專利名稱：金蓮花藥材指紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中藥材指紋圖譜的構建方法，尤其是金蓮花藥材高效液相色譜(HPLC)指 紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜。屬于藥物分析技術領域。
背景技術：
中藥指紋圖譜特指中藥樣本經光譜或色譜等現(xiàn)代分析技術得到的中藥各組分群體特 征的圖譜或圖象。目前指紋圖譜已成為國內外公認的鑒別中藥品種和評價中藥質量的最有 效手段之一。美國食品藥品管理局在1996年制定的《FDA關于植物制品的指南》中，要求 對植物原料、植物藥中間品和植物藥產品提供相應的指紋圖譜。英國草藥典、印度草藥典 以及加拿大藥用及芳香植物學會、德國藥用植物學會也接受色譜指紋圖譜。中國國家藥品 監(jiān)督管理部門于2000年發(fā)布了《中藥注射劑的指紋圖譜研究的技術要求(暫行)》，明確要 求對新申報的中藥注射劑和已上市的中藥注射劑實行指紋圖譜標準。
中藥指紋圖譜經過了數(shù)十年的研究，使用了包括紫外、紅外、氣相、高效液相、薄層、 核磁共振、掃描電子顯微鏡、計算機圖像分析、電泳技術、同功酶分析法、分子生物學技 術、聚類分析技術等許多現(xiàn)代分析測試手段，為中藥的物質鑒定和成分分析積累了大量的 數(shù)據(jù)。但從中藥全面質量控制的角度看，還遠未達到有效地反映和控制中藥的整體質量的 目的。高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜在國際上容易獲得認可，包括美國、英國、法國、 加拿大、德國、日本和印度在內的許多國家更愿意接受HPLC指紋圖譜。因此，為中藥材建 立相應的HPLC指紋圖譜，是現(xiàn)階段控制中藥內在質量的有效手段。
金蓮花為毛茛科植物金蓮花的干燥花，廣泛分布于我國東北、華北和內蒙古地區(qū)。 金蓮花有抑菌和清熱解毒的作用，常用于急、慢性扁桃體炎，急性中耳炎，急性鼓膜炎，急性結膜炎，急性淋巴管炎。文獻報道對金蓮花藥材的研究多以總黃酮為定量指標，但是 在大部活性成分尚不清楚的情況下，測定一兩個化學成分的量還不能真正反映原藥材質量 的穩(wěn)定性。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種金蓮花藥材指紋圖譜的構建方法，以及由此方法所得到的金 蓮花藥材標準指紋圖譜。為實現(xiàn)此目的，本發(fā)明通過對金蓮花藥材高效液相色譜指紋圖譜 的研究，提出了一種較好的金蓮花藥材質量控制方法，彌補了現(xiàn)有質量控制技術的不足， 使金蓮花藥材的質量控制更加完善和科學。
本發(fā)明的金蓮花藥材高效液相色譜指紋圖譜的構建方法，包括如下步驟
(1) 供試品溶液的制備精密稱取藥材粉末10g，置于具塞容器中，加入60 100%的甲
醇100 700mL，浸泡24h，超聲震蕩30min，冷卻后定容，取上清液用O. 45 n m微孔 濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。
(2) 高效液相色譜分析色譜分離柱填料為5um Kromasil-C18, 250X4. 6mm;流動相為 甲醇-水；采用梯度洗脫方式Omin—25min—60min—85min—120min，甲醇10%— 18%—25%—38%—50%;流速O. 8 1, 2mL/min;檢測波長350nm;柱溫30 45。C。在 此條件下分析供試品溶液，得到金蓮花藥材的指紋圖譜。
按照本發(fā)明提供的方法，對14批金蓮花藥材建立了HPLC指紋圖譜，通過分析比較， 確定了 17個共有特征峰，其保留時間分別為4. 8min、7. 7min、 10. 9min、 17. 6min、28. Omin、 33. 5min、 41.3min、 43.8min、 48.0min、 53.2min、 57.1min、 62.3min、 82.7min、 86,2min、 94.0min、 101.1min、 109.5min，這些共有特征峰構成了金蓮花藥材的指紋特征，可作為金 蓮花藥材的標準指紋圖譜。
本發(fā)明將金蓮花藥材作為一個整體對待，通過比較其共有峰可以找出不同藥材之間的 細微差異，適于對金蓮花藥材真?zhèn)?、產地和品質的鑒別和控制。


圖1是本發(fā)明提供的金蓮花藥材的標準指紋圖譜。圖中從左到右分別標出了其共有特 征峰1至17號。
具體實施例方式
本發(fā)明的優(yōu)選實施例如下
(1) 儀器和藥品使用島津LC10A高效液相色譜儀；金蓮花藥材共14批，均購于中草
藥商店；其它試劑為色譜純或分析純。
(2) 供試品溶液的制備精密稱取藥材粉末10g，置于容量瓶中，加入75%的甲醇400mL， 浸泡24h,超聲震蕩30min,冷卻后定容，取上清液用0. 45 y m微孔濾膜過濾，濾 液作為供試品溶液。
(3) 高效液相色譜分析色譜分離柱填料為5u mKromasil-C18, 250X4. 6隱；流動相為 甲醇-水；采用梯度洗脫方式Omin—25min—60min—85min—120min，甲醇10%— 18%—25%—38%—50%;流速1.0mL/min;檢測波長350nm;柱溫40。C。在此條件下 分析供試品溶液，得到金蓮花藥材的指紋圖譜。
(4) 按照本發(fā)明提供的方法，對14批金蓮花藥材建立了 HPLC指紋圖譜，確定了 17個 共有特征峰，其保留時間分別為4. 8min、 7. 7min、 10. 9min、 17. 6min、 28.0min、 33. 5min、 41.3min、 43.8min、 48.0min、 53,2min、 57.1min、 62.3min、 82.7min、 86.2min、 94.0min、 101.1min、 109.5min，這些共有特征峰構成了金蓮花藥材的指紋特征，可 作為金蓮花藥材的標準指紋圖譜。
權利要求
1、一種金蓮花藥材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征包括供試品溶液的制備、指紋圖譜的制作和標準指紋圖譜的確定。
2、 根據(jù)權利要求1所述的金蓮花藥材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征是所述的 供試品溶液的制備方法是精密稱取藥材粉末10g，置于具塞容器中，加入60 100%的 甲醇100 700mL，浸泡24h，超聲震蕩30min，冷卻后定容，取上清液用0. 45 u m微孔濾 膜過濾，濾液作為供試品溶液。
3、 根據(jù)權利要求l、 2所述的金蓮花藥材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征是所述 的指紋圖譜的制作過程為色譜分離柱填料為5ym Kromasil-C18， 250X4. 6mm;流動相 為甲醇-水；采用梯度洗脫方式Omin—25min—60min—85min—120min，甲醇10%—18% —25%—38%—50%;流速O. 8 1.2mL/min;檢測波長350nrn;柱溫30 45。C。在此條件下 分析供試品溶液，得到金蓮花藥材的指紋圖譜。
4、 根據(jù)權利要求1、 2、 3所述的金蓮花藥材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征是 所述的標準指紋圖譜的確定方法是按照本發(fā)明提供的方法，對14批金蓮花藥材建立了 HPLC指紋圖譜，通過分析比較，確定了17個共有特征峰，其保留時間分別為4.8min、 7. 7min、 10. 9min、 17. 6min、 28. Omin、 33. 5min、 41.3min、 43.8min、 48.0min、 53.2min、 57.1min、 62.3min、 82.7min、 86.2min、 94,0min、 101.1min、 109.5min,這些共有特征峰 構成了金蓮花藥材的指紋特征，可作為金蓮花藥材的標準指紋圖譜。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種金蓮花藥材指紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜。向金蓮花藥材粉末中加入適量甲醇浸泡24小時，超聲提取30分鐘，并將上清液用微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。對供試品溶液進行高效液相色譜分析，色譜柱為Kromasil-C₁₈(5μm，250×4.6mm)，柱溫為40℃，流動相為甲醇-水，采用梯度洗脫方式，檢測波長350nm，得到金蓮花藥材的HPLC指紋圖譜。通過對14批次金蓮花藥材HPLC指紋圖譜的比對，確定其共有指紋特征，得到標準指紋圖譜。利用標準指紋圖譜可以有效監(jiān)控金蓮花藥材的質量。
文檔編號G01N30/00GK101183092SQ20071030693
公開日2008年5月21日 申請日期2007年12月28日 優(yōu)先權日2007年12月28日
發(fā)明者史曉南, 周考文, 王樹聰 申請人:北京聯(lián)合大學生物化學工程學院