專利名稱：用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種對(duì)移液器容量的精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，具體地說是一種采用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量的精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的鑒定方法。
背景技術(shù)：
移液器是采用空氣排代原理的量出式加樣器，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境檢測(cè)、食品安全、精細(xì)化工等技術(shù)領(lǐng)域，是各科研所、實(shí)驗(yàn)室定量分析的常用工具。移液器容量的精確度，直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。目前，國內(nèi)外移液器容量精確度的校準(zhǔn)方法有兩種①重量分析法。《中華人民共和國國家計(jì)量檢定規(guī)程》JJG 646-90規(guī)定，用蒸餾水稱重法作為移液器容量精確度檢定的標(biāo)準(zhǔn)方法，但該操作繁瑣，實(shí)驗(yàn)受到氣溫、濕度、氣壓等影響，同時(shí)檢測(cè)靈敏度較低，僅為0.1mg，實(shí)驗(yàn)誤差較大，且3次稱重結(jié)果很難判別誤差引起的原因，此法適用于容量為20μl以上移液器的校準(zhǔn)。②分光光度測(cè)定法。如重鉻酸鉀法、曙紅法等，此方法應(yīng)用“朗拜-比耳”比色原理，缺陷是對(duì)高濃度、低濃度溶液存在線性偏差，檢測(cè)靈敏度為10-3-10-4g/L。另外，對(duì)容量小于20ul的微量移液器，國內(nèi)外至今尚未提出或建立起有效的比對(duì)與校準(zhǔn)方法，而小容量移液器正是分子生物學(xué)、基因工程、蛋白質(zhì)工程實(shí)驗(yàn)的主要加樣工具。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提出一種靈敏度高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便的用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法包括如下工作步驟1、標(biāo)準(zhǔn)移液器吸液將標(biāo)準(zhǔn)移液器的滴頭浸入銪標(biāo)記溶液內(nèi)，滴頭完全吸滿；2、標(biāo)準(zhǔn)移液器放液將標(biāo)準(zhǔn)移液器移至聚乙烯板條內(nèi)壁底部并排空其內(nèi)的銪標(biāo)記溶液；3、重復(fù)上述過程，利用標(biāo)準(zhǔn)移液器加樣若干孔；4、平行試驗(yàn)用待檢移液器吸取同一銪標(biāo)記溶液，重復(fù)上述1-3步驟，用待檢移液器也加樣相同數(shù)量孔；5、結(jié)果測(cè)定將上述已加樣的聚乙烯板條同時(shí)放到時(shí)間分辨檢測(cè)儀上測(cè)熒光讀數(shù)，通過測(cè)得熒光值(CPS值)來反映溶液內(nèi)的熒光物質(zhì)顆粒數(shù)量，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器進(jìn)行容量比對(duì)與校準(zhǔn)。
上述用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，利用標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器各加樣20孔。
上述用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，在吸液前，先將標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器及吸液嘴與銪標(biāo)記溶液在室溫平衡30分鐘。
上述用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，在吸液前，先將銪原子溶液用增強(qiáng)液稀釋，最終將濃度控制在CPS值為100000-200000/100μl之間，使溶液充分混均。
上述用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，在吸液前先進(jìn)行預(yù)吸液，即選擇潔凈、合適的吸液嘴安置在標(biāo)準(zhǔn)移液器套筒上，壓緊吸液嘴使之與套筒之間無空氣間隙，預(yù)吸入銪標(biāo)記溶液并排回原容器中，吸液、排液重復(fù)多次。
上述用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，吸液時(shí)，將標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器的滴頭浸入銪標(biāo)記溶液液面下2-3mm處，然后緩慢平穩(wěn)地放松按鈕，待1-2秒鐘滴頭完全吸滿后，滴頭離開液面，貼壁停留2-3秒，淌走多余的液體。
上述用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，放液時(shí)，將標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器移至已編號(hào)的聚乙烯板條內(nèi)壁底部，保持垂直狀態(tài)，輕輕壓下按鈕至第一停點(diǎn)位置，等待1-2秒鐘，移動(dòng)滴頭貼內(nèi)壁，完全撳下按鈕，以排盡滴頭內(nèi)的銪標(biāo)記溶液，然后將滴頭沿內(nèi)壁向上移開。
上述用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，所述時(shí)間分辨熒光儀的激發(fā)波長(zhǎng)為336～337nm，測(cè)定波長(zhǎng)為610～613nm。
上述用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，測(cè)定得到CPS值后計(jì)算出兩移液器的CPS均值，利用公式CV＝SD/CPS均值×100％和R＝[待檢移液器CPS均值-標(biāo)準(zhǔn)移液器CPS均值]/標(biāo)準(zhǔn)移液器CPS均值×100％相對(duì)誤差分別計(jì)算出CV值(表示移液器的精密度---反映隨機(jī)誤差)及相對(duì)誤差R(表示待檢移液器的準(zhǔn)確度---反映系統(tǒng)誤差)；對(duì)CV值超過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定誤差范圍的移液器棄用；如待檢移液器的CV值符合規(guī)定但與標(biāo)準(zhǔn)移液器的CPS均值不相等時(shí)，調(diào)節(jié)移液器頂部旋鈕，調(diào)整其容量大小；再次重復(fù)檢測(cè)步驟1-5及上述計(jì)算調(diào)整步驟，直至待檢移液器CPS均值與標(biāo)準(zhǔn)移液器的CPS均值相等，即R趨向于0為止。
本發(fā)明由于采用了上述方法，它通過測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)移液器與待檢移液器對(duì)同一銪標(biāo)記溶液吸樣的熒光值，計(jì)算出各自的相關(guān)數(shù)據(jù)。由于在同一銪標(biāo)記濃度下，顆粒數(shù)的多少反映容量的大小，從而可對(duì)兩移液器的容量進(jìn)行比對(duì)，并計(jì)算出相對(duì)誤差。測(cè)定結(jié)果的CV值應(yīng)在《定量、可調(diào)移液器計(jì)量檢定規(guī)程》JJG 646-90規(guī)定的允許誤差范圍之內(nèi)。對(duì)CV值超過JJG 646-90規(guī)定誤差范圍的移液器應(yīng)棄用；如CV符合規(guī)定，且待檢移液器的CPS均值與標(biāo)準(zhǔn)移液器的CPS均值相等，則表示兩者容量相同。如待檢移液器的CV符合規(guī)定，但與標(biāo)準(zhǔn)移液器的CPS均值不相等時(shí)，表示兩者容量不相同。這時(shí)，就需要對(duì)待檢移液器的容量進(jìn)行校準(zhǔn)用專用扳手調(diào)節(jié)移液器頂部旋鈕，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，容量調(diào)大；逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，容量調(diào)小，隨后再進(jìn)行20次標(biāo)記溶液加樣測(cè)定，直至待檢移液器與標(biāo)準(zhǔn)移液器之間的CPS均值相等為止。它利用時(shí)間分辨熒光檢測(cè)技術(shù)(time-resolvedfluoroimmunoassay，TR-FIA)所具有的高靈敏度與高穩(wěn)定性特點(diǎn)，以鑭系銪原子(Eu)作為示蹤材料(原子序數(shù)63，原子半徑2.56，原子體積28.9cm3/mol)，以β-萘甲酰三氟丙酮(β-NTA)為熒光增強(qiáng)液，以336～337nm為激發(fā)波長(zhǎng)，以610～613nm為測(cè)定波長(zhǎng)，用時(shí)間分辨熒光儀檢測(cè)魯赫曼紫色熒光光譜，以《中華人民共和國國家計(jì)量檢定規(guī)程》JJG 646-90為判斷標(biāo)準(zhǔn)，建立起精確有效、簡(jiǎn)便快速的用銪原子標(biāo)記技術(shù)對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法。它具有本底低(200～400cps)、靈敏度高(檢測(cè)靈敏度達(dá)10-12～10-14g/L)、特異性強(qiáng)(激發(fā)光與發(fā)射光的STOKES位移大于200nm)、重復(fù)性好(CV＜1％)、示蹤物穩(wěn)定(銪半衰期長(zhǎng)達(dá)上萬年)、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范寬等檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)。利用本發(fā)明方法，可以更好地執(zhí)行關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)間醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、醫(yī)學(xué)影像檢查互認(rèn)的有關(guān)規(guī)定，既是各實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的具體要求，又為推進(jìn)醫(yī)療機(jī)構(gòu)間醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、檢查結(jié)果“一單通”提供了技術(shù)保障。


圖1是本發(fā)明比對(duì)與校準(zhǔn)方法的流程圖。
具體實(shí)施例方式下面以100μl待檢移液器與100μl標(biāo)準(zhǔn)移液器的比對(duì)與校準(zhǔn)方法為例進(jìn)行具體說明。該方法包括如下工作步驟1、確定標(biāo)準(zhǔn)移液器選用1支已經(jīng)國家計(jì)量部門檢定的100μl移液器作為本次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)移液器。
2、容量設(shè)定轉(zhuǎn)動(dòng)移液器頂部調(diào)節(jié)旋鈕，將標(biāo)準(zhǔn)移液器及待檢移液器的容量調(diào)節(jié)到100μl刻度。
3、將銪原子溶液用增強(qiáng)液(β-萘甲酰三氟丙酮(β-NTA))稀釋，最終將濃度控制在CPS值為100000-200000/100μl之間，溶液充分混均。這樣，CPS值的線性比較好，也可減少由于自然界中放射本底產(chǎn)生的誤差。
4、溫度平衡先將標(biāo)準(zhǔn)移液器、待檢移液器和吸液嘴與銪標(biāo)記溶液在室溫平衡30分鐘。這樣，可使吸液嘴的熱脹冷縮度一致，同時(shí)溶液中溶質(zhì)和溶劑能充分混合均勻，保證一致性。
5、預(yù)吸液選擇潔凈、合適的吸液嘴安置在標(biāo)準(zhǔn)移液器套筒上，稍加扭轉(zhuǎn)壓緊吸液嘴使之與套筒之間無空氣間隙。垂直握持移液器，預(yù)吸入銪標(biāo)記溶液并排回原容器中，吸液、排液共重復(fù)5次，整個(gè)操作動(dòng)作柔和，避免按鈕急速彈回。由于水第一次接觸到塑料吸液嘴時(shí)會(huì)有吸附性，通過5次預(yù)吸后就能使吸液嘴保持濕潤(rùn)度，即保證以后吸液和放液的吸附性保持一致。
6、吸液垂直握持標(biāo)準(zhǔn)移液器，把按鈕壓至第一停點(diǎn)，滴頭浸入銪標(biāo)記溶液液面下2-3mm處，然后緩慢平穩(wěn)地放松按鈕，等1-2秒鐘滴頭完全吸滿后，滴頭離開液面，貼壁停留2-3秒，淌走多余的液體。
7、放液將移液器移至已編號(hào)聚乙烯板條內(nèi)壁底部，保持垂直狀態(tài)，輕輕壓下按鈕至第一停點(diǎn)位置，等待1-2秒鐘，移動(dòng)滴頭貼內(nèi)壁，完全撳下按鈕，以排盡滴頭內(nèi)的銪標(biāo)記溶液，然后將滴頭沿內(nèi)壁向上移開，用標(biāo)準(zhǔn)移液器共加樣20孔。
8、平行試驗(yàn)用待檢移液器吸取同一銪標(biāo)記溶液，重復(fù)上述5-8步驟，用待檢移液器也加樣20孔。
9、結(jié)果測(cè)定將上述已加樣40孔的聚乙烯板條同時(shí)放到時(shí)間分辨檢測(cè)儀上測(cè)熒光讀數(shù)，通過測(cè)得CPS值來反映容液內(nèi)的熒光物質(zhì)顆粒數(shù)量。在同一濃度下，CPS的數(shù)值反映出了容量的大小，從而可對(duì)兩移液器的容量進(jìn)行相互比較。
10、計(jì)算方法通過上述標(biāo)準(zhǔn)移液器與待檢移液器各20次加樣，應(yīng)用時(shí)間分辨熒光法實(shí)測(cè)值，計(jì)算出兩移液器的CPS均值、CV及相對(duì)誤差R。計(jì)算公式為CV＝SD/CPS均值×100％；相對(duì)誤差R＝[待檢移液器CPS均值-標(biāo)準(zhǔn)移液器CPS均值]/標(biāo)準(zhǔn)移液器CPS均值×100％。
11、容量比對(duì)待檢移液器的CV值應(yīng)在《定量、可調(diào)移液器計(jì)量檢定規(guī)程》J JG 646-90規(guī)定的范圍之內(nèi)。對(duì)CV值超過JJG 646-90規(guī)定誤差范圍的移液器應(yīng)棄用；如待檢移液器的CV符合規(guī)定，且兩者的CPS均值相等，則表示兩者容量完全相同。
12、容量校準(zhǔn)當(dāng)待檢移液器CV符合規(guī)定，但與標(biāo)準(zhǔn)移液器的CPS均值不相等時(shí)，表示兩者容量不相等。這時(shí)，就需要對(duì)待檢移液器的容量進(jìn)行校準(zhǔn)用專用扳手調(diào)節(jié)移液器頂部旋鈕，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，容量調(diào)大；逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，容量調(diào)小。隨后再次重復(fù)5-12步驟，直至待檢移液器CPS均值(XR)與標(biāo)準(zhǔn)移液器的CPS均值(XS)相等，即R趨向于0為止。
本發(fā)明方法中，移液器的加樣孔數(shù)可以不是20次，如10次、25次等等，加樣20孔以上的準(zhǔn)確性會(huì)更高一些。
權(quán)利要求
1.用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，其特征在于，它包括如下工作步驟1、標(biāo)準(zhǔn)移液器吸液將標(biāo)準(zhǔn)移液器的滴頭浸入銪標(biāo)記溶液內(nèi)，滴頭完全吸滿；2、標(biāo)準(zhǔn)移液器放液將標(biāo)準(zhǔn)移液器移至聚乙烯板條內(nèi)壁底部并排空其內(nèi)的銪標(biāo)記溶液；3、重復(fù)上述過程，利用標(biāo)準(zhǔn)移液器加樣若干孔；4、平行試驗(yàn)用待檢移液器吸取同一銪標(biāo)記溶液，重復(fù)上述1-3步驟，用待檢移液器也加樣相同數(shù)量孔；5、結(jié)果測(cè)定將上述已加樣的聚乙烯板條同時(shí)放到時(shí)間分辨檢測(cè)儀上測(cè)熒光讀數(shù)，通過測(cè)得熒光值CPS值來反映溶液內(nèi)的熒光物質(zhì)顆粒數(shù)量，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器進(jìn)行容量比對(duì)與校準(zhǔn)。
2.如權(quán)利要求1所述的用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，其特征在于，利用標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器各加樣20孔。
3.如權(quán)利要求1或2所述的用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，其特征在于，在吸液前，先將標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器及吸液嘴與銪標(biāo)記溶液在室溫平衡30分鐘。
4.如權(quán)利要求1或2所述的用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，其特征在于，在吸液前，先將銪原子溶液用增強(qiáng)液稀釋，最終將濃度控制在CPS值為100000-200000/100μl之間，使溶液充分混均。
5.如權(quán)利要求1或2所述的用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，其特征在于，在吸液前先進(jìn)行預(yù)吸液，即選擇潔凈、合適的吸液嘴安置在標(biāo)準(zhǔn)移液器套筒上，壓緊吸液嘴使之與套筒之間無空氣間隙，預(yù)吸入銪標(biāo)記溶液并排回原容器中，吸液、排液重復(fù)多次。
6.如權(quán)利要求1或2所述的用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，其特征在于，吸液時(shí)，將標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器的滴頭浸入銪標(biāo)記溶液液面下2-3mm處，然后緩慢平穩(wěn)地放松按鈕，待1-2秒鐘滴頭完全吸滿后，滴頭離開液面，貼壁停留2-3秒，淌走多余的液體。
7.如權(quán)利要求1或2所述的用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，其特征在于，放液時(shí)，將標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器移至已編號(hào)的聚乙烯板條內(nèi)壁底部，保持垂直狀態(tài)，輕輕壓下按鈕至第一停點(diǎn)位置，等待1-2秒鐘，移動(dòng)滴頭貼內(nèi)壁，完全撳下按鈕，以排盡滴頭內(nèi)的銪標(biāo)記溶液，然后將滴頭沿內(nèi)壁向上移開。
8.如權(quán)利要求1或2所述的用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，其特征在于，所述時(shí)間分辨熒光儀的激發(fā)波長(zhǎng)為336～337nm，測(cè)定波長(zhǎng)為610～613nm。
9.如權(quán)利要求1或2所述的用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，其特征在于，測(cè)定得到CPS值后計(jì)算出兩移液器的CPS均值，利用公式CV＝SD/CPS均值×100％和R＝[待檢移液器CPS均值-標(biāo)準(zhǔn)移液器CPS均值]/標(biāo)準(zhǔn)移液器CPS均值×100％相對(duì)誤差分別計(jì)算出CV值及相對(duì)誤差R；對(duì)CV值超過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定誤差范圍的移液器棄用；如待檢移液器的CV值符合規(guī)定但與標(biāo)準(zhǔn)移液器的CPS均值不相等時(shí)，調(diào)節(jié)移液器頂部旋鈕，調(diào)整其容量大小；再次重復(fù)檢測(cè)步驟1-5及上述計(jì)算調(diào)整步驟，直至待檢移液器CPS均值與標(biāo)準(zhǔn)移液器的CPS均值相等，即R趨向于0為止。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用銪原子標(biāo)記法對(duì)移液器容量精確度進(jìn)行比對(duì)與校準(zhǔn)的方法，包括如下工作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)移液器吸液將標(biāo)準(zhǔn)移液器的滴頭浸入銪標(biāo)記溶液內(nèi)，滴頭完全吸滿；2.標(biāo)準(zhǔn)移液器放液將標(biāo)準(zhǔn)移液器移至聚乙烯板條內(nèi)壁底部并排空其內(nèi)的銪標(biāo)記溶液；3.重復(fù)上述過程，利用標(biāo)準(zhǔn)移液器加樣若干孔；4.平行試驗(yàn)用待檢移液器吸取同一銪標(biāo)記溶液，重復(fù)上述1－3步驟，用待檢移液器也加樣相同數(shù)量孔；5.結(jié)果測(cè)定將上述已加樣的聚乙烯板條同時(shí)放到時(shí)間分辨檢測(cè)儀上測(cè)熒光讀數(shù)，通過測(cè)得熒光值(CPS值)來反映溶液內(nèi)的熒光物質(zhì)顆粒數(shù)量，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)移液器和待檢移液器進(jìn)行容量比對(duì)與校準(zhǔn)。本發(fā)明方法具有靈敏度高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01F25/00GK101038202SQ20071006719
公開日2007年9月19日 申請(qǐng)日期2007年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月6日
發(fā)明者王志剛, 邵平揚(yáng) 申請(qǐng)人:王志剛