專(zhuān)利名稱：：Hiv-1/2抗體唾液檢測(cè)儀的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明關(guān)于一種HIV-1/2抗體唾液檢測(cè)儀，尤其涉及一種能夠有效檢測(cè)唾液中HIV-1/2抗體的快速檢測(cè)儀器。
背景技術(shù)：
：唾液與廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)的血液(包括全血、血清與血漿)均是人體體液的一部分，都屬于細(xì)胞外液，其大多數(shù)成分類(lèi)似，尤其是臨床檢測(cè)中具有重大意義目標(biāo)物質(zhì)的出現(xiàn)時(shí)機(jī)具有一致性，只是含量存在一定差異。Challacombe的研究結(jié)果證實(shí)唾液中IgG可及時(shí)反映體內(nèi)IgG的存在；Parry通過(guò)RIA及ELISA對(duì)唾液的特異性抗體水平進(jìn)行研究表明唾液中抗體含量雖遠(yuǎn)低于血清，IgA、IgG與IgM分別大約為血清含量的1/10、1/800、1/400，但已足夠用于某些免疫學(xué)診斷；隨后，Acosta等人將唾液樣本應(yīng)用于寄生蟲(chóng)病血清學(xué)診斷研究；Archibald、Behets、Chamnanput等科研工作者對(duì)唾液在fflV診斷中進(jìn)行了研究。這些研究結(jié)果表明唾液樣本用于某些疾病的檢測(cè)是完全可行的。目前，眾多血液樣本HIV檢測(cè)技術(shù)與產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用于臨床，這些產(chǎn)品取得了比較滿意的準(zhǔn)確率。但利用唾液進(jìn)行HIV-l/2抗體快速檢測(cè)的產(chǎn)品還鮮有面市。中國(guó)藥品生物制品檢定所王佑春教授在宜昌舉行的2006年度中國(guó)HIV高層論壇上介紹，中國(guó)目前有四家公司正在開(kāi)發(fā)HIV-l/2抗體唾液或尿液檢測(cè)試劑，并可能在近期上市。其中，艾康(杭州)生物技術(shù)有限公司己經(jīng)開(kāi)發(fā)出HIV-1/2尿液ELISA檢測(cè)試劑盒，并獲準(zhǔn)上市，而利用唾液進(jìn)行HIV-l/2抗體快速檢測(cè)的試劑卡或儀器在國(guó)內(nèi)仍然沒(méi)有商業(yè)化產(chǎn)品，也沒(méi)有這方面的新聞報(bào)道，國(guó)外也僅美國(guó)奧拉爾休生物技術(shù)公司成功開(kāi)發(fā)出這類(lèi)產(chǎn)品，并獲FDA認(rèn)證。2004年元月，我們醫(yī)療科研協(xié)作小組著手唾液在臨床檢測(cè)中應(yīng)用的研究，并成功開(kāi)發(fā)了HIV-l/2抗體唾液快速檢測(cè)儀。該產(chǎn)品明顯區(qū)別于美國(guó)奧拉爾休生物技術(shù)公司的現(xiàn)有產(chǎn)品，在國(guó)內(nèi)是首創(chuàng)，在國(guó)際上也處于領(lǐng)先水平。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，其借助樣本采集器強(qiáng)大的親水性能及其內(nèi)部毛細(xì)微孔基質(zhì)的特性，過(guò)濾封閉條的物理性質(zhì)，緩沖液的作用和試劑條的膠體金技術(shù)與免疫層析原理，使采集、輸送的唾液滿足試劑條檢測(cè)的需要，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)唾液進(jìn)行HIV-l/2抗體的快速檢測(cè)。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，包括塑料保護(hù)殼、置于塑料保護(hù)殼內(nèi)的試劑條、過(guò)濾封閉條及樣本采集器；試劑條包括加樣區(qū)及反應(yīng)區(qū)；樣本采集器包括柄部、板部及連接柄部與板部的結(jié)合部；塑料保護(hù)殼體包括底板及與底板配合設(shè)置的面板，面板上設(shè)有用于判讀檢測(cè)結(jié)果的觀察窗口，觀察窗口與反應(yīng)區(qū)對(duì)應(yīng)設(shè)置；過(guò)濾封閉條完全重疊放置于加樣區(qū)上方；樣本采集器的柄部放置于過(guò)濾封閉條上方并與過(guò)濾封閉條部分重疊，板部伸出塑料保護(hù)殼外。唾液借助樣本采集器強(qiáng)大親水性能，被吸收、富集、輸送至過(guò)濾封閉條，經(jīng)過(guò)濾封閉條過(guò)濾，唾液中的目標(biāo)物質(zhì)被吸入加樣區(qū)，最后利用層析原理輸送至反應(yīng)區(qū)，并在反應(yīng)區(qū)發(fā)生一系列免疫學(xué)反應(yīng)，顯示出肉眼通過(guò)面板觀察窗口可直接判讀的結(jié)果。本發(fā)明的有益效果首先，無(wú)創(chuàng)安全，操作時(shí)對(duì)人體唯一可能造成損傷的過(guò)程是樣本采集器緊貼并輕刮口腔黏膜，而樣本采集器使用了具備優(yōu)良的生物安全性能與一定柔軟性的生產(chǎn)材料，對(duì)口腔黏膜刺激非常小，極少可能造成口腔黏膜損傷，完全區(qū)別于血液的采集過(guò)程，其優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在可免除被檢測(cè)對(duì)象對(duì)針刺的痛苦與恐懼，更可減少檢測(cè)人員職業(yè)暴露的幾率與風(fēng)險(xiǎn)；其次，方便快速，在采集唾液樣本后，無(wú)需對(duì)樣本采集器或HIV-l/2抗體唾液快速檢測(cè)儀進(jìn)行機(jī)械壓縮或離心處理，樣本釆集器所吸收的唾液自動(dòng)通過(guò)其內(nèi)部"毛細(xì)微孔基質(zhì)"輸送至試劑條的加樣區(qū)，整個(gè)輸送過(guò)程在一個(gè)相對(duì)密封環(huán)境中進(jìn)行，與外界環(huán)境之間相互干擾最小，對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響也最小，樣本采集器與膠體金免疫層析試劑條相結(jié)合，真正實(shí)現(xiàn)了HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)的方便與快速；再次，高效準(zhǔn)確，樣本采集器所具備的物理化學(xué)特性保證了所采集和輸送的唾液量滿足試劑條檢測(cè)的需要，且本發(fā)明在試劑條設(shè)計(jì)時(shí)，分別在檢測(cè)區(qū)域包埋有重組抗原gp36、gp41、gpl20和p24，提高了發(fā)明的檢測(cè)有效率并縮短檢測(cè)窗口期，此外由于樣本采集器與過(guò)濾封閉條對(duì)一些大分子物質(zhì)的過(guò)濾處理，減少了非特異物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。下面結(jié)合附圖，通過(guò)對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式詳細(xì)描述，將使本發(fā)明的技術(shù)方案及其他有益效果顯而易見(jiàn)。附圖中，圖1為本發(fā)明的HIV-1/2抗體唾液檢測(cè)儀的組合示意圖2為圖1的分解示意圖；圖3為圖2中的試劑條的示意圖4為圖2中的樣本采集器的示意圖5為圖2中的樣本采集器的示意圖；及圖6為各部分的裝配示意圖。具體實(shí)施例方式如圖l-6所示，本發(fā)明的HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀包括塑料保護(hù)殼2、置于塑料保護(hù)殼2內(nèi)的試劑條4、過(guò)濾封閉條6及樣本采集器8。參閱圖3，試劑條4包括加樣區(qū)42，反應(yīng)區(qū)44及濾紙46;加樣區(qū)42設(shè)于靠近樣本采集器8的一端，反應(yīng)區(qū)44設(shè)于中部，反應(yīng)區(qū)44上設(shè)置檢測(cè)線45及對(duì)照線47，濾紙46設(shè)置于另一端。參閱圖5，樣本采集器8包括柄部82、板部84及連接本采集器柄部82與板部84的結(jié)合部86。參閱圖1及2，塑料保護(hù)殼體2包括底板22，與底板22配合設(shè)置的面板24，塑料保護(hù)殼體22—端設(shè)為手持區(qū)23，底板22于手持區(qū)23內(nèi)設(shè)置數(shù)個(gè)通氣孔21，底板22內(nèi)側(cè)遠(yuǎn)離手持區(qū)23的一端設(shè)為樣本采集器裝配區(qū)25,其上設(shè)置樣本采集器固定裝置252，用于安置樣本采集器8;中部設(shè)為試劑條裝配區(qū)26，其上分別設(shè)置試劑條固定裝置262，用以放置試劑條4。面板24上設(shè)有用于判讀檢測(cè)結(jié)果的觀察窗口27，觀察窗口27與反應(yīng)區(qū)25對(duì)應(yīng)設(shè)置；在觀察窗口27上方粘接有一鏡片28，鏡片28上標(biāo)記有"T"、"C"線，分別與試劑條4的檢測(cè)線45和對(duì)照線47相對(duì)應(yīng)設(shè)置；鏡片28由透明硬質(zhì)塑料膜制成。參閱圖2及圖6，過(guò)濾封閉條6完全重疊放置于加樣區(qū)42上方；柄部82緊密放置于過(guò)濾封閉條6上方并與過(guò)濾封閉條6部分重疊，板部84伸出塑料保護(hù)殼2外。唾液借助樣本采集器8的強(qiáng)大親水性能，被吸收、富集、輸送至過(guò)濾封閉條6，經(jīng)過(guò)濾封閉條6過(guò)濾，唾液中的目標(biāo)物質(zhì)被吸入加樣區(qū)42，最后利用層析原理輸送至反應(yīng)區(qū)44，并在反應(yīng)區(qū)44發(fā)生一系列免疫學(xué)反應(yīng)，顯示出肉眼通過(guò)面板24的觀察窗口27可直接判讀的結(jié)果(紅色條帶)。底板22與面板24內(nèi)側(cè)設(shè)置連接裝置，在本實(shí)施例中連接裝置為焊接線29，采用超聲波塑料焊接機(jī)焊接固定；用于將底板22與面板24固定連接還可采用現(xiàn)有技術(shù)中通用的扣壓方法。安裝時(shí)，在底板22內(nèi)側(cè)依照順序裝配試劑條4、過(guò)濾封閉條6與樣本采集器8，首先將試劑條6水平裝配在底板22內(nèi)側(cè)試劑條裝配區(qū)26;其次在加樣區(qū)42上方重疊安放過(guò)濾封閉條6，過(guò)濾封閉條6與試劑條的加樣區(qū)42完全重疊；再在過(guò)濾封閉條6上方重疊安放樣本采集器8，柄部82與過(guò)濾封閉條6部分重疊，板部84伸出塑料保護(hù)殼2外；最后安裝面板24為mV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀。另外，在采集唾液時(shí)，可添加緩沖液，緩沖液灌注于高度為5052毫米的透明硬質(zhì)塑料瓶中，裝備量為L(zhǎng)23.0毫升，與硬質(zhì)塑料瓶配套的是軟質(zhì)塑料瓶塞，瓶塞與瓶之間設(shè)計(jì)有防止緩沖液滲漏的裝置。本發(fā)明的HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀結(jié)合樣本采集器與試劑條用以檢測(cè)唾液中HIV-l/2抗體，是一種定性檢測(cè)，具有無(wú)創(chuàng)安全、方便快捷與高效準(zhǔn)確的特點(diǎn)。本HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀區(qū)別于其他血液檢測(cè)儀的技術(shù)重點(diǎn)在于樣本采集器、過(guò)濾封閉條、試劑條與緩沖液的技術(shù)參數(shù)及其制作方法，以下分別就HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀各部分的技術(shù)參數(shù)及制作步驟進(jìn)行說(shuō)明。一、樣本采集器材料組成親水性纖維與疏水性塑料，親水性纖維主要用于維持樣本采集器強(qiáng)大的親水性能和吸收水分的能力；疏水性塑料主要用于維持樣本采集器的外部形態(tài)與內(nèi)部結(jié)構(gòu)；在本實(shí)施例中試驗(yàn)了親水性纖維中的棉花纖維，但不能排除使用濾紙以及其他親水性材料的可能，主要被試驗(yàn)的疏水性塑料有聚乙烯、聚丙烯、聚酯、多苯乙烯、高密度聚乙烯、超高分子聚乙烯、聚偏乙烯氟化物、聚四氟乙烯、尼龍與聚醚砜，這些都能應(yīng)用于樣本采集器生產(chǎn)，其中以聚酯效果最佳，當(dāng)然也不能排除應(yīng)用玻璃、樹(shù)脂以及其他塑料材料的可能。另外，也不排除直接用疏水性塑料經(jīng)過(guò)親水處理后用于樣本采集器生產(chǎn)的可能；經(jīng)過(guò)測(cè)試，棉花纖維與聚酯為優(yōu)選的材料，且，滿足樣本采集器生產(chǎn)的棉花纖維與聚酯重量比范圍為l:9至4:l之間，其中以重量比為l:9至3:2之范圍的樣本采集器效果最好，最能滿足本發(fā)明通過(guò)唾液快速檢測(cè)HIV-l/2抗體的需要(包括檢測(cè)時(shí)間與采集的唾液量)。技術(shù)參數(shù)樣本采集器的外形與采集效果之間無(wú)直接關(guān)聯(lián)性，其外形可為但不限于乒乓板或槳形，應(yīng)能保證樣本采集器的板部84能充分地與口腔黏膜接觸，以便于口腔液體的采集；樣本采集器的總表面積與體積影響著唾液采集數(shù)量和采集時(shí)間，也影響著緩沖液裝配量，為了達(dá)到試劑條檢測(cè)唾液中HIV-1/2抗體的需要，樣本采集器總表面積不低于700平方毫米，總體積不低于650立方毫米，其中與口腔黏膜接觸的樣本采集器的板部84的面積不低于樣本采集器總表面積50%;樣本采集器最主要的技術(shù)參數(shù)是其內(nèi)部結(jié)構(gòu)，即毛細(xì)微孔基質(zhì)，其技術(shù)參數(shù)為平均孔徑20500微米，總空隙容積不超過(guò)500立方毫米，總空隙率(即空孔徑容積與樣本采集器總體積之比值)不超過(guò)80%，同時(shí)對(duì)應(yīng)樣本采集器的密度范圍為0.210.86克/立方厘米，經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，其中以平均孔徑20~200微米、總空隙率為40%45%、密度為0.480.52克/立方厘米的樣本采集器最滿足檢測(cè)HIV-1/2抗體的需要(包括檢測(cè)時(shí)間與采集唾液量)。吸收水分的性能樣本采集器飽和吸收水分的數(shù)量控制在500立方毫米以下，飽和吸收水分的時(shí)間控制在l分鐘以內(nèi)，樣本采集器飽和吸收水分后，其內(nèi)部結(jié)構(gòu)要求不發(fā)生明顯變化，尤其是經(jīng)過(guò)干燥處理后，其吸水速率不發(fā)生明顯的改變，在本發(fā)明之裝置中，在沒(méi)有外界機(jī)械壓縮或過(guò)濾的前提下，唾液與緩沖液從樣本采集器充分接觸口腔黏膜或緩沖液液面到完全將唾液或緩沖液轉(zhuǎn)移至試劑條的時(shí)間控制在10分鐘以內(nèi)，最好在2分鐘之內(nèi)完成。表面處理為了保證樣本采集器充分吸收唾液，其表面可以用刺激唾液分泌的物質(zhì)處理，這些物質(zhì)主要有擰檬酸、酒石酸、反丁烯二酸、抗壞血酸、蘋(píng)果酸、食鹽、果糖、葡萄糖、蔗糖、人造甜味劑和芳香化合物等。二、過(guò)濾封閉條材料組成主要的材料為棉花纖維、濾紙或海綿等，在本實(shí)施例中使用濾紙，其作用是過(guò)濾經(jīng)樣本采集器轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)的唾液，阻擋唾液中可能對(duì)本裝置檢測(cè)過(guò)程和結(jié)果有重大干擾的大分子物質(zhì)進(jìn)入試劑條，降低非特異因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾與影響；同時(shí)，因其親水性能與吸收水分的能力與樣本采集器和試劑條之間存在差異，過(guò)濾封閉條的親水性能小于試劑條的1/3，為樣本采集器的210倍，以保證唾液流動(dòng)的方向性，可阻擋已進(jìn)入試劑條中的唾液回流至樣本采集器。技術(shù)參數(shù)尺寸為2.4毫米*4毫米*1.2毫米。，表面處理過(guò)濾封閉條進(jìn)行表面活化劑處理，也可直接使用濾紙而不進(jìn)行活化劑處理，同樣可滿足本發(fā)明對(duì)唾液輸送與檢測(cè)的需要。三、試劑條材料硝酸纖維素(NC)膜及重組抗原P24、gp36、gp41、gpl20;重組抗原P24、gp36、gp41及gpl20由深圳菲鵬公司提供；硝酸纖維素膜由Millipore公司提供。工作原理試劑條為膠體金法免疫層析試紙，采用夾心法工作原理。膠體金標(biāo)記物及測(cè)試線(T線)包埋物均為P24、gp36、gp41及gpl20重組抗原，對(duì)照線(C線)包埋mv單克隆抗體。樣品液中的目標(biāo)抗體與Au-Ag復(fù)合物(膠體金標(biāo)記抗原)形成Au-Ag-Ab復(fù)合物(膠體金一抗原一抗體復(fù)合物)，該復(fù)合物隨樣品液沿層析膜切向流動(dòng)，至測(cè)試線(T線)處被包埋重組抗原捕捉，形成紅色條帶；未結(jié)合的Au-Ag復(fù)合物可被包埋于對(duì)照線(C線)的單克隆抗體捕獲形成紅色條帶。1、膠體金標(biāo)記物的制備步驟一重組抗原前處理P24、gp36、gp41及gpl20重組抗原分別對(duì)0.02M、pH8.0的PBS，4'C透析過(guò)夜，除去多余鹽離子及可能存在的防腐劑等干擾因素。透析后的各蛋白分別用0.02M、pH8.0的PBS稀釋至0.51.5mg/ml。步驟二膠體金制備取in/。HAuC14水溶液lml，加至100ml煮沸雙蒸水中，加入1%檸檬酸三鈉溶液，繼續(xù)煮沸520分鐘，使得膠體金顆粒大小為2030nm，4"C保存?zhèn)溆?。步驟三，抗原標(biāo)記取一定體積制備的膠體金溶液，攪拌狀態(tài)下緩緩加入P24抗原，抗原終濃度控制在0.1mg/ml左右，繼續(xù)攪拌30分鐘后，加入10%BSA溶液至終濃度0.6X，攪拌5分鐘，再加入10X的PEG20000溶液至終濃度0.2%，繼續(xù)攪拌5分鐘，1200015000r/min離心60分鐘，棄去上清液，沉淀用緩沖液懸浮，微孔濾膜過(guò)濾后4'C保存?zhèn)溆?；步驟四，按如上所述步驟制備gp36、gp41及gpl20抗原膠體金標(biāo)記物；步驟五，將分別制備的各個(gè)標(biāo)記物按l:1:1:l比例混合。2、試劑條制備步驟一，膠體金標(biāo)記物(含助溶劑)浸泡玻璃纖維素膜，37'C溫育30min，室溫30分鐘，干燥后放置密封袋作為膠體金墊備用；步驟二，在NC膜上噴涂處理后的重組抗原稀釋液(濃度6mg/ml)成T線(測(cè)試線)，包埋量為lul/cm;步驟三，在NC膜上噴涂fflV單克隆抗體稀釋液(濃度2mg/ml)成C線(對(duì)照線)，包埋量為lul/cm;步驟四，點(diǎn)樣后的NC膜37'C干燥1小時(shí)；步驟五，將吸水纖維、膠體金墊、NC膜和吸水濾紙依次粘貼于PVC支持物上，相互間留有大約0.2mm重疊，壓緊；步驟六，切割成寬度4mm的條帶，相對(duì)濕度4080%，溫度1825'C下保存。四、緩沖液緩沖液不同于實(shí)驗(yàn)室常用的PBS或Tris等緩沖液，它是一種復(fù)合的緩沖液，其作用為調(diào)節(jié)唾液樣本的PH值，使之符合試劑條檢測(cè)HIV-l/2唾液抗體的酸堿度需要，保證唾液運(yùn)輸?shù)姆较蛐耘c流速，填補(bǔ)因唾液向試劑條方向流動(dòng)后在樣本采集器上留下的空隙，還可以洗脫黏附于樣本采集器外表面與內(nèi)部空隙表面的HIV-l/2抗體，并使抗體與緩沖液一起向試劑條方向流動(dòng)，從而使試劑條獲取足夠的唾液樣本，保證檢測(cè)的有效性。試劑磷酸二氫鉀、三羥甲基氨基甲垸、磷酸氫二鈉、氯化鈉、氯化鉀、Tween-20、硫柳汞、十二烷基硫酸鈉(分子生物學(xué)專(zhuān)用)、乙二胺四乙酸、去離子水；儀器容量瓶、燒杯、電子天平、pH計(jì)、高壓滅菌鍋(或微孔過(guò)濾裝置)。緩沖液配方(見(jiàn)下表)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>緩沖液配制方法步驟一，按緩沖液配方表中數(shù)據(jù)準(zhǔn)確稱量，分別進(jìn)行溶解；步驟二，混合并攪拌均勻后轉(zhuǎn)入1L容量瓶，洗滌燒杯34次，洗滌液一并轉(zhuǎn)入容量瓶，定容；步驟三，檢測(cè)和調(diào)節(jié)緩沖液pH值，溶液pH值應(yīng)在6.58.5之間；步驟四，將上步驟二中所配稀釋液使用濕熱法或過(guò)濾法進(jìn)行滅菌；步驟五，按照分裝規(guī)格要求(1.23.0ml/份)進(jìn)行緩沖液分裝于透明密封的硬質(zhì)塑料緩沖液瓶中，室溫保存。五、人工唾液質(zhì)控品配制試劑亞硝酸鈉、氯化鎂、氯化鈣、氯化鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、碳酸氫鈉、硫柳汞、ct-淀粉酶(sigma公司提供)、粘蛋白(牛下頷粘蛋白、豬胃粘蛋白，sigma公司提供)、抗蛋白酶(sigma公司提供)、HIV-1陰性標(biāo)準(zhǔn)血清(中檢所細(xì)胞室提供)、HIV-2陰性標(biāo)準(zhǔn)血清(中檢所細(xì)胞室提供)、HIV-1陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清(中檢所細(xì)胞室提供)、HIV-2陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清(中檢所細(xì)胞室提供)、fflV-1/2膠體金試劑條(自產(chǎn))、去離子水；儀器容量瓶、燒杯、電子分析天平、pH計(jì)、試管、微量移液器、微孔過(guò)濾裝置。配制方法1、人工唾液配置方法步驟一，配制5%粘蛋白溶液取牛下頷粘蛋白0.1g,豬胃粘蛋白9.9克，溶解于200ml去離子水中，充分?jǐn)嚢柚恋鞍踪|(zhì)完全溶解，4"C保存?zhèn)溆?；步驟二，按下表中順序準(zhǔn)確稱量，并溶解于800ml去離子水中；<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>步驟三，溶解后轉(zhuǎn)入1L容量瓶，洗滌燒杯34次，洗滌液一并轉(zhuǎn)入，定容;步驟四，檢測(cè)制備液pH值溶液pH值應(yīng)為6.5士0.2，實(shí)際應(yīng)用中5.87.8范圍內(nèi)皆可；步驟五，除菌由于人工唾液比較粘稠，容易堵塞濾膜，因而先使用0.45pm濾膜進(jìn)行初濾，再用0.22pm濾膜進(jìn)行除菌過(guò)濾，除菌過(guò)程依微孔過(guò)濾操作規(guī)范進(jìn)行；步驟六，保存短期使用可直接保存于4'C冰箱，若需長(zhǎng)期保存可將人工唾液分裝至10ml玻璃瓶中-2(TC凍存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2、人工唾液質(zhì)控品配制步驟一，HIV-l/2陰性標(biāo)準(zhǔn)血清及陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清評(píng)估確定陰性標(biāo)準(zhǔn)血清最高稀釋倍數(shù)用人工唾液倍比稀釋HIV-l/2陰性血清，使用HIV-l/2膠體金試紙條分別對(duì)各個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，能使試紙條C線(對(duì)照線)顯現(xiàn)的最高稀釋度即為陰性血清最高稀釋倍數(shù)；確定陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清最佳稀釋倍數(shù)用人工唾液倍比稀釋HIV-l/2陽(yáng)性血清，使用膠體金試紙條分別檢測(cè)各個(gè)稀釋度的陽(yáng)性血清液，選取可以準(zhǔn)確判定T線(測(cè)試線)顯現(xiàn)的最高稀釋度作為陽(yáng)性血清的最佳稀釋倍數(shù)。步驟二，HIV-l/2陽(yáng)性質(zhì)控品的制備(總體積以Z表示)計(jì)算需要HIV-l/2陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清體積(X):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>計(jì)算需要HIV-l/2陰性標(biāo)準(zhǔn)血清體積(Y):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>計(jì)算并量取需要人工唾液的體積(Z-X-Y)，加入X體積HIV-l/2陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清及Y體積陰性標(biāo)準(zhǔn)血清，混勻并分裝，保存于4。C冰箱中備用。步驟三，fflV-l/2陰性質(zhì)控品的制備(總體積以B表示)a)計(jì)算需要HIV-l/2陰性標(biāo)準(zhǔn)血清體積(A)隨性糊最高稀釋麟b)計(jì)算并量取需要人工唾液的體積(B-A)，加入A體積fflV陰性標(biāo)準(zhǔn)血清，混勻并分裝，保存于4'C冰箱中備用。將以上述參數(shù)生產(chǎn)的主要配件和塑料保護(hù)殼、干燥劑、緩沖液瓶與鋁箔包裝袋按照一定的工藝進(jìn)行組裝、包裝，并借助壓卡機(jī)與塑料焊接機(jī)進(jìn)行固定，生產(chǎn)出fflV-l/2抗體唾液快速檢測(cè)儀。所生產(chǎn)的產(chǎn)品使用所配制的人工唾液質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控制，在符合檢測(cè)需要的前提下，形成最終產(chǎn)品。關(guān)于HIV-1/2抗體唾液檢測(cè)儀的質(zhì)控過(guò)程，主要包括如下步驟依據(jù)每批次生產(chǎn)規(guī)模，隨機(jī)抽取當(dāng)批次生產(chǎn)總量0.1%~1%的產(chǎn)品或50200份產(chǎn)品，并隨機(jī)平均分成兩組；從冰箱中取出已分裝的人工唾液質(zhì)控品，平衡至室溫備用；用微量移液管分別吸取人工唾液質(zhì)控品，一組在每個(gè)產(chǎn)品的樣本采集器的板部添加50微升fflV-l/2陽(yáng)性質(zhì)控品，另一組在每個(gè)產(chǎn)品的樣本采集器的板部添加50微升HIV-l/2陰性質(zhì)控品，待質(zhì)控品完全滲入樣本采集器后，將樣本采集器的板部垂直伸入緩沖液瓶中，靜置；2040分鐘內(nèi)分別判讀和統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性與陰性檢測(cè)結(jié)果，并計(jì)算該產(chǎn)品的敏感性與特異性，如檢測(cè)結(jié)果敏感性與特異性均達(dá)到98%以上，則可以判斷該批次產(chǎn)品合格，否則，則分析出現(xiàn)誤差的原因。本發(fā)明的HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀區(qū)別于現(xiàn)有的血液HIV-l/2抗體快速檢測(cè)試劑條，主要表現(xiàn)在如下方面首先，底板與面板的固定除采用了傳統(tǒng)方法中通用的扣壓方法外，還使用超聲波塑料焊接機(jī)將其焊接固定；其次，為提高本發(fā)明對(duì)HIV-l/2抗體檢測(cè)的總有效率，也為了使本發(fā)明的fflV-1/2抗體唾液檢測(cè)儀更能滿足檢測(cè)唾液的需要，并縮短檢測(cè)fflV-1/2抗體的窗口期，本發(fā)明所使用試劑條包埋的重組抗原包括gp36、gp41、gpl20和p24，而傳統(tǒng)血液快速檢測(cè)試劑條尚未發(fā)現(xiàn)使用重組p24抗原的產(chǎn)品；再次，過(guò)濾封閉條具有過(guò)濾和封閉的作用，通過(guò)過(guò)濾流經(jīng)的唾液與緩沖液，減少了非特異性物質(zhì)的干擾，還可以阻擋流入試劑條里的唾液或緩沖液倒流回樣本采集器，過(guò)濾封閉條由親水性能較強(qiáng)的濾紙、海綿、棉花纖維等組成并經(jīng)表面活化劑處理，過(guò)濾封閉條的親水性能不超過(guò)試劑條的1/3，是樣本采集器的210倍，從而保證了唾液與緩沖液在本產(chǎn)品中流動(dòng)的方向性；最后，樣本采集器的使用是本發(fā)明的重點(diǎn)與技術(shù)關(guān)鍵點(diǎn)，樣本采集器由兩種，也可以是兩種以上材料組成，其中一種是親水性纖維，一種是疏水性塑料，樣本采集器還經(jīng)過(guò)表面活化劑處理，樣本采集器內(nèi)部是一種網(wǎng)狀微孔結(jié)構(gòu)，稱為"毛細(xì)微孔基質(zhì)"，這種結(jié)構(gòu)可以維持樣本采集器擁有一定的剛性和柔軟性，還可以提供強(qiáng)大的吸水性能，并提供液體的運(yùn)輸通道。本發(fā)明的fflV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，可廣泛用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床科室對(duì)患者進(jìn)行的HIV抗體初篩試驗(yàn)，也可用于疾控中心等單位對(duì)高危人群進(jìn)行的HIV抗體初篩試驗(yàn)，還可用于高危人群自行HIV抗體檢測(cè)。以上所述，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，可以根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案和技術(shù)構(gòu)思作出其他各種相應(yīng)的改變和變形，而所有這些改變和變形都應(yīng)屬于本發(fā)明所保護(hù)的范圍。權(quán)利要求1、一種HIV-1/2抗體唾液檢測(cè)儀，其特征在于，包括塑料保護(hù)殼、置于塑料保護(hù)殼內(nèi)的試劑條、過(guò)濾封閉條及樣本采集器；試劑條包括加樣區(qū)及反應(yīng)區(qū)；樣本采集器包括柄部、板部及連接柄部與板部的結(jié)合部；塑料保護(hù)殼體包括底板及與底板配合設(shè)置的面板，面板上設(shè)有用于判讀檢測(cè)結(jié)果的觀察窗口，觀察窗口與反應(yīng)區(qū)對(duì)應(yīng)設(shè)置；過(guò)濾封閉條完全重疊放置于加樣區(qū)上方；樣本采集器的柄部放置于過(guò)濾封閉條上方并與過(guò)濾封閉條部分重疊，板部伸出塑料保護(hù)殼外。2、如權(quán)利要求l所述的fflV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，其特征在于，所述試劑條還包括濾紙，濾紙?jiān)O(shè)于遠(yuǎn)離樣本采集器的一端，加樣區(qū)設(shè)于靠近樣本采集器的一端，反應(yīng)區(qū)設(shè)于中部；反應(yīng)區(qū)上設(shè)置檢測(cè)線及對(duì)照線，測(cè)試線包埋物為P24、gp36、gp41及gpl20重組抗原，對(duì)照線包埋HIV單克隆抗體。3、如權(quán)利要求l所述的HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，其特征在于，所述塑料保護(hù)殼體一端設(shè)為手持區(qū)，塑料保護(hù)殼體的底板于手持區(qū)的一端設(shè)置數(shù)個(gè)通氣孔，其內(nèi)側(cè)遠(yuǎn)離手持區(qū)的一端設(shè)為樣本采集器裝配區(qū)，其上設(shè)置樣本采集器固定裝置，用于安置樣本采集器；中部設(shè)為試劑條裝配區(qū)，其上設(shè)置試劑條固定裝置，用以放置試劑條。4、如權(quán)利要求l所述的HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，其特征在于，所述觀察窗口上方粘接有一鏡片，鏡片上標(biāo)記有"T"、"C"標(biāo)示線，分別與試劑條的檢測(cè)線和對(duì)照線相對(duì)應(yīng)設(shè)置；鏡片由透明硬質(zhì)塑料膜制成。5、如權(quán)利要求l所述的HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，其特征在于，塑料保護(hù)殼體的底板與面板內(nèi)側(cè)設(shè)置連接裝置，用于將底板與面板固定連接，固定方法可采用扣壓方法，還可采用超聲波塑料焊接機(jī)焊接固定連接。6、如權(quán)利要求l所述的fflV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，其特征在于，所述樣本采集器的組成材料為親水性纖維及疏水性材料，該親水性纖維與疏水性材料形成毛細(xì)微孔基質(zhì)結(jié)構(gòu)；親水性纖維占樣本采集器總重量比值范圍為8%80%，親水性纖維可為棉花纖維、濾紙、海綿、布料；疏水性材料可為聚乙烯、聚丙烯、多苯乙烯、高密度聚乙烯、超高分子聚乙烯、聚偏乙烯氟化物、聚四氟乙烯、尼龍與聚醚砜及其他塑料，還可為玻璃、樹(shù)脂；親水性纖維與疏水性材料的重量比范圍為l:9至4:1;樣本采集器的外形可為兵乓板或漿形，其總表面積不低于700平方毫米，總體積不低于650立方毫米，樣本采集器板部的表面積不低于樣本采集器總表面積50%;毛細(xì)微孔基質(zhì)的平均孔徑20500微米、總空隙容積不超過(guò)500立方毫米、總空隙率不超過(guò)80%，樣本采集器相對(duì)應(yīng)的密度為0.210.86克/立方厘米。7、如權(quán)利要求5所述的HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，其特征在于，所述親水性纖維占樣本采集器總重量比值范圍優(yōu)選10%~58%,親水性纖維優(yōu)選棉花纖維，疏水性材料優(yōu)選聚酯，棉花纖維與聚酯的重量比范圍優(yōu)選l:9至3:2;毛細(xì)微孔基質(zhì)的平均孔徑優(yōu)選20200微米、總空隙率優(yōu)選為40%45%、樣本采集器的密度優(yōu)選0.480.52克/立方厘米。8、如權(quán)利要求l所述的HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，其特征在于，過(guò)濾封閉條的材料可為棉花纖維、濾紙或海綿，其親水性能與吸收水分的能力與樣本采集器和試劑條之間存在差異，過(guò)濾封閉條的親水性能小于試劑條的1/3，為樣本采集器的210倍，以保證唾液流動(dòng)的方向性，并可阻擋已進(jìn)入試劑條中的唾液回流至樣本采集器，另外，過(guò)濾封閉條可進(jìn)行表面活化劑處理。9、如權(quán)利要求l所述的HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，其特征在于，所述試劑條為采用夾心法工作原理制成的膠體金法免疫層析試紙，其內(nèi)含膠體金標(biāo)記物，膠體金標(biāo)記物及測(cè)試線(T線)包埋物均為P24、gp36、gp41及gpl20重組抗原，對(duì)照線(C線)包埋fflV單克隆抗體；樣品液中的目標(biāo)抗體與Au-Ag復(fù)合物(膠體金標(biāo)記抗原)形成Au-Ag-Ab復(fù)合物(膠體金一抗原—抗體復(fù)合物)，該復(fù)合物隨樣品液沿層析膜切向流動(dòng)，至測(cè)試線(T線)處被包埋重組抗原捕捉，形成紅色條帶；未結(jié)合的Au-Ag復(fù)合物可被包埋于對(duì)照線(C線)的單克隆抗體捕獲形成紅色條帶。10、如權(quán)利要求l所述的HIV-l/2抗體唾液檢測(cè)儀，其特征在于，還包括可于樣本采集器上添加的緩沖液，以調(diào)節(jié)唾液樣本的PH值并保證唾液運(yùn)輸?shù)姆较蛐耘c流速，使試劑條獲取足夠的唾液樣本；緩沖液為一種復(fù)合的緩沖液，由磷酸二氫鉀、三羥甲基氨基甲烷、磷酸氫二鈉、氯化鈉、氯化鉀、Tween-20、硫柳汞、十二垸基硫酸鈉(分子生物學(xué)專(zhuān)用)、乙二胺四乙酸、去離子水按比例配制而成。全文摘要一種HIV-1/2抗體唾液檢測(cè)儀，包括塑料保護(hù)殼、置于塑料保護(hù)殼內(nèi)的試劑條、過(guò)濾封閉條及樣本采集器；試劑條包括加樣區(qū)及反應(yīng)區(qū)；樣本采集器包括柄部、板部及連接柄部與板部的結(jié)合部；塑料保護(hù)殼體包括底板及與底板配合設(shè)置的面板，面板上設(shè)有用于判讀檢測(cè)結(jié)果的觀察窗口，觀察窗口與反應(yīng)區(qū)對(duì)應(yīng)設(shè)置；過(guò)濾封閉條完全重疊放置于加樣區(qū)上方；樣本采集器的柄部放置于過(guò)濾封閉條上方并與過(guò)濾封閉條部分重疊，板部伸出塑料保護(hù)殼外。本發(fā)明的HIV-1/2抗體唾液檢測(cè)儀是對(duì)唾液中HIV-1/2抗體的初篩試驗(yàn)，可廣泛應(yīng)用于臨床及個(gè)體自行檢測(cè)。文檔編號(hào)G01N33/543GK101393213SQ20071016973公開(kāi)日2009年3月25日申請(qǐng)日期2007年11月15日優(yōu)先權(quán)日2007年9月20日發(fā)明者津劉,荀閆申請(qǐng)人:深圳市賽茵斯愛(ài)速醫(yī)療科技有限公司;閆荀;劉津