO:13;(b)檢測(cè)多肽/抗體復(fù)合物；其中檢測(cè)到多肽/抗體復(fù)合物表明PRRSV或PRRSV多肽存在于所述樣品中，并且不存在多肽/抗體復(fù)合物表明PRRSV或PRRSV多肽不存在于所述樣品中。27.如權(quán)利要求26的方法，其中所述一種或多種抗體為單克隆抗體、多克隆抗體或抗體片段。28.如權(quán)利要求26的方法，其中所述樣品為血清、全血、乳、肉汁、痰、肺灌洗液、肺組織、扁斗兆體組織或'淋巴結(jié)組織。29.—種在檢測(cè)PRRSVORF7特異性PRRSV抗體的診斷測(cè)定中減少假陽(yáng)性出現(xiàn)率的方法，包括在所述診斷測(cè)定中采用包含約19至約28個(gè)N末端氨基酸缺失的PRRSVORF7多肽作為抗體捕獲抗原。30.如權(quán)利要求29的方法，其中所述PRRSVORF7多肽為SEQIDNO:1或SEQIDNO:18。31.如權(quán)利要求29的方法，其中所述PRRSVORF7多肽還在任一端包含一個(gè)或多個(gè)不與PRRSVORF7天然鄰接的氨基酸。32.如權(quán)利要求1的物質(zhì)組合物，其中所述純化多肽還在任一端包含一個(gè)或多個(gè)不與PRRSVORF7天然鄰接的氨基酸。全文摘要本發(fā)明提供了采用多肽檢測(cè)和定量PRRSV抗體和抗體片段的組合物和方法。文檔編號(hào)G01N33/569GK101184997SQ200680013884公開(kāi)日2008年5月21日申請(qǐng)日期2006年2月24日優(yōu)先權(quán)日2005年2月25日發(fā)明者E·克拉申請(qǐng)人:艾德克斯實(shí)驗(yàn)室公司