專(zhuān)利名稱(chēng)：一種雙黃連注射液的制備方法及其成分檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種雙黃連注射液的制備方法及其成分檢測(cè)方法，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
雙黃連注射液載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十一冊(cè)(WS3-B-2104-96)，是由金銀花、黃芩和連翹三味藥組成。用于外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽痛。適用于病毒及細(xì)菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃體炎、咽炎等。方中金銀花甘寒，芳香疏散，善清肺經(jīng)熱邪，為君藥；黃芩苦寒，善清肺火及上焦實(shí)熱；連翹苦微寒，散上焦風(fēng)熱，有清熱解毒之功，為臣藥。三藥使用，共奏辛涼解表，清熱解毒之功。
專(zhuān)利文獻(xiàn)99106224.8公開(kāi)了一種精制雙黃連注射液的生產(chǎn)工藝，包括1.將金銀花及連翹生藥煎煮；2.所得濾液濃縮后加入乙醇；3.溶液靜置；4.回收乙醇，加去離子水，調(diào)pH；5.靜置，超濾膜過(guò)濾，濃縮；6.向濃縮液中加入乙醇；7.靜置，回收乙醇；8.溶液過(guò)濾，得到浸膏；9.將上述浸膏、常規(guī)方法得到的黃芩甙粉及注射用水混合，加熱煮沸；10.微孔濾膜過(guò)濾，得到雙黃連注射液。其中，金銀花有效成分-綠原酸遇高溫易破壞，所以采用金銀花及連翹共提，金銀花的收率較低。
而且現(xiàn)有雙黃連注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)金銀花、黃芩和連翹三味藥均進(jìn)行了定性鑒別，但只建立了黃芩的含量測(cè)定方法；而其處方成分金銀花為君藥、連翹為臣藥，在處方中也起重要作用，是反映藥物內(nèi)在質(zhì)量的重要指標(biāo)成分，因而發(fā)明人認(rèn)為在該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上應(yīng)該增加其他2種成分的含量測(cè)定方法，彌補(bǔ)原質(zhì)量控制方法的不足，提高產(chǎn)品質(zhì)量的控制水平，保證產(chǎn)品的療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種雙黃連注射液的制備方法。
本發(fā)明的另一目的是提供雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，該方法提高了產(chǎn)品質(zhì)量的控制水平，保證產(chǎn)品的療效。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種雙黃連注射液的制備方法，由如下步驟制備1)金銀花濃浸膏的制備稱(chēng)取金銀花，加4～16倍水于60～85℃保溫浸泡30～180分鐘，浸泡2～3次，分次過(guò)濾，收取濾液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.25(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入乙醇至含醇量75～80％，靜置12～24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.12～1.23(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，加入膏重2～6倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12～24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.25(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入乙醇，至含醇量達(dá)到80～85％，靜置12～24小時(shí)，取上清液調(diào)pH值8.0～10.0，靜置24～36小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.12～1.23(80℃±5℃測(cè))，得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的制備稱(chēng)取連翹，水煎3次，第一次，加入4～12倍量水，浸泡30分鐘，加熱煮沸1.0～3.0小時(shí)，過(guò)濾；第二、第三次各2～8倍量水，煮沸1.0～2.0小時(shí)，合并藥液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.25(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入乙醇至含醇量75～80％，沉淀12～24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重2～6倍量的純化水，攪拌，靜置12～24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.25(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加乙醇，使含醇量達(dá)到80～85％，靜置12～24小時(shí)，取上清液調(diào)pH值8.0～10.0，靜置24～36小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.12～1.23(80±5℃測(cè))，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的制備取黃芩片，加入2～12倍量水，至少煎煮2次，每次1～3小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，濃縮至生藥量3～6倍，靜置1～3小時(shí)后濾取上清液調(diào)pH值至1.0～3.0，70～80℃保溫1～3小時(shí)，靜置12～20小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加5～10倍量水，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過(guò)濾，濾液調(diào)pH值至1.0～3.0，60～70℃保溫30～60分鐘，靜置12～20小時(shí)，濾過(guò)，沉淀用乙醇洗至pH值為6.0～8.0，回收乙醇，離心得沉淀物；取沉淀物加入1～3倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，浸潤(rùn)4～10小時(shí)，再加入4～8倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，攪拌2～10分鐘后，調(diào)pH值至6.0～7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸30～60分鐘，待冷卻至60～80℃后，用乙醇過(guò)濾，濾液調(diào)pH值至1.0～3.0，60±5℃保溫30～60分鐘，靜置4～10小時(shí)，棄去上清液，沉淀物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽干，干燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的制備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷，將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋?zhuān)靹蚝蠹尤朦S芩苷攪拌，溶解得雙黃連濃配液；絹布過(guò)濾，微孔濾膜過(guò)濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15～30分鐘并冷卻至70℃以下，調(diào)pH值6.8～7.5，定容至全量，攪拌均勻，進(jìn)行粗濾，粗濾后的藥液冷卻至10～40℃，精濾，灌裝，115～118℃滅菌30分鐘，即得。
其制備方法優(yōu)選的為1)金銀花濃浸膏的制備稱(chēng)取金銀花，第一遍加入10倍量水，于80℃保溫浸泡1小時(shí)，第二遍加入10倍量水，于80℃保溫浸泡40分鐘，分次過(guò)濾，收取濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入90％以上乙醇至含醇量75％，靜置12小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達(dá)到85％，靜置12小時(shí)，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8.5～9.0，靜置24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))。得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的制備稱(chēng)取連翹，第一遍加入8倍量水，浸泡30分鐘，加熱煮沸1.5小時(shí)，過(guò)濾；第二、第三遍各6倍量水，煮沸1.0小時(shí)，合并藥液濃縮至密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入90％以上乙醇至含醇量75％，沉淀12小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達(dá)到85％，靜置12小時(shí)，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8.5～9.0，靜置24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的制備取黃芩片，加入8倍量水，煎煮2小時(shí)，過(guò)濾，加入6倍量水，煎煮1小時(shí)，合并濾液，濃縮至生藥量4～5倍，靜置1小時(shí)后濾取上清液用2mol/L鹽酸調(diào)pH值至1.0～2.0，80℃保溫1小時(shí)，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加6～8倍量水，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5～7.5，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過(guò)濾，濾液用2mol/L鹽酸調(diào)pH值至1.0～2.0，60℃保溫30分鐘，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，沉淀用乙醇洗至pH值為6.5～7.5，回收乙醇，離心得沉淀物；取沉淀物加入2倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，浸潤(rùn)4小時(shí)以上，再加入4倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，攪拌2分鐘后緩緩加入10％氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值至6.5～7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸30分鐘，待冷卻至60～80℃后，加入藥液體積0.5倍量的90％以上乙醇，趁熱過(guò)濾，濾液用10％HCl調(diào)pH值至1.5～2.0，60±5℃保溫30分鐘，靜置4小時(shí)以上，棄去上清液，沉淀物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽干，干燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的制備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷。將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋?zhuān)靹蚝蠹尤朦S芩苷攪拌使溶解得雙黃連濃配液；絹布過(guò)濾，微孔濾膜過(guò)濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15分鐘并冷卻至70℃以下，調(diào)pH值6.8～7.5，定容至全量，攪拌均勻，進(jìn)行粗濾，粗濾后的藥液冷卻至10～40℃，精濾，灌裝，115～118℃滅菌30分鐘，即得。
本發(fā)明雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，該方法包括黃芩、金銀花與連翹中任意兩種或三種成分的含量測(cè)定。
本發(fā)明的雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，包括所述的黃芩、金銀花和連翹的含量測(cè)定(1)黃芩的含量測(cè)定 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比40-60∶0.5-2∶60-40的甲醇-冰醋酸-水為流動(dòng)相，優(yōu)選為48∶1∶52；檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于1000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品，加40～60％甲醇或乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，優(yōu)選采用50％甲醇或乙醇，即得。
供試品溶液的制備 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加40～60％甲醇或乙醇稀釋至刻度，優(yōu)選采用50％甲醇或乙醇，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各8μl，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量，即得。
本品每1ml含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計(jì)，為6.0～12.0mg。
(2)金銀花 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比10-30∶90-70∶0.1-2的甲醇-水-冰醋酸為流動(dòng)相，優(yōu)選為20∶80∶1；檢測(cè)波長(zhǎng)為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置棕色量瓶中，加水(甲醇、乙醇)制成每1ml含40μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水(甲醇、乙醇)稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每1ml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)，為0.05～2.0mg。
(3)連翹 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比10-40∶90-60的乙腈-水為流動(dòng)相，優(yōu)選為25∶75；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 取連翹苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加30～90％甲醇或乙醇制成每1ml含60μg的溶液，優(yōu)選采用50％甲醇或乙醇，即得。
供試品溶液的制備 精密量取本品10ml，置中性氧化鋁柱(100～120目6g，內(nèi)徑1cm)上，用30～90％乙醇40ml洗脫，優(yōu)選采用70％甲醇或乙醇，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0～90％甲醇或乙醇適量，優(yōu)選采用50％甲醇或乙醇，溫?zé)崾谷芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每1ml含連翹以連翹苷(C29H36O15)計(jì)，為0.05～0.4mg。
本發(fā)明的一種雙黃連注射液的質(zhì)量控制方法，也可以包括金銀花和連翹的含量測(cè)定方法，黃芩和金銀花的含量測(cè)定方法，或黃芩和連翹的含量測(cè)定方法。
本發(fā)明的雙黃連注射液的制備方法，采用三種原料分別提取有效成分，將金銀花改為用熱水先浸泡再醇沉，避免了金銀花有效成分的破壞，使綠原酸的收率有所提高。本發(fā)明雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，提高了產(chǎn)品質(zhì)量的控制水平，保證產(chǎn)品的療效。既有利于生產(chǎn)廠家和管理部門(mén)對(duì)產(chǎn)品的監(jiān)測(cè)，也可以為醫(yī)療部門(mén)和患者的治療提供較好的保障。


圖1-1為金銀花陰性液色譜圖；圖1-2為金銀花檢測(cè)時(shí)雙黃連注射液標(biāo)準(zhǔn)色譜圖；圖2-1為連翹陰性液色譜圖；圖2-2為連翹檢測(cè)時(shí)雙黃連注射液色譜圖。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1雙黃連注射液制備方法1)金銀花濃浸膏的制備稱(chēng)取金銀花，第一遍加入10倍量水，于80℃保溫浸泡1小時(shí)，第二遍加入10倍量水，于80℃保溫浸泡40分鐘，分次過(guò)濾，收取濾液濃縮至相對(duì)密度1.20±0.02(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入90％乙醇至含醇量75％，靜置12小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.18(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.20±0.02(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達(dá)到85％，靜置12小時(shí)，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8.5，靜置24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))。得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的制備稱(chēng)取連翹，第一遍加入8倍量水，浸泡30分鐘，加熱煮沸1.5小時(shí)，過(guò)濾；第二、第三遍各6倍量水，煮沸1.0小時(shí)，合并藥液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入90％乙醇至含醇量75％，沉淀12小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達(dá)到85％，靜置12小時(shí)，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值9.0，靜置24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的制備取黃芩片，加入8倍量水，煎煮2小時(shí)，過(guò)濾，加入6倍量水，煎煮1小時(shí)，合并濾液，濃縮至生藥量5倍，靜置1小時(shí)后濾取上清液用2mol/L鹽酸調(diào)pH值至1.0，80℃保溫1小時(shí)，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加8倍量水，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.5，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過(guò)濾，濾液用2mol/L鹽酸調(diào)pH值至1.0，60℃保溫30分鐘，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，沉淀用乙醇洗至pH值為7.5，回收乙醇，離心得沉淀物；取沉淀物加入2倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃的注射用水，浸潤(rùn)4小時(shí)，再加入4倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃的注射用水，攪拌2分鐘后緩緩加入10％氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值至6.5，加入0.5％的藥用炭，煮沸30分鐘，待冷卻至60℃后，加入藥液體積0.5倍量的90％乙醇，趁熱過(guò)濾，濾液用10％HCl調(diào)pH值至1.5，60±5℃保溫30分鐘，靜置4小時(shí)，棄去上清液，沉淀物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽干，干燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的制備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷。將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋?zhuān)靹蚝蠹尤朦S芩苷攪拌使溶解得雙黃連濃配液；絹布過(guò)濾，微孔濾膜過(guò)濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15分鐘并冷卻至70℃，調(diào)pH值6.8，定容至全量，攪拌均勻，進(jìn)行粗濾，粗濾后的藥液冷卻至40℃，精濾，灌裝，118℃滅菌30分鐘，即得。
實(shí)施例21)金銀花濃浸膏的制備稱(chēng)取金銀花，第一遍加入4倍量水，于60℃保溫浸泡80分鐘，第二遍加入8倍量水，于80℃保溫浸泡60分鐘，第三遍加入12倍量水，于85℃保溫浸泡30分鐘，分次過(guò)濾，收取濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入95％乙醇至含醇量80％，靜置18小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，加入膏重6倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達(dá)到90％，靜置18小時(shí)，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值9.0，靜置24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))。得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的制備稱(chēng)取連翹，第一遍加入12倍量水，浸泡40分鐘，加熱煮沸3小時(shí)，過(guò)濾；第二、第三遍各8倍量水，煮沸2小時(shí)，合并藥液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入90％乙醇至含醇量80％，沉淀20小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重2倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達(dá)到90％，靜置18小時(shí)，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8.0，靜置36小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.20～1.23(80±5℃測(cè))，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的制備取黃芩片，加入2倍量水，煎煮1小時(shí)，過(guò)濾，加入8倍量水，煎煮2小時(shí)，加入10倍量水，煎煮1小時(shí)，合并濾液，濃縮至生藥量3倍，靜置1小時(shí)后濾取上清液用2mol/L鹽酸調(diào)pH值至2.0，70℃保溫3小時(shí)，靜置20小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加5倍量水，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過(guò)濾，濾液用2mol/L鹽酸調(diào)pH值至2.0，70℃保溫60分鐘，靜置20小時(shí)，濾過(guò)，沉淀用乙醇洗至pH值為7.0，回收乙醇，離心得沉淀物；取沉淀物加入3倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，浸潤(rùn)10小時(shí)，再加入6倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，攪拌6分鐘后緩緩加入10％氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值至7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸40分鐘，待冷卻至70℃后，加入藥液體積0.5倍量的90％以上乙醇，趁熱過(guò)濾，濾液用10％HCl調(diào)pH值至1.0，60±5℃保溫60分鐘，靜置10小時(shí)，棄去上清液，沉淀物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽干，干燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的制備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷。將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋?zhuān)靹蚝蠹尤朦S芩苷攪拌使溶解得雙黃連濃配液；絹布過(guò)濾，微孔濾膜過(guò)濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15分鐘并冷卻至70℃以下，調(diào)pH值7.5，定容至全量，攪拌均勻，進(jìn)行粗濾，粗濾后的藥液冷卻至30℃，精濾，灌裝，118℃滅菌60分鐘，即得。
實(shí)施例31)金銀花濃浸膏的制備稱(chēng)取金銀花，第一遍加入6倍量水，于70℃保溫浸泡1小時(shí)，第二遍加入16倍量水，于85℃保溫浸泡30分鐘，分次過(guò)濾，收取濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入90％乙醇至含醇量78％，靜置24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，加入膏重2倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置20小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達(dá)到85％，靜置24小時(shí)，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8.5，靜置24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))。得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的制備稱(chēng)取連翹，第一遍加入4倍量水，浸泡60分鐘，加熱煮沸1小時(shí)，過(guò)濾；第二、第三遍各2倍量水，煮沸1.5小時(shí)，合并藥液濃縮至相對(duì)密度1.22～1.25(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入95％乙醇至含醇量78％，沉淀24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重6倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置20小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達(dá)到85％，靜置24小時(shí)，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值10.0，靜置30小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.12～1.16(80±5℃測(cè))，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的制備取黃芩片，加入12倍量水，煎煮2小時(shí)，過(guò)濾，加入6倍量水，煎煮3小時(shí)，合并濾液，濃縮至生藥量6倍，靜置1小時(shí)后濾取上清液用2mol/L鹽酸調(diào)pH值至3.0，75℃保溫2小時(shí)，靜置18小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加10倍量水，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過(guò)濾，濾液用2mol/L鹽酸調(diào)pH值至1.5，65℃保溫40分鐘，靜置18小時(shí)，濾過(guò)，沉淀用乙醇洗至pH值為8.0，回收乙醇，離心得沉淀物；取沉淀物加入1倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，浸潤(rùn)6小時(shí)，再加入8倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，攪拌10分鐘后緩緩加入10％氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值至7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸60分鐘，待冷卻至80℃后，加入藥液體積0.5倍量的90％以上乙醇，趁熱過(guò)濾，濾液用10％HCl調(diào)pH值至3.0，60±5℃保溫40分鐘，靜置6小時(shí)，棄去上清液，沉淀物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽干，干燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的制備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷。將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋?zhuān)靹蚝蠹尤朦S芩苷攪拌使溶解得雙黃連濃配液；絹布過(guò)濾，微孔濾膜過(guò)濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15分鐘并冷卻至70℃以下，調(diào)pH值7.0，定容至全量，攪拌均勻，進(jìn)行粗濾，粗濾后的藥液冷卻至10℃，精濾，灌裝，115℃滅菌40分鐘，即得。
實(shí)施例4由實(shí)施例1制備的雙黃連注射液對(duì)三種成分進(jìn)行檢測(cè)。
1)金銀花的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸(20∶80∶1)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含40μg的溶液，即為對(duì)照品溶液。精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。本發(fā)明中雙黃連注射液每1ml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)，為1.1mg。
2)連翹的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(25∶75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。取連翹苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50％乙醇制成每1ml含60μg的溶液，即為對(duì)照品溶液。精密量取本品10ml，置中性氧化鋁柱(100～120目6g，內(nèi)徑1cm)上，用70％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0％乙醇適量，溫?zé)崾谷芙猓D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。本發(fā)明中雙黃連注射液每1ml含連翹以連翹苷(C29H36O15)計(jì)，為0.2mg。
3)黃芩的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-冰醋酸-水(48∶1∶52)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于1000。精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品，加50％甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各8μl，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量，即得。本品每1ml含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計(jì)，為8.8mg。
實(shí)施例5基本過(guò)程同實(shí)施例4，不同的是三種成分檢測(cè)過(guò)程中的條件黃芩的含量測(cè)定中，以40∶2∶60的甲醇-冰醋酸-水為流動(dòng)相；制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，所用溶劑為40％乙醇。
金銀花的含量測(cè)定中，以10∶90∶2的甲醇-水-冰醋酸為流動(dòng)相；連翹的含量測(cè)定中，以10∶90乙腈-水為流動(dòng)相，制備對(duì)照品溶液所用溶劑為30％甲醇，供試品溶液洗脫用30％甲醇，溶解用的90％甲醇。
實(shí)施例6基本過(guò)程同實(shí)施例4，不同的是三種成分檢測(cè)過(guò)程中的條件黃芩的含量測(cè)定中，以60∶0.5∶40的甲醇-冰醋酸-水為流動(dòng)相；制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，所用溶劑為60％乙醇。
金銀花的含量測(cè)定中，以30∶70∶0.1的甲醇-水-冰醋酸為流動(dòng)相；連翹的含量測(cè)定中，以40∶60乙腈-水為流動(dòng)相，制備對(duì)照品溶液所用溶劑為90％甲醇，供試品溶液洗脫用90％甲醇，溶解用的30％甲醇。
對(duì)于產(chǎn)品成分檢測(cè)也可以只針對(duì)金銀花和連翹的含量測(cè)定方法、黃芩和金銀花的含量測(cè)定方法，或黃芩和連翹的含量測(cè)定方法。
實(shí)驗(yàn)例1金銀花含量測(cè)定及方法學(xué)考察(1)儀器與試藥儀器高效液相色譜儀Agilent 1200，色譜柱Agilent ZORBAXEclipse XDB-C18 4.6×150mm 5μ。
對(duì)照品綠原酸(來(lái)源于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110753-200413，供含量測(cè)定用)。
樣品批號(hào)20060801、20060802、20060803試劑甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純。
(2)色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸(10-30∶90-70∶0.1-2)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
(3)供試品溶液的制備精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水(甲醇、乙醇)稀釋至刻度，搖勻，即得。
(4)對(duì)照品溶液的制備取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置棕色量瓶中，加水(甲醇、乙醇)制成每1ml含40μg的溶液，即得。
(5)線(xiàn)性范圍試驗(yàn)精密稱(chēng)定綠原酸對(duì)照品10.28mg，置100ml棕色量瓶中加水(甲醇、乙醇)溶解并稀釋至刻度。從中取出4ml至10ml棕色量瓶中稀釋至刻度。精密吸取上述溶液各2μl、5μl、10μl、15μl、20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)Y，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)X，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，結(jié)果表明綠原酸進(jìn)樣量在0.08-0.82μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 線(xiàn)性范圍試驗(yàn)

(6)精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD＝0.16％，符合規(guī)定，見(jiàn)表2。
表2 精密度試驗(yàn)

(7)穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液分別在制備好后0小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)注入液相色譜儀，結(jié)果其峰面積均未見(jiàn)明顯變化(RSD＝0.14％)，說(shuō)明供試品溶液24小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定，結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

(8)專(zhuān)屬性試驗(yàn)取不含金銀花的其他藥材按生產(chǎn)工藝制備陰性對(duì)照液，取6ml置50ml棕色量瓶中，用水(甲醇、乙醇)稀釋至刻度，搖勻，即得。注入液相色譜儀，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果對(duì)樣品測(cè)定無(wú)干擾(見(jiàn)圖1-1，1-2)。
(9)重復(fù)性試驗(yàn)精密量取樣品6份(批號(hào)20060801)各6ml，分別置50ml棕色量瓶中，用水(甲醇、乙醇)稀釋至刻度，搖勻，即得。注入液相色譜儀，分別測(cè)定，重復(fù)性良好，結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 重復(fù)性試驗(yàn)

(10)回收率試驗(yàn)精密量取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下的5號(hào)供試品溶液6ml共6份，至棕色量瓶中，精密加入綠原酸對(duì)照品2.2762mg，加水(甲醇、乙醇)攪拌使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。注入液相色譜儀，分別測(cè)定，計(jì)算回收率及RSD％值。結(jié)果見(jiàn)表5。
表5 回收率試驗(yàn)

綠原酸的平均回收率為100.56％，RSD＝0.46％；結(jié)果表明該方法的回收率理想。
(11)樣品含量測(cè)定分別精密量取樣品(批號(hào)20060801、20060802、20060803)，每份6ml，置50ml棕色量瓶中，用水(甲醇、乙醇)稀釋至刻度，搖勻，即得。注入液相色譜儀，分別測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表6。
表6 樣品含量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)例2連翹含量測(cè)定及方法學(xué)考察(1)儀器與試藥儀器高效液相色譜儀Agilent 1200型，色譜柱Agilent ZORBAXEclipse XDB-C184.6×150mm 5μ。
對(duì)照品連翹苷(來(lái)源于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110821-200609，供含量測(cè)定用)。
樣品批號(hào)20060801、20060802、20060803
試劑乙腈為色譜純。
(2)色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(10-40∶90-60)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
(3)對(duì)照品溶液的制備取連翹苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加30～90％甲醇或乙醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。
(4)供試品溶液的制備精密量取本品10ml，置中性氧化鋁柱(100～120目6g，內(nèi)徑1cm)上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0～90％甲醇或乙醇適量，溫?zé)崾谷芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
(5)線(xiàn)性范圍試驗(yàn)精密稱(chēng)定連翹苷對(duì)照品14.80mg，置100ml量瓶中加30～90％甲醇或乙醇溶解并稀釋至刻度。從中取出4ml至10ml量瓶中稀釋至刻度。精密吸取上述溶液各2μl、5μl、10μl、15μl、20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)Y，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)X，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，結(jié)果表明連翹苷進(jìn)樣量在0.12～1.18μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)表7。
表7 線(xiàn)性范圍試驗(yàn)

(6)精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD＝0.35％，符合規(guī)定，見(jiàn)表8。
表8 精密度試驗(yàn)

(7)穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液分別在制備好后0小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)注入液相色譜儀，結(jié)果其峰面積均未見(jiàn)明顯變化(RSD＝0.25％)，說(shuō)明供試品溶液24小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定，結(jié)果見(jiàn)表9。
表9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

(8)專(zhuān)屬性試驗(yàn)取不含連翹的其他藥材，按相同工藝制備陰性對(duì)照液，精密量取10ml，按供試品溶液的制備方法制備樣品，注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果對(duì)樣品測(cè)定無(wú)干擾(見(jiàn)圖2-1，2-2)。
(9)重復(fù)性試驗(yàn)共量取適量樣品6份(批號(hào)20060801)，從中各精密吸取10ml，分別置中性氧化鋁柱(100～120目6g，內(nèi)徑1cm)上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0～90％甲醇或乙醇適量，溫?zé)崾谷芙猓D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。注入液相色譜儀，分別測(cè)定，重復(fù)性良好，結(jié)果見(jiàn)表10。
表10 重復(fù)性試驗(yàn)

(10)回收率試驗(yàn)精密量取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下的5號(hào)供試品溶液10ml共6份，精密加入連翹苷對(duì)照品mg，攪拌溶解后，分別置中性氧化鋁柱(100～120目6g，內(nèi)徑1cm)上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0～90％甲醇或乙醇適量，溫?zé)崾谷芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。注入液相色譜儀，分別測(cè)定，計(jì)算回收率及RSD％值。結(jié)果見(jiàn)表11。
表11 回收率試驗(yàn)


連翹苷的平均回收率為99.64％，RSD＝0.32％；結(jié)果表明該方法的回收率較理想。
(11)樣品含量測(cè)定精密量取樣品(批號(hào)20060801、20060802、20060803)各10ml，按供試品溶液的制備方法制備樣品，注入液相色譜儀，分別測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表12。
表12 樣品含量測(cè)定

本發(fā)明所述雙黃連注射液具有清熱解毒，清宣風(fēng)熱的功效。藥效學(xué)研究表明按照本發(fā)明的制備方法以及產(chǎn)品檢測(cè)方法來(lái)控制產(chǎn)品質(zhì)量，所得的成品在抑菌、抗病毒，抗炎，解熱，鎮(zhèn)痛等方面有較好的療效。
具體情況如下實(shí)驗(yàn)例3體內(nèi)抑菌作用比較(對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起小鼠死亡的保護(hù)作用)取小鼠按體重隨機(jī)分為7組每組10只，即空白對(duì)照組、雙黃連注射液I(按現(xiàn)行制備工藝所得)高中低三個(gè)劑量組和雙黃連注射液II(由實(shí)施例1所得)高中低三個(gè)劑量組。給藥組腹腔注射(最后一次皮下注射)藥液40ml/kg，每天一次，連續(xù)給藥7天；空白對(duì)照組以同樣方式給予注射用水。在最后一次給藥30min后，各組腹腔注射金黃色葡萄球菌的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)液(37℃±1℃，24h，細(xì)菌數(shù)約108/ml)，劑量為每只小鼠0.5ml，即刻觀察，并連續(xù)觀察7天，記錄每天小鼠死亡情況，計(jì)算半數(shù)有效量(ED50)。結(jié)果表明，雙黃連注射液I和雙黃連注射液II對(duì)腹腔注射金黃色葡萄球菌引起的小鼠死亡均有一定保護(hù)作用，且雙黃連注射液II的保護(hù)作用強(qiáng)于雙黃連注射液I，但兩者的ED50無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，見(jiàn)表13。
表13 雙黃連注射液體內(nèi)抑菌作用比較試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例4體內(nèi)抗病毒作用比較(對(duì)小鼠流感病毒性肺炎的影響)取小鼠按體重隨機(jī)分組，腹腔注射樣品，病毒感染對(duì)照組和正常動(dòng)物對(duì)照組均給予相同藥液容積的注射用水。除正常對(duì)照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個(gè)LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05ml。從感染前一天開(kāi)始給藥或水，每天2次，連續(xù)5天，第6天稱(chēng)取小鼠體重后固定，放血、解剖，摘取全肺稱(chēng)重，逐個(gè)計(jì)算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)抑制率，結(jié)果見(jiàn)表14。肺組織用10％甲醛固定，乙醇系列脫水，二甲苯透明，石蠟包埋。切片厚度4～5μm，HE染色，普通光學(xué)顯微鏡觀察肺組織形態(tài)學(xué)變化。按炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)分，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)比較，結(jié)果見(jiàn)表15。
表14 雙黃連注射液對(duì)流感病毒感染小鼠肺部炎癥(肺指數(shù))的影響(n＝10)

注與感染對(duì)照組相比，**P＜0.01，*P＜0.05
表15 雙黃連注射液對(duì)流感病毒感染小鼠肺部炎癥(病毒觀察)的影響(n＝10)

注與感染對(duì)照組相比，**P＜0.01，*P＜0.05由表14、15結(jié)果可見(jiàn)，感染后小鼠肺指數(shù)值明顯增大，炎癥計(jì)分值明顯增高，雙黃連注射液在本試驗(yàn)條件下的劑量范圍內(nèi)對(duì)流感病毒感染小鼠引起的肺炎有明顯的抑制作用，肺指數(shù)值明顯降低，肺組織病變程度明顯減輕，計(jì)分值明顯降低。且在相同劑量條件下，雙黃連注射液II的作用強(qiáng)于雙黃連注射液I。
實(shí)驗(yàn)例5抗炎作用比較(對(duì)腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響)取50只小鼠，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為5組。用藥組按20ml/kg體重腹腔注射藥液，空白對(duì)照組給予同體積的注射用水。每天給藥一次，連續(xù)7天，于末次給藥30分鐘后，各小鼠均尾靜脈注射0.5％伊文思蘭生理鹽水溶液0.1ml/10g體重，并立即腹腔注射0.6％醋酸生理鹽水溶液0.2ml/只，20min后脫頸椎處死，打開(kāi)腹腔，用6ml生理鹽水洗滌腹腔，收集洗滌液并離心，取上清液于590nm處測(cè)吸收度。結(jié)果由表16可見(jiàn)，雙黃連注射液能顯著抑制腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增高，與空白組比，20g/kg、10g/kg(含生藥)組，差異非常顯著(P＜0.01)，與劑量呈相關(guān)性。雙黃連注射液II的作用強(qiáng)度與雙黃連注射液I相似。
表16雙黃連注射液對(duì)腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響


注與空白對(duì)照組比，**P＜0.01，*P＜0.05實(shí)驗(yàn)例6解熱作用比較取預(yù)測(cè)溫合格家兔，在試驗(yàn)日按要求測(cè)定給藥前直腸體溫后，按體溫隨機(jī)分組。給藥組靜脈注射藥液，空白對(duì)照組給予注射用水，給藥體積均為4ml/kg。除空白對(duì)照組外，各組給藥后立即靜脈注射細(xì)菌內(nèi)毒素50ED/kg，以后每隔30min測(cè)直腸溫度一次，以不同時(shí)間所測(cè)體溫與給藥前體溫之差值，為體溫升高值(體溫下降在0.4℃以?xún)?nèi)者以0計(jì))，結(jié)果見(jiàn)表17。
表17 雙黃連注射液對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素所致家兔體溫升高的影響(n＝6)

注與模型組比較，**P＜0.01，*P＜0.05結(jié)果表明，雙黃連注射液給藥劑量在20g/kg、10g/kg(含生藥)時(shí)，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素引起的家兔體溫升高具有良好的解熱作用，與模型組比較差異非常顯著(P＜0.01)。雙黃連注射液II的解熱作用與雙黃連注射液I相似。
實(shí)驗(yàn)例7鎮(zhèn)痛作用比較(扭體法)將50只小鼠隨機(jī)分為5組，用藥組按20ml/kg體重腹腔注射藥液，空白對(duì)照組給予同體積的注射用水。每日一次，連續(xù)5天，第5天上午給藥45分鐘后，腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，觀察記錄15分鐘內(nèi)各鼠扭體次數(shù)，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
表18 雙黃連注射液對(duì)醋酸所致小鼠疼痛的影響

注與空白對(duì)照組比，*P＜0.05從表18可見(jiàn)，同等劑量下雙黃連注射液II的鎮(zhèn)痛作用好于雙黃連注射液I。
實(shí)驗(yàn)例8止咳作用比較取小鼠50只隨機(jī)分為5組，用藥組按20ml/kg體重腹腔注射藥液，空白對(duì)照組給予同體積的注射用水。連續(xù)給藥5天，一天一次，末次給藥1小時(shí)后，利用超聲霧化器噴霧26％氨水3秒，觀察并記錄小鼠的咳嗽潛伏期(即停止噴霧到咳嗽的時(shí)間)和2分鐘內(nèi)小鼠咳嗽次數(shù)(以其腹肌收縮、張大嘴和聽(tīng)到咳聲為準(zhǔn))，結(jié)果見(jiàn)表19。
表19 雙黃連注射液對(duì)氨水所致小鼠咳嗽的影響

注與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01，*P＜0.05從表19可見(jiàn)，雙黃連注射液可顯著延長(zhǎng)氨水所致小鼠咳嗽潛伏期，還可明顯減少小鼠咳嗽次數(shù)。雙黃連注射液II的鎮(zhèn)咳作用略好于雙黃連注射液I。
從以上試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，同等劑量下的雙黃連注射液II的主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均優(yōu)于雙黃連注射液I。
雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1.一種雙黃連注射液的制備方法，其特征在于，由如下步驟制備1)金銀花濃浸膏的制備稱(chēng)取金銀花，加4～16倍水于60～85℃保溫浸泡30～180分鐘，浸泡2～3次，分次過(guò)濾，收取濾液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.25(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入乙醇至含醇量75～80％，靜置12～24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.12～1.23(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，加入膏重2～6倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12～24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.25(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入乙醇，至含醇量達(dá)到80～85％，靜置12～24小時(shí)，取上清液調(diào)pH值8.0～10.0，靜置24～36小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.12～1.23(80℃±5℃測(cè))，得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的制備稱(chēng)取連翹，水煎3次，第一次，加入4～12倍量水，浸泡30分鐘，加熱煮沸1.0～3.0小時(shí)，過(guò)濾；第二、第三次各2～8倍量水，煮沸1.0～2.0小時(shí)，合并藥液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.25(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入乙醇至含醇量75～80％，沉淀12～24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重2～6倍量的純化水，攪拌，靜置12～24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.25(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加乙醇，使含醇量達(dá)到80～85％，靜置12～24小時(shí)，取上清液調(diào)pH值8.0～10.0，靜置24～36小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.12～1.23(80±5℃測(cè))，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的制備取黃芩片，加入2～12倍量水，至少煎煮2次，每次1～3小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，濃縮至生藥量3～6倍，靜置1～3小時(shí)后濾取上清液調(diào)pH值至1.0～3.0，70～80℃保溫1～3小時(shí)，靜置12～20小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加5～10倍量水，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過(guò)濾，濾液調(diào)pH值至1.0～3.0，60～70℃保溫30～60分鐘，靜置12～20小時(shí)，濾過(guò)，沉淀用乙醇洗至pH值為6.0～8.0，回收乙醇，離心得沉淀物；取沉淀物加入1～3倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，浸潤(rùn)4～10小時(shí)，再加入4～8倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，攪拌2～10分鐘后，調(diào)pH值至6.0～7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸30～60分鐘，待冷卻至60～80℃后，用乙醇過(guò)濾，濾液調(diào)pH值至1.0～3.0，60±5℃保溫30～60分鐘，靜置4～10小時(shí)，棄去上清液，沉淀物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽干，干燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的制備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷，將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋?zhuān)靹蚝蠹尤朦S芩苷攪拌，溶解得雙黃連濃配液；絹布過(guò)濾，微孔濾膜過(guò)濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15～30分鐘并冷卻至70℃以下，調(diào)pH值6.8～7.5，定容至全量，攪拌均勻，進(jìn)行粗濾，粗濾后的藥液冷卻至10～40℃，精濾，灌裝，115～118℃滅菌30分鐘，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙黃連注射液的制備方法，其特征在于，由如下步驟制備1)金銀花濃浸膏的制備稱(chēng)取金銀花，第一遍加入10倍量水，于80℃保溫浸泡1小時(shí)，第二遍加入10倍量水，于80℃保溫浸泡40分鐘，分次過(guò)濾，收取濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入90％以上乙醇至含醇量75％，靜置12小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達(dá)到85％，靜置12小時(shí)，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8.5～9.0，靜置24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))。得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的制備稱(chēng)取連翹，第一遍加入8倍量水，浸泡30分鐘，加熱煮沸1.5小時(shí)，過(guò)濾；第二、第三遍各6倍量水，煮沸1.0小時(shí)，合并藥液濃縮至密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))，待溫度降至40℃以下，加入90％以上乙醇至含醇量75％，沉淀12小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.18～1.22(80±5℃測(cè))；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達(dá)到85％，靜置12小時(shí)，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8.5～9.0，靜置24小時(shí)，取上清液過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度1.15～1.20(80±5℃測(cè))，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的制備取黃芩片，加入8倍量水，煎煮2小時(shí)，過(guò)濾，加入6倍量水，煎煮1小時(shí)，合并濾液，濃縮至生藥量4～5倍，靜置1小時(shí)后濾取上清液用2mol/L鹽酸調(diào)pH值至1.0～2.0，80℃保溫1小時(shí)，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加6～8倍量水，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5～7.5，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過(guò)濾，濾液用2mol/L鹽酸調(diào)pH值至1.0～2.0，60℃保溫30分鐘，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，沉淀用乙醇洗至pH值為6.5～7.5，回收乙醇，離心得沉淀物；取沉淀物加入2倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，浸潤(rùn)4小時(shí)以上，再加入4倍量(以黃芩苷干品重量計(jì))40℃以下的注射用水，攪拌2分鐘后緩緩加入10％氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值至6.5～7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸30分鐘，待冷卻至60～80℃后，加入藥液體積0.5倍量的90％以上乙醇，趁熱過(guò)濾，濾液用10％HCl調(diào)pH值至1.5～2.0，60±5℃保溫30分鐘，靜置4小時(shí)以上，棄去上清液，沉淀物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽干，干燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的制備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷。將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋?zhuān)靹蚝蠹尤朦S芩苷攪拌使溶解得雙黃連濃配液；絹布過(guò)濾，微孔濾膜過(guò)濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15分鐘并冷卻至70℃以下，調(diào)pH值6.8～7.5，定容至全量，攪拌均勻，進(jìn)行粗濾，粗濾后的藥液冷卻至10～40℃，精濾，灌裝，115～118℃滅菌30分鐘，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法制成的雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括黃芩、金銀花與連翹中任意兩種或三種成分的含量測(cè)定。
4.根據(jù)權(quán)利要求3雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，其特征在于所述的黃芩、金銀花和連翹的含量測(cè)定包括下列步驟(1)黃芩的含量測(cè)定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比40～60∶0.5～2∶60～40的甲醇-冰醋酸-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于1000，精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品，加40～60％甲醇或乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，為對(duì)照品溶液；精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加40～60％甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，為供試品溶液；分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各8μl，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量，本品每1ml含黃芩以黃芩苷計(jì)，為6.0～12.0mg；(2)金銀花的含量測(cè)定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比10～30∶90～70∶0.1～2的甲醇-水-冰醋酸為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不低于2000；取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置棕色量瓶中，加水、甲醇或乙醇制成每1ml含40μg的溶液，為對(duì)照品溶液；精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水、甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，本品每1ml含金銀花以綠原酸計(jì)，為0.05～2.0mg；(3)連翹的含量測(cè)定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比10～40∶90～60的乙腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫；理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算不低于2000；取連翹苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加30～90％甲醇或乙醇制成每1ml含60μg的溶液，為對(duì)照品溶液；精密量取本品10ml，置100～120目6g，內(nèi)徑1cm的中性氧化鋁柱上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0～90％甲醇或乙醇適量，溫?zé)崾谷芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，本品每1ml含連翹以連翹苷計(jì)，為0.05～0.4mg。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，其特征在于，黃芩的含量測(cè)定中，以體積比48∶1∶52的甲醇-冰醋酸-水為流動(dòng)相；金銀花的含量測(cè)定中，以體積比20∶80∶1的甲醇-水-冰醋酸為流動(dòng)相；連翹的含量測(cè)定中，以體積比25∶75乙腈-水為流動(dòng)相。
6.根據(jù)權(quán)利要求3雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，其特征在于所述的金銀花和連翹的含量測(cè)定包括下列步驟(1)金銀花的含量測(cè)定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比10～30∶90～70∶0.1～2的甲醇-水-冰醋酸為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫，理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不低于2000；取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置棕色量瓶中，加水、甲醇或乙醇制成每1ml含40μg的溶液，為對(duì)照品溶液；精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水、甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，本品每1ml含金銀花以綠原酸計(jì)，為0.05～2.0mg；(2)連翹的含量測(cè)定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比10～40∶90～60的乙腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫；理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算不低于2000；取連翹苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加30～90％甲醇或乙醇制成每1ml含60μg的溶液，為對(duì)照品溶液；精密量取本品10ml，置100～120目6g，內(nèi)徑1cm的中性氧化鋁柱上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0～90％甲醇或乙醇適量，溫?zé)崾谷芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，本品每1ml含連翹以連翹苷計(jì)，為0.05～0.4mg。
7.根據(jù)權(quán)利要求3雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，其特征在于所述的黃芩和金銀花的含量測(cè)定包括下列步驟(1)黃芩的含量測(cè)定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比40～60∶0.5～2∶60～40的甲醇-冰醋酸-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm；流速1ml/min；柱溫室溫，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于1000，精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品，加40～60％甲醇或乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，為對(duì)照品溶液；精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加40～60％甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，為供試品溶液；分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各8μl，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量，本品每1ml含黃芩以黃芩苷計(jì)，為6.0～12.0mg；(2)金銀花的含量測(cè)定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比10～30∶90～70∶0.1～2的甲醇-水-冰醋酸為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫，理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不低于2000；取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置棕色量瓶中，加水、甲醇或乙醇制成每1ml含40μg的溶液，為對(duì)照品溶液；精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水、甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，本品每1ml含金銀花以綠原酸計(jì)，為0.05～2.0mg。
8.根據(jù)權(quán)利要求3雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，其特征在于所述的黃芩和連翹的含量測(cè)定包括下列步驟(1)黃芩的含量測(cè)定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比40～60∶0.5～2∶60～40的甲醇-冰醋酸-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm；流速1ml/min；柱溫室溫，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于1000，精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品，加40～60％甲醇或乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，為對(duì)照品溶液；精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加40～60％甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，為供試品溶液；分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各8μl，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量，本品每1ml含黃芩以黃芩苷計(jì)，為6.0～12.0mg；(2)連翹的含量測(cè)定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比10～40∶90～60的乙腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫；理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算不低于2000；取連翹苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加30～90％甲醇或乙醇制成每1ml含60μg的溶液，為對(duì)照品溶液；精密量取本品10ml，置100～120目6g，內(nèi)徑1cm的中性氧化鋁柱上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0～90％甲醇或乙醇適量，溫?zé)崾谷芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，本品每1ml含連翹以連翹苷計(jì)，為0.05～0.4mg。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種雙黃連注射液的制備方法，其先分別對(duì)黃芩、金銀花和連翹進(jìn)行提取，然后再進(jìn)行注射液的制備。同時(shí)還提供了雙黃連注射液的成分檢測(cè)方法，該成分檢測(cè)方法提高了產(chǎn)品質(zhì)量的控制水平，保證產(chǎn)品的療效，既有利于生產(chǎn)廠家和管理部門(mén)對(duì)產(chǎn)品的監(jiān)測(cè)，也可以為醫(yī)療部門(mén)和患者的治療提供較好的保障。
文檔編號(hào)G01N30/02GK101040915SQ20071009898
公開(kāi)日2007年9月26日 申請(qǐng)日期2007年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月30日
發(fā)明者方同華 申請(qǐng)人:黑龍江省珍寶島制藥有限公司