專利名稱：一種調(diào)控桃實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種桃的育種的方法，具體涉及一種利用生理標(biāo)記輔助調(diào)控桃實(shí)生樹階段轉(zhuǎn) 變的方法。
技術(shù)背景果樹實(shí)生樹從播種到結(jié)果需要幾年甚至十幾年時(shí)間，這是提高果樹育種工作效率的技術(shù) 瓶頸。果樹等木本被子植物的個(gè)體發(fā)育過程分為童期、成年?duì)I養(yǎng)生長期和生殖生長期。實(shí)生 樹表現(xiàn)童性，不具備成花能力的發(fā)育階段稱為童期；實(shí)生樹雖然具備了成花潛能，但在自然 條件下不能成花，接受某種誘導(dǎo)后可以成花，而且之后即使不再實(shí)施這種誘導(dǎo)也能連續(xù)成花 的發(fā)育階段稱為成年?duì)I養(yǎng)生長期；而實(shí)生樹在自然條件下連續(xù)開花結(jié)果的階段稱為生殖生長 期。為提高果樹育種效率，將實(shí)生樹從播種到自然條件下連續(xù)開花結(jié)果所需的時(shí)間縮到最 短， 一直是果樹育種工作者追求的目標(biāo)。蘋果、桃等多年生木本果樹的育種理論上，要縮短 實(shí)生樹開花結(jié)果所需的時(shí)間，前期需要采取促進(jìn)營養(yǎng)生長的技術(shù)措施，使其快速通過童期， 而實(shí)生樹進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生長期之后則應(yīng)采取抑制營養(yǎng)生長的技術(shù)措施，以降低成花節(jié)位，提 早開花結(jié)果，從而縮短育種周期?？s短成年?duì)I養(yǎng)生長期是指通過采取有效措施降低實(shí)生樹成花節(jié)位。目前還沒有專用的降 低果樹實(shí)生樹成花節(jié)位的方法，實(shí)踐中一般采用與促花有關(guān)的技術(shù)措施，包括低溫、生長調(diào) 節(jié)劑、嫁接、扦插、環(huán)剝、環(huán)割、絞縊、限根、斷根等等。這方面的研究報(bào)道很多，許多促 花的技術(shù)可以顯著提高果樹實(shí)生樹成花率，但并非所有促花措施都能有效地降低實(shí)生樹的成 花節(jié)位。育種實(shí)踐中成年?duì)I養(yǎng)生長期從何時(shí)何處起始，到何時(shí)何處結(jié)束至今尚不清楚，限制了育 種效率的提高。因此，準(zhǔn)確確定實(shí)生樹童性的消失，進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生長期的臨界點(diǎn)，對(duì)于提高果樹育種效率十分重要，而且，即使找到了某實(shí)生樹在某特定條件下成年?duì)I養(yǎng)生長期的起 始的臨界節(jié)位，其在不同雜交組合、不同自然條件下也不能通用，所以，只有找到合適的生 理生化標(biāo)記輔助，適時(shí)對(duì)實(shí)生樹采取適宜的調(diào)控措施，才能達(dá)到上述目的。關(guān)于桃及其他木本植物階段轉(zhuǎn)變的生理標(biāo)記尚無相關(guān)專利，相關(guān)論文報(bào)道如下桃童期葉片和成年期葉片在光和能力、淀粉、蔗糖、甘露醇含量上都有區(qū)別或許可作為桃實(shí)生樹童 性的標(biāo)記[1]。桃成熟區(qū)莖尖較童區(qū)莖尖玉米素含量高，分布廣泛，可作為桃實(shí)生樹童性消失 的標(biāo)記[1]。但關(guān)于實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控技術(shù)尚無相關(guān)專利報(bào)道。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種調(diào)控桃實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，該方法縮短實(shí)生樹開花結(jié)果所需的時(shí)間， 實(shí)生樹進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生長期之后抑制營養(yǎng)生長，以降低成花節(jié)位，提早開花結(jié)果，從而縮短 育種周期。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種調(diào)控桃實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，連續(xù)測(cè)定不同節(jié)位采樣中所含內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯基腺嘌呤iP、玉米素ZT的含量，對(duì)其進(jìn)行分析，確定實(shí)生樹階段 轉(zhuǎn)變開始與結(jié)束的臨界點(diǎn)，對(duì)實(shí)生樹采取調(diào)控措施，其具體步驟如下1) 采樣① 桃實(shí)生幼樹于春季從根頸部選留1個(gè)萌蘗，8-9月份采樣，剪取此選留萌蘗，從實(shí)生樹 的基部起隨節(jié)位升高，每5節(jié)為1采樣單元，取30株實(shí)生樹，分別取其相同節(jié)位采樣單元混 合，重復(fù)1次，置冰盒中帶回；② 自來水清洗后取下韌皮部，用紗布包好投入液氮中待測(cè)；2) 采用高效液相色譜法測(cè)定韌皮部采樣中所含內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、 異戊烯基腺嘌呤iP、玉米素ZT的含量，其中，采用高效液相色譜的條件是，色譜柱為C18 反相柱，流動(dòng)相中的甲醇與0.5%乙酸的體積比為45 : 55，流速0.8毫升/分鐘，紫外檢測(cè)器， 檢測(cè)波長為252納米，采用外標(biāo)法定性，峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。其測(cè)定步驟如下① 采樣經(jīng)冷凍干燥機(jī)干燥20-26小時(shí)，研成細(xì)粉，過35-45目篩；② 取0.3-0.7克凍干樣粉，加入含有0.8-1.2毫摩爾2,6-二叔丁基對(duì)甲苯酚的2-3毫升的4 。C100。/。乙腈，25-35。C條件下超聲波浴25-35分鐘，冰浴浸提10-15小時(shí)，4'C條件下 10000-12000轉(zhuǎn)/分離心8-12分鐘；③ 取1-2毫升②所得的上清液，25-35。C條件下干燥，用0.8-1.2毫升pH 8.0的0.4摩爾/ 升的磷酸緩沖液重新溶解，每次加入0.4-0.6毫升的三氯甲垸萃取3-5次，直至有機(jī)相無色， 水相用15-25微升的1.5-2.5摩爾/升的NaOH調(diào)pH至8.0,加入70-90毫克的不溶性的聚乙 烯聚吡咯烷酮(PVPP)，渦旋15-25秒后，4'C條件下10000-12000轉(zhuǎn)/分離心8-12分鐘；④ 取l-2毫升③所得的上清液，用45-60微升的純甲酸調(diào)pH至3.0，每次加入0.4-0.6毫升的乙酸乙酯，萃取2-5次，合并酯相，25-35。C條件下千燥，用0.15-0.3毫升流動(dòng)相溶解， 過0.45微米的微孔濾膜后，取10-20微升用高效液相色譜測(cè)定內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤 霉素GA、異戊烯基腺嘌呤iP、玉米素ZT的含量。3) 實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定根據(jù)上述不同節(jié)位采樣中內(nèi)源激素含量的連續(xù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，① 隨節(jié)位升高，實(shí)生樹某節(jié)位韌皮部采樣中玉米素ZT、異戊烯基腺嘌呤iP、赤霉素GA 含量驟然升高，且脫落酸ABA含量突然降低，即可判定為實(shí)生樹該節(jié)位已經(jīng)進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生 長期，開始階段轉(zhuǎn)變，即可實(shí)施階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控；② 隨著節(jié)位繼續(xù)升高，當(dāng)實(shí)生樹某節(jié)位韌皮部采樣中玉米素ZT、異戊烯基腺嘌呤iP、赤 霉素GA含量從高水平驟然恢復(fù)到低水平，則可以判定為實(shí)生樹在該節(jié)位已經(jīng)完成階段轉(zhuǎn)變， 進(jìn)入生殖生長期，無需再實(shí)施階段轉(zhuǎn)變調(diào)控措施；4) 實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控所述階段轉(zhuǎn)變調(diào)控的調(diào)控措施為下一年的6月底-7月初整株噴施2-3次植物生長調(diào)節(jié)劑， 此植物生長調(diào)節(jié)劑選用125毫克/千克水的烯效唑，每2次噴施間隔5-10天。 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1) 本發(fā)明采用實(shí)生樹生理生化指標(biāo)分析的取樣方法，用實(shí)生樹基生萌蘗與旺盛新梢接 力的辦法實(shí)現(xiàn)整株所有節(jié)位連續(xù)取樣；30株實(shí)生樹相同節(jié)位混合采樣，消除實(shí)生樹基因型間 的差異；5節(jié)為1個(gè)采樣單位，既消除取樣誤差，又減少工作量。(2) 本發(fā)明在不同節(jié)位連續(xù)取樣的基礎(chǔ)上，分析生理生化指標(biāo)隨節(jié)位升高的動(dòng)態(tài)變化， 確定成年?duì)I養(yǎng)生長期開始和結(jié)束的臨界點(diǎn)，用多種生長調(diào)節(jié)劑組合同時(shí)對(duì)實(shí)生樹進(jìn)行促花處 理，調(diào)査最低始花節(jié)位，使所得結(jié)果更準(zhǔn)確、更可靠。(3) 利用本發(fā)明所提供的方法，桃實(shí)生樹接受調(diào)控提前完成階段轉(zhuǎn)變，翌年可以在階段 轉(zhuǎn)變開始的節(jié)位之上，階段轉(zhuǎn)變結(jié)束節(jié)位之下大量開花結(jié)果。如果不實(shí)施調(diào)控處理，開花結(jié) 果的節(jié)位不低于階段轉(zhuǎn)變結(jié)束的節(jié)位。(4) 本發(fā)明與常規(guī)技術(shù)相比，桃實(shí)生樹播種當(dāng)年即通過童期，第2年實(shí)施階段轉(zhuǎn)變調(diào)控， 第3年大量開花結(jié)果，第5年完成雜種初選；較常規(guī)技術(shù)提早l年，節(jié)省育種成本16.7%。


圖1是隨節(jié)位升高，采樣韌皮部中玉米素ZT含量的動(dòng)態(tài)變化圖；圖2是隨節(jié)位升高，采樣韌皮部中異戊烯基腺嘌呤iP含量的動(dòng)態(tài)變化圖；圖3是隨節(jié)位升高，采樣韌皮部中赤霉素GA含量的動(dòng)態(tài)變化圖；圖4是隨節(jié)位升高，采樣韌皮部中脫落酸ABA含量的動(dòng)態(tài)變化圖。
具體實(shí)施方式
一種調(diào)控桃實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，連續(xù)測(cè)定不同節(jié)位采樣中所含內(nèi)源激素中的脫落酸 ABA、赤霉素GA、異戊烯基腺嘌呤iP、玉米素ZT的含量，對(duì)其進(jìn)行分析，確定實(shí)生樹階段 轉(zhuǎn)變開始與結(jié)束的臨界點(diǎn)，對(duì)實(shí)生樹采取調(diào)控措施，其具體步驟如下 實(shí)施例11) 采樣① 昌黎果樹所于2003年采樣監(jiān)測(cè)大久保、燕紅2個(gè)當(dāng)年生自然實(shí)生群體，桃實(shí)生幼樹于 春季從根頸部選留1個(gè)萌蘗，9月15日采樣，剪取此選留萌蘗，從實(shí)生樹的基部起隨節(jié)位升 高，每5節(jié)為1采樣單元，取30株實(shí)生樹，分別取其相同節(jié)位采樣單元混合，重復(fù)l次共選 取60株，置冰盒中帶回；② 自來水清洗后取下韌皮部，用紗布包好投入液氮中待測(cè)；2) 測(cè)定采用高效液相色譜法測(cè)定韌皮部采樣中所含內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異 戊烯基腺嘌呤iP、玉米素ZT的含量，所述高效液相色譜的條件是，色譜柱為C18反相柱， 流動(dòng)相中的甲醇與0.5%乙酸的體積比為45 : 55，流速0.8毫升/分鐘，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長 為252納米，采用外標(biāo)法定性，峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。其步驟如下-① 采樣經(jīng)冷凍干燥機(jī)干燥20小時(shí)，研成細(xì)粉，過45目篩；② 取0.3克凍干樣粉，加入含有0.8毫摩爾2,6-二叔丁基對(duì)甲苯酚的2毫升的4匸100%乙 腈，25r條件下超聲波浴35分鐘，冰浴浸提15小時(shí)，4'C條件下10000轉(zhuǎn)/分離心12分鐘；③ 取1毫升②所得的上清液，25'C條件下干燥，用0.8毫升pH 8.0的0.4摩爾/升的磷酸 緩沖液重新溶解，每次加入0.4毫升的三氯甲烷萃取3次，直至有機(jī)相無色，水相用15微升 的2.5摩爾/升的NaOH調(diào)pH至8.0，加入70毫克的不溶性的聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)，渦 旋25秒后，4X:條件下10000轉(zhuǎn)/分離心12分鐘； 取1毫升③所得的上清液，用60微升的純甲酸調(diào)pH至3.0，每次加入0.4毫升的乙酸 乙酯，萃取3次，合并酯相，25'C條件下干燥，用0.15毫升流動(dòng)相溶解，過0.45微米的微孔 濾膜后，取10微升用高效液相色譜測(cè)定內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯基腺 嘌呤iP、玉米素ZT的含量；3) 實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定根據(jù)圖1、圖2、圖3、圖4連續(xù)測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)實(shí)生樹60節(jié)及以上節(jié)位韌 皮部樣品中玉米素、異戊烯基腺嘌呤、赤霉素含量驟然升高，且脫落酸含量突然降低，判定 為實(shí)生樹60節(jié)已經(jīng)進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生長期，開始階段轉(zhuǎn)變。到80節(jié)完成階段轉(zhuǎn)變。4)階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控-2004年6月28日、7月7日分2次整株噴施125毫克/千克水烯效唑。2005年春季調(diào)查，2群體最低成花節(jié)位平均68節(jié)，成花株率分別為85.41%和68.26%，成花節(jié)率分別為47.01%和17.86%。實(shí)施例21) 采樣2003年8月20日采樣，步驟同實(shí)施例l;2) 測(cè)定采樣中內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯基腺嘌呤iP、玉米素ZT 的含量，其步驟如下① 采樣經(jīng)冷凍千燥機(jī)干燥26小時(shí)，研成細(xì)粉，過35目篩；② 取0.7克凍干樣粉，加入含有0.8毫摩爾2,6-二叔丁基對(duì)甲苯酚(BHT)的3毫升的4°C 100%乙腈，35。C下超聲波浴25分鐘，冰浴浸提15小時(shí)，4'C條件下12000轉(zhuǎn)/分離心8分鐘；③ 取2毫升②所得的上清液，35'C條件下干燥，用0.8毫升pH 8.0的0.4摩爾/升的磷酸 緩沖液重新溶解，每次加入0.6毫升的三氯甲垸萃取5次，直至有機(jī)相無色，水相用25微升 的1.5摩爾/升的NaOH調(diào)pH至8.0，加入90毫克的不溶性的聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)，渦 旋25秒后，4'C條件下12000轉(zhuǎn)/分離心8分鐘；④ 取2毫升③所得的上清液，用60微升的純甲酸調(diào)pH至3.0，每次加入0.6毫升的乙酸 乙酯，萃取5次，合并酯相，35'C條件下干燥，用0.15毫升流動(dòng)相溶解，過0.45微米的微 孔濾膜后，取20微升用高效液相色譜測(cè)定內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯基 腺嘌呤iP、玉米素ZT的含量；所述高效液相色譜的條件同實(shí)施例1 。3) 實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定根據(jù)上述不同節(jié)位采樣中內(nèi)源激素含量的連續(xù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，① 隨節(jié)位升高，實(shí)生樹某節(jié)位韌皮部采樣中玉米素ZT、異戊烯基腺嘌呤iP、赤霉素GA 含量驟然升高，且脫落酸ABA含量突然降低，即可判定為實(shí)生樹該節(jié)位己經(jīng)進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生 長期，開始階段轉(zhuǎn)變；② 隨著節(jié)位繼續(xù)升高，當(dāng)實(shí)生樹某節(jié)位韌皮部采樣中玉米素ZT、異戊烯基腺嘌呤iP、赤 霉素GA含量從高水平驟然恢復(fù)到低水平，則可以判定為實(shí)生樹在該節(jié)位已經(jīng)完成階段轉(zhuǎn)變， 進(jìn)入生殖生長期；4)實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控2004年6月30日、7月7日分2次整株噴施125毫克/千克 水烯效唑。 實(shí)施例31) 采樣2003年8月30日采樣，步驟同實(shí)施例l;2) 測(cè)定采樣中內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯基腺嘌呤iP、玉米素ZT 的含量，其步驟如下① 采樣經(jīng)冷凍干燥機(jī)干燥22小時(shí)，研成細(xì)粉，過38目篩；② 取0.4克凍干樣粉，加入含有0.9毫摩爾2,6-二叔丁基對(duì)甲苯酚(BHT)的2.5毫升的4 。Cl00。/。乙腈，28'C下超聲波浴29分鐘，冰浴浸提ll小時(shí)，4。C下11000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；③ 取1.4毫升②所得的上清液，28'C條件下干燥，用0.9毫升pH 8.0的0.4摩爾/升的磷 酸緩沖液重新溶解，每次加入0.5毫升的三氯甲垸萃取3次，直至有機(jī)相無色，水相用18微 升的1.8摩爾/升的NaOH調(diào)pH至8.0，加入75毫克的不溶性的聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)， 渦旋18秒后，4'C條件下11000轉(zhuǎn)/分離心9分鐘； 取1.4毫升③所得的上清液，用48微升的純甲酸調(diào)pH至3.0，每次加入0.45毫升的 乙酸乙酯，萃取3次，合并酯相，28t:條件下干燥，用0.18毫升流動(dòng)相溶解，過0.45微米的 微孔濾膜后，取10微升用高效液相色譜測(cè)定內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯 基腺嘌呤iP、玉米素ZT的含量；所述高效液相色譜的條件同實(shí)施例1 。3) 實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定同實(shí)施例2;4) 實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控2004年6月29日、7月5日、7月10日分3次整株噴施125 毫克/千克水烯效唑。實(shí)施例41) 采樣2003年9月10日采樣，步驟同實(shí)施例l;2) 測(cè)定采樣中內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯基腺嘌呤iP、玉米素ZT 的含量，其步驟如下① 采樣經(jīng)冷凍干燥機(jī)干燥24小時(shí)，研成細(xì)粉，過40目篩；② 取0.5克凍干樣粉，加入含有1毫摩爾2,6-二叔丁基對(duì)甲苯酚(BHT)的2.3毫升的4'C 100%乙腈，30。C下超聲波浴30分鐘，冰浴浸提12小時(shí)，4'C條件下10000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；③ 取1.5毫升②所得的上清液，3(TC條件下千燥，用l毫升pH8.0的0.4摩爾/升的磷酸 緩沖液重新溶解，每次加入0.5毫升的三氯甲烷萃取4次，直至有機(jī)相無色，水相用20微升 的2摩爾/升的NaOH調(diào)pH至8.0，加入80毫克的不溶性的聚乙烯聚吡咯垸酮(PVPP)，渦旋20秒后，4'C條件下10000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；④取1.5毫升③所得的上清液，用50微升的純甲酸調(diào)pH至3.0，每次加入0.5毫升的乙 酸乙酯，萃取3次，合并酯相，30。C條件下干燥，用0.2毫升流動(dòng)相溶解，過0.45微米的微 孔濾膜后，取15微升用高效液相色譜測(cè)定內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯基 腺嘌呤iP、玉米素ZT的含量；所述高效液相色譜的條件同實(shí)施例1 。3) 實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定同實(shí)施例2;4) 實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控2004年6月25日、7月1日、7月5日分3次整株噴施125 毫克/千克水烯效唑。實(shí)施例51) 采樣2003年9月12日采樣，步驟同實(shí)施例l;2) 測(cè)定采樣中內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯基腺嘌呤iP、玉米素ZT 的含量，其步驟如下-① 采樣樣品經(jīng)冷凍干燥機(jī)干燥25小時(shí)，研成細(xì)粉，過40目篩；② 取0.6克凍干樣粉，加入含有1.1毫摩爾2，6-二叔丁基對(duì)甲苯酚(BHT)的2.8毫升的4 t;iOO。/。乙腈，32'C下超聲波浴33分鐘，冰浴浸提12小時(shí)，4'C下12000轉(zhuǎn)/分離心11分鐘；③ 取1.8毫升②所得的上清液，32'C條件下干燥，用1.1毫升pH 8.0的0.4摩爾/升的磷 酸緩沖液重新溶解，每次加入0.55毫升的三氯甲垸萃取4次，直至有機(jī)相無色，水相用22 微升的2.2摩爾/升的NaOH調(diào)pH至8.0，加入85毫克的不溶性的聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)， 渦旋22秒后，4"C條件下以11000轉(zhuǎn)/分離心11分鐘；④ 取1.8毫升③所得的上清液，用55微升的純甲酸調(diào)pH至3.0，每次加入0.55毫升的 乙酸乙酯，萃取4次，合并酯相，35r條件下干燥，用0.25毫升流動(dòng)相溶解，過0.45微米的 微孔濾膜后，取15微升用高效液相色譜測(cè)定內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯 基腺嘌呤iP、玉米素ZT的含量；所述高效液相色譜的條件同實(shí)施例1。3) 實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定同實(shí)施例2;4) 實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控2004年6月30日、7月10日分2次整株噴施125毫克/千 克水烯效唑。[1] Bitonti， M. B" Cozza， R.， Chiappetta, A.， Giannino， D" Castiglione， M. R.， Dewitte， W.， Mariotti， D.， Onckelen， H. V. and Innocenti， A. M.， Distinct nuclear organization, DNA methylation pattern and cytokinin distribution mark juvenile, juvenile-like and adult vegetative apical meristems in peach (/Vm"m戸w'ca (L.) Batsch), J. Exp. Bot" 2002， 53, 1047-105權(quán)利要求
1. 一種調(diào)控桃實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，其特征在于，連續(xù)測(cè)定不同節(jié)位采樣中所含內(nèi)源激素中的脫落酸、赤霉素、異戊烯基腺嘌呤、玉米素的含量，對(duì)其進(jìn)行分析，確定實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變開始與結(jié)束的臨界點(diǎn)，對(duì)實(shí)生樹采取調(diào)控措施，其具體步驟如下1)采樣①桃實(shí)生幼樹于春季從根頸部選留1個(gè)萌蘗，8-9月份采樣，剪取此選留萌蘗，從實(shí)生樹的基部起隨節(jié)位升高，每5節(jié)為1采樣單元，取30株實(shí)生樹，分別取其相同節(jié)位采樣單元混合，重復(fù)1次，置冰盒中帶回；②自來水清洗后取下韌皮部，用紗布包好投入液氮中待測(cè)；2)采用高效液相色譜法測(cè)定韌皮部采樣中內(nèi)源激素中的脫落酸、赤霉素、異戊烯基腺嘌呤、玉米素的含量；3)實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的確定根據(jù)上述不同節(jié)位采樣中內(nèi)源激素含量的連續(xù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，①隨節(jié)位升高，實(shí)生樹某節(jié)位韌皮部采樣中玉米素、異戊烯基腺嘌呤、赤霉素含量驟然升高，且脫落酸含量突然降低，即可判定為實(shí)生樹該節(jié)位已經(jīng)進(jìn)入成年?duì)I養(yǎng)生長期，開始階段轉(zhuǎn)變；②隨著節(jié)位繼續(xù)升高，當(dāng)實(shí)生樹某節(jié)位韌皮部采樣中玉米素、異戊烯基腺嘌呤、赤霉素含量從高水平驟然恢復(fù)到低水平，則可以判定為實(shí)生樹在該節(jié)位已經(jīng)完成階段轉(zhuǎn)變，進(jìn)入生殖生長期；4)實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的調(diào)控實(shí)生樹節(jié)位進(jìn)入了成年?duì)I養(yǎng)生長期，即可實(shí)施階段轉(zhuǎn)變調(diào)控，調(diào)控措施為下一年的6月底-7月初整株噴施2-3次植物生長調(diào)節(jié)劑，每2次噴施間隔5-10天。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種調(diào)控桃實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，其特征在于，采用高效液 相色譜的條件是，色譜柱為C18反相柱，流動(dòng)相中的甲醇與0.5%乙酸的體積比為45 : 55， 流速0.8毫升/分鐘，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長為252納米，其測(cè)定步驟如下① 采樣經(jīng)冷凍干燥機(jī)干燥20-26小時(shí)，研成細(xì)粉，過35-45目篩；② 取0.3-0.7克凍干樣粉，加入含有0.8-1.2毫摩爾2,6-二叔丁基對(duì)甲苯酚的2-3毫升的4 。C100。/。乙腈，25-35。C條件下超聲波浴25-35分鐘，冰浴浸提10-15小時(shí)，4'C條件下 10000-12000轉(zhuǎn)/分離心8-12分鐘；③取1-2毫升②所得的上清液，25-35。C條件下干燥，用0.8-1.2毫升pH 8.0的0.4摩爾/ 升的磷酸緩沖液重新溶解，每次加入0.4-0.6毫升的三氯甲垸萃取3-5次，直至有機(jī)相無色， 水相用15-25微升的1.5-2.5摩爾/升的NaOH調(diào)pH至8.0，加入70-90毫克的不溶性的聚乙 烯聚吡咯烷酮，渦旋15-25秒后，4X:條件下10000-12000轉(zhuǎn)/分離心8-12分鐘； 取1-2毫升③所得的上清液，用45-60微升的純甲酸調(diào)pH至3.0,每次加入0.4-0.6毫 升的乙酸乙酯，萃取2-5次，合并酯相，25-35"條件下干燥，用0.15-0.3毫升流動(dòng)相溶解， 過0.45微米的微孔濾膜后，取10-20微升用高效液相色譜測(cè)定內(nèi)源激素中的脫落酸、赤霉素、 異戊烯基腺嘌呤、玉米素的含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種調(diào)控桃實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變的方法，連續(xù)測(cè)定不同節(jié)位采樣中所含內(nèi)源激素中的脫落酸ABA、赤霉素GA、異戊烯基腺嘌呤iP、玉米素ZT的含量，對(duì)其進(jìn)行分析，確定實(shí)生樹階段轉(zhuǎn)變開始與結(jié)束的臨界點(diǎn)，對(duì)實(shí)生樹采取調(diào)控措施，抑制營養(yǎng)生長，以降低成花節(jié)位，提早開花結(jié)果，從而縮短育種周期。桃實(shí)生樹播種當(dāng)年即通過童期，第2年實(shí)施階段轉(zhuǎn)變調(diào)控，第3年大量開花結(jié)果，第5年完成雜種初選，較常規(guī)技術(shù)提早1年，節(jié)省育種成本16.7％。
文檔編號(hào)G01N33/00GK101228838SQ200710002559
公開日2008年7月30日 申請(qǐng)日期2007年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月26日
發(fā)明者俎文芳, 劉國儉, 常瑞豐, 張新忠, 李春敏, 王廣鵬 申請(qǐng)人:河北省農(nóng)林科學(xué)院昌黎果樹研究所