專利名稱：一種調(diào)控板栗實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用生理標(biāo)記輔助調(diào)控板栗實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法。
技術(shù)背景縮短成年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期是指通過采取有效措施降低實(shí)生樹成花節(jié)位。目前還沒有專 用的降低果樹實(shí)生樹成花節(jié)位的方法，實(shí)踐中一般采用與促花有關(guān)的技術(shù)措施，包括 低溫、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、嫁接、扦插、環(huán)剝、環(huán)割、絞縊、限根、斷根等等。這方面的研 究報(bào)道很多，許多促花的技術(shù)可以顯著提高果樹實(shí)生樹成花率，但并非所有促花措施 都能有效地降低實(shí)生樹的成花節(jié)位。板栗實(shí)生樹的個(gè)體發(fā)育周期較長(zhǎng)，板栗育種實(shí)踐中，要縮短實(shí)生樹開花結(jié)果所需 的時(shí)間，前期需要促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，使其快速通過童期，當(dāng)實(shí)生樹進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期 之后則應(yīng)抑制營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，以降低成花節(jié)位，提早開花結(jié)果，從而縮短育種周期。因此， 確定實(shí)生樹成年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期開始與結(jié)束的臨界點(diǎn)十分重要，但是，因?yàn)槌赡隊(duì)I養(yǎng)生長(zhǎng) 期的臨界節(jié)位在不同雜交組合中不能通用，所以僅找到臨界點(diǎn)還不夠，只有應(yīng)用合適 的生理生化標(biāo)記輔助，適時(shí)對(duì)實(shí)生樹采取適宜的調(diào)控措施，才能達(dá)到上述目的。關(guān)于板栗階段轉(zhuǎn)變的生理標(biāo)記，有相關(guān)論文報(bào)道板栗組培苗的多酚含量可作為童期或返童(Rejuvenation)的生化標(biāo)記；以及板栗成年區(qū)枝條組培苗中有2條特異蛋 白質(zhì)譜帶(童期枝條組培苗中沒有)是板栗成年區(qū)的標(biāo)記等等內(nèi)容；而實(shí)生樹階段轉(zhuǎn) 變的調(diào)控技術(shù)尚無相關(guān)報(bào)道。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提出一種利用生理標(biāo)記輔助調(diào)控板栗實(shí)生樹階段轉(zhuǎn) 變的方法，為解決上述技術(shù)問題，所提供的技術(shù)方案 一種調(diào)控板栗實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，該方法包括有以下步驟采樣板栗實(shí)生幼樹于春季從根頸部選留1個(gè)萌蘗，8 9月份剪取選留的萌蘗， 從實(shí)生樹基部起分別采取萌蘗的葉片樣品和韌皮樣品，每3節(jié)為l樣品，每30株實(shí)生 樹的樣品混合，重復(fù)1 2次，清洗后冷凍保藏；多酚測(cè)定樣品凍干并研成細(xì)粉，測(cè)定細(xì)粉中的多酚U1、多酚U2、對(duì)-羥基苯甲 酸、綠原酸和兒茶素的含量；實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定根據(jù)上述不同節(jié)位樣品中多酚含量的連續(xù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行 分析a. 在實(shí)生樹某節(jié)位葉片樣品中出現(xiàn)多酚U1或者葉片中的兒茶素、綠原酸、多 酚U2含量升高，且韌皮部中的兒茶素、綠原酸含量下降，即可判定為實(shí)生樹從該節(jié)位起已經(jīng)開始階段轉(zhuǎn)變，進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期；b. 而當(dāng)實(shí)生樹某節(jié)位葉片樣品中多酚U1、多酚U2、對(duì)-羥基苯甲酸含量都達(dá)到高的穩(wěn)定水平，且葉片和韌皮部中的綠原酸達(dá)到最低穩(wěn)定水平，則可以判定為實(shí)生 樹在該節(jié)位起已經(jīng)完成階段轉(zhuǎn)變，進(jìn)入生殖生長(zhǎng)期；實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控在板栗實(shí)生樹進(jìn)入了成年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期時(shí)，即開始實(shí)施階段轉(zhuǎn)變調(diào)控，調(diào)控措施為在下一年的6月中旬 7月中旬整株噴施植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)采用本項(xiàng)目的技術(shù)，板栗實(shí)生樹接受調(diào)控提前完成階段轉(zhuǎn)變， 翌年可以在階段轉(zhuǎn)變開始的節(jié)位之上，階段轉(zhuǎn)變結(jié)束節(jié)位之下大量開花結(jié)果；從而促 進(jìn)了板栗實(shí)生樹盡早地開花結(jié)果。


圖1為本發(fā)明中對(duì)-羥基苯甲酸含量的檢測(cè)數(shù)據(jù)圖； 圖2為本發(fā)明中多酚Ul含量的檢測(cè)數(shù)據(jù)圖； 圖3為本發(fā)明中多酚U2含量的檢測(cè)數(shù)據(jù)圖； 圖4為本發(fā)明中兒茶素含量的檢測(cè)數(shù)據(jù)圖； 圖5為本發(fā)明中綠原酸含量的檢測(cè)數(shù)據(jù)圖。
具體實(shí)施例方式一種調(diào)控板栗實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，適用于板栗實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的監(jiān)測(cè)和調(diào)控。 具體技術(shù)細(xì)節(jié)如下采樣板栗實(shí)生幼樹于春季從根頸部選留l個(gè)萌蘗，8 9月份剪取選留的萌蘗，從實(shí)生樹基部起采取樣品，每3節(jié)為1樣品，每30株實(shí)生樹的樣品混合，重復(fù)1 2次，置冰盒中帶回實(shí)驗(yàn)室，自來水清洗后取下葉片和韌皮部，用紗布包好投入液氮中待觀lj多酚測(cè)定樣品凍干并研成細(xì)粉，用石油醚浸泡洗滌后，80%丙酮提取，高效液相色譜法測(cè)定多酚U1、多酚U2、對(duì)-羥基苯甲酸、綠原酸和兒茶素的含量。高效液相色譜條件，C18反相柱，柱溫30°C。采用梯度洗脫，流動(dòng)相A: 5%乙酸水，流動(dòng)相B:甲醇。洗脫梯度為0 15分鐘，B含量10 40。/。， 15 25分鐘，40 60%， 25 35分鐘，60 100%， 35 38分鐘，100%， 38 40分鐘，100 10%，40 50分鐘，10 10%。檢測(cè)波長(zhǎng)280納米。實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定根據(jù)上述不同節(jié)位樣品中多酚含量的連續(xù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析a. 在實(shí)生樹某節(jié)位葉片樣品中出現(xiàn)多酚U1或者葉片中的兒茶素、綠原酸、多 酚U2含量升高，且韌皮部中的兒茶素、綠原酸含量下降，即可判定為實(shí)生樹該節(jié)位 起已經(jīng)進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期；b. 而當(dāng)實(shí)生樹某節(jié)位葉片樣品中多酚U1、多酚U2、對(duì)-羥基苯甲酸含量都達(dá)到 高的穩(wěn)定水平，且葉片和韌皮部中的綠原酸達(dá)到最低穩(wěn)定水平，則可以判定為實(shí)生樹 在該節(jié)位起已經(jīng)完成階段轉(zhuǎn)變，進(jìn)入生殖生長(zhǎng)期。實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控如果板栗實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變開始，進(jìn)入了成年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期，即可實(shí)施階段轉(zhuǎn)變調(diào)控。調(diào)控措施為在下一年的6月中旬 7月中旬整株噴施1 3次激動(dòng)素(KT30) 1亳克/千克水和多效唑1000毫克/千克水或6-卞氨基腺嘌呤50毫克/ 千克水和多效唑1000毫克/千克水，至生殖生長(zhǎng)期停止調(diào)控。采用本項(xiàng)目的技術(shù)，板栗實(shí)生樹接受調(diào)控提前完成階段轉(zhuǎn)變，翌年可以在階段轉(zhuǎn) 變開始的節(jié)位之上，階段轉(zhuǎn)變結(jié)束節(jié)位之下大量開花結(jié)果。如果不實(shí)施調(diào)控處理開花 結(jié)果的節(jié)位不低于階段轉(zhuǎn)變結(jié)束的節(jié)位。實(shí)施例于2004年采樣監(jiān)測(cè)燕明X早豐和2399X燕山短枝2個(gè)2年生板栗雜種群體，9 月中旬采樣測(cè)定，發(fā)現(xiàn)實(shí)生樹39 41節(jié)及以上節(jié)位葉片樣品中出現(xiàn)多酚U1，判定為 實(shí)生樹39 41節(jié)已經(jīng)進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期，開始階段轉(zhuǎn)變。2005年7月7日整株噴 施1次激動(dòng)素(KT30) 1.0毫克/千克水和多效唑1000毫克/千克水。2006年春季調(diào)查， 2群體平均最低開花節(jié)位42節(jié)，開花株率74.93%，結(jié)果株率35.61%，雌花量平均5.43 個(gè)/株。其中，各種成分含量檢測(cè)如圖1至5所示板栗實(shí)生樹葉片中對(duì)-羥基苯甲酸含量變化曲線如圖l所示。35 37節(jié)以下對(duì)-羥 基苯甲酸含量無顯著變化，從36 38節(jié)到51 53節(jié)對(duì)-羥基苯甲酸含量明顯高于33 35節(jié)以下。54 56節(jié)以上對(duì)-羥基苯甲酸含量激增到更高水平。說明板栗實(shí)生樹36 38節(jié)和54 56節(jié)分別是2個(gè)生理轉(zhuǎn)折點(diǎn)。如圖2所示，從板栗實(shí)生樹的39 41節(jié)開始，葉片樣品中檢測(cè)到一種未知多酚 U,，并且從39 41節(jié)到51 53節(jié)之間U,的含量隨節(jié)位升高緩慢升高，但到54 56 節(jié)以上U,含量突然急劇升高。說明39 41節(jié)和54-56節(jié)分別是板栗實(shí)生樹的2個(gè)生 理轉(zhuǎn)折點(diǎn)。板栗實(shí)生樹葉片中檢測(cè)到另一種未知多酚U2。如圖3所示，36 38節(jié)以下，未知 多酚U2含量無顯著變化。從39 41節(jié)到51 53節(jié)，112含量顯著高于36 38節(jié)以下。 54 56節(jié)以上U2含量突然急劇升高。說明39 41節(jié)和54 56節(jié)分別是板栗實(shí)生樹 的2個(gè)生理轉(zhuǎn)折點(diǎn)。如圖4所示，板栗實(shí)生樹11 35節(jié)韌皮部中兒茶素含量未見顯著變化，但從36-38 節(jié)開始含量驟降，直到48 50節(jié)維持在較低水平，之后，51 53節(jié)以上韌皮部中兒 茶素含量又恢復(fù)到33 35節(jié)以下的水平。說明36 38節(jié)和51 53節(jié)分別是板栗實(shí)生 樹的2個(gè)生理轉(zhuǎn)折點(diǎn)。葉片中兒茶素含量36 38節(jié)之前隨節(jié)位升高變化幅度很小，從 39-40節(jié)開始含量顯著高于36 38節(jié)以下。說明39 41節(jié)是板栗實(shí)生樹的生理轉(zhuǎn)折 點(diǎn)。板栗實(shí)生樹葉片和韌皮部中綠原酸含量隨節(jié)位升高的動(dòng)態(tài)曲線如圖5所示。韌皮 部中綠原酸含量呈梯度下降趨勢(shì)，36 38節(jié)到48 50節(jié)的含量顯著低于33 35節(jié)以 下，而51 53節(jié)以上綠原酸含量又進(jìn)一步顯著降低。說明36 38節(jié)和51 53節(jié)分別 是板栗實(shí)生樹的2個(gè)生理轉(zhuǎn)折點(diǎn)。36 38節(jié)以下的葉片中綠原酸含量較低，從39 41節(jié)到48 50節(jié)含量較高，51 53節(jié)之后又降低到更低水平。說明39 41節(jié)和51 53 節(jié)分別是板栗實(shí)生樹的2個(gè)生理轉(zhuǎn)折點(diǎn)。通過本項(xiàng)研究，板栗實(shí)生樹播種后第3年實(shí)施階段轉(zhuǎn)變調(diào)控，第4年開花結(jié)果， 第6年完成雜種初選。較常規(guī)技術(shù)提早3年，節(jié)省育種成本33.3%。
權(quán)利要求
1. 一種調(diào)控板栗實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，該方法包括有以下步驟采樣板栗實(shí)生幼樹于春季從根頸部選留1個(gè)萌蘗，8～9月份剪取選留的萌蘗，從實(shí)生樹基部起分別采取萌蘗的葉片樣品和韌皮樣品，每3節(jié)為1樣品，每30株實(shí)生樹相同節(jié)位的樣品混合，重復(fù)1～2次，清洗后冷凍保藏；多酚測(cè)定樣品凍干并研成細(xì)粉，測(cè)定細(xì)粉中的多酚U1、多酚U2、對(duì)-羥基苯甲酸、綠原酸和兒茶素的含量；實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定根據(jù)上述不同節(jié)位樣品中多酚含量的連續(xù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析a.在實(shí)生樹某節(jié)位葉片樣品中出現(xiàn)多酚U1或者葉片中的兒茶素、綠原酸、多酚U2含量升高，且韌皮部中的兒茶素、綠原酸含量下降，即可判定為實(shí)生樹從該節(jié)位起已經(jīng)開始階段轉(zhuǎn)變，進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期；b.而當(dāng)實(shí)生樹某節(jié)位葉片樣品中多酚U1、多酚U2、對(duì)-羥基苯甲酸含量都達(dá)到高的穩(wěn)定水平，且葉片和韌皮部中的綠原酸達(dá)到最低穩(wěn)定水平，則可以判定為實(shí)生樹在該節(jié)位起已經(jīng)完成階段轉(zhuǎn)變，進(jìn)入生殖生長(zhǎng)期；實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控在板栗實(shí)生樹進(jìn)入了成年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期時(shí)，即開始實(shí)施階段轉(zhuǎn)變調(diào)控，調(diào)控措施為在下一年的6月中旬～7月中旬整株噴施植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的調(diào)控板栗實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，其特征在于所述多 酚測(cè)定為高效液相色譜法測(cè)定。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種調(diào)控板栗實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，該方法包括有以下步驟采樣、多酚測(cè)定、實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定和實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控。本發(fā)明明確了果樹實(shí)生樹的生理轉(zhuǎn)折點(diǎn)和實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的臨界點(diǎn)，從而找到了實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的生理標(biāo)記，利用生理標(biāo)記監(jiān)測(cè)大規(guī)模雜交群體，階段轉(zhuǎn)變開始后實(shí)施調(diào)控。板栗實(shí)生樹播種后第3年實(shí)施階段轉(zhuǎn)變調(diào)控，第4年開花結(jié)果，第6年完成雜種初選。較常規(guī)技術(shù)提早3年，節(jié)省育種成本33.3％。
文檔編號(hào)G01N30/02GK101228835SQ20071000255
公開日2008年7月30日 申請(qǐng)日期2007年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月26日
發(fā)明者劉慶香, 孔德軍, 常瑞豐, 張新忠, 李春敏, 王廣鵬 申請(qǐng)人:河北省農(nóng)林科學(xué)院昌黎果樹研究所