專利名稱：一種檢測孔雀石綠的分子印跡聚合物微球的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種分子印跡檢測技術，具體地，涉及一種利用分子 印跡技術的快速檢測水產品中孔雀石綠的方法，本發(fā)明還涉及用于該 檢測方法的分子印跡聚合物微球。
背景技術：
眾所周知，孔雀石綠在水產養(yǎng)殖中抗菌效果較好，價格低廉，目 前對其危害性的宣傳力度較弱，從而使得被不少水產養(yǎng)殖業(yè)戶廣泛使 用?；诖耍覈贫恕稛o公害食品水產品中漁藥殘留限量(NY5070-2002 )》標準，其中規(guī)定水產品中不得檢出孔雀石綠等危 害性物質。《2000年度中國出口動物源性食品中有毒有害物質殘留監(jiān)控計 劃》首次將出口鰻魚中孔雀石綠殘留量的監(jiān)控列入年度計劃，并延續(xù) 至今。2002年5月歐盟曾向我國通報在2批浙江舟山向德國出口的鰻魚 中檢出孔雀石綠。2005年6月5日，英國食品標準局在英國一家知名 的超市連鎖店出售的鮭魚體內發(fā)現(xiàn)一種名為"孔雀石綠"的成分，有 關方面將此事迅速通報給歐洲國家所有的食品安全機構，發(fā)出了食品 安全警報。英國食品標準局發(fā)布消息說，任何魚類都不允許含有孔雀 石綠，并且這種化學物質不應該出現(xiàn)在任何食品中。2005年7月7曰農 業(yè)部辦公廳發(fā)布了《關于組織查處"孔雀石綠"等禁用獸藥的緊急通 知》，要求各地盡快組織開展孔雀石綠等禁用藥物的專項整治工作。 農業(yè)部漁業(yè)局馬上組織調查組奔赴各地調查孔雀石綠問題，并組織專 家商討對策。2005年以來歐盟、日本、韓國等國加大了對我國出口鰻 魚中孔雀石綠的檢驗力度。日本從2005年7月1日起，開始對來自我國 的鰻魚產品強制檢測孔雀石綠。同時，香港、新加坡等地也加強了水 產品檢驗，檢出多批大陸水產品中含有孔雀石綠殘留?？兹甘G別名堿性綠、鹽基塊綠、孔雀綠，其分子式為C23H25C1N2，分子量為364.92，屬于三苯甲烷類染料，是一分子苯 甲醛與兩分子二甲基苯胺在濃硫酸或氯化鋅存在的條件下聚合而形 成的深綠色晶體，具有金屬光澤?？兹甘G極易溶于水，水溶液呈蘭 綠色(4.0g/100ml)，也能溶于乙醇、甲醇或戌醇?？兹甘G在細胞分 裂時，抑制細胞內的谷氨酸轉變?yōu)殡念惣跋嚓P產物，從而抑制細胞分 裂，達到抗菌效果(HECHTT等.JApplIchth， 1998, 14(3-4):213-221.)?？兹甘G有強烈的致癌作用，由于其為脂溶性化合物，在魚體內 和環(huán)境中殘留時間長，且代謝緩慢，在人體殘留時間長，對人體的危 害是積蓄式的(劉峰延等.中國水產，2006 (1): 58 - 59.)。有時雖然 攝入量不多，不會有很明顯的中毒癥狀，但當體內的孔雀石綠堆積到 一定程度，就可能引發(fā)各種疾病?？兹甘G及其代謝產物無色孔雀石綠具有高殘留性、高致癌性、 高致畸性、致突變性、高毒性等特性。研究發(fā)現(xiàn)孔雀石綠能導致大鼠 肝細胞空泡化，使甲狀腺濾泡上皮大量凋亡，抑制雄鼠甲狀腺激素的 釋放；抑制血漿膽堿脂酶的作用，進而造成乙酰膽堿的蓄積有出現(xiàn)神 經癥狀的可能性(MUSASO等.JAquatSci， 1999,14:37-42.)。此外， 它還能通過溶解足夠的鋅(Srivastava S等.Aquat Toxicol, 2004, 66: 319-3291; SVOBODOVAZ等.Acta Vet Brno， 1997， 66(2):111-116 ),導 致水生動物急性鋅中毒，引起水生生物消化道、鰓和皮膚輕度炎癥， 從而影響其正常攝食和生長，還可阻礙腸道酶(如胰蛋白酶、oc-淀 粉酶)的活性，影響水生動物的消化吸收功能(SRIVASTAVAK等.Acta Hydrobiol， 1995,37(2):113-119; SRIVASTAVAS J等.J Adv Zool, 1998, 19(l):46-49 )。目前檢測孔雀石綠方法包括同時檢測孔雀石綠和無色孔雀石錄 殘留《無公害食品水產品中孔雀石綠殘留量的測定液相色譜法》(SC/T 3021—2004)標準。2005年9月5日中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局和國家標準化管理委員會發(fā)布《水產品中孔雀石綠和結晶紫 殘留量的測定》，規(guī)定將高效液相色譜和液相色譜-串聯(lián)質譜作為孔雀 石綠檢測的國標方法。國外還釆用氣相色譜-質譜聯(lián)用法、薄層色譜法和毛細管電泳法等進行孔雀石綠的檢測(Tumipseed S B等.J AOAC Int， 1995，78(4):971-977; Matysik FM. 1998， 802(2): 349; Tarbin J A等.J the analyst Int, 1998,123(12): 2567-2571 )。但這些檢測方法都要依賴復 雜精密儀器，對樣品分離凈化的步驟也相對繁瑣。分子印跡技術是為獲得在空間結構和結合點位上與某一分子(通 常稱為模板分子)完全匹配的聚合物的實驗制備技術。其工作原理一 般分三個步驟使印跡分子與功能單體相互作用形成復合物；加交聯(lián) 劑和聚合引發(fā)劑，發(fā)生聚合反應；除去聚合物中的印跡分子后即獲得 分子印跡聚合物。分子印跡聚合物具有制作簡單、成本低廉、功能可 設計、堅固耐用、適用范圍廣等優(yōu)點，被譽為"萬能的分子識別材料"。 其中分子印跡聚合物微球使用更方便、識別效率更高，應用前景也更 加廣闊。主要應用于色譜分離、抗體和受體模擬物、固相萃取、生物 傳感器敏感材料、催化作用等。孔雀石綠的分子結構屬三苯甲烷類，其分子中含有三個苯環(huán)，一 個二甲基氨和一個次二甲基氨，分子結構本身具有足夠的空間特征， 易與不同的功能單體形成有特異性的空間結構空穴。此外孔雀石綠的 親水基團次二甲基氨，可與功能單體很好地作用，形成強烈的氫鍵， 這無論在制備印跡分子還是在吸附模板分子中都是強有力的因素。分 子中的兩個疏水基團苯環(huán)和二甲基氨可互相作用，且與溶劑作用，形 成結合位點。鑒于對孔雀石綠分子式的研究和性質的考慮，釆用懸浮 聚合分子印跡法較適合制備以孔雀石綠為模板的印跡分子聚合物微 球。因為孔雀石綠是水溶性分子，而水會削弱功能單體與模板分子之 間或分子印跡聚合物微球與模板分子之間的非共價鍵作用，從而影響 復合物的形成或分子印跡聚合物微球的識別效果。如何在水溶性的環(huán)境中合成并識別模板分子，是一個新的挑戰(zhàn)。所以本發(fā)明選用懸浮乳 液聚合法，利用分散劑使親水性表面和親脂性表面隔開，使得親水基 團朝著同 一個方向，這樣有利于孔雀石綠分子和功能單體的結合。目前國內外已經出現(xiàn)了 一些檢測孔雀石綠的檢測方法，有些已經 申請了專利，國內相關的專利有水產品中孔雀石綠間接竟爭ELISA檢測試劑盒(專利號申請為200510060995.1 )、孔雀石綠快速檢測方法 及快速檢測試劑盒(專利申請?zhí)枮?00710068348.4)和一種水及水產 品中孔雀石綠殘留的快速檢測試劑盒(專利申請?zhí)枮?200620113227.8),美國有兩項利用免疫學技術檢測孔雀石綠的專利 (專利申請?zhí)枮?0070254323和20070072242 ),其檢測原理均不是利 用分子印跡技術。迄今為止，我國還沒有穩(wěn)定可靠的快速檢測水產品中孔雀石綠殘 留的檢測方法，所以目前迫切想找到一種新的、快速的檢測方法，其 既能避免繁瑣的操作步驟和冗長的檢測過程，又能做到靈敏度高，檢 出限低。發(fā)明內容為解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種利用分子印跡技 術、操作簡單，吸附、濃縮和分離效果好的快速檢測孔雀石綠的方法。 該方法除可檢測樣品中的孔雀石綠外，還可以對其進行濃縮，降低了 檢測的檢出限，對低含量樣品的檢測尤為有效。本發(fā)明的另一個目的 在于提供一種用于該檢測方法的分子印跡聚合物微球，該微球特別適 合對水產品中孔雀石綠殘留的檢測。本發(fā)明分子印跡聚合物微球是以孔雀石綠為模板制備獲得。具體地說，通過如下步驟制備獲得(1) 潛兩種功能單體以一定比例混合；(2) .將孔雀石綠模板與單體以一定比例混合，然后依次加入交聯(lián) 劑、引發(fā)劑、乳化劑和親脂溶劑，乳化，熱聚合；(3).微球洗滌、烘干，過篩。其中，所述兩功能單體按物質的量比1~8: l-8混合；孔雀石綠 模板與混合單體的物質的量比為1:1~8。其中，所述交聯(lián)劑優(yōu)選為乙二醇二甲基丙稀酸酯，其物質的量是 總功能單體的2 10倍；引發(fā)劑偶優(yōu)選為氮二異丁腈，其質量是單體 的1~8倍；乳化劑選可為十二烷基硫酸鈉、聚乙烯醇、羥磺基甜菜堿、 谷氨酸鈉或吐溫80,按蒸餾水體積的1 10%;親脂溶劑可為氯仿、 石油醚、三氯甲烷或甲醇，親脂溶劑與水的體積比是1: 5~20;反應 體系的水油比是5 40: 1。在制備分子印跡微球的過程中，為使體系穩(wěn)定，釆用超聲波或分 散乳化機先對混合溶液進行乳化，為保持溶液穩(wěn)定的乳化狀態(tài)，對乳 化液進行攪拌，攪拌的速度為0~200rpm;攪拌時間為0 24h;引發(fā) 熱聚合溫度為50-7(TC。在對制備的微球進行洗滌的過程中可用超聲波洗滌和索式提取 洗滌方法，洗滌液可為蒸餾水、酒精、20~80%的乙腈-乙酸胺溶液。 洗滌后利用分子篩對制備的微球進行均質篩選，IOO目篩下，200目 篩上，得到直徑為50 200^im微球。利用分子印跡微球進行水產品的檢測時，按照孔雀石綠國標方法 先將樣品研磨勾漿后浸泡、攪拌、過濾，將濾液通過由分子印跡微球 填滿的過濾柱，再使用80~98%的乙腈緩沖溶液對微球進行洗脫， 利用分光光度計在620nm條件下檢測洗脫液中孔雀石綠的含量。隨 后對分子印跡微球的吸附效果進行作了評價，結果得出產量最高的單 體組等比例丙烯酰胺和甲基丙烯酸組成的功能單體對孔雀石綠再吸 附能力最強，靜態(tài)分布系數(shù)達到3.96，證實了對最佳單體的選擇。利用分子印跡技術快速檢測水產品中孔雀石綠的技術方案，優(yōu)選 為，以等比例的丙烯酰胺和甲基丙烯酸作為功能單體，混合單體與模 板分子摩爾比為8 : 1，以石油醚為溶劑，體積比為3%的吐溫-80為乳化劑，加入交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙稀酸酯和引發(fā)劑偶氮丁異二腈，分散乳化機對混合溶液分散乳化3min, 65'C水洛熱聚合24h，索式提 取洗脫過夜，收集100~200目篩之間的微粒，即可得到分散性好、 顆粒均勻且產量高的孔雀石綠分子印跡微球，回收率在60%以上。將樣品濾液通過由微球填滿的過濾柱，再使用80%的乙腈緩沖 溶液對微球進行洗脫，利用分光光度計在620nm條件下檢測洗脫液 中孔雀石綠的含量。檢出限為0.63 ±0.07 jug/kg,回收率為102±1.4。本發(fā)明工藝簡單易行，有良好的重現(xiàn)性，可反復使用，并能進行 工業(yè)化生產，成本低廉， 一般實驗室均可進行，不需要復雜昂貴的設 備。檢測效果基本達到GB水平，同時具有可再生、操作方法簡便快 速、易于推廣等優(yōu)點。
具體實施方式
以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。 實施例1孔雀石綠分子印跡聚合物微球的制備在250mL三角瓶中加入2mmol孔雀石綠、8 mmol丙烯酰胺和 8mmo1甲基丙烯酸，再加入15mL石油醚。量取蒸餾水150mL，加 入4.5mL吐溫-80 (按蒸餾水體積的3 %添加)，加熱使完全溶解， 冷卻至常溫。將蒸餾水倒入三角瓶中，并加入交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙 稀酸酯(40mmo1, 7.56mL)，引發(fā)劑偶氮丁異二腈(200mg)。超聲 脫氣5min，分散乳化機乳化3min, 65。C水洛聚合24h。所得聚合物 用蒸餾水洗滌至澄清后，以80%的乙腈-乙酸胺緩沖液為洗滌液進行 索氏提取。最后在固相萃取裝置中用80%的乙腈-乙酸胺緩沖液沖洗， 直至流出液在紫外-可見光譜檢測無孔雀石綠檢出為止。所得微球烘 干，用篩子篩選微球(100目篩下，200目篩上)。得到分散性好、顆 粒均勻的孔雀石綠分子印跡微球，回收率為63%。 實施例2孔雀石綠印跡分子聚合物微球的制備'在250mL三角瓶中加入2mmol孔雀石綠、4mmol丙烯酰胺和4mmol4-乙烯基吡P定，再加入15mL氯仿，量取蒸餾水150mL，加 入7.5mL吐溫-80 (按蒸餾水體積的3 %添加)，加熱使完全溶解， 冷卻至常溫。將蒸餾水倒入三角瓶中，并加入交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙 稀酸酯(40mmo1， 7.56mL)，引發(fā)劑偶氮丁異二腈(200 mg )。超聲 脫氣10min,分散乳化機乳化5min， 70。C水浴聚合4h。所得聚合物 用蒸餾水洗滌至澄清后，以80%的乙腈-乙酸胺緩沖液為洗滌液進行 索氏提取。最后在固相萃取裝置中用60%的乙腈-乙酸胺緩沖液沖洗， 直至流出液在紫外-可見光譜檢測無孔雀石綠檢出為止。所得微球烘 干，用篩子篩選微球(100目篩下，200目篩上)。得到分散性好、顆 粒均勾的孔雀石綠分子印跡微球，回收率為57%。 實施例3孔雀石綠印跡分子聚合物微球的制備在250mL三角瓶中加入2mmol孔雀石綠、4 irnnol甲基丙烯酸 和4 mmol 4-乙烯基吡嗖，再加入15mL三氯甲烷。量取蒸餾水150 mL，加入6.0mL十二烷基硫酸鈉(按蒸餾水體積的4%添加)，加熱 使完全溶解，冷卻至常溫。將蒸餾水倒入三角瓶中，并加入交聯(lián)劑乙 二醇二甲基丙稀酸酯(40mmo1, 7.56 mL)，引發(fā)劑偶氮丁異二腈(200 mg)。超聲脫氣2min，分散乳化機乳化5 min, 6CTC水浴聚合12h。 所得聚合物用蒸餾水洗滌至澄清后，以50%的乙腈-乙酸胺緩沖液為 洗脫液進行超聲波洗脫。最后在固相萃取裝置中用60%的乙腈-乙酸 胺緩沖液沖洗，直至流出液在紫外-可見光譜檢測無孔雀石綠檢出為 止。所得微球烘干，用篩子篩選微球(100目篩下，200目篩上)。得 到分散性好、顆粒均勻的孔雀石綠分子印跡微球，回收率為44%。 實施例4孔雀石綠印跡分子聚合物微球的制備在250mL三角瓶中加入2mmol孔雀石綠、4 mmol甲基丙烯酸 和4mmol丙烯酰胺，再加入15mL谷氨酸鈉。量取蒸餾水150mL， 加入3.0mL十二烷基硫酸鈉(按蒸餾水體積的2%添加)，加熱使完 全溶解，冷卻至常溫。將蒸餾水倒入三角瓶中，并加入交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙稀酸酯(40 mmol， 7.56 mL ),引發(fā)劑偶氮丁異二腈(200 mg )。 超聲脫氣5min,分散乳化機乳化3min， 65'C水洛聚合24h。所得聚 合物用蒸餾水洗滌至澄清后，以60%的乙腈-乙酸胺緩沖液為洗脫液 進行超聲波洗脫。最后在固相萃取裝置中用50%的乙腈-乙酸胺緩沖 液沖洗，直至流出液在紫外-可見光譜檢測無孔雀石綠檢出為止。所 得微球烘干，用篩子篩選微球(100目篩下，200目篩上)。得到分散 性好、顆粒均勻的孔雀石綠分子印跡微球，回收率為51%。 實施例5孔雀石綠分子印跡聚合物微球的制備在250mL三角瓶中加入2mmo1孔雀石綠、8 mmol丙烯酰胺和 8mmo1甲基丙烯酸，再加入15mL石油醚。量取蒸僧水150mL，加 入4.5 mL吐溫-80 (按蒸僧水體積的3 %添加)，加熱使完全溶解， 冷卻至常溫。將蒸餾水倒入三角瓶中，并加入交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙 稀酸酯(40mmo1， 7.56mL)，引發(fā)劑偶氮丁異二腈(200 mg )。超聲 脫氣5min，分散乳化機乳化3min, 65。C水浴、攪拌速度為200rpm、 聚合24h。所得聚合物用蒸餾水洗滌至澄清后，以80%的乙腈-乙酸 胺緩沖液為洗滌液進行索氏提取。最后在固相萃取裝置中用80%的乙 腈-乙酸胺緩沖液沖洗，直至流出液在紫外-可見光譜檢測無孔雀石綠 檢出為止。所得微球烘干，用篩子篩選微球(100目篩下，200目篩 上)。得到分散性好、顆粒均勻的孔雀石綠分子印跡微球，回收率為 530/0。實施例6水產樣品中孔雀石綠的快速檢測取2.00g孔雀石綠分子印跡微球(實施例l)裝入的固相萃取小 柱內，輕擊柱壁填實。用80%乙腈-乙酸胺溶液反復沖洗至洗出液在 紫外-可見分光光度計下檢測620nm處無讀數(shù)。稱取5.00g巿售鮮鰻 魚置于50mL離心管內，按照孔雀石綠國家標準處理樣品，將樣品研 磨勻漿后浸泡、攪拌、過濾，將濾液通過由微球填滿的過濾柱，再使 用80%的乙腈緩沖溶液對微球進行洗脫，利用分光光度計在620nm條件下檢測洗脫液中孔雀石綠的濃度，從而得到受檢水產品中孔雀石綠的含量為0.29ppm。實施例7水產樣品中孔雀石綠的快速檢測取2.00g孔雀石綠分子印跡微球裝入的固相萃取小柱內，輕擊柱 壁填實。用90%乙腈-乙酸胺溶液反復沖洗至洗出液在紫外-可見分光 光度計下檢測620nm處無讀數(shù)。稱取5.00g巿售鮮八寶魚置于50 mL 離心管內，按照孔雀石綠國家標準處理樣品，稱取5.00g已搗碎樣品 于50mL離心管中，加入200|xL混合內標標準溶液，加入llmL乙腈， 超聲波振蕩提取2min，8000r/min勻漿提取30s,4000r/min離心5min, 上清液轉移至25mL比色管中；另取一50mL離心管加入llmL乙腈， 洗滌勻漿刀頭10s，洗滌液移入前一離心管中，用坡棒搗碎離心管中 的沉淀，漩渦混勻器上振蕩30s，超聲波振蕩5min， 4 000r/min離心 5min，上清液合并至25mL比色管中，用乙腈定容至25.0mL,搖勻 備用，將樣品處理液通過由微球填滿的過濾柱，再使用60%的乙腈 緩沖溶液對微球進行洗脫，利用分光光度計在620nm條件下檢測洗 脫液中孔雀石綠的含量。從而得到受檢水產品中孔雀石綠的含量為 0.14ppm。實施例8水產樣品中孔雀石綠的快速檢測取2.00 g孔雀石綠分子印跡微球裝入的固相萃取小柱內，輕擊柱 壁填實。用80%乙腈-乙酸胺溶液反復沖洗至洗出液在紫外-可見分光 光度計下檢測620nm處無讀數(shù)。稱取5.00g巿售鮮鮭魚置于50 mL 離心管內，按照孔雀石綠國家標準處理樣品，稱取5.00g已搗碎樣品 于50mL離心管中，加入200pL混合內標標準溶液，加入llmL乙腈， 超聲波振蕩提取2min, 8000r/min勻漿提取30s,4000 r/min離心5min, 上清液轉移至25mL比色管中；另取一50mL離心管加入llmL乙腈， 洗滌勻漿刀頭10s,洗滌液移入前一離心管中，用玻棒搗碎離心管中 的沉淀，漩渦混勾器上振蕩30s，超聲波振蕩5min， 4 000r/min離心5min，上清液合并至25rnL比色管中，用乙腈定容至25.0mL，搖勻 備用，將樣品液通過由微球填滿的過濾柱，再使用98%的乙腈緩沖 溶液對微球進行洗脫，利用分光光度計在620nm條件下檢測洗脫液 中孔雀石綠的含量。從而得到受檢水產品中孔雀石綠的含量為 0.17ppm。雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳 盡的描述，但在本發(fā)明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本 領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎 上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
權利要求
1、一種分子印跡聚合物微球，其特征在于，它是通過如下方法制備(1).將兩種功能單體以一定比例混合；(2).將孔雀石綠模板與單體以一定比例混合，然后加入交聯(lián)劑、引發(fā)劑、乳化劑和親脂溶劑，乳化，熱聚合；(3).微球洗滌、烘干，過篩。
2、 根據(jù)權利要求l所述的分子印跡聚合物微球，其特征在于，所 釆用的功能單體選自丙烯酰胺、甲基丙烯酸和4-乙烯基吡啶。
3、 根據(jù)權利要求1或2所述的分子印跡聚合物微球，其特征在于， 所釆用的功能單體為丙烯酰胺、甲基丙烯酸。
4、 根據(jù)權利要求1或2所述的分子印跡聚合物微球，其特征在于， 兩功能單體按物質的量比1 8 : 1~8混合；孔雀石綠模板與混合單體 的物質的量比為l : 1 ~8。
5、 根據(jù)權利要求1或2所述的分子印跡聚合物微球，其特征在于， 兩功能單'體按物質的量比i : 1混合。
6、 根據(jù)權利要求l-5任一項所述的分子印跡聚合物微球，其特征 在于，交聯(lián)劑為乙二醇二甲基丙稀酸酯，其物質的量是總功能單體的 2~10倍；引發(fā)劑偶為氮二異丁腈，其質量是單體的1 8倍；乳化劑選 自十二烷基硫酸鈉、聚乙烯醇、羥磺基甜菜堿、谷氨酸鈉和吐溫80， 按蒸餾水體積的i~io %添加。
7、 根據(jù)權利要求6所述的分子印跡聚合物微球，其特征在于，所 述親脂溶劑選自氯仿、石油醚、三氯甲烷和甲醇，親脂溶劑與水的體 積比是l: 5~20;反應體系的水油體積比是5 ~ 40 : 1。
8、 根據(jù)權利要求7所述的分子印跡聚合物微球，其特征在于，熱 聚合溫度為50 70。C。
9、 根據(jù)權利要求7或8所述的分子印跡聚合物微球，其特征在于,使用超聲波洗脫和索式提取洗脫對微球進行洗滌，洗滌液為蒸餾水、 酒精或20~ 80%的乙腈-乙酸胺溶液。
10、 根據(jù)權利要求l-9任一項所述的分子印跡聚合物微球，其特 征在于，微球直徑為50-200pm。
11、 一種快速檢測水產品中孔雀石綠的方法，其包括如下步驟(1) .將樣品研磨勻漿后浸泡、攪拌、過濾；(2) .將濾液通過由權利要求1-10任一項所述的分子印跡微球填滿 的過濾柱，再使用緩沖溶液對微球進行洗脫；(3) .利用分光光度計在620nm條件下檢測洗脫液中孔雀石綠的含量。
12、 根據(jù)權利要求ll所述的方法，其特征在于，緩沖溶液為80-98%的乙腈溶液。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于快速檢測水產品中孔雀石綠的分子印跡聚合物微球，其是通過下述方法制備將兩種功能單體以一定比例混合，再將孔雀石綠模板與單體以一定比例混合，按一定順序加入交聯(lián)劑、引發(fā)劑、乳化劑和親脂溶劑，制備分子印跡聚合物微球。本發(fā)明還進一步提供了檢測樣品中的孔雀石綠的方法，該方法包括對處理的水產樣品進行識別、吸附和濃縮，并利用分光光度法檢測其中孔雀石綠的濃度。還可以對其進行濃縮，降低了檢測的檢出限，對低含量樣品的檢測尤為有效。
文檔編號G01N30/50GK101216464SQ20071030475
公開日2008年7月9日 申請日期2007年12月29日 優(yōu)先權日2007年12月29日
發(fā)明者何計國, 曹冬冬, 茅文璽, 袁長梅, 車會蓮 申請人:中國農業(yè)大學