專利名稱：：人類免疫缺陷病毒抗原/抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種人類免疫缺陷病毒抗原/抗體測(cè)定試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
：艾滋病，艮卩獲得性免疫缺陷綜合癥(AcquiredImmureDeficiencySyndrome,AIDS),是由人類免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus,HIV)引起的，目前尚不能治愈、病死率高的慢性進(jìn)行性疾病。根據(jù)艾滋病臨床表現(xiàn)的不同，可將其分為急性感染期、潛伏期、艾滋病前期、典型艾滋病期四個(gè)時(shí)期。急性感染期的AIDS通常僅表現(xiàn)為發(fā)熱、皮疹、淋巴結(jié)腫大、乏力、出汗、惡心、嘔吐、腹瀉、咽炎等輕微癥狀，絕大多數(shù)患者在HIVl/2感染26周后，血清中可出現(xiàn)HIV抗體，可作為早期診斷和疾病篩査的重要指標(biāo)。急性期癥狀持續(xù)314天后，AIDS出現(xiàn)一個(gè)長(zhǎng)短不等的(平均210年)的無(wú)癥狀潛伏期，HIV病毒持續(xù)繁殖，具有強(qiáng)烈的破壞作用，患者卻無(wú)任何臨床癥狀。進(jìn)行廣泛的篩查，特別是把好輸血關(guān)，可大大降低AIDS傳播的幾率。潛伏期之后,疾病繼續(xù)發(fā)展即進(jìn)入艾滋病前期和典型艾滋病期，感染者由于免疫功能缺陷導(dǎo)致各種感染，病程發(fā)展的后期，感染者出現(xiàn)各種機(jī)會(huì)性感染和惡性腫瘤，發(fā)生嚴(yán)重后果和極高的死亡率。HIV病毒是一種逆轉(zhuǎn)錄RNA病毒，常見(jiàn)的為HIV-1型，HIV-2型病毒較為少見(jiàn)。電鏡下HIV病毒呈球形，直徑100120nm，可見(jiàn)一致密的圓錐狀核心，內(nèi)含病毒RNA分子和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶、蛋白酶)，病毒外層囊膜系雙層脂質(zhì)蛋白膜，其中(HIV-1型)嵌有g(shù)pl20和gp41，分別組成刺突和跨膜蛋白(HIV-2型相對(duì)應(yīng)的蛋白為gp36)。囊膜內(nèi)面為P17蛋白構(gòu)成的衣殼，其內(nèi)有核心蛋白(P24)包裹RNA。HIV-l+2型主要侵犯人類具有CD4+受體的細(xì)胞，特別是CD4+T輔助淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致人類免疫系統(tǒng)缺陷，最終發(fā)生機(jī)會(huì)性感染和惡性腫瘤。HIV對(duì)單核巨噬細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞也有破壞作用，在疾病發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后中也起著一定的作用。目前的AIDS病原學(xué)診斷技術(shù)主要包括病毒特異性抗體Anti-HIV檢測(cè)、病毒抗原檢測(cè)、HIV病毒分離、HIV病毒載量測(cè)定和HIV核酸測(cè)定等?？贵w檢測(cè)是常規(guī)檢測(cè)方法，包括酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)、明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)、免疫熒光試驗(yàn)(IFA)和斑點(diǎn)印跡(層析或滲濾)及免疫印跡試驗(yàn)(WB)等。免疫印跡試驗(yàn)(WB)用作確證實(shí)驗(yàn)，其它方法多用于篩選實(shí)驗(yàn)。病毒抗體檢測(cè)以外的方法一般用在特殊情況，例如，p24抗原檢測(cè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用于急性HIV感染。檢測(cè)抗-HIV的ELISA法是國(guó)際上應(yīng)用最早、發(fā)展最快、至今在血源篩查中普遍使用的檢測(cè)技術(shù)。ELISA第3代技術(shù)采用了"雙抗原夾心法"，不僅可檢測(cè)抗-HIVIgG，而且可檢測(cè)早期出現(xiàn)的IgM抗體，甚至可檢測(cè)少見(jiàn)的"0"亞型HIV抗體。1998年，國(guó)際上出現(xiàn)第4代ELISA試劑，在檢測(cè)抗-HIV的同時(shí)也可檢測(cè)p24抗原?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析(Chemil咖inescenceImmunoassay,CLIA)于1977年問(wèn)世，1985年第一代化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒研制成功并投放市場(chǎng)。進(jìn)入九十年代，化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒的研制和自動(dòng)化測(cè)量?jī)x的生產(chǎn)取得了突破性進(jìn)展，從而進(jìn)入高速發(fā)展階段?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析是繼熒光、放射性同位素和酶免疫分析之后發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新的免疫分析技術(shù)，根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果及臨床應(yīng)用資料，從實(shí)用性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性及發(fā)展前景來(lái)看，在非放射性標(biāo)記分析技術(shù)中化學(xué)發(fā)光免疫分析處于領(lǐng)先地位，代表了當(dāng)今世界發(fā)展的方向和潮流，它不僅具有免疫反應(yīng)的特異性，而且具有化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高靈敏度(檢測(cè)限度可達(dá)10—15~10—18mol/L)。化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)具有靈敏度高、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、效期長(zhǎng)并安全無(wú)毒無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，成為取代放射免疫分析和酶免疫分析技術(shù)的首選。化學(xué)發(fā)光酶免疫分析是以酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)(如酶標(biāo)記的抗原或抗體)進(jìn)行免疫反應(yīng)，免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物，在信號(hào)試劑作用下發(fā)光，用發(fā)光信號(hào)測(cè)定儀進(jìn)行發(fā)光測(cè)定。目前常用的標(biāo)記酶為辣根過(guò)氧化物酶(HRP)，HRP常用的底物為魯米諾(3-氨基鄰苯二甲酰肼，luminol)或其衍生物如異魯米諾(4-氨基鄰苯二甲酰肼)等，魯米諾的氧化反應(yīng)在堿性緩沖液中進(jìn)行，在過(guò)氧化物酶及活性氧的存在下，生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)其回到基態(tài)時(shí)發(fā)光，其波長(zhǎng)為425nm。發(fā)光強(qiáng)度依賴于酶免疫反應(yīng)物中酶的濃度。生物素-親和素免疫放大技術(shù)可極大地提高檢測(cè)方法的靈敏度，且特異性強(qiáng)，穩(wěn)定性高，適用范圍廣，實(shí)驗(yàn)成本低。生物素-親和素免疫放大技術(shù)有兩種基本類型，一類以游離親和素為中間物，分別連接包含生物素大分子的待測(cè)反應(yīng)體系和標(biāo)記生物素，后在此基礎(chǔ)上發(fā)展了親和素-生物素化酶復(fù)合物技術(shù)；另一類是直接用標(biāo)記親和素連接生物素化大分子反應(yīng)體系進(jìn)行檢測(cè)，稱為標(biāo)記親和素-生物素法。根據(jù)待測(cè)反應(yīng)體系中所用的是生物素化第一抗體或生物素化第二抗體，又分為直接法和間接法。在間接法中，親和素-生物素系統(tǒng)可以與免疫分析檢測(cè)體系偶聯(lián)，放大終反應(yīng)先將針對(duì)不同抗原決定簇的固相抗體和生物素化抗體與抗原(標(biāo)準(zhǔn)抗原和待測(cè)抗原)同時(shí)反應(yīng)，在固相載體表面形成雙抗體夾心免疫復(fù)合物，再加入親和素與復(fù)合物中的生物素結(jié)合，最終使反應(yīng)信號(hào)放大，從而提高了免疫分析的靈敏度?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法結(jié)合生物素一親和素免疫放大技術(shù)是一種較先進(jìn)而有效的方法?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)需要一定的發(fā)光增強(qiáng)劑，并配有各自的過(guò)氧化物酶系統(tǒng)。主要是生物素與親合素、過(guò)氧化物酶(或堿性磷酸酶)結(jié)合，再經(jīng)過(guò)化學(xué)發(fā)光及增強(qiáng)作用，將光量放大后檢測(cè)。生物素一親和素免疫放大技術(shù)結(jié)合化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)應(yīng)用在HIV免疫分析中可大大提高檢測(cè)的靈敏度。另外，現(xiàn)有技術(shù)中的化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒為封閉式全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)量系統(tǒng)，需要昂貴的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x，'從而限制了推廣使用，無(wú)法廣泛地應(yīng)用于臨床診斷和科研工作。本發(fā)明的試劑盒采用微孔板化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，既可應(yīng)用于開(kāi)放式的半自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x，也可用于全自動(dòng)的測(cè)量系統(tǒng)，可實(shí)現(xiàn)大批量快檢測(cè)，使用成本低，更易推廣應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的發(fā)明人為了解決上述問(wèn)題提出并完成了本發(fā)明。本發(fā)明的目的是提供一種生物素一親和素免疫放大技術(shù)結(jié)合化學(xué)發(fā)光酶免疫分析技術(shù)測(cè)定人類免疫缺陷病毒抗原/抗體的試劑盒。本發(fā)明的再一目的是提供一種制備上述試劑盒的方法。根據(jù)本發(fā)明的人類免疫缺陷病毒抗原/抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒包括1)人類免疫缺陷病毒抗原和抗體同時(shí)包被的固相載體；2)生物素標(biāo)記的人類免疫缺陷病毒抗體；3)酶標(biāo)記的人類免疫缺陷病毒抗原和鏈霉親和素；4)上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；以及5)陰性對(duì)照物、人類免疫缺陷病毒抗原和抗體陽(yáng)性對(duì)照物。具體地，本發(fā)明的試劑盒可以包括1)人類免疫缺陷病毒HIV1+2型抗原和HIV-1P24抗體同時(shí)包被的固相載體；2)生物素標(biāo)記的HIV-1P24抗體；3)酶標(biāo)記的HIV1+2型抗原和鏈霉親和素；4)上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；以及5)陰性對(duì)照物、HIV抗體HIV-1P24抗原陽(yáng)性對(duì)照物。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，其中，所述固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，其中，所述標(biāo)記酶為辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，其中，所述化學(xué)發(fā)光底物為魯米諾、異魯米諾或1，2-二氧乙烷類衍生物。優(yōu)選地，上述試劑盒中，所述1,2-二氧乙烷類衍生物為(金剛垸)-1，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-l，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。本發(fā)明同時(shí)提供了一種獨(dú)創(chuàng)的化學(xué)發(fā)光底物液，它由以下方法制備而成A液在雙蒸水中加入Tris和濃HC1配成0.1MpH8.5的Tris-HCl緩沖液。在此緩沖液中加入Luminol、Tween20以及苯并熒蒽(結(jié)構(gòu)如下圖所示)，混合均勻。B液在雙蒸水中加入檸檬酸三鈉和檸檬酸，配制成0.1MpH4.6的檸檬酸緩沖液，在此溶液中加入30%過(guò)氧化氫溶液。使用前將A液與B液按1:1比例混合后使用。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>由此，根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，所述化學(xué)發(fā)光底物包括A液和B液，其中，基于100mL所述化學(xué)發(fā)光底物A液，包括1.21gTris、295uL濃鹽酸、0.5g魯米諾、20PLTween20以及0.lg苯并熒蒽；基于100mL所述化學(xué)發(fā)光底物B液，包括0.73g檸檬酸三鈉、0.44g檸檬酸、100uL30o/o的H202溶液，其pH值為4.6。本發(fā)明提供了一種制備上述試劑盒的方法，包括以下步驟1)以人類免疫缺陷病毒抗原和抗體同時(shí)包被固相載體；2)以生物素標(biāo)記人類免疫缺陷病毒抗體；3)以酶標(biāo)記人類免疫缺陷病毒抗原和鏈霉親和素；4)配制上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；5)配制陰性對(duì)照物、人類免疫缺陷病毒抗原和抗體陽(yáng)性對(duì)照物；6)分裝上述陰性和陽(yáng)性對(duì)照、生物素標(biāo)記的人類免疫缺陷病毒抗體、酶標(biāo)記的人類免疫缺陷病毒抗原和鏈霉親和素和該酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；以及7)組裝為成品。根據(jù)本發(fā)明的方法，優(yōu)選，所述包被固相載體的步驟包括以下步驟I)包被配制包被液，基于lOOOmL所述包被液包含1.59g的無(wú)水碳酸鈉和2.94g的碳酸氫鈉，所述包被液的pH值為9.6，然后將制備的包被液與適當(dāng)濃度的人類免疫缺陷病毒抗原和抗體混合，并將所得混合液負(fù)載于固相載體上；II)用PBST洗液洗滌上述固相載體；以及III)封閉配制封閉液，基于1000mL所述封閉液包含0.2gNaH2PO4*2H20、2.9gNaH2P0412H20、10gBSA、20g蔗糖、lOOmL新生牛血清和lmL生物防腐劑，所述封閉液的pH值為7.07.6，然后將所得封閉液負(fù)載于上述洗滌后的固相載體上。在上述方法中，優(yōu)選，所述固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒。在上述方法中，優(yōu)選，所述酶為辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶。在上述方法中，優(yōu)選，所述化學(xué)發(fā)光底物為魯米諾、異魯米諾或l，2-二氧乙烷類衍生物。在上述方法中，優(yōu)選，所述1,2-二氧乙垸類衍生物為(金剛垸)-1,2-二氧乙垸、3-(2'-螺旋金剛垸)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-l，2-二氧乙烷、CSPD或CDP隱Star。具體地，本發(fā)明的試劑盒包括同時(shí)包被有HIV1+2型抗原和HIV-1P24抗體的化學(xué)發(fā)光包被板48或96孔、標(biāo)記物2瓶、化學(xué)發(fā)光底物液2瓶、洗滌液1瓶、陰性對(duì)照1瓶、HIV抗體陽(yáng)性對(duì)照1瓶、P24抗原陽(yáng)性對(duì)照1瓶以及其它輔助試劑。其中，具體地，標(biāo)記物1含有生物素標(biāo)記的P24抗體；標(biāo)記物2含有酶標(biāo)記的HIV抗原和鏈霉親和素。其中，具體地，洗滌液為20倍濃縮洗滌液，由4g/LNaH2P04*2H20、58g/LNa2HP04'12H20、180g/LNaCl禾口10ml/LTween20配制成。本發(fā)明的試劑盒可以同時(shí)檢測(cè)HIV感染者血清或血漿中的HIV抗體和P24抗原，與目前檢測(cè)HIV抗體的方法相比，又進(jìn)一步縮短了檢測(cè)窗口期；利用生物素親和素系統(tǒng)，使P24抗原檢測(cè)的靈敏度大大提高同時(shí)，本試劑盒采用化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，比ELISA具有的檢測(cè)靈敏度，安全可靠，操作簡(jiǎn)便，與國(guó)外的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)相比價(jià)格低廉且不需要昂貴的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x，為臨床HIV抗體和HIV抗原的檢測(cè)和血液安全篩查提供了一種新的檢測(cè)方法。本發(fā)明的試劑盒應(yīng)用的是酶催化發(fā)光底物，通過(guò)檢測(cè)發(fā)光底物產(chǎn)生的光信號(hào)代替酶聯(lián)免疫分析中的顯色底物，因而具有與酶聯(lián)免疫分析同等的特異性，而靈敏度大大提高，比現(xiàn)今的酶聯(lián)免疫吸附分析靈敏度提高約10倍，可為HIV的診斷提供更為特異、快速、可靠的依據(jù)。本發(fā)明的試劑盒采用了生物素-親和素體系，放大了反應(yīng)信號(hào)，從而提高了免疫分析的靈敏度，且特異性強(qiáng)，穩(wěn)定性高，適用范圍廣，實(shí)驗(yàn)成本低，可更有效地檢測(cè)HIV。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1制備本發(fā)明的人類免疫缺陷病毒抗原/抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒本發(fā)明的人類免疫缺陷病毒抗原/抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)試劑盒含有以下成分用HIV抗原和P24單克隆抗體同時(shí)包被的預(yù)包被發(fā)光板；用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的酶標(biāo)HIV抗原標(biāo)記物和酶標(biāo)鏈霉親和素；生物素化的P24抗體；含有Tween20磷酸鹽緩沖液的洗滌液(20倍濃縮洗滌液)；含有魯米諾、Tween20及其增強(qiáng)劑苯并熒蒽的化學(xué)發(fā)光底物液A;含有過(guò)氧化氫的化學(xué)發(fā)光底物液B;正常人血清的陰性對(duì)照；新生牛血清稀釋HIV抗體陽(yáng)性人血清的HIV抗體陽(yáng)性對(duì)照；以及新生牛血清稀釋P24抗原陽(yáng)性人血清的P24抗原陽(yáng)性對(duì)照。一、用HIV抗原和P24單克隆抗體同時(shí)包被預(yù)包被化學(xué)發(fā)光板將包被用HIV重組抗原和P24抗體加至碳酸鹽緩沖液中混勻，加至發(fā)光板內(nèi)，每孔100uL，溫育過(guò)夜，用含有Tween20的磷酸鹽緩沖液洗滌發(fā)光板3遍后，再加入含有BSA的磷酸鹽緩沖液，室溫靜置2小時(shí)后，棄去孔內(nèi)液體，徹底干燥發(fā)光板，用鋁鉬袋封口包裝，完成HIV抗原/抗體同時(shí)包被的預(yù)包被發(fā)光板的制備。二、生物素化P24抗體的制備將生物素和P24抗體進(jìn)行標(biāo)記，制備成生物素化P24抗體。三、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記HIV抗原和標(biāo)記鏈霉親和素用改良的過(guò)碘酸鈉法將HIV抗原和辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)在一起，制備HIV抗原標(biāo)記物；用改良過(guò)碘酸鈉法將鏈霉親和素和辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)在一起，制備辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素。四、化學(xué)發(fā)光底物液的制備A液在100ml雙蒸水中加入1.21gTris和295yL濃HC1配成0.1MpH8.5的Tris-HCl緩沖液。在此緩沖液中加入O.5g的Lumino1、20uL的Tween20以及O.lg苯并熒蒽，混合均勻。B液在100ml雙蒸水中加入檸檬酸三鈉0.73g和檸檬酸0.44g，配制成0.1MpH4.6的檸檬酸緩沖液，在此溶液中加入100uL30%過(guò)氧化氫溶液。使用方法使用前將A液與B液按1:1比例混合后使用。五、其它組分的制備洗滌液為含有Tween20的磷酸鹽緩沖液，陰性對(duì)照為混合的正常人血清，HIV抗體陽(yáng)性對(duì)照為新生牛血清稀釋的HIV抗體陽(yáng)性人血清，P24抗原陽(yáng)性對(duì)照為新生牛血清稀釋的P24抗原陽(yáng)性人血清。六、半成品及成品組成上述步驟所得產(chǎn)品分裝即為半成品。抽出三份經(jīng)過(guò)特異性、精密性、靈敏度及穩(wěn)定性檢定合格才能組裝成測(cè)定試劑盒。組裝成試劑盒后還需抽檢合格后才能出廠。實(shí)施例23制備本發(fā)明的人類免疫缺陷病毒抗原/抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒除分別以塑料珠、磁性顆粒作為載體外，其余均以與實(shí)施例1相同的方法制備本發(fā)明的試劑盒。實(shí)施例4本發(fā)明的試劑盒的使用方法一、在化學(xué)發(fā)光包被板上加入樣品、生物素化抗體和對(duì)照物取HIV抗原抗體包被板，平衡至室溫后，每次實(shí)驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照3孔，HIV抗體陽(yáng)性對(duì)照2孔，HIV-1P24抗原陽(yáng)性對(duì)照2孔，每孔分別加入100ul，樣品孔中每孔加入樣品50iU，再加入生物素化P24抗體50y1，混勻，貼上封板膜，置37'C溫育30分鐘。二、用洗滌液洗板甩去反應(yīng)液，用稀釋后的洗滌液洗板5次，最后在干凈的吸水紙上扣干。三、加入酶標(biāo)記物除空白孔外，每孔加入含有辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的HIV1+2型抗原和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素酶標(biāo)記物100ul，貼上封板膜，靜置37'C30分鐘。四、用洗滌液洗板(方法與二相同)五、混合底物使用前將化學(xué)發(fā)光底物液A和B以1:1混合，置室溫避光反應(yīng)5分鐘。六、測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度在化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x上依序測(cè)量各孔的發(fā)光強(qiáng)度(RLU)，測(cè)量時(shí)間l秒/孔。七、讀取結(jié)果根據(jù)待測(cè)樣本的RLU值與臨界值的比值S/CO值判斷，若S/C0值》1，則為陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明樣本中含有HIV抗體或P24抗原；若S/C0值〈1，則為陰性反應(yīng)，說(shuō)明樣本中不含有HIV抗體或P24抗原。實(shí)施例5本發(fā)明的試劑盒的臨床實(shí)驗(yàn)比對(duì)本發(fā)明試劑盒的臨床實(shí)驗(yàn)比對(duì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>權(quán)利要求1、一種人類免疫缺陷病毒抗原/抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括1)人類免疫缺陷病毒抗原和抗體同時(shí)包被的固相載體；2)生物素標(biāo)記的人類免疫缺陷病毒抗體；3)酶標(biāo)記的人類免疫缺陷病毒抗原和鏈霉親和素；4)上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；以及5)陰性對(duì)照物、人類免疫缺陷病毒抗原和抗體陽(yáng)性對(duì)照物。2、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括1)人類免疫缺陷病毒HIV1+2型抗原和HIV-lP24抗體同時(shí)包被的固相載體；2)生物素標(biāo)記的HIV-1P24抗體；3)酶標(biāo)記的HIVl+2型抗原和鏈霉親和素；4)上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；以及5)陰性對(duì)照物、HIV抗體和HIV-1P24抗原陽(yáng)性對(duì)照物。3、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒。4、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述酶為辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶。5、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物為魯米諾、異魯米諾或1，2-二氧乙烷類衍生物。6、如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述1，2-二氧乙烷類衍生物為(金剛垸)-l，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。7、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物包括A液和B液，其中，基于lOOmL所述化學(xué)發(fā)光底物A液，包括1.21gTris、295"L濃鹽酸、0.5g魯米諾、20nLTween20以及0.lg苯并熒蒽；基于100mL所述化學(xué)發(fā)光底物B液，包括0.73g檸檬酸三鈉、0.44g檸檬酸、100"L30。/o的H2O2溶液，其pH值為4.6。8、一種制備權(quán)利要求1所述試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟1)以人類免疫缺陷病毒抗原和抗體同時(shí)包被固相載體；2)以生物素標(biāo)記人類免疫缺陷病毒抗體；3)以酶標(biāo)記人類免疫缺陷病毒抗原和鏈霉親和素；4)配制上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；5)配制陰性對(duì)照物、人類免疫缺陷病毒抗原和抗體陽(yáng)性對(duì)照物；6)分裝上述陰性和陽(yáng)性對(duì)照物、生物素標(biāo)記的人類免疫缺陷病毒抗體、酶標(biāo)記的人類免疫缺陷病毒抗原和鏈霉親和素和該酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；以及7)組裝為成品。9、如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述包被固相載體的步驟1)采用以下方法I)包被配制包被液，基于1000mL所述包被液包含1.59g的無(wú)水碳酸鈉和2.94g的碳酸氫鈉，所述包被液的pH值為9.6，然后將制備的包被液與適當(dāng)濃度的人類免疫缺陷病毒抗原和抗體混合，并將所得混合液負(fù)載于固相載體上；II)用PBST洗液洗滌上述固相載體；III)封閉配制封閉液，基于1000mL所述封閉液包含0.2gNaH2PO42H20、2.9gNaH2P0412H20、10gBSA、20g蔗糖、lOOmL新生牛血清和lmL生物防腐劑，所述封閉液的pH值為7.07.6，然后將所得封閉液負(fù)載于上述洗滌^的固相載體上。10、如權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒。11、如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述酶為辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶。12、如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物為魯米諾、異魯米諾或1,2-二氧乙烷類衍生物。13、如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述1，2-二氧乙烷類衍生物為(金剛垸)-l，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。全文摘要本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種人類免疫缺陷病毒抗原/抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒及其制備方法。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒包括1)HIV抗原和抗體包被的固相載體；2)生物素標(biāo)記的HIV抗體；3)酶標(biāo)記的HIV抗原和鏈霉親和素；4)上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；以及5)對(duì)照物。進(jìn)一步，根據(jù)本發(fā)明制備上述試劑盒的方法包括以下步驟1)HIV抗原和抗體包被固相載體；2)以生物素標(biāo)記HIV抗體；3)以酶標(biāo)記HIV抗原和鏈霉親和素；4)配制化學(xué)發(fā)光底物；5)配制對(duì)照物；6)分裝；以及7)組裝為成品。本發(fā)明的試劑盒具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)G01N33/543GK101363853SQ20071011998公開(kāi)日2009年2月11日申請(qǐng)日期2007年8月6日優(yōu)先權(quán)日2007年8月6日發(fā)明者應(yīng)希堂,胡國(guó)茂,詹先發(fā)申請(qǐng)人:北京科美東雅生物技術(shù)有限公司