專利名稱：：臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間(tt)測(cè)定體外診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間(TT)測(cè)定的體外診斷試劑盒。
背景技術(shù)：
：隨著當(dāng)今社會(huì)人口老齡化進(jìn)程的加快，各類血栓性疾病日益成為致病、致死及惡化人類生活質(zhì)量的因素，尤其是心、腦血管血栓性疾病。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報(bào)告，血栓疾病為全球總死亡率的第一位常見(jiàn)原因。血栓形成是導(dǎo)致心、腦和外周血管事件的最后關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是致殘致死的直接原因，沒(méi)有血栓就沒(méi)有心腦血管事件。現(xiàn)在全人類正面臨著血栓栓塞性疾病的巨大挑戰(zhàn)，迫切需要應(yīng)用科學(xué)的指南來(lái)指導(dǎo)血栓栓塞性疾病的診斷和治療。血栓栓塞性疾病涉及各學(xué)科領(lǐng)域，如心血管內(nèi)科、神經(jīng)內(nèi)科、血液科、呼吸科、腫瘤科、腎內(nèi)科、血管外科、骨科、婦產(chǎn)科、麻醉科、心血管外科、神經(jīng)外科、普外科等。因而，血栓與止血的實(shí)驗(yàn)室檢査的臨床重要性與日倶增，檢驗(yàn)內(nèi)容不斷擴(kuò)大，工作量也日益增多；不斷出現(xiàn)的方法革新和自動(dòng)化，改變了以往單靠手工操作，自配試劑，工作效率低的局面。與此同時(shí)，要求方法標(biāo)準(zhǔn)化和實(shí)行質(zhì)量控制的呼聲也愈來(lái)愈高。凝血,是作用于凝血過(guò)程中的一種蛋白，與游離的纖維蛋白原相結(jié)合，從而將其演變?yōu)椴豢扇艿睦w維蛋白，使血液凝固。而凝血酶時(shí)間(TT)是檢測(cè)共同通路終端上纖維蛋白原變成纖維蛋白的方法，也是檢査受試者血漿纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白能力的過(guò)篩實(shí)驗(yàn)，是檢測(cè)凝血、抗凝、及纖維蛋白原溶解系統(tǒng)功能的一個(gè)簡(jiǎn)便試驗(yàn)。TT延長(zhǎng)常見(jiàn)于肝素增多或類肝素物質(zhì)存在，SLE，肝病，腎病，纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)增多及DIC、低(無(wú))纖維蛋白原血癥、異常纖維蛋白原血癥(纖維蛋白原機(jī)制不良血癥)，異常球蛋白血癥或免疫球蛋白增多等疾??；TT縮短見(jiàn)于血液中有鈣離子存在或血液呈酸性等。因此，凝血酶時(shí)間(TT)測(cè)定對(duì)檢測(cè)血栓性疾病的防治有重要意義，是血栓與止血檢測(cè)中的重要項(xiàng)目。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為了提供一種篩選類肝素抗凝物存在及纖維蛋白原含量減少和作為肝素治療及溶纖治療監(jiān)測(cè)的體外診斷試劑盒。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的一種臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間測(cè)定體外診斷試劑盒，其特征在于它是由凝血酶、緩沖液組成。所述的臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間測(cè)定體外診斷試劑盒，其特征在于緩沖液由下述原料制成甘氨酸49%;聚乙二醇-80000.30.8%;BSA2%;氯化鈉0.430.54°/。；NaN31%。；余量為水。所述的臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間測(cè)定體外診斷試劑盒，其特征在于緩沖液中甘氨酸的最適含量應(yīng)選為6。％。所述的臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間測(cè)定體外診斷試劑盒，其特征在于緩沖液中聚乙二醇-8000的最適含量應(yīng)選為0.5%。所述的臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間測(cè)定體外診斷試劑盒，其特征在于緩沖液中氯化鈉的最適含量應(yīng)選為0.51%。本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)-1.本發(fā)明通過(guò)研究反應(yīng)機(jī)理，用獨(dú)特的緩沖液穩(wěn)定凝血酶活性，在凝血酶試劑復(fù)溶后37'C條件下能夠穩(wěn)定七天，與一般市售產(chǎn)品相比，在穩(wěn)定性和重復(fù)性方面較好，結(jié)果準(zhǔn)確性較高。因此，對(duì)于各級(jí)醫(yī)院來(lái)說(shuō)，使用方便、節(jié)省時(shí)間、減少浪費(fèi)并降低醫(yī)療成本。2.適用面廣，對(duì)于光學(xué)法、磁珠法原理的血凝儀測(cè)定結(jié)果一致性好，具有很好的兼容性，使不同醫(yī)院的檢驗(yàn)結(jié)果之間具有可比性，對(duì)于推行檢驗(yàn)報(bào)告"一單通"具有重要意義。具體實(shí)據(jù)方式本發(fā)明的設(shè)計(jì)是由凝血酶、緩沖液組成。該緩沖液由下述原料制成-甘氣醸49%;聚乙二醇-80000.30.8%;BSA2%;氯化鈉0.430.54%;NaN31%。；余量為水。其中，該緩沖液中甘氨酸的最適含量應(yīng)選為6%，聚乙二醇-8000的最適含量應(yīng)選為0.5%，氯化鈉的最適含量應(yīng)選為0.51%。本發(fā)明還將結(jié)合實(shí)例作進(jìn)一步詳述實(shí)施例一本發(fā)明試劑盒的應(yīng)用1.檢測(cè)原理待測(cè)血漿加入適量的凝血酶溶液，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白，測(cè)定凝固所需的時(shí)間，即為待測(cè)血漿凝血酶時(shí)間(TT)。2.檢測(cè)步驟凝血酶凍干品用一定體積的緩沖液復(fù)溶。以太平洋TS400C血凝儀為例，操作步驟如表l:表l本發(fā)明試劑盒操作步驟試劑加樣量待劂血槳(正常質(zhì)控血漿)加入測(cè)試杯100u137'C預(yù)溫孔預(yù)溫3分鐘，移入測(cè)雖孔并激活測(cè)試通道。凝血酶(室溫)100P1儀器進(jìn)行自動(dòng)測(cè)試并記錄結(jié)果。其它血凝儀測(cè)定時(shí)，按照相應(yīng)的儀器說(shuō)明書提供的參數(shù)操作。實(shí)施例二三種不同配比緩沖液測(cè)定結(jié)果的比較A種緩沖液配方甘氨酸4%;聚乙二醇-80000.3%;氯化鈉0.43%;NaN31%。；BSA2%;余量為水。B種緩沖液配方甘氨酸6%;聚乙二醇-80000.5%;氯化鈉0.51°/。；NaN31%。；BSA2%;余量為水。C種緩沖液配方甘氨酸9%;聚乙二醇-80000.8%;氯化鈉0.54°/。；NaN31%。；BSA2%;余量為水。將凝血酶凍干品分別用一定體積的A種、B種、C種緩沖液復(fù)溶，在太平洋T^400C血凝儀上測(cè)定同一正常質(zhì)控血漿(TT值1016秒)。(結(jié)果見(jiàn)表2)表2表明，A、B、C三種緩沖液的配比不同對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響較大，其中B種緩沖液測(cè)定結(jié)果較穩(wěn)定，至少可穩(wěn)定七天，而A、C兩種緩沖液分別在第六和第五天時(shí)出現(xiàn)延長(zhǎng)現(xiàn)象，穩(wěn)定性欠佳。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實(shí)施例三凝血酶試劑復(fù)溶后與市售TT試劑穩(wěn)定性比較凝血酶凍干品用一定體積的緩沖液復(fù)溶，然后將復(fù)溶后試劑置于37"C保存。在太平洋TS400C血凝儀上測(cè)定同一正常質(zhì)控血漿(TT值1016秒)，市售試劑同步進(jìn)行測(cè)定。(結(jié)果見(jiàn)表3)表3表明，本發(fā)明的TT試劑在復(fù)溶后的七天內(nèi)測(cè)定結(jié)果比較穩(wěn)定，而市售試劑在第三天時(shí)就開始明顯變化，這一結(jié)果對(duì)臨床檢驗(yàn)科來(lái)說(shuō)非常重要，因?yàn)樗梢詼p少浪費(fèi)，從而降低成本表3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實(shí)施例四與市售TT試劑重復(fù)性比較凝血酶凍干品用一定體積的緩沖液復(fù)溶，按實(shí)施例一所述方法操作，重復(fù)測(cè)定10次。同一正常質(zhì)控血漿(TT值1016秒)凝血酶時(shí)間(TT)在太平洋TS400C血凝儀上測(cè)得。(表4)表4表明，本發(fā)明所講的TT試劑與市售試劑相比，變異系數(shù)(CV)較小，重復(fù)性較好。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例五與市售TT試劑在光學(xué)法和磁珠法血凝儀上測(cè)定結(jié)果的比較凝血酶凍干品用一定體積的緩沖液復(fù)溶，分別在光學(xué)法和磁珠法血凝儀上測(cè)定同一正常質(zhì)控血漿(TT值1016秒)，重復(fù)測(cè)定10次，計(jì)算均值(X)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用t檢驗(yàn)比較兩者的差異。(表5)經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，本發(fā)明所講的TT試劑在光學(xué)法和磁珠法血凝儀上測(cè)定結(jié)果比較P>0.05，無(wú)顯著性差異，結(jié)果基本一致，具有很好的兼容性，相比之下，市售試劑P<0.01，差異非常顯著，兼容性欠佳。表s光學(xué)法與磁珠法血凝儀上測(cè)定結(jié)果比較<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>綜上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非用來(lái)限定本發(fā)明的實(shí)施范圍。即凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍的內(nèi)容所作的等效變化與修飾，都應(yīng)為本發(fā)明的技術(shù)范疇。權(quán)利要求1.一種臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間測(cè)定體外診斷試劑盒，其特征在于它是由凝血酶、緩沖液組成。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間測(cè)定體外診斷試劑盒，其特征在于緩沖液由下述原料制成-甘氨酸49%;聚乙二醇-80000.30.8%;BSA2%;氯化鈉0.430.54%;NaN31%Q;余量為水。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間測(cè)定體外診斷試劑盒，其特征在于緩沖液中甘氨酸的最適含量應(yīng)選為6%。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間測(cè)定體外診斷試劑盒，其特征在于緩沖液中聚乙二醇-8000的最適含量應(yīng)選為0.5%。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間測(cè)定體外診斷試劑盒，其特征在于緩沖液中氯化鈉的最適含量應(yīng)選為0.51%。全文摘要本發(fā)明涉及一種臨床檢驗(yàn)?zāi)笗r(shí)間(TT)測(cè)定體外診斷試劑盒。它是由凝血酶、緩沖液組成，用于篩選類肝素抗凝物存在及纖維蛋白原含量減少和作為肝素治療及溶纖治療監(jiān)測(cè)。其優(yōu)點(diǎn)在于凝血酶試劑復(fù)溶后穩(wěn)定時(shí)間長(zhǎng)、重復(fù)性好，同時(shí)對(duì)于光學(xué)法、磁珠法原理的血凝儀測(cè)定結(jié)果一致性較好，因此對(duì)大中小型醫(yī)院均適用，使不同醫(yī)院之間的檢驗(yàn)結(jié)果具有可比性，對(duì)于推行檢驗(yàn)報(bào)告“一單通”具有重要意義，為臨床血栓與止血類疾病的診斷治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。文檔編號(hào)G01N33/86GK101221188SQ200710036409公開日2008年7月16日申請(qǐng)日期2007年1月12日優(yōu)先權(quán)日2007年1月12日發(fā)明者朱美萍,謝永華申請(qǐng)人:上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司