專利名稱：食品或飼料中脂溶性偶氮染料的檢測方法及試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品衛(wèi)生檢測領(lǐng)域，具體的說，涉及一種食品或飼料中蘇丹紅等脂溶性偶氮染料的檢測方法及試劑盒。
背景技術(shù)：
目前，化學(xué)合成染料已有幾千種。偶氮染料約占總數(shù)的三分之二。偶氮染料是合成染料中數(shù)量、品種最多的一類，在工業(yè)上被廣泛應(yīng)用。偶氮染料又可分為脂溶性偶氮染料(或稱為親脂性偶氮染料)和水溶性偶氮染料(或稱為親水性偶氮染料)。偶氮化合物在食品中非天然存在。由于偶氮染料大多數(shù)有較強的毒性，能作為食品添加劑使用的為數(shù)很少。在我國，只有檸檬黃等少數(shù)幾種水溶性染料被允許作為食品添加劑使用，并且對其用量有嚴(yán)格的規(guī)定。脂溶性偶氮染料被禁止在食品中添加。
在食品中使用色素可改變商品的“賣相”，提高其價值。由于天然色素存在價格昂貴，著色力差，易褪色等缺點，而偶氮染料具有著色力強、價格低、顏色鮮艷等特性，因此偶氮染料常被違法添加在食品中。
脂溶性偶氮染料價廉易得，工業(yè)上常用于地板蠟、鞋油、機油等產(chǎn)品的染色。近年來，關(guān)于在食品和飼料中違法添加脂溶性偶氮類染料所引發(fā)的食品安全事件時有發(fā)生。這些染料包括蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅III、蘇丹紅IV、蘇丹橙G、蘇丹紅7B、蘇丹紅G、對位紅等。
2005年4月，中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布的第43號公告指出“據(jù)世界衛(wèi)生組織的國際癌癥研究機構(gòu)(IARC)1995年確定，蘇丹紅屬第三類致癌物質(zhì)，它能夠使老鼠和兔子患癌癥，但還沒有直接證據(jù)表明對人有致癌作用。由于蘇丹紅誘發(fā)動物腫瘤的劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于人體可能攝入量，因此，偶然攝入含有少量蘇丹紅的食品對人體造成危害的可能性較小，但如果長期大劑量攝入會增加人體致癌的危險性。因而，我國及許多國家都禁止將其用于食品生產(chǎn)。”2005年國家質(zhì)檢總局組織全國質(zhì)檢系統(tǒng)對可能含有蘇丹紅的辣味制品、番茄醬制品進(jìn)行了專項檢查。通過檢查發(fā)現(xiàn)，少數(shù)添加劑生產(chǎn)企業(yè)以蘇丹紅化工染料冒充食用添加劑辣椒紅色素銷售給辣味制品生產(chǎn)企業(yè)，見國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局公告第54號(2005-04-11)。
早在2003年，為防止進(jìn)口紅辣椒及產(chǎn)品中摻雜致癌物質(zhì)蘇丹紅一號，歐委會于6月20日發(fā)布關(guān)于《歐盟關(guān)于嚴(yán)查進(jìn)口紅辣椒及其產(chǎn)品中蘇丹紅一號化工染料的2003/460/EC決議》，決定對來自非成員國的進(jìn)口紅辣椒及其產(chǎn)品采取緊急措施。
為確保我國輸歐紅辣椒及其產(chǎn)品符合歐盟要求，國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)出了《關(guān)于輸歐盟紅辣椒及其產(chǎn)品中嚴(yán)禁使用蘇丹紅一號化工染料的緊急通知》(國質(zhì)檢食函 620號，2003年8月1日)，要求各直屬檢驗檢疫局切實加強對輸歐盟紅辣椒及其產(chǎn)品的檢驗檢疫和監(jiān)督管理。盡快將歐委會的該規(guī)定書面通知當(dāng)?shù)卣⒏飨嚓P(guān)企業(yè)，要求出口企業(yè)加強收購、加工等環(huán)節(jié)的質(zhì)量自控工作，確保出口紅辣椒及產(chǎn)品無蘇丹紅一號。
2005年，英國食品標(biāo)準(zhǔn)局(FSA)發(fā)布警告，提醒公眾提防一種叫“對位紅”的色素。該局稱，他們某牌子的辣味墨西哥菜和墨西哥玉米煎餅中發(fā)現(xiàn)了“對位紅”。隨后，英國食品標(biāo)準(zhǔn)局發(fā)現(xiàn)69種含有“對位紅”的食品，包括人們常用的咖喱醬、辣椒醬、烤肉醬等調(diào)味品，此事一出，立刻引起了英國社會的關(guān)注?！皩ξ患t”是一種化學(xué)成分類似于“蘇丹紅1號”的工業(yè)染料。
2006年11月，國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布了《關(guān)于上報蛋制品中蘇丹紅專項檢查結(jié)果的緊急通知》(質(zhì)檢食監(jiān)函 146號)?！毒o急通知》稱近日，媒體廣泛報道了河北省部分地區(qū)一些養(yǎng)殖戶使用含有蘇丹紅IV號的飼料喂養(yǎng)蛋鴨而產(chǎn)出“紅心”鴨蛋，個別蛋制品企業(yè)以此為原料生產(chǎn)加工咸鴨蛋制品的違法行為，目前該突發(fā)事件已經(jīng)引起了十多個省市的關(guān)注?？偩钟?1月14日上午發(fā)出《關(guān)于立即開展蛋制品中蘇丹紅專項檢查的緊急通知》(明電國質(zhì)檢明發(fā) 62號)，要求各級質(zhì)檢部門立即開展蛋制品生產(chǎn)加工企業(yè)專項檢查。
2007年1月17日，國家質(zhì)檢總局發(fā)出預(yù)警公告在國家質(zhì)檢總局對辣椒粉、辣椒醬、油辣椒、豆瓣醬等預(yù)包裝辣椒制品和散裝辣椒粉的產(chǎn)品質(zhì)量專項國家監(jiān)督抽查中，抽查的137種產(chǎn)品平均抽樣合格率僅為74.5％，不合格項目全部集中在蘇丹紅I～I(xiàn)V號。此次共抽查了貴州、四川、重慶、湖南、湖北、廣西、山東、河南等8個省(區(qū)、市)生產(chǎn)企業(yè)、商場、超市的80種預(yù)包裝辣椒產(chǎn)品，合格率為98.75％，有1種產(chǎn)品不合格，不合格項為蘇丹紅IV。對貴州、四川、重慶等地23個農(nóng)貿(mào)市場上抽取的57種散裝辣椒制品(辣椒粉55種)，合格23種，合格率僅為40％，不合格的34種產(chǎn)品全部檢出蘇丹紅。國家質(zhì)檢總局要求辣椒制品生產(chǎn)加工企業(yè)建立強制檢驗制度，蘇丹紅為必檢項目，產(chǎn)品出廠必須檢驗合格。企業(yè)不具備自行檢驗?zāi)芰Φ模仨毼芯哂蟹ǘㄙY質(zhì)的檢驗機構(gòu)進(jìn)行檢驗。
上述情況表明食品受蘇丹紅等化學(xué)合成染料污染的問題常有發(fā)生，在國內(nèi)外受到廣泛的重視。為有效地查禁摻蘇丹紅等化學(xué)合成染料的有毒食品，幫助生產(chǎn)企業(yè)開展自行檢驗，建立簡便易行的快速檢測方法非常必要。
目前檢測食品中是否添加了蘇丹紅等脂溶性偶氮染料的方法主要有高效液相色譜法(LC法)和高效液相色譜法-質(zhì)譜法(LC-MS法)。前者是現(xiàn)行的國標(biāo)方法(食品中蘇丹紅染料的檢測方法高效液相色譜法；中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 19681-2005)，后者是歐盟使用的確證方法。
高效液相色譜法的優(yōu)點是色譜分離效率高，靈敏度高。其缺點是(1)儀器價格昂貴，樣品前處理時間長，色譜柱易受污染，分析成本高；(2)當(dāng)共存成分的色譜保留時間與目標(biāo)成分的色譜保留時間接近時容易作出錯誤的判斷；(3)儀器對使用環(huán)境要求高，需要固定擺放，不適合作流動性大的現(xiàn)場檢測；(4)對檢驗人員的技術(shù)要求高。
以高效液相色譜儀作為分離器、質(zhì)譜儀作為分析器的高效液相色譜液-質(zhì)譜法適合于成分復(fù)雜、背景干擾嚴(yán)重的樣品分析，這種分析方法可提高檢測結(jié)果的可靠性。高效液相色譜液-質(zhì)譜法是一種分析成本比高效液相色譜法更高、操作比高效液相色譜法更復(fù)雜的分析方法。儀器對使用環(huán)境要求更高，需要固定擺放，不適合作流動性大的現(xiàn)場檢測。這些檢驗只能在少數(shù)實驗室中進(jìn)行，無法普及使用。
政府監(jiān)管部門對在食品中添加了蘇丹紅等脂溶性偶氮染料這種違法行為進(jìn)行查處，將是一項長期的任務(wù)。它涉及范圍廣，需要進(jìn)行大量的檢驗，如果全部都用高效液相色譜方法進(jìn)行檢測，則檢驗費用巨大，行政執(zhí)法成本高；在廣大的農(nóng)村地區(qū)和經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)的中小城市，因為沒有儀器和相應(yīng)的檢測技術(shù)人員，而無法開展這項檢測，從而使這些地區(qū)成為監(jiān)管的真空地帶。很多生產(chǎn)企業(yè)也因為沒有儀器和相應(yīng)的檢測技術(shù)人員，而無法對原料和成品開展自行檢驗，留下了食品安全隱患。
為保障食品安全，確保人民生命健康，迫切需要建立一種簡單易行、快速高效、成本低廉的檢測食品是否違法添加蘇丹紅等脂溶性偶氮染料的方法。
鑒于可被違法添加的脂溶性偶氮染料的品種很多，僅針對蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅III、蘇丹紅IV、蘇丹橙G、蘇丹紅7B、蘇丹紅G和對位紅中的一種或幾種化合物進(jìn)行檢測的儀器分析方法顯然存在不足。受色譜分辨率、共存干擾物、標(biāo)準(zhǔn)品等因素限制，儀器分析方法一般一次只能對幾個或一二十個目標(biāo)化合物進(jìn)行篩查，而可用于違法添加的脂溶性偶氮染料的品種眾多，當(dāng)添加的染料不在預(yù)設(shè)范圍，儀器分析方法就會出現(xiàn)漏檢。因此需要建立一種能涵蓋大部分脂溶性偶氮染料的快速篩查檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點，提供一種分析成本低、不需要使用貴重分析儀器、專屬性強、靈敏度高、易于普及并且適用于現(xiàn)場檢測食品或飼料是否添加了蘇丹紅等脂溶性偶氮染料的檢測方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供利用上述檢測方法進(jìn)行檢測蘇丹紅等脂溶性偶氮染料的試劑盒。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的檢測方法包括如下步驟(1)供試液的制備待檢樣品采用有機溶劑稀釋、溶解或提取，作供試液；油狀液體樣品(如辣椒油)用適量有機溶劑稀釋后作供試液；固體或半流體油脂制品經(jīng)有機溶劑溶解后作供試液；其它樣品(如辣椒粉、辣椒醬、番茄醬、熟肉、蘿卜條、火腿腸、蛋黃、蛋糕、辣味魚干、粉狀和顆粒狀飼料等)則用有機溶劑提取，提取液作供試液。
(2)往供試液中加入過量氧化劑，氧化反應(yīng)除去有色干擾物質(zhì)。
(3)加入還原劑除去過剩的氧化劑，消除過剩氧化劑對后續(xù)觀察的影響。
(4)靜置分層，根據(jù)有機層的顏色判斷待檢樣品是否含有脂溶性偶氮染料；如果有機層呈無色或幾乎無色，則為陰性，不含有脂溶性偶氮染料；如果有機層呈有顏色，則為陽性，很可能含有脂溶性偶氮染料。
在上述檢測方法中，有機溶劑是指具有如下性質(zhì)的有機溶劑(a)與水不相溶；(b)不能被高錳酸鉀氧化；(c)在硫酸存在下不會發(fā)生明顯的水解反應(yīng)。這些有機溶劑優(yōu)選環(huán)己烷、環(huán)己烷的同系物、正己烷、正己烷的同系物、苯、甲苯、苯的同系物、氯仿、二氯甲烷或石油醚中的一種或幾種的混合物。
在上述檢測方法中，所述氧化劑優(yōu)選高錳酸鉀溶液，作為優(yōu)選還可加入硫酸溶液，加入硫酸的目的是提高高錳酸鉀的氧化電位，使之有足夠的氧化能力，提高氧化反應(yīng)的速度。
在上述檢測方法中，所述還原劑優(yōu)選5～12重量％的鹽酸羥胺、5～12重量％的抗壞血酸溶液或5～12重量％的草酸溶液。
利用上述檢測方法進(jìn)行檢測的試劑盒，包括有機溶劑、氧化劑和還原劑。
偶氮類染料是人工化學(xué)合成物質(zhì)，偶氮類染料偶氮類染料可分為水溶性染料和脂溶性偶氮染料，本發(fā)明只涉及脂溶性偶氮染料。偶氮化合物都是有色化合物。為方便理解，列出部分常用偶氮染料的命名和溶解性如下蘇丹紅I(SudanI)的化學(xué)名稱為1-苯基偶氮-2-萘酚，(1-phenylazo-2-naphthalenol)，以苯胺為原料，在鹽酸中與亞硝酸鈉進(jìn)行重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，再與2-萘酚進(jìn)行偶合制得。溶解性不溶于水，溶于油脂、環(huán)己烷、礦物油、丙酮和苯。
蘇丹紅II(SudanII)化學(xué)名稱為1-[(2，4-二甲基苯)偶氮]-2-萘酚，(1-[(2，4-dimethylphenyl)azo]-2-naphthalenol)；由2，4-二甲基苯胺重氮化后，與β-萘酚偶合制得。溶解性溶于醚、苯、揮發(fā)油、環(huán)己烷、脂肪、油中，不溶于水、堿、弱酸。
蘇丹紅III(SudanIII)化學(xué)名稱為1-[4-(苯基偶氮)苯基]偶氮-2-萘酚，(1-[4-(phenylazo)phenyl]azo]-2-naphthalenol)；由氨基偶氮苯重氮化與β-萘酚偶合制得。溶解性溶于乙醚、丙酮、石油醚、油脂、環(huán)己烷、氯仿、冰乙酸、乙醇，不溶于水、堿溶液。
蘇丹紅IV(SudanIV)化學(xué)名稱為1-2-甲基-4-[(2-甲基苯)偶氮]苯基偶氮-2-萘酚，(1-2-methyl-4-[[(2-methylphenyl)azo]phenylazo]-2-naphthalenol)，由鄰氨基偶氮甲苯重氮化與β-萘酚偶合制得。溶解性溶于乙醚、乙醇、環(huán)己烷、油脂、酚，不溶于水。
蘇丹紅G(Sudan red G)化學(xué)名稱為1-(2-甲氧基苯基)偶氮-2-萘酚，1-(2-Methoxyphenylazo)-2-naphthol。溶解性溶于乙醚、環(huán)己烷、乙醇、油脂、酚，不溶于水。
蘇丹紅7B (Sudan Red 7B)化學(xué)名稱為2-Naphthalenamine，N-ethyl-1-[[4-(phenylazo)phenyl]azo]-；CAS Number 6368-72-5；溶解性溶于乙醚、丙酮、環(huán)己烷、油脂，不溶于水。
蘇丹橙G(Sudan Orange G)化學(xué)名稱為2，4-二羥基偶氮苯；2，4-Dihydroxyazobenzene。溶解性溶于乙醚、乙醇、環(huán)己烷、油脂、酚，不溶于水。
對位紅(Para Red)化學(xué)名稱為1-對硝基苯基偶氮-2-萘酚，1-(4-Nitrophenylazo)-2-naphthol，亦稱對硝苯胺紅。溶解性溶于乙醚、丙酮、油脂、乙醇(呈紅色溶液)，不溶于水。
偶氮染料的化學(xué)結(jié)構(gòu)特征是分子中有一個或多個偶氮基團(tuán)(-N＝N-)，偶氮基的一端或兩端與芳環(huán)相連，例如蘇丹紅I的偶氮基一端與苯環(huán)相連，另一端與萘環(huán)相連；蘇丹橙G的偶氮基兩端相連的都是苯環(huán)；檸檬黃(C16H9N4O9S2Na3)的偶氮基只有一端與芳環(huán)相連。在與偶氮基相連的芳環(huán)接上不同的取代基則衍生出不同的偶氮化合物，因此可衍生出很多種偶氮芳香化合物。通常，在芳環(huán)上連上一個或多個磺酸基，則偶氮化合物的水溶性增強。
大多數(shù)脂溶性偶氮染料，其分子結(jié)構(gòu)中至少有一個偶氮基團(tuán)的兩端都連上芳環(huán)。由于芳環(huán)通過偶氮基相連形成一個大的共軛體系，π電子有較大的離域范圍，可吸收可見光中的一定波長，因此偶氮化合物都是有色化合物。使偶氮染料降解褪色的關(guān)鍵是破壞其偶氮基。
偶氮基團(tuán)上的N＝N雙鍵與芳環(huán)形成離域共軛體系，共軛的結(jié)果增強了偶氮基氮原子與芳環(huán)上碳原子間連接的穩(wěn)定性，也增強了偶氮基本身的穩(wěn)定性，同時也使到氮原子上的孤對電子不容易丟失，因此偶氮基本身不容易被氧化。當(dāng)偶氮基兩端都連有芳環(huán)時，這種共軛效應(yīng)更明顯。即化合物更穩(wěn)定，更難被氧化，顏色更深。由于芳環(huán)本身碳原子上的p電子已參與了共軛，形成了穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，所以芳環(huán)也不容易被氧化劑破壞。在氧化劑存在情況下，芳環(huán)上的某些取代基可能會被氧化，但不能使化合物變?yōu)闊o色(這是因為芳環(huán)和偶氮基還存在，大的共軛體系還存在)。綜上原因，在一定的濃度和酸度下，高錳酸鉀溶液不能破壞偶氮染料的發(fā)色基團(tuán)，不能使偶氮染料褪色。
β-胡蘿卜素、辣椒紅素和其它類胡蘿卜素等天然色素在植物中廣泛存在，是脂溶性色素。β-胡蘿卜素、辣椒紅素和其它類胡蘿卜素等化合物含有多個共軛雙鍵，這是它們顯有顏色的原因。這些雙鍵易被強氧化劑氧化而斷裂，被氧化后共軛體系不復(fù)存在。例如，胡蘿卜素分子結(jié)構(gòu)中含有多個共軛雙鍵，具有強還原性，雙鍵容易被氧化而斷裂，生成為無色物質(zhì)。
天然產(chǎn)物中的水溶性有色化合物，如黃酮皂苷類色素，不溶于油脂和環(huán)己烷等親脂性溶劑。通過環(huán)己烷等親脂性溶劑萃取，可使水溶性有色化合物與脂溶性偶氮染料分離。
本發(fā)明的主要原理如下(1)利用親脂性有機溶劑稀釋油狀液體食品(如辣椒油)，使其在振搖時容易分散成小液滴，充分與氧化劑接觸，加速反應(yīng)的完成。
利用親脂性有機溶劑(如環(huán)己烷)從樣品中提取脂溶性偶氮染料。
(2)利用偶氮染料難被氧化褪色而天然脂溶性色素易被氧化褪色的特點，在硫酸存在的條件下，采用過量強氧化劑高錳酸鉀氧化天然色素，達(dá)到消除共存的天然色素干擾的目的。
(3)利用還原劑(如鹽酸羥胺、草酸或抗壞血酸)還原過剩的氧化劑，消除對后續(xù)觀察判斷的影響。
(4)利用偶氮染料自身顯顏色的特性進(jìn)行判斷。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果本發(fā)明的檢驗方法克服了現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點，具有分析成本低、專屬性強、靈敏度高、操作簡便快速，不需要使用貴重儀器等優(yōu)點，適用于現(xiàn)場快速檢測食品和飼料中是否違法添加蘇丹紅等脂溶性偶氮染料，滿足食品和飼料監(jiān)督檢驗的需要；同時為檢驗食品和飼料是否違法添加蘇丹紅等脂溶性偶氮染料的專門實驗室提供了快速的篩選檢驗方法，將能達(dá)到降低分析成本、提高檢驗效率的目的。
根據(jù)本發(fā)明制成的快速檢驗試劑盒，將能滿足廣大的農(nóng)村地區(qū)和經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)開展食品和飼料監(jiān)督檢驗的需要，也將能滿足生產(chǎn)企業(yè)和商業(yè)單位對相關(guān)食品和飼料進(jìn)行自檢的需要。
具體實施例方式
實施例1辣椒油1(市售瓶裝，辣椒油呈橙紅色，已知每mL含蘇丹I 0.3mg)第一步用吸管吸取辣椒油約0.2mL，置于具塞試管中，加入環(huán)己烷0.8mL(加入環(huán)己烷的目的是降低油的粘稠度，使在試管振搖時容易分裂成小液滴，增大氧化反應(yīng)接觸面積，使油中有色干擾物質(zhì)更快被氧化)；第二步加入重量百分濃度為10％的硫酸溶液5mL(加入硫酸的目的是提高高錳酸鉀的氧化電位，使之有足夠的氧化能力，提高氧化反應(yīng)的速度)；第三步加入摩爾濃度為0.1mol/L的高錳酸鉀溶液1mL，用力振搖約5分鐘，靜置2分鐘，試管中的水層仍呈明顯的紫紅色。
第四步再滴入重量百分濃度為10％的鹽酸羥胺溶液，一邊滴入一邊振搖試管，至水層變?yōu)闊o色。
第五步靜置，待分層后觀察有機層的顏色。
本實驗觀察到有機層的顏色呈明顯的橙黃色，由此判斷樣品中可能含有脂溶性偶氮染料。
實施例2辣椒粉1(市售散裝，呈紅色，用高效液相色譜檢測，已知不含蘇丹I、蘇丹II、蘇丹III、蘇丹IV、蘇丹橙G、蘇丹紅7B、蘇丹紅G、對位紅等染料)。
第一步取辣椒粉約2克，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，待分層后用吸管吸取上層清液1mL(呈橙黃色)作供試液，置于另一試管中；其余操作照實施例1中的第二步～第五步。
本實驗觀察到第五步操作得到的有機層為澄清、無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
實施例3辣椒粉2(取實施例2中的辣椒粉適量，加入蘇丹I標(biāo)準(zhǔn)溶液、拌勻、得每克樣品含蘇丹I0.3mg的陽性樣品)。
全部操作與實施例2相同。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為橙黃色，由此判斷樣品中很可能含有脂溶性偶氮染料。
實施例4辣椒粉3(取實施例2中的辣椒粉適量，加入蘇丹I標(biāo)準(zhǔn)溶液、拌勻、得每克含蘇丹I 1mg的陽性樣品)。
全部操作與實施例2相同。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為橙紅色，由此判斷樣品中很可能含有脂溶性偶氮染料。
比較實施例3與實施例4中觀察到的有機層的顏色深淺可知，陽性樣品中蘇丹I的添加量越多，有機層的顏色越深。
實施例5辣椒醬1(市售瓶裝，用高效液相色譜檢測，已知不含蘇丹I、蘇丹II、蘇丹III、蘇丹IV、蘇丹橙G、蘇丹紅7B、蘇丹紅G、對位紅等染料)。
第一步取辣椒醬約8克，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，待分層后用吸管吸取上層清液1mL(呈橙黃色)作供試液，置于另一試管中；其余操作參照實施例1中的第二步～第五步。
本實驗觀察到第五步操作得到的有機層為澄清無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
實施例6辣椒醬2(取實施例5中的辣椒醬適量，加入蘇丹IV標(biāo)準(zhǔn)溶液、拌勻、得每克樣品含蘇丹IV1mg的陽性樣品)。
全部操作與實施例5相同。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為桔紅色，由此判斷樣品中很可能含有脂溶性偶氮染料。
實施例7番茄醬1(市售瓶裝，用高效液相色譜檢測，已知不含蘇丹I、蘇丹II、蘇丹III、蘇丹IV、蘇丹橙G、蘇丹紅7B、蘇丹紅G、對位紅等染料)。
第一步取番茄醬約4克，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，待分層后用吸管吸取上層清液1mL(呈橙黃色)作供試液，置于另一試管中；其余操作照實施例1中的第二步～第五步。
本實驗觀察到第五步操作得到的有機層為澄清無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
實施例8番茄醬2(取實施例7中的番茄醬適量，加入蘇丹IV標(biāo)準(zhǔn)溶液、拌勻、得每克樣品含蘇丹IV1mg的陽性樣品)。
全部操作與實施例7相同，提取液呈紅色。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為桔紅色，由此判斷樣品中很可能含有脂溶性偶氮染料。
實施例9豆瓣醬(市售瓶裝)
第一步取豆瓣醬約8克，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，待分層后用吸管吸取上層清液1mL(呈橙黃色)作供試液，置于另一試管中；其余操作照實施例1中的第二步～第五步。
本實驗觀察到第五步操作得到的有機層為澄清無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
實施例10豆瓣醬(實施例9中使用的瓶裝樣品，加入對位紅標(biāo)準(zhǔn)溶液、拌勻、得每克含蘇丹IV0.3mg的陽性樣品)全部操作與實施例9相同，提取液呈橙紅色。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為桔紅色，由此判斷樣品中很可能含有脂溶性偶氮染料。
實施例11剁椒(市售瓶裝)第一步取剁椒約8克，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，待分層后用吸管吸取上層清液1mL(呈橙黃色)作供試液，置于另一試管中；其余操作照實施例1中的第二步～第五步。
本實驗觀察到第五步操作得到的有機層為澄清無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
實施例12剁椒(實施例11中市售瓶裝樣品，加入蘇丹III標(biāo)準(zhǔn)溶液、拌勻、得每克含蘇丹III0.3mg的陽性樣品)全部操作與實施例11相同，提取液呈橙紅色。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為桔紅色，由此判斷樣品中很可能含有脂溶性偶氮染料。
實施例13飼料(棕色顆粒狀)第一步取飼料約5克，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，待分層后用吸管吸取上層清液1mL(呈黃色)作供試液，置于另一試管中；其余操作照實施例1中的第二步～第五步。
本實驗觀察到第五步操作得到的有機層為澄清無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
實施例14飼料(取實施例13的棕色顆粒狀，加入蘇丹IV標(biāo)準(zhǔn)溶液、拌勻、得每克含蘇丹IV0.5mg的陽性樣品)全部操作與實施例13相同，提取液呈紅色。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為紅色，由此判斷樣品中很可能含有脂溶性偶氮染料。
實施例15熟肉(紅色)用刀切取樣品表層約4g，剪碎，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，靜置，有機層呈白色乳濁，吸取有機層3mL置另一試管，加入飽和氯化鈉溶液12mL，振搖，靜置，待分層或吸取1mL有機層作供試液，其余操作同實施例1。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
實施例16忌廉蛋糕(紅色)取樣品4g，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，靜置，有機層呈微紅色乳濁，吸取有機層3mL置另一試管，加入飽和氯化鈉溶液12mL，振搖，靜置，待分層或吸取1mL有機層作供試液，其余操作同實施例1。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
實施例17鴨蛋黃(黃色)稱取攪勻的樣品4g，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，靜置，有機層呈黃色乳濁，吸取有機層3mL置另一試管，加入飽和氯化鈉溶液12mL，振搖，靜置，待分層或吸取1mL有機層作供試液，其余操作同實施例1。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
實施例18鴨蛋黃(取實施例17的鴨蛋黃適量，加入蘇丹IV標(biāo)準(zhǔn)溶液、拌勻、得每克含蘇丹IV0.3mg的陽性樣品)稱取攪勻的樣品4g，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，靜置，有機層呈橙紅色乳濁，吸取有機層3mL置另一試管，加入飽和氯化鈉溶液12mL，振搖，靜置，待分層或吸取1mL有機層作供試液，其余操作同實施例1。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為桔紅色，由此判斷樣品中很可能含有脂溶性偶氮染料。
實施例19火腿腸(玫瑰紅色)稱取剪碎的樣品4g，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，靜置，有機層呈微紅色乳濁，吸取有機層3mL置另一試管，加入飽和氯化鈉溶液12mL，振搖，靜置，待分層或吸取1mL有機層作供試液，其余操作同實施例1。
本實驗觀察到最后一步操作得到的有機層為無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
實施例20蘿卜條(帶有紅色辣椒粉)第一步取剪碎的樣品8g，置于規(guī)格為50mL的比色管中，加入水10mL，再加入環(huán)己烷8mL，用力振搖5分鐘，待分層后用吸管吸取上層清液1mL(呈橙黃色)作供試液，置于另一試管中；其余操作照實施例1中的第二步～第五步。
本實驗觀察到第五步操作得到的有機層為澄清無色，由此判斷樣品中不含有脂溶性偶氮染料。
上述操作中，如果有漩渦振蕩器代替手工振搖，效果更好；當(dāng)有機層出現(xiàn)乳化現(xiàn)象時，可將其轉(zhuǎn)入離心試管中，離心處理，可以加速破乳和分層。
實施例21氧化劑對脂溶性偶氮染料顏色的影響蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅III、蘇丹紅IV、蘇丹橙G、蘇丹紅7B、蘇丹紅G和對位紅各取適量，用環(huán)己烷溶解，制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，各標(biāo)準(zhǔn)溶液作如下處理用吸管吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL，置于試管中，加入重量百分濃度為10％的硫酸溶液5mL，再加入摩爾濃度為0.1mol/L的高錳酸鉀溶液1mL，用力振搖約5分鐘，靜置，試管中的水層仍呈紫紅色；滴入重量百分濃度為10％的鹽酸羥胺溶液，一邊滴入一邊振搖試管，至水層變?yōu)闊o色。靜置，待分層后觀察有機層的顏色，結(jié)果見表1。試驗結(jié)果表明，在本試驗條件下高錳酸鉀溶液不能使偶氮染料褪色。
以不含偶氮染料的辣椒油(橙紅色)代替環(huán)己烷作溶劑制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，各標(biāo)準(zhǔn)溶液作如下處理取標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.5mL)與環(huán)己烷(0.5mL)置于同一試管中，加入重量百分濃度為10％的硫酸溶液5mL，再加入摩爾濃度為0.1mol/L的高錳酸鉀溶液1.5mL，用力振搖約5分鐘，靜置，試管中的水層仍呈紫紅色；滴入重量百分濃度為10％的鹽酸羥胺溶液，一邊滴入一邊振搖試管，至水層變?yōu)闊o色。靜置，待分層后觀察有機層的顏色，結(jié)果見表2。實驗結(jié)果表明，只要脂溶性偶氮染料的摻入量不太低即可被檢出。
實施例22氧化劑對樣品本底顏色的影響取已知不含偶氮染料的辣椒油(0.2mL，橙紅色)與環(huán)己烷(0.8mL)置于同一試管中，加入重量百分濃度為10％的硫酸溶液5mL，觀察到有機層呈橙紅色，再加入摩爾濃度為0.1mol/L的高錳酸鉀溶液1.5mL，用力振搖約5分鐘，靜置，試管中的水層仍呈紫紅色；滴入重量百分濃度為10％的鹽酸羥胺溶液，一邊滴入一邊振搖試管，至水層變?yōu)闊o色。靜置，待分層后觀察到有機層的顏色是橙紅色消失，幾乎無色，容易與脂溶性偶氮染料區(qū)分。
辣椒粉、辣椒醬、番茄醬、蘿卜條、蛋黃、辣味魚干等樣品的環(huán)己烷提取液也呈橙紅色，參照上述方法提取、氧化和還原處理后，有機層變成無色。實驗結(jié)果表明，脂溶性天然色素可被氧化褪色。
實施例23添加不同品種和不同量脂溶性偶氮染料的實驗辣椒粉、辣椒醬、番茄醬、熟肉、蘿卜條、火腿腸、蛋黃、蛋糕、辣味魚干、粉狀和顆粒狀飼料等樣品，分別添加不同量的蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅III、蘇丹紅IV、蘇丹橙G、蘇丹紅7B、蘇丹紅G和對位紅染料，參照上述方法進(jìn)行實驗，結(jié)果表明只要每千克(或每升)樣品中脂溶性偶氮染料摻入量≥25mg水平，則能被檢出，現(xiàn)象明顯；只要每千克(或每升)樣品中脂溶性偶氮染料摻入量在10mg水平，也能被檢出，現(xiàn)象仍較明顯。
表1環(huán)己烷中8種染料加反應(yīng)劑前后的顏色

表2辣椒油中8種染料加反應(yīng)劑前后的顏色

權(quán)利要求
1.一種食品或飼料中脂溶性偶氮染料的檢測方法，其特征在于包括如下步驟(1)供試液的制備待檢樣品采用有機溶劑稀釋、溶解或提取，作供試液；(2)往供試液中加入過量氧化劑；(3)加入還原劑除去過剩的氧化劑；(4)靜置分層，根據(jù)有機層的顏色判斷待檢樣品是否含有脂溶性偶氮染料；如果有機層呈無色或幾乎無色，則為陰性，不含有脂溶性偶氮染料；如果有機層呈有顏色，則為陽性，很可能含有脂溶性偶氮染料。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述有機溶劑為環(huán)己烷、環(huán)己烷的同系物、正己烷、正己烷的同系物、苯、甲苯、苯的同系物、氯仿、二氯甲烷或石油醚中的一種或幾種的混合物。
3.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述氧化劑為高錳酸鉀溶液。
4.如權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征是在加入高錳酸鉀溶液的同時加入硫酸溶液。
5.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述還原劑為5～12重量％的鹽酸羥胺、5～12重量％的抗壞血酸溶液或5～12重量％的草酸溶液。
6.利用權(quán)利要求1所述檢測方法進(jìn)行檢測的試劑盒，其特征在于包括有機溶劑、氧化劑和還原劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種食品或飼料中脂溶性偶氮染料的檢測方法及試劑盒，其包括如下步驟(1)供試液的制備待檢樣品采用有機溶劑稀釋、溶解或提取，作供試液；(2)往供試液中加入過量氧化劑；(3)加入還原劑除去過剩的氧化劑；(4)靜置分層，根據(jù)有機層的顏色判斷待檢樣品是否含有蘇丹紅等脂溶性偶氮染料。本發(fā)明的檢驗方法具有分析成本低、專屬性強、靈敏度高、操作簡便快速，不需要使用貴重儀器等優(yōu)點，適用于現(xiàn)場快速檢測食品或飼料中是否違法添加蘇丹紅等脂溶性偶氮染料。同時為檢驗食品和飼料是否違法添加蘇丹紅等脂溶性偶氮染料的專門實驗室提供了快速的篩選檢驗方法。
文檔編號G01N21/25GK101071099SQ20071002759
公開日2007年11月14日 申請日期2007年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月17日
發(fā)明者朱炳輝, 龍朝陽, 高燕紅, 鐘志雄 申請人:廣東省疾病預(yù)防控制中心