專利名稱：豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及醫(yī)療設(shè)備，特別一種豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒。二、 背景技術(shù)目前，用于豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒很多，根據(jù)疫苗株所 缺失的糖蛋白可將鑒別ELISA分為gE-ELISA、 gC-ELISA和gG-ELISA，其 中g(shù)E-ELISA敏感性最高，應(yīng)用較多。目前商業(yè)化應(yīng)用的gE-ELISA試劑盒多采用細(xì)胞培養(yǎng)物來增殖病毒制備 抗原，這種方法的成本高，勞動強(qiáng)度大，還存在散毒的危險。而近年來報道 了用在桿狀病毒系統(tǒng)中表達(dá)的gE蛋白作為抗原，雖然比前者安全，但也存在 成本高，操作繁瑣等不足。大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是人們應(yīng)用最多，研究最為透徹的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)， 大腸桿菌(Escherichia coli)表達(dá)系統(tǒng)的主要優(yōu)點(diǎn)是其遺傳背景和生化特性清 楚、易于操作、生產(chǎn)迅速、培養(yǎng)基成本低、易于制備等。因此對于一些非糖 基化蛋白或只要求其抗原性的蛋白，大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是一個極好的選擇。 目前許多診斷試劑用的抗原都是由大腸桿菌表達(dá)的。但所用試劑盒多存在勞 動強(qiáng)度大，不安全，不易操作，且成本高的問題，難以有效推廣應(yīng)用。三、 實(shí)用新型內(nèi)容針對上述情況，本實(shí)用新型之目的就是提供一種新型的豬偽狂犬病病毒 gE-ELISA診斷試劑盒，可有效克服現(xiàn)有設(shè)備不易操作，成本高，勞動強(qiáng)度大， 難以快速進(jìn)行豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷的問題，其解決的技術(shù)方案是， 包括有盒體，盒體內(nèi)向上開口隔置成前后兩排存物槽，在兩排存物槽的后部 有微量滴定板存放室，其室內(nèi)放置有微量滴定板，所說的兩排存物槽，其前 排依次為酶標(biāo)記物存放槽、濃縮樣品稀釋液存放槽、濃縮樣品洗滌液存放槽 和陽性對照試劑存放槽，后排依次是陰性對照試劑存放槽、TMB底物液存放 槽、終止液存放槽和酶標(biāo)抗體稀釋液存放槽，本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡單，使用方 便，易于操作，工作效率高，勞動強(qiáng)度小，成本低，易推廣應(yīng)用，經(jīng)濟(jì)和社 會效益良好。四、
圖l為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)立體圖。圖2為微量滴定板結(jié)構(gòu)圖。 五具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖對本實(shí)用新型的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)的說明。由圖l、圖2給出，本實(shí)用新型包括有盒體10，盒體10內(nèi)向上開口隔置 成前后兩排存物槽，在兩排存物槽的后部有微量滴定板存放室ll，其室內(nèi)放 置有微量滴定板l，所說的兩排存物槽，其前排依次為酶標(biāo)記物存放槽2、濃 縮樣品稀釋液存放槽3、濃縮樣品洗滌液存放槽4和陽性對照試劑存放槽5， 后排依次是陰性對照試劑存放槽6、 TMB底物液存放槽7、終止液存放槽8 和酶標(biāo)抗體稀釋液存放槽9。所說的微量滴定板1為96孔12的長方形微孔板，每排12孔，共8排， 其長度與微量滴定板存放室11的長度相同，寬高于盒體10的高度，便于存 放或取出。該試劑盒表達(dá)的蛋白質(zhì)為抗原包被微孔板或致敏乳膠，故無散毒 危險，安全可靠，該試劑盒可顯著區(qū)分基因缺失疫苗注射豬與自然感染豬， 且成本低，操作簡單，存物槽內(nèi)各種液體均為已知的現(xiàn)有技術(shù)(即已有產(chǎn)品)， 本實(shí)用新型的使用情況是，將重組抗原和空白載體抗原用0.05mol/L碳酸鹽 緩沖液(pH9.5)稀釋至最佳濃度后隔列包被96孔酶標(biāo)板，100uL/孔，37 。C放置lh后轉(zhuǎn)移至4。C過夜。甩去包被液，用PBST洗板3次，每次2-3min。 然后加入200uL/孔的封閉液于37。C封閉2h。取出洗板同上，用封閉液將血 清樣品稀釋至最佳稀釋度后，每孔加100uL，每份血清樣品設(shè)兩個重復(fù)，37 。C反應(yīng)45min后。取出洗板同上，再加入兔抗豬酶標(biāo)二抗，100uL/孔，37 。C反應(yīng)45min后。取出洗板同上，然后加入底物溶液，避光反應(yīng)3-5min后加 2mol/LH2S04終止反應(yīng)，立即于ELISA儀上讀出490nm處每孔吸光度值。同時 設(shè)定陽性對照孔、陰性對照孔和調(diào)零孔(調(diào)零孔同樣包被抗原，不加血清和 二抗,但加TMB底物液和終止液)。經(jīng)對建立的豬偽狂犬病病毒gE-ELISA 180 例豬血清檢測，結(jié)果陽性率為72.5%;陰性率為27.5%。該試劑盒與進(jìn)口診斷 試劑盒的符合率為96. 3%，取得了滿意效果。本實(shí)用新型的設(shè)計成功，為豬偽狂犬病毒gE-ELISA檢測提供了簡單易操 作的設(shè)備，快速而準(zhǔn)確，經(jīng)濟(jì)和社會效益顯著。
權(quán)利要求1、一種豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒，包括有盒體(10)，其特征在于，盒體(10)內(nèi)向上開口隔置成前后兩排存物槽，在兩排存物槽的后部有微量滴定板存放室(11)，其室內(nèi)放置有微量滴定板(1)，所說的兩排存物槽，其前排依次為酶標(biāo)記物存放槽(2)、濃縮樣品稀釋液存放槽(3)、濃縮樣品洗滌液存放槽(4)和陽性對照試劑存放槽(5)，后排依次是陰性對照試劑存放槽(6)、TMB底物液存放槽(7)、終止液存放槽(8)和酶標(biāo)抗體稀釋液存放槽(9)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒，其 特征在于，所說的微量滴定板(1)為96 L (12)的長方形微孔板，每排 12孔，共8排，其長度與微量滴定板存放室(11)的長度相同，寬高于盒 體(10)的高度。
專利摘要本實(shí)用新型涉及豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒，可有效克服現(xiàn)有設(shè)備不易操作，成本高，勞動強(qiáng)度大，難以快速進(jìn)行豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷的問題，其解決的技術(shù)方案是，包括有盒體，盒體內(nèi)向上開口隔置成前后兩排存物槽，在兩排存物槽的后部有微量滴定板存放室，其室內(nèi)放置有微量滴定板，所說的兩排存物槽，其前排依次為酶標(biāo)記物存放槽、濃縮樣品稀釋液存放槽、濃縮樣品洗滌液存放槽和陽性對照試劑存放槽，后排依次是陰性對照試劑存放槽、TMB底物液存放槽、終止液存放槽和酶標(biāo)抗體稀釋液存放槽，本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡單，使用方便，易于操作，工作效率高，勞動強(qiáng)度小，成本低，易推廣應(yīng)用，經(jīng)濟(jì)和社會效益良好。
文檔編號G01N33/569GK201107316SQ200720175109
公開日2008年8月27日 申請日期2007年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月6日
發(fā)明者吳鳳筍, 唐桂芬, 李文剛, 樊淑華 申請人:鄭州牧業(yè)工程高等專科學(xué)校