專利名稱：：一種蜂膠藥材的鑒別方法及蜂膠藥材產(chǎn)區(qū)的初步分類方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及蜂膠藥材的鑒別方法及蜂膠藥材產(chǎn)區(qū)的初步分類方法，特別涉及一種用模式化的高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜來鑒別蜂膠藥材方法。
背景技術：
：蜂膠(propolis)是蜜蜂從植物芽苞和樹干處采集的樹膠，混入蜜蜂上顎腺分泌物和蜂蠟等形成的一種具有芳香味的膠狀固形物。蜂膠化學成分與蜂種和蜜蜂生活周圍地區(qū)的植被有關，已知的蜂膠化學成分有上百種，如果用一、二個蜂膠的活性成分來說明蜂膠及其成方制劑的內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，應當對它的物質(zhì)群整體予以控制。所以，除了"微觀分析"夕卜，還應用某種"宏觀分析"方法，從整體上有效的表征中藥質(zhì)量。蜂膠是一種富含黃酮類物質(zhì)純天然蜂產(chǎn)品，楊樹等植物分泌的樹膠是蜂膠的原料，蜜蜂采集樹膠后經(jīng)制作形成了蜂膠。蜂膠具有抗菌、抗病毒、抗氧化、降血糖、降血脂、提高免疫力等多種醫(yī)療保健功能，是一種具有廣闊市場的保健品原料。2003年國內(nèi)蜂膠年產(chǎn)量已達到300噸，2005年版中國藥典已將蜂膠作為中藥材加以收載。但社會上以次充好、以假當真的個案屢見不鮮，不但無法確定其產(chǎn)地，甚至出現(xiàn)了以樹膠冒充蜂膠的現(xiàn)象。而目前對蜂膠的質(zhì)量控制，主要是以白楊素、高良姜素等含量為指標(中國藥典2005年版一部249頁)。然而，由于蜂膠源于樹膠，其成分也近似于樹膠，因此，現(xiàn)行的藥典方法及行業(yè)標準等均無法區(qū)分樹膠與蜂膠，使得蜂膠質(zhì)量控制難以實施，己顯著影響了人們生活質(zhì)量和蜂膠的出口創(chuàng)匯。因此需要應用模式指紋圖譜技術等率先建立蜂膠質(zhì)控平臺，確保蜂膠質(zhì)量穩(wěn)定可控。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是通過建立一種區(qū)分蜂膠產(chǎn)區(qū)的模式指紋圖譜應用技術，可很好地區(qū)分樹膠與蜂膠，并初步辨別蜂膠的產(chǎn)地，明確其在醫(yī)藥衛(wèi)生及食品化工方面的應用范圍，從而顯著提高蜂膠質(zhì)控水平，確保其應用價值和經(jīng)濟效益。本發(fā)明的一種蜂膠藥材的鑒別方法，包括如下步驟(1)、建立蜂膠的指紋圖譜(a)供試品溶液的制備分別取多批蜂膠藥材粉末，精密稱定，置索氏提取器中，用丙酮索氏提取至提取液無色，提取液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，置容量瓶中，甲醇定容至刻度，為供試品溶液；(b)對照品溶液的制備分別精密稱定蘆丁、槲皮素、白楊素、高良姜素對照品適量，用流動相稀釋，制成對照品溶液；(C)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為A:甲醇，B:酸水；采用梯度洗脫方式；流速1.0mL/min;檢測波長283nm或256nm或365nm或360nm;柱溫20-30。C。(d)測定分別精確吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法進行試驗，以對照品為參照物，測定并記錄色譜圖，得到蜂膠HPLC指紋圖譜(見附圖l-圖2)。(2)、以上述相同的方法測定楊樹膠等假蜂膠的指紋圖譜(見附圖3)。(3)、所述蜂膠指紋圖譜共有29個共有峰，與楊樹膠的指紋圖譜對比，從峰高及其大小排序的差別比較可以看出19號共有峰和21號共有峰的峰高及其大小排序等參數(shù)反映出楊樹膠和蜂膠的差別，因此，19號共有峰(RT:66.61min)和21號共有峰(RT二78.37min)共同形成了樹膠和蜂膠相互區(qū)別的特征峰。(4)、以上述相同的方法測定待測樣品的指紋圖譜。(5)、將待測蜂膠樣品指紋圖譜與蜂膠的指紋圖譜對比，篩選符合蜂膠標準指紋圖譜的蜂膠藥材。上述步驟的第一步中，所述蜂膠供試品溶液的具體制備過程為分別取多種蜂膠藥材粉末約lg，精密稱定，置索氏提取器中，用丙酮100ml，索氏提取至提取液無色，提取液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，置100ml量瓶中，甲醇定容至刻度，為供試品溶液。所述色譜條件為色譜柱采用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填料，流動相為A:甲醇，B:0.4%的磷酸水；采用梯度洗脫方式Omin—10min—20min—30min—35min—50min—60min—120min，甲醇35%—35%—45%—45%—50%—50%—55%—55%,0.4%的磷酸水65%—65%—55%—55%—50%—50%—45%—45%;流速l.OmL/min;檢測波長283nm;柱溫25°C。上述步驟第一步中所述對照品溶液每ml中含蘆丁0.268mg、槲皮素O.1096mg、白楊素O.0296mg、高良姜素0.Q206mg。上述步驟第一步中所述蜂膠為26批我國不同產(chǎn)地所產(chǎn)的蜂膠。上述步驟第五步中(a)共有峰保留時間與蜂膠指紋圖譜不存在明顯差別，也不存在獨有峰，并有明顯25號共有峰(白楊素RT=88.76min)的，重點鑒別圖譜中的19號和21號共有峰，19號共有峰峰高值達不到第十大峰，21號共有峰峰高值達不到第三大峰為真蜂膠；而19號共有峰峰高值達到第四大峰，同時21號共有峰峰高值達到第一大峰者為楊樹膠。(b)、共有峰保留時間與蜂膠指紋圖譜存在明顯差別者，屬于其他類樹膠或其他假蜂膠。所述29個共有峰的相對保留時間的相對標準偏差RSD均小于3%，其中蘆丁(11號共有峰)的平均相對保留時間RT為29.5min，相對標準偏差RSD為0.23%;槲皮素(16號共有峰)的平均相對保留時間RT為46.3min，相對標準偏差RSD為0.95%;白楊素(25號共有峰)的平均相對保留時間RT為88.8min，相對標準偏差RSD為1.6%，高良姜素(27號共有峰)的平均相對保留時間RT為98.0min，相對標準偏差RSD為2.0%。一種蜂膠藥材產(chǎn)區(qū)的初步分類方法，包括如下步驟采用國家藥監(jiān)局推薦使用的MATLAB軟件，對蜂膠HPLC指紋圖譜進行分析比較，結(jié)果，26批蜂膠樣品(毛膠)的相似度在61%-94%之間，其相似度的差異較大(見附圖7)，因此，對26批蜂膠樣品(毛膠)的HPLC指紋圖譜采用主成分分析和相似度相結(jié)合方式分類，初步將26批蜂膠樣品(毛膠)分為5類，每類的相似度均高于90%(見附圖8-圖12)。根據(jù)表1至表3的數(shù)據(jù)比較進行分析歸納，蜂膠和樹膠HPLC指紋圖譜的區(qū)別，體現(xiàn)在峰高這個參數(shù)上。以峰高為參數(shù)分析，將蜂膠劃分為5類第1類是6號共有峰(RT=17.62min)為第1大峰，28號共有峰(RT二IOO.02min)為第2大峰；第2類是20號共有峰(RT=75.84min)為第2或1大峰，24號共有峰(RT=84.7min)為第19大峰，同時25號共有峰(白楊素RT=88.76min)達不到第3大峰；第3類是20號共有峰(RT二75.84min)為第1大峰，11號共有峰(RT=29.50min)達不到第11大峰，23號共有峰(RT=81.llmin)為第2大峰；第4類是20號共有峰(RT=75.84min)為第1大峰，25號共有峰(白楊素RT=88.76min)為第3大峰；第5類是20號共有峰(RT=75.84min)為第1或2大峰，25號共有峰(RT=88.76min)為第2、第1或4大峰。表l蜂膠共有峰保留時間表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表2蜂膠共有峰高表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表3蜂膠共有峰高大小排序表<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注表1一表2中l(wèi)表示有峰，但由于小沒被積分到；表3中空白格表示有峰，但由于小沒被積分到。表4峰高和相似度相結(jié)合的分析結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表4中數(shù)字l，2,3，表示峰從強到弱。l表示最強峰，2表示次強峰，……本發(fā)明的原理是根據(jù)蜂膠中的黃酮類成分是其主要的活性成份之一，建立起蜂膠黃酮類成分的HPLC指紋圖譜，來源于不同產(chǎn)地的蜂群采集的樹膠不同，造成其色譜的整體面貌特征上的差異，可通過模式化來建立蜂膠類別。同時雖然蜂膠源于樹膠，但經(jīng)過蜜蜂的咀嚼，摻入其上顎腺分泌物和蜂蠟后，也可造成兩者指紋圖譜的差異，通過模式化來區(qū)分。本發(fā)明具有方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易于掌握的特點。藥典用于測定白楊素和高良姜素的檢測波長為256nm(中國藥典2005年版一部249頁)，文獻中用于測定良姜素和高良姜素的檢測波長為360nm(宋愛清等，中國養(yǎng)蜂，2001，52(3):10);用于測定槲皮素和山奈酚的檢測波長為365nm(杜海燕等，中草藥，2002，23(11):997);用于測定白楊素的檢測波長為268mn(焦慶連等，中成藥，2005，27(8):961)，但指紋圖譜不是為測定某個成分的精確含量，而是要充分反映化學成分的信息。與文獻和藥典的檢測波長相比，用283nm進行檢測，出峰較多，反映的信息較完全，故采用283nm為檢測波長。以下結(jié)合附圖詳細說明本發(fā)明圖1對照品圖譜。圖2蜂膠HPLC指紋圖譜圖3假膠(樹膠)指紋圖譜圖4同一供試品平行制備5份供試品溶液的重復性試驗相似度評價疊加圖圖5精密度試驗相似度評價疊加圖圖6穩(wěn)定性試驗相似度評價疊加726批蜂膠樣品(毛膠)HPLC指紋圖譜相似度評價疊加8第一類(贛l類)蜂膠樣品相似度評價疊加圖(圖中1、2依次為江西樣品2、江西樣品3。)圖9第二類(其他類)蜂膠樣品相似度評價疊加圖(圖中1為云南樣品，2為江西樣品8)圖IO第三類(贛2類)蜂膠樣品相似度評價疊加圖(圖中1、2、3、4、5依次為江西樣品1、江西樣品4、江西樣品5、江西樣品6、江西樣品7。)圖11第四類(北方類)蜂膠樣品相似度評價疊加圖(圖中1為山東樣品1，2為內(nèi)蒙古樣品，3為山西樣品，4為遼寧樣品，5為吉林樣品，6為山東樣品2，7為青海樣品，8為河北樣品，9為東北樣品。)圖12第五類(鄂豫類)蜂膠樣品相似度評價疊加圖(圖中1為河南樣品1，2為河南樣品2，3為甘肅樣品，4為荊州樣品，5為荊門樣品，6為安徽樣品，7為河南樣品3，8為宜昌樣品。)具體實施方式本發(fā)明的優(yōu)選實施例如下1、儀器、試藥與材料U儀器與材料德國DionexP680A型高效液相色譜儀(PM-100檢測器、STH585柱溫箱、P680HPLC泵、ASI-100自動進樣器)，chromeleon色普工作站；8953Dietikon型電子分析天平(瑞士，精度0.lmg);AS2060B型超聲儀(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)等。1.2試藥蘆丁對照品(080-9705)、槲皮素對照品(081-9003)、白楊素(111701-200501)、高良姜素(111699-200501)均有中國藥品生物制品鑒定所提供，蜂膠(毛膠，由廣州市寶生圓有限公司提供，經(jīng)廣州市蜂產(chǎn)品研究所盧占列鑒定，為蜂膠)。流動相所用甲醇為色譜醇，其他試劑如甲醇，磷酸等均為分析純。2、方法(1)建立蜂膠的指紋圖譜(a)、供試品溶液的制備分別取26批蜂膠藥材-IO'C冷凍數(shù)天后用粉碎機粉碎取粉末約lg，精密稱定，置索氏提取器中，用丙酮100ml,索氏提取至提取液無色，提取液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，置100ml量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勾，即得為供試品溶液。(b)、對照品溶液的制備分別精密稱定蘆丁、槲皮素、白楊素、高良姜素對照品適量，用流動相稀釋，制成對照品溶液，所述對照品溶液每ml中含丁0.268mg、槲皮素0.1096mg、白楊素0.0296mg、高良姜素0.0206mg。(C)、色譜條件為色譜柱采用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為A:甲醇，B:0.4%的磷酸水;采用梯度洗脫方式Omin—lOmin—20min—30min—35min—50min—60min—120min，甲醇35%—35%—45%—45%—50%—50%—55%—55%,0.4%的磷酸水65%—65%—55%—55%—50%—50%—45%—45%;流速1.0mL/min;檢測波長283nm;柱溫25°C。(d)測定分別精確吸取對照品溶液與供試品溶液各IOUI，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法進行試驗，以對照品為參照物，測定并記錄色譜圖，得到26批蜂膠HPLC指紋圖譜。(2)、以上述相同的方法測定楊樹膠等假蜂膠的指紋圖譜。(3)、所述蜂膠指紋圖譜共有29個共有峰，與楊樹膠等假蜂膠的指紋圖譜對比，從峰高及其大小排序的差別比較可以看出19號共有峰和21號共有峰的峰高及其大小排序等參數(shù)反映出楊樹膠和蜂膠的差別，因此，19號共有峰(RT=66.61min)和21號共有峰(RT=78.37min)共同形成了樹膠和蜂膠相互區(qū)別的特征峰。所述29個共有峰的相對保留時間的相對標準偏差RSD均小于3%，其中蘆丁(11號共有峰)的平均相對保留時間RT為29.5min，相對標準偏差RSD為0.23%;槲皮素(16號共有峰)的平均相對保留時間RT為46.3min，相對標準偏差RSD為0.95%;白楊素(25號共有峰)的平均相對保留時間RT為88.8min，相對標準偏差RSD為1.6%，高良姜素(27號共有峰)的平均相對保留時間RT為98.0min，相對標準偏差RSD為2.0%。26批蜂膠藥材保留時間統(tǒng)計結(jié)果見表(4)、以上述相同的方法測定待測樣品的指紋圖譜。(5)、將待測蜂膠樣品指紋圖譜與蜂膠的指紋圖譜對比，篩選符合蜂膠標準指紋圖譜的蜂膠藥材，具體篩選過程如下(a)、共有峰保留時間與蜂膠指紋圖譜不存在明顯差別，也不存在獨有峰，并有明顯25號共有峰(白楊素RT=88.76min)的，重點鑒別圖譜中的19號和21號共有峰，19號共有峰峰高值達不到第十大峰，21號共有峰峰高值達不到第三大峰為真蜂膠；而19號共有峰峰高值達到第四大峰，同時21號共有峰峰高值達到第一大峰者為楊樹膠。(b)、共有峰保留時間與蜂膠指紋圖譜存在明顯差別者，屬于其他類樹膠或其他假蜂膠。3、指紋圖譜重現(xiàn)性實驗取同一份供試品(河南蜂膠藥材)5份，按照供試品溶液的制備方法，平行制備5份供試品溶液，同法進行檢測，5份供試品溶液測得的色譜指紋圖譜直觀觀察，表明指紋圖譜的全貌無明顯變化，用相似度計算，在同一儀器測得的色譜指紋圖譜與其所得共有模式圖譜的相似度分別為0.9894、0.9956、0.9951、0.9969、0.9977，均大于0.95，并考察保留時間和峰面積的一致性，蘆丁、槲皮素保留時間RSD和峰面積的RSD均小于1.89()(表5、圖4)。表5重復性試驗結(jié)果(n:=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>峰面積37.64038.94238.44237.54237.45638.00±0.651.724、指紋圖譜精密度實驗取同一份供試品(河南蜂膠藥材)溶液，連續(xù)進樣5次，用相似度計算，在同一儀器測得的色譜指紋圖譜與其所得共有模式圖譜的相似度分別為0.9937、0.9952、0.9973、0.9969、0.9959，滿足相似度不小于0.950，并考察色譜峰保留時間和峰面積的一致性，蘆丁、槲皮素、白楊素、高良姜素保留時間RSD和峰面積的RSD均小于1.7%。(表6、圖5)表6精密度試驗結(jié)果(n=5)12345X±SD.RSD(%)蘆出峰時間28.88828.45628.16228.16128.35228.404±0.2991.05丁峰面積32.66332.62632.70332.26132.31932.514±0.2080.64槲出峰時間45.53544.77244.39644.37344.80444.776±0.4691.05皮峰面積41.91542.03542.11841.56541.55641.838±0.2630.63素白出峰時間85.43584.14883.75083.87184.63184.367±0.6870.81楊素峰面積297.47297.22297.27293.56294.20295.949±1.9020.64高良出峰時間93.21791.62691.18191.38992.28991.940±0.8260.90姜峰面積39.06140.21340.40939.77638.99739.691±0.6471.63素5、指紋圖譜穩(wěn)定性實驗取同一份供試品溶液，分別在0h、2h、4h、10h、14h不同時間點進行檢測，直觀觀察指紋圖譜的全貌無明顯變化，用相似度計算，在同一儀器測得的色譜指紋圖譜與其所得共有模式圖譜的相似度分別為0.9922、0.9932、0.9886、0.9959、0.9951，滿足相似度不小于0.950，并考察保留時間和峰面積的一致性，蘆丁、槲皮素、白楊素、高良姜素保留時間RSD和峰面積的RSD均小于1.6%，表明在此時間內(nèi)供試品溶液的成分是穩(wěn)定的(表7、圖6)。表7穩(wěn)定性試驗結(jié)果(n=5)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>以上實驗顯示，該測定方法穩(wěn)定可靠。一種蜂膠藥材產(chǎn)區(qū)的初步分類方法，包括如下步驟采用國家藥監(jiān)局推薦使用的MATLAB軟件，對蜂膠HPLC指紋圖譜進行分析比較，結(jié)果，26批蜂膠樣品(毛膠)的相似度在61%-94%之間，其相似度的差異較大(見附圖7)，因此，對26批蜂膠樣品(毛膠)的HPLC指紋圖譜采用主成分分析和相似度相結(jié)合方式分類，初步將26批蜂膠樣品(毛膠)分為5類，每類的相似度均高于90%(見附圖8-圖12)。根據(jù)表1至表3的數(shù)據(jù)比較進行分析歸納，蜂膠和樹膠HPLC指紋圖譜的區(qū)別，體現(xiàn)在峰高這個參數(shù)上。以峰高為參數(shù)分析，將蜂膠劃分為5類:第1類是6號共有峰(RT47.62min)為第1大峰，28號共有峰(RT=100.02min)為第2大峰；第2類是20號共有峰(RT:75.84min)為第2或1大峰，24號共有峰(RT二84.7min)為第19大峰，同時25號共有峰(白楊素RT=88.76min)達不到第3大峰；第3類是20號共有峰(RT=75.84min)為第1大峰，11號共有峰(RT:29.50min)達不到第11大峰，23號共有峰(RT=81.llmin)為第2大峰；第4類是20號共有峰(RT=75.84min)為第1大峰，25號共有峰(白楊素RT^8.76min)為第3大峰；第5類是20號共有峰(RT=75.84min)為第1或2大峰，25號共有峰(RT二88.76min)為第2、第1或4大峰。權利要求1、一種蜂膠藥材的鑒別方法，包括如下步驟(1)、建立蜂膠的指紋圖譜(a)供試品溶液的制備分別取多批蜂膠藥材粉末，精密稱定，置索氏提取器中，用丙酮索氏提取至提取液無色，提取液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，置容量瓶中，甲醇定容至刻度，為供試品溶液；(b)對照品溶液的制備分別精密稱定蘆丁、槲皮素、白楊素、高良姜素對照品適量，用流動相稀釋，制成對照品溶液；(c)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為A甲醇，B酸水；采用梯度洗脫方式；流速1.0mL/min；檢測波長283nm或256nm或365nm或360nm；柱溫20-30℃。(d)測定分別精確吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法進行試驗，以對照品為參照物，測定并記錄色譜圖，得到蜂膠HPLC指紋圖譜。(2)、以上述相同的方法測定楊樹膠等假蜂膠的指紋圖譜。(3)、所述蜂膠指紋圖譜共有29個共有峰，與楊樹膠等假蜂膠的指紋圖譜對比，從峰高及其大小排序的差別比較可以看出19號共有峰和21號共有峰的峰高及其大小排序等參數(shù)反映出楊樹膠和蜂膠的差別，因此，19號共有峰(RT＝66.61min)和21號共有峰(RT＝78.37min)共同形成了樹膠和蜂膠相互區(qū)別的特征峰。(4)、以上述相同的方法測定待測樣品的指紋圖譜。(5)、將待測蜂膠樣品指紋圖譜與蜂膠的指紋圖譜對比，篩選符合蜂膠標準指紋圖譜的蜂膠藥材。2、根據(jù)權利要求1所述的蜂膠藥材的鑒別方法，其特征在于所述蜂膠供試品溶液的具體制備過程為分別取多批蜂膠藥材粉末約lg，精密稱定，置索氏提取器中，用丙酮100ml，索氏提取至提取液無色，提取液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，置100ml量瓶中，甲醇定容至刻度，為供試品溶液。3、根據(jù)權利要求1所述的蜂膠藥材的鑒別方法，其特征在于所述色譜條件為色譜柱采用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填料，流動相為A:甲醇，B:0.4%的磷酸水；采用梯度洗脫方式Omin—10min—20min—30min—35min—50min—60min—120min，甲醇35%—35%—45%—45%—50%—50%—55%—55%，0.4%的磷酸水65%—65%—55%—55%—50%—50%—45%—45%;流速1.OmL/min;檢測波長283nm;柱溫25°C。4、根據(jù)權利要求1或2所述的蜂膠藥材的鑒別方法，其特征在于(a)共有峰保留時間與蜂膠指紋圖譜不存在明顯差別，也不存在獨有峰，并有明顯25號共有峰(白楊素ia^88.76min)的，重點鑒別圖譜中的19號和21號共有峰，19號共有峰峰高值達不到第十大峰，21號共有峰峰高值達不到第三大峰為真蜂膠；而19號共有峰峰高值達到第四大峰，同時21號共有峰峰高值達到第一大峰者為楊樹膠。(b)、共有峰保留時間與蜂膠指紋圖譜存在明顯差別者，屬于其他類樹膠或其他假蜂膠。5、根據(jù)權利要求1或2所述的蜂膠藥材鑒別方法，其特征在于所述29個共有峰的相對保留時間的相對標準偏差RSD均小于3%，其中蘆丁(11號共有峰)的平均相對保留時間RT為29.5min，相對標準偏差RSD為0.23%;槲皮素(16號共有峰)的平均相對保留時間RT為46.3min，相對標準偏差RSD為0.95%;白楊素(25號共有峰)的平均相對保留時間RT為88.8min，相對標準偏差RSD為1.6%，高良姜素(27號共有峰)的平均相對保留時間RT為98.0min，相對標準偏差RSD為2.0%。6、一種蜂膠藥材產(chǎn)區(qū)的初步分類方法，包括如下步驟采用國家藥監(jiān)局推薦使用的MATLAB軟件，對蜂膠HPLC指紋圖譜進行分析比較，結(jié)果，26批蜂膠樣品(毛膠)的相似度在61%-94%之間，其相似度的差異較大，因此，對26批蜂膠樣品(毛膠)的HPLC指紋圖譜采用主成分分析和相似度相結(jié)合方式分類，初步將26批蜂膠樣品(毛膠)分為5類，每類的相似度均高于90%。以峰高為參數(shù)分析，將蜂膠劃分為5類第1類是6號共有峰(RT:17.62min)為第1大峰，28號共有峰(RT=100.02min)為第2大峰；第2類是20號共有峰(RT=75.84min)為第2或1大峰，24號共有峰(RT=84.7min)為第19大峰，同時25號共有峰(白楊素RT=88.76min)達不到第3大峰;第3類是20號共有峰(RT二75.84min)為第1大峰，11號共有峰(RT=29.50min)達不到第11大峰，23號共有峰(RT=81.11min)為第2大峰；第4類是20號共有峰(RT=75.84min)為第1大峰，25號共有峰(白楊素RT=88.76min)為第3大峰；第5類是20號共有峰(RT=75.84min)為第1或2大峰，25號共有峰(RT=88.76min)為第2、第1或4大峰。全文摘要本發(fā)明涉及一種蜂膠藥材的鑒別方法及蜂膠藥材產(chǎn)區(qū)的初步分類方法，首先制備供試品溶液，再配制對照品溶液，測定法是分別精確吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法進行試驗，以對照品為參照物，測定并記錄色譜圖，建立蜂膠HPLC指紋圖譜。本發(fā)明的優(yōu)點是方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易于掌握，能從色譜的整體特征面貌上把握蜂膠的真?zhèn)危蓪⑵渥鳛榉淠z質(zhì)量控制及其真?zhèn)舞b別的指標之一。同時對不同產(chǎn)地的蜂膠進行了初步分類。文檔編號G01N30/00GK101327224SQ200710028678公開日2008年12月24日申請日期2007年6月19日優(yōu)先權日2007年6月19日發(fā)明者盧占列,勵林,潘建國,王小平,鄭堯隆申請人:廣州市寶生園有限公司;廣州中醫(yī)藥大學