專(zhuān)利名稱(chēng)：：用于確定先兆子癇治療有效性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于定制藥物以治療或預(yù)防先兆子癇并監(jiān)測(cè)其有效性的方法。
背景技術(shù)：
：妊娠障礙，稱(chēng)為先兆子癇(PE)是一種妊娠并發(fā)癥，其出現(xiàn)率占所有孕婦的5-7%，并且是妊娠期間引起母體死亡的第二常見(jiàn)原因(在美國(guó)18%的母體死亡率與妊娠相關(guān))。先兆子癇被定義為先前血壓正常的婦女在妊娠20周后形成高血壓新發(fā)作。世界妊娠期高血壓大會(huì)已經(jīng)提供了用于診斷先兆子癇的以下定義在先前尿中有痕量或沒(méi)有蛋白的婦女中，妊娠20周后形成高血壓新發(fā)作，相隔4-6小時(shí)(在某些情況下相隔4-72小時(shí))的兩次測(cè)量〉90/140mmHg(收縮/舒張，至少一次)，并結(jié)合在24小時(shí)內(nèi)收集的尿液中對(duì)應(yīng)于300mg/DL的蛋白表觀或經(jīng)檢驗(yàn)片測(cè)量為2+。嚴(yán)重的先兆子癇被定義為其中高血壓達(dá)到160/110mmHg(收縮/舒張，至少一次)，并結(jié)合在24小時(shí)內(nèi)檢驗(yàn)片中蛋白尿》3+或〉3gr/dl。子癇是一種緊急狀態(tài)，其中嚴(yán)重的先兆子癇可惡化為危及母親生命的痙車(chē)、中風(fēng)和昏迷。為了避免這種緊急狀態(tài)，婦女通過(guò)分娩取出引起這些作用的嬰兒和胎盤(pán)。HBLLP是先兆子癇的一種嚴(yán)重形式，所述HELLP的主要副作用是溶血、升高的肝酶以及降血小板。盡管先兆子癇的比例在發(fā)展中國(guó)家更高，但是在美國(guó)的人數(shù)仍然很高(5-7%)。所有先兆子癇孕婦中的50%通過(guò)剖腹產(chǎn)分娩，而與之相對(duì)照的是在整個(gè)人群中僅有15-18%的孕婦采用剖腹產(chǎn)。從剖腹產(chǎn)分娩中的恢復(fù)延長(zhǎng)了恢復(fù)時(shí)間。與陰道分娩比較，剖腹產(chǎn)分娩不僅過(guò)程復(fù)雜，而且價(jià)格昂貴。在妊娠期間經(jīng)歷先兆子癇失調(diào)的婦女最終發(fā)展為心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加9倍，而且她們的平均壽命明顯縮短。早期先兆子癇是先兆子癇的一種嚴(yán)重形式，其在早期形成，不得不在妊娠37周前分娩(期限前)。嚴(yán)重的和早期發(fā)作的先兆子癇主要危害母親和胎兒。根據(jù)NICHD，早期先兆子癇占所有先兆子癇病例的20-25°/。，這意味著在經(jīng)歷了應(yīng)激的待產(chǎn)期后，每100名孕婦中有1-2名將受此并發(fā)癥的影響，而且嬰兒會(huì)在極早期分娩。由于嬰兒的體重低和內(nèi)部臟器發(fā)育不完全，因此分娩出現(xiàn)越早，嬰兒的并發(fā)癥越嚴(yán)重，所述并發(fā)癥包括失明、運(yùn)動(dòng)和認(rèn)知障礙以及長(zhǎng)期的醫(yī)學(xué)殘疾。由于先兆子癇過(guò)早地出生的嬰兒處于后來(lái)形成高血壓、心血管疾病和糖尿病的增加的風(fēng)險(xiǎn)中。在妊娠34周前(GW)分娩的早期先兆子癇病例是最嚴(yán)重的，是造成大多數(shù)死亡率病例的原因，而且如果嬰兒在出生后存活，平均需要在新生兒監(jiān)護(hù)病房看護(hù)6-8周。根據(jù)NICHD，對(duì)于這部分嬰兒群體，早期檢測(cè)對(duì)于其生命救助能力和防止早熟是十分必需的。僅有的治療先兆子癇的現(xiàn)行辦法是使母親分娩，但是當(dāng)這樣的分娩過(guò)早發(fā)生時(shí)，由于體重較低、運(yùn)動(dòng)和認(rèn)知功能障礙，出現(xiàn)各種各樣的新生兒病損，且更為嚴(yán)重的情況是生產(chǎn)中或產(chǎn)后死亡。已經(jīng)開(kāi)展了許多研究用于早期鑒別形成先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)。早期的風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)提供了兩個(gè)主要優(yōu)點(diǎn)l)它通過(guò)密切觀察婦女使得控制風(fēng)險(xiǎn)成為可能。按照AC0G指南，對(duì)處于高風(fēng)險(xiǎn)中的婦女有效地增加觀察，且對(duì)處于高風(fēng)險(xiǎn)中病例增加的觀察明顯改善了結(jié)果。由于密切觀察和使參與的孕婦接受教育及了解項(xiàng)目相結(jié)合，顯示妊娠管理計(jì)劃節(jié)約了成本。益處包括與全國(guó)平均值1.96。/。相比，由于早期先兆子癇(<34周)的出生下降，僅占所有分娩的0.6%;與全國(guó)基準(zhǔn)2.3°/。相比，早產(chǎn)減少至所有分娩的0.9%;并且與全國(guó)平均值2.9°/。相比，由于先兆子癇的低出生體重為1.3%。密切觀察允許孕婦能在分娩前到達(dá)三級(jí)醫(yī)療中心，所述的分娩在社區(qū)診所和鄉(xiāng)村基礎(chǔ)健康服務(wù)部門(mén)是一個(gè)非常重大的問(wèn)題。在那里，密切觀察確保某些病例延長(zhǎng)分娩持續(xù)時(shí)間，以降低嬰兒后果的嚴(yán)重性，所述嬰兒正處于分娩過(guò)早的風(fēng)險(xiǎn)之中。其它益處是換取了實(shí)施治療和給予藥物例如產(chǎn)前皮質(zhì)類(lèi)甾醇的時(shí)間，所述藥物能促進(jìn)胎兒器官的成熟。2)早期檢測(cè)能夠確保在一個(gè)更長(zhǎng)的周期內(nèi)通過(guò)應(yīng)用各種認(rèn)定的藥劑形成藥物干預(yù)策略，所述藥劑被認(rèn)為作用于胎盤(pán)以防止/減少所述風(fēng)險(xiǎn)。雖然對(duì)于治療來(lái)說(shuō)沒(méi)有黃金標(biāo)準(zhǔn)，但是大量的候選藥物已經(jīng)顯現(xiàn)出希望，包括低劑量阿司匹林，低分子量肝素，抗氧化劑如維生素C和E以及疏酸鎂等。在所有的這些研究中，不是所有處于風(fēng)險(xiǎn)中的婦女都能從治療千預(yù)中獲益。而在一些病例中有跡象顯示干預(yù)開(kāi)始得太晚，在其它病例中沒(méi)有明顯的證據(jù)表明是否應(yīng)用的藥物是不正確的或沒(méi)有在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間或劑量下應(yīng)用。目前的研究顯示，從目前可得的認(rèn)定的藥物治療目錄(以及在適當(dāng)?shù)倪M(jìn)程中將成為可用的藥物)中定制每名婦女的藥物干預(yù)和繼續(xù)監(jiān)測(cè)治療的有效性是有必要的。目前預(yù)防先兆子癇的最主要的藥物有(1)低劑量水楊酸(阿司匹林)，用以提高血流到達(dá)母體動(dòng)脈以補(bǔ)充氧氣和養(yǎng)分到達(dá)胎盤(pán)；(2)抗凝劑，例如發(fā)現(xiàn)低分子量肝素有效防止血栓和其在復(fù)發(fā)的和嚴(yán)重的先兆子癇中出現(xiàn)的并發(fā)癥；(3)硫酸鎂(MgSO,)，迄今為止已經(jīng)證實(shí)其僅對(duì)治療子癇有效。然而，其治療先兆子癇的有用性仍舊存在爭(zhēng)論。盡管如此，在治療婦女先兆子癇和HELLP(溶血、肝酶升高和低血小板計(jì)數(shù))的許多情況下，MgS04仍處在一線(xiàn)藥劑中。(4)抗氧化劑，如維生素C和E顯示能減少在高風(fēng)險(xiǎn)妊娠期中先兆子癇的流行。在許多這些治療中，可出現(xiàn)副作用如腦出血、神經(jīng)肌肉阻斷和復(fù)蘇困難，并引起母親和胎兒出現(xiàn)并發(fā)癥。胎盤(pán)蛋白13(PP13)是15-16，OOOMw的蛋白，所述蛋白如美國(guó)專(zhuān)利NO.6，548，306(Admon，Wa/)中所述，可以從人胎盤(pán)組織純化或通過(guò)重組技術(shù)制備，所述專(zhuān)利的內(nèi)容以參考方式引入本文。如美國(guó)專(zhuān)利NO.5，198，366(Silbe函n)中所述，純化的PP13用來(lái)開(kāi)發(fā)某些用于妊娠相關(guān)障礙檢測(cè)的測(cè)定，例如子宮內(nèi)生長(zhǎng)限制UUGR)、先兆子癇和早產(chǎn)，所述專(zhuān)利的內(nèi)容以參考方式引入本文。通過(guò)使用標(biāo)記的PP13和抗PP13多克隆抗血清，進(jìn)行放射免疫測(cè)定(RIA)和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)。PP13的氨基酸組成和序列分析揭示其與半乳凝集素(galectin)家族具有最高度的同源性，所述半乳糖凝集素家族為一組與糖殘基具有高度親和性的蛋白，所述糖殘基在連接細(xì)胞和胞外基質(zhì)中(和在分化中)的作用格外重要(Than，N.G，等人(1999))Placenta20:703-710;Than,等人，(2004)Eur.Biochem.271(6):1065-1078)。實(shí)際上，通過(guò)免疫組織化學(xué)發(fā)現(xiàn)，PP13在胎盤(pán)形成中很重要。美國(guó)專(zhuān)利NO.6，790，625公開(kāi)了在妊娠早期階段，PP13的單克隆抗體和固相免疫試驗(yàn)?zāi)軠y(cè)定母體血清PP13,所述專(zhuān)利的內(nèi)容以參考方式引入本文。W004/021012公開(kāi)了一種基于許多因素、包括PP13水平的妊娠并發(fā)癥診斷方法，所述專(zhuān)利的內(nèi)容以參考方式引入本文。發(fā)明概述本發(fā)明目的在于提供一種簡(jiǎn)單的體外測(cè)定，其將允許主治醫(yī)生能監(jiān)測(cè)給予孕婦的認(rèn)定的抗先兆子癇藥物的有效性，所述孕婦正處于先兆子癇的高風(fēng)險(xiǎn)之中或正在遭受先兆子癇。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于應(yīng)用體外或離體系統(tǒng)，從認(rèn)定的抗先兆子癇的藥物治療目錄中定制用于預(yù)防或治療先兆子癇的藥物干預(yù)。在本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供了用于測(cè)定治療孕婦先兆子癇有效性的方法，所述孕婦處于先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)之中，包括(a)測(cè)定得自治療前所述婦女身體物質(zhì)中胎盤(pán)蛋白13(PP13)的第一濃度；(b)測(cè)定得自開(kāi)始治療后所述婦女身體物質(zhì)中的PP13的第二濃度；并且(c)比較所迷第一和第二濃度與對(duì)應(yīng)的PP13正常水平，并在所述比較的基礎(chǔ)之上，確定治療的有效性。有時(shí)可參考本發(fā)明這方面作為直接方法。任選地，可持續(xù)本發(fā)明的方法直到分娩以跟蹤所述治療的有效性。在本發(fā)明說(shuō)明書(shū)中，除非另有特別說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"先兆子癇"(PE)包括所有類(lèi)型的疾病，包括有輕、重、早發(fā)作、晚發(fā)作、由子宮內(nèi)生長(zhǎng)限制(IUGR)并發(fā)的先兆子癇和HELLP。術(shù)語(yǔ)"先兆子癇的治療，，包括所有類(lèi)型用于預(yù)防先兆子癇、降低其嚴(yán)重性或治療性處理先兆子癇(例如氧過(guò)多，特別是使用藥物和食品添加劑的治療)的藥物治療。用于治療先兆子癇藥物的非限制性實(shí)施例包括抗血小板劑如低劑量阿司匹林、抗凝劑如肝素類(lèi)包括低分子量肝素，抗氧化劑如維生素C和E，硫酸鎂以及新的采用生長(zhǎng)因子如血管上皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、用CO處理等試驗(yàn)性治療。術(shù)語(yǔ)"確定治療的有效性"可以包括比較一種類(lèi)型和另一種類(lèi)型治療的有效性，比較不同條件下(氧氣水平、溫度等)同樣類(lèi)型的治療以及監(jiān)測(cè)某一特定治療隨時(shí)間的有效性。術(shù)語(yǔ)"所述婦女身體物質(zhì)"包括體液(血清、羊水、尿液、唾液)和胎盤(pán)組織，所述胎盤(pán)組織通過(guò)絨毛膜絨毛采樣(CVS)、羊膜穿刺術(shù)、胎盤(pán)活組織檢查獲得或應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化的胎盤(pán)絨毛。術(shù)語(yǔ)"PP13的正常水平，，指的是來(lái)源于正常、健康孕婦的身體物質(zhì)，所述孕婦沒(méi)有形成先兆子癇或沒(méi)有處于形成先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)之中。有時(shí)也指由分娩后獲得的胎盤(pán)外植體釋放或由培養(yǎng)的胎盤(pán)細(xì)胞釋放的PP13水平，所述胎盤(pán)細(xì)胞來(lái)自羊膜穿刺術(shù)或由來(lái)自正常、健康的孕婦絨毛膜絨毛取樣后分離的胎盤(pán)絨毛，所述孕婦沒(méi)有形成先兆子癇或沒(méi)有處在形成先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)之中。PP13的水平可以作為時(shí)間(妊娠周數(shù))的函數(shù)、作為所述婦女的遺傳和物理特征的函數(shù)以及作為測(cè)定的身體物質(zhì)的一致性的函數(shù)而變化，所述遺傳和物理特征包括身體質(zhì)量指數(shù)、孕婦年齡、種族和產(chǎn)次。因此，當(dāng)比較來(lái)源于患者的PP13測(cè)定值和PP13的正常水平時(shí)，應(yīng)該考慮這些參數(shù)。有時(shí)，將對(duì)測(cè)定的PP13值標(biāo)準(zhǔn)化使得它能與相對(duì)應(yīng)的PP13的正常水平進(jìn)行比較。處于高風(fēng)險(xiǎn)中的婦女是否形成先兆子癇可由以下因素確定l)風(fēng)險(xiǎn)因素(例如在以前妊娠中的先兆子癇或家族史)；2)血流到達(dá)母體子宮動(dòng)脈受損，由多普勒超聲波測(cè)定的較高的搏動(dòng)指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)；3)各種血清標(biāo)記物水平異常，如在前述專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)中公開(kāi)的孕婦體液中的PP13。在一個(gè)實(shí)施方案中，PP13的第一濃度選自下組(a)用于多個(gè)處于類(lèi)似先兆子癇風(fēng)險(xiǎn)中的未經(jīng)治療的孕婦身體物質(zhì)的中值PP13濃度的預(yù)定范圍；或(b)接受所述治療前該孕婦身體物質(zhì)的測(cè)定的PP13濃度。根據(jù)本發(fā)明的方法，對(duì)身體物質(zhì)中PP13變化的檢測(cè)可用于確定與其初始風(fēng)險(xiǎn)比較，該婦女的風(fēng)險(xiǎn)是否是持續(xù)的、是減少的或是增加的，并且與在各自妊娠周的多個(gè)正常和處于高風(fēng)險(xiǎn)中的婦女的身體物質(zhì)中PP13的典型值進(jìn)行比較。將所述婦女形成先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)的繼續(xù)重新定義作為一種評(píng)價(jià)認(rèn)定的藥物療法有效性的手段，以減少/消除形成先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在第一濃度和第二濃度的單次測(cè)定中進(jìn)行比較。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，在第一斜率和第二斜率之間比較，所述第一斜率是由所述婦女妊娠期間兩個(gè)或更多個(gè)連續(xù)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的多個(gè)所迷第一濃度計(jì)算得到的，且所述第二斜率是由所述婦女妊娠期間兩個(gè)或更多個(gè)連續(xù)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的多個(gè)所述第二濃度計(jì)算得到的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的多個(gè)濃度在2-3周的期間內(nèi)測(cè)定。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，多個(gè)的每一個(gè)濃度與相應(yīng)的多個(gè)的PP13正常水平進(jìn)行比較。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及胎盤(pán)組織。在體內(nèi)給予治療后，在組織培養(yǎng)基中培養(yǎng)1-7天的組織中進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案涉及將組織暴露在認(rèn)定的藥物下，并選擇最有效的一個(gè)藥物。盡管這使婦女免于不必要的藥物暴露，但她卻暴露在干預(yù)過(guò)程的風(fēng)險(xiǎn)之中。因此，在本發(fā)明方法中應(yīng)用胎盤(pán)組織通常僅適用于那些無(wú)論如何都要進(jìn)行胎盤(pán)組織介入取樣的婦女。有時(shí)候，也可以向有先兆子癇反復(fù)發(fā)作史以及被認(rèn)為處于非常高先兆子癇風(fēng)險(xiǎn)之中的婦女提供此方法。因此，本發(fā)明也包括用于確定兩種或更多種不同先兆子癇治療的相對(duì)有效性的方法，所述方法包括(a)測(cè)定得自治療前所述婦女胎盤(pán)組織外植體中PP13的第一濃度；(b)使外植體與第一種治療接觸;(c)測(cè)定所述治療后的外植體中PP13的第二濃度；(d)比較所述第一和第二濃度與對(duì)應(yīng)的PP13正常水平，且在所述比較的基礎(chǔ)之上，確定所述第一種治療的有效性；(e)用一種或多種另外治療重復(fù)步驟(a)到(d);并且(f)比較兩種或更多種不同治療的相對(duì)有效性。在一個(gè)實(shí)施方案中，在步驟(d)中確定治療的有效性，如下(a)如果第一和第二濃度之間沒(méi)有顯著性差異，所述治療是無(wú)效的；(b)如果第二濃度與所述PP13正常水平之間的差異明顯低于第一濃度與所述正常水平之間的差異，治療是有效的；(c)如果第二濃度與所述PP13正常水平之間的差異明顯高于第一濃度與所述正常水平之間的差異，所述治療是有害的。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在胎盤(pán)外植體與所述治療接觸后l-4天內(nèi)測(cè)定所述的第二濃度。本發(fā)明的第二方面涉及一種方法，所述方法用于確定兩種或更多種不同治療相對(duì)有效性的方法，所述治療用于處在先兆子癇風(fēng)險(xiǎn)之中的孕婦的先兆子癇，包括(a)提供多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的胎盤(pán)組織外植體，其用于PP13釋放以應(yīng)答不同的先兆子癇治療；(b)使婦女身體物質(zhì)與第一胎盤(pán)組織外植體接觸；(c)使所述外植體與第一種治療接觸，并且在所述第一種治療之后測(cè)定所述外植體的PP13濃度；(d)用單一或更多種另外的外植體和治療重復(fù)步驟(b)和(c);并且(e)測(cè)定在所述治療后PP13的濃度與相應(yīng)的PP13正常水平的差異，引起最小差異的治療是最有效的。有時(shí)可參考本發(fā)明這方面作為間接方法。根據(jù)本發(fā)明這方面內(nèi)容，可應(yīng)用胎盤(pán)組織外植體評(píng)價(jià)不同孕婦的身體物質(zhì)對(duì)藥物作用于標(biāo)準(zhǔn)組織外植體所產(chǎn)生效果的取代/加強(qiáng)/阻斷作用，所述胎盤(pán)組織外植體已經(jīng)就它們?cè)诟鞣N藥物存在下的應(yīng)答標(biāo)準(zhǔn)化。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，標(biāo)準(zhǔn)化胎盤(pán)外植體在使用前是冷藏的。本發(fā)明這方面也包括用于實(shí)施本發(fā)明方法的診斷試劑盒，包括(a)一套抗先兆子癇的藥物；和(b)—套標(biāo)準(zhǔn)化胎盤(pán)外植體。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒進(jìn)一步包括計(jì)算機(jī)軟件，所述計(jì)算機(jī)軟件提供計(jì)算模型用以基于所測(cè)定的PP13值確定所述藥物的有效性。本發(fā)明還包括試劑盒以測(cè)定被調(diào)節(jié)用于本發(fā)明方法的PP13。如圖l所述，在各種認(rèn)定的抗先兆子癇藥物存在下，胎盤(pán)外植體(標(biāo)準(zhǔn)的外植體或來(lái)源于婦女的外植體)，可以在條件培養(yǎng)基上生長(zhǎng)48小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。根據(jù)本發(fā)明的第一方面，就婦女的自身組織而言，比較在有/無(wú)藥物情況下條件培養(yǎng)基上PP13的釋放。根據(jù)本發(fā)明的第二方面，就其它來(lái)源的標(biāo)準(zhǔn)化組織而言，所述組織是成比例的一部分用于在婦女身體物質(zhì)不存在的情況下測(cè)定藥物的影響，而另一部分在婦女身體物質(zhì)存在的情況下測(cè)定。在婦女處于先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)之中的情況下，與沒(méi)有暴露在患者身體物質(zhì)下的外植體相比較，她的身體物質(zhì)影響PP13釋放。鑒于包括在所述患者身體物質(zhì)內(nèi)的分子，該比較使人們能評(píng)價(jià)藥物治療的價(jià)值，在所有的病例中，收集培養(yǎng)上清液、離心和測(cè)定例如體外ELISA測(cè)定，以確定從外植體中釋放到培養(yǎng)基中PP13的水平。應(yīng)用釋放的PP13水平評(píng)價(jià)所述藥物的影響，所述釋放的PP13水平被調(diào)節(jié)至蛋白水平或組織重量以及培養(yǎng)存活力，并且與對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)條件進(jìn)行比較。比較分析PP13釋放使人們能夠鑒別哪種藥物治療能使PP13的釋放恢復(fù)至其正常水平，正如未受影響的患者的水平，并且這種作用被認(rèn)為是一種所述治療性藥物作用的指征?；谏衔乃觯瑥亩鄠€(gè)現(xiàn)存方案的藥物/藥物組合的各種候選物中選擇一個(gè)是有可能的，所述現(xiàn)存方案將極有可能是有效的。根據(jù)現(xiàn)有發(fā)明，在整個(gè)妊娠期跟蹤確定處于風(fēng)險(xiǎn)之中的婦女，并且評(píng)價(jià)她的風(fēng)險(xiǎn)以驗(yàn)證不同的治療如何影響她的風(fēng)險(xiǎn)。在本發(fā)明中，使用來(lái)自身體物質(zhì)的PP13評(píng)價(jià)婦女的風(fēng)險(xiǎn)。因此，分析不是以多個(gè)病例和對(duì)照為基礎(chǔ)，而是根據(jù)個(gè)體以及她們的特定應(yīng)答而調(diào)節(jié)。通過(guò)這種方式，評(píng)價(jià)治療益處/作用以及對(duì)于個(gè)體進(jìn)行她們之間的區(qū)分是可能的，從而將試驗(yàn)和誤差過(guò)程最小化。根據(jù)三個(gè)主要妊娠期，所述術(shù)語(yǔ)"PP13異常水平"可被定義為與孕齡有關(guān)(a)妊娠6-13周高風(fēng)險(xiǎn)與PP13值低相關(guān)(PP13處于較低人群的四分位數(shù)，或在一個(gè)實(shí)施方案中所述PP13中值的倍數(shù)(MoM)低于約0.45)(b)妊娠14-25周與前一個(gè)周期的值或與處于正常風(fēng)險(xiǎn)組的孕婦的值相比，PP13值急劇上升。在一個(gè)實(shí)施方案中，PP13值增加的平均斜率為7。(c)妊娠26周-分娩PP13值高于正常(在一個(gè)實(shí)施方案中，與來(lái)源于多個(gè)正常孕婦的計(jì)算值相比，具有>1.5MoM的最高和較高的四分位數(shù))。因此，相對(duì)于其使各妊娠期的PP13水平恢復(fù)到正常水平的能力確定藥物益處。于是，在妊娠前期，根據(jù)藥物提高PP13水平/釋放到正常(更高)水平的能力確定藥物的益處。在妊娠中期，通過(guò)藥物降低PP13釋放從高(例如7)至正常(例如O)的斜率變化的陡峭能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。在妊娠后期，根據(jù)使PP13水平降低到正常的能力判斷所述益處。在下列實(shí)施例中將說(shuō)明檢測(cè)PP13如何有益于評(píng)價(jià)形成先兆子癇的增加的風(fēng)險(xiǎn)以及人們?nèi)绾问褂肞P13風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)工具來(lái)鑒別有益藥物或定制藥物干預(yù)。為了理解本發(fā)明和了解本發(fā)明在實(shí)踐中如何實(shí)施，現(xiàn)在將僅通過(guò)非限制實(shí)施例，參考相關(guān)附圖描述某些實(shí)施方案，其中圖1顯示，從絨毛膜絨毛或胎盤(pán)合胞體滋養(yǎng)層的頂端膜獲得胎盤(pán)外植體的步驟。從左至右，顯示外植體處于轉(zhuǎn)移(6小時(shí))和培養(yǎng)后36小時(shí)。培養(yǎng)物在條件培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后，收集、離心上清液，用PBS稀釋沉淀，通過(guò)夾層ELISA并使用PP13標(biāo)準(zhǔn)檢查PP13濃度以校正應(yīng)答0D至PP13濃度。根據(jù)所有點(diǎn)的線(xiàn)性回歸和外植體的蛋白水平，標(biāo)化PP13水平至孕齡。圖2是說(shuō)明PP13(pg/ml)水平隨時(shí)間變化的縱向評(píng)價(jià)曲線(xiàn)圖，所述PP13水平每2-4周由52名到期分娩正常嬰兒的婦女和5名到期左右形成嚴(yán)重先兆子癇的婦女的血液樣本測(cè)定。通過(guò)垂直線(xiàn)表明分娩時(shí)間。每條曲線(xiàn)代表多個(gè)正常和患病婦女的PP13預(yù)期血清水平。圖3是棒圖，其顯示將250名正常婦女的妊娠前期PP13水平分到四個(gè)四分位數(shù)，且隨后指定50名處于先兆子癇高風(fēng)險(xiǎn)中的婦女到不同的四分位數(shù)。根據(jù)這種方法，來(lái)自較低四分位數(shù)的婦女向較高的四分位數(shù)的移動(dòng)是所述藥物益處的指征。圖4是棒圖，其顯示在三個(gè)妊娠期婦女的PP13值，包括1179名正常孕婦、20名處于先兆子癇高風(fēng)險(xiǎn)中的婦女、40名接受維生素E給藥的正常婦女以及19名接受維生素E給藥治療的處于風(fēng)險(xiǎn)之中的婦女。圖5是棒圖，其顯示假陽(yáng)性結(jié)果的比率(例如基于PP13檢測(cè)結(jié)果表明婦女將形成先兆子癇，但是實(shí)際沒(méi)有形成的病例)，所述比率基于在妊娠前期期間PP13血清水平的測(cè)定(PP13MoM)，基于妊娠中期兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間斜率的評(píng)價(jià)(PP13斜率)，基于所述的兩次測(cè)定的組合(結(jié)合的)，以及基于具有低妊娠前期值的婦女中測(cè)定的組合(偶然的)；圖6顯示在有或沒(méi)有維生素C和鎂治療的情況下，PP13從得自具有正常妊娠或處于先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)之中的婦女的培養(yǎng)基滋養(yǎng)層中隨時(shí)間(天)的釋放。圖7-11是棒圖，其顯示PP13水平(pg/ml)的中值結(jié)果±95%的置信區(qū)間，所述PP13水平用不同的抗先兆子癇方法(如20%氧氣-氧過(guò)多)和得自處于風(fēng)險(xiǎn)中婦女的標(biāo)化胎盤(pán)外植體中的藥物獲得(12名女[點(diǎn)狀柱])以及16名正常對(duì)照婦女[空白柱]—p〈0.01;*"p<0.001。每名婦女的組織分為16個(gè)不同部分，每一個(gè)部分暴露于不同條件下，并培養(yǎng)48小時(shí)；圖7顯示6°/。和20°/。氧氣對(duì)PP13釋放的作用；圖8顯示6%和20°/。氧氣以及0.7和1.4mMMg對(duì)PP13釋放的作用；圖9顯示6%(圖9A)和20%氧氣(圖9B)，0.7和1.4mMMg以及維生素C和E對(duì)PP13釋放的作用。M-帶有0.7mMMg的條件培養(yǎng)基；MC-M+維生素C;ME-M+維生素E;醒-帶有1.4mMMg的條件培養(yǎng)基；MMC-MM+維生素C;MME-MM+維生素E;最佳候選用箭頭表示。圖10顯示6%(圖10A)和20%氧氣(圖10B),0.7mMMg以及抗凝劑肝素和抑酶肽對(duì)PP13釋放的作用。M-條件培養(yǎng)基；MH-M+肝素；MA-M+抑酶肽;MM-帶有0.7mMMg的條件培養(yǎng)基；MMH-匪+肝素；MMA-MM+抑酶肽；最佳候選用箭頭表示。圖ll顯示進(jìn)一步的結(jié)果，使用條件如圖10，圖11A-6。/。氧氣土0.7niMMgCl2;圖11B-6°/。氧氣±1.4mMMgCl2;圖11C-20。/。氧氣±0.7mMMgCh;圖11D-20。/。氧氣土l.4mMMgCl2;M-帶有0.7mMMg條件培養(yǎng)基;MH-M+肝素；MA-M+抑酶肽；MHA-M+肝素+抑酶肽；醒-帶有1.4mMMg的條件培養(yǎng)基。例舉的實(shí)施方式的詳細(xì)說(shuō)明方法除非另有說(shuō)明，在所有的試驗(yàn)中，通過(guò)固相夾層ELISA分析在母體靜脈血清中測(cè)定PP13(不知道妊娠結(jié)果)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，校正PP13水平，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)由重組PP13的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物制備。濃度以pgPP13/ml血清表示。各種臨床研究由醫(yī)療中心的內(nèi)部倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)，所有參加本研究的婦女都提供了知情同意書(shū)，允許少量采集她們的體液以用于測(cè)定PP13的水平?；颊邆儾皇请S機(jī)進(jìn)行任何治療，治療決定是基于醫(yī)院內(nèi)醫(yī)療保健標(biāo)準(zhǔn)的作為最適合每個(gè)個(gè)體患者的治療決定。所有其它細(xì)節(jié)在每一個(gè)實(shí)施例中單獨(dú)描述。實(shí)施例的方法在臨床癥狀出現(xiàn)很久以前，在評(píng)價(jià)先兆子癇風(fēng)險(xiǎn)的上下文中，基于PP13測(cè)試，可以采用根據(jù)本發(fā)明的方法測(cè)定風(fēng)險(xiǎn)(1)通過(guò)夾層ELISA用PP13標(biāo)準(zhǔn)物以及一對(duì)已知的特異單克隆抗體測(cè)定婦女PP13水平，獲得以pg/ml表示的數(shù)據(jù)，而且將該水平與正常中值±95%的置信區(qū)間水平進(jìn)行比較。然后在最佳的敏感性/特異性的平衡處(trade-off)建立截止值(cutoff)以確定鑒別婦女處于增加的風(fēng)險(xiǎn)中所需的PP13血清水平。來(lái)自預(yù)期正常中值婦女的值的明顯差異確立了風(fēng)險(xiǎn)。(2)在根據(jù)方法(1)測(cè)定PP13后，計(jì)算正常的多個(gè)中值的倍數(shù)(MoM)。通過(guò)這種方法建立了正常PP13的中值MoM。將其標(biāo)準(zhǔn)化為正常PP13值的妊娠周(GW)參考中值,并進(jìn)一步線(xiàn)性調(diào)節(jié)為母體重量或嬰兒體重指數(shù)(BMI)。(3)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)或?qū)嶒?yàn)室間使原始PP13值標(biāo)準(zhǔn)化，通過(guò)回歸在整個(gè)妊娠周內(nèi)每一個(gè)妊娠周至少40個(gè)原始PP13值的原始值確定用于每一個(gè)妊娠周正常結(jié)果的參考中值，并從回歸線(xiàn)提取參考妊娠周特異性中值。然后如下計(jì)算MoM:mom^^^其中i-妊娠周數(shù)且j-樣本中值j然后以BMI對(duì)MoMs進(jìn)行回歸，所述BMI分為BMI四分位數(shù)的4個(gè)值，并相應(yīng)地調(diào)整，由此標(biāo)化PP13結(jié)果。采用這個(gè)步驟使得實(shí)驗(yàn)室間能進(jìn)行合并/比較數(shù)據(jù)。(4)正常多個(gè)PP13MoM值定義為1.0。在妊娠前期，MoM-O.45提供了一個(gè)截止值，在該截止值下患者形成先兆子癇的可能性與>80%敏感性和>85°/。特異性的正常人群相比至少高出4倍。通過(guò)理由或受試者工作特征曲線(xiàn)(R0C)定義準(zhǔn)確性，所述曲線(xiàn)在曲線(xiàn)下面積(AUC)0.5時(shí)不提供預(yù)測(cè)，曲線(xiàn)下面積>0.75且95°乂置信區(qū)間(CI)為時(shí)提供相當(dāng)?shù)念A(yù)測(cè)，而當(dāng)曲線(xiàn)下面積>0，8且95%置信區(qū)間(CI)為時(shí)提供p<0.05或更高的非常好的預(yù)測(cè)。認(rèn)為MoM低于0.45的婦女處于增加的風(fēng)險(xiǎn)之中。在表l中，舉例說(shuō)明MoM的應(yīng)用。在妊娠前期，在5-10或11-15妊娠周內(nèi)，那些具有形成先兆子癇風(fēng)險(xiǎn)增加的婦女的PP13MoM分別為0.14和0.17，均以p<0.001顯著低于正常值。在妊娠周16-20和21-25的第二時(shí)期，各自的MoMs分別從早期非常低的值增加到0.59和1.08，且相應(yīng)的P值分別為p<0.05和p<0.39。以上實(shí)施例顯示了在妊娠前期所述MoM方法的益處，并且如下面(5)中詳細(xì)所述，在隨后的時(shí)期基于PP13隨時(shí)間的變化轉(zhuǎn)換為另一種方法的必要性。(5)測(cè)定相隔幾周實(shí)施PP13的兩次測(cè)定的PP13的斜率隨時(shí)間變化，并且計(jì)算？？13斜率-(PP13m-PP13GW1)/(GW2-GW1)，其中1和2分別代表早期和晚期時(shí)間點(diǎn)的GW，在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間測(cè)定斜率。比較多個(gè)正常孕婦的斜率提供了額外的風(fēng)險(xiǎn)參數(shù)，所述正常孕婦與處于先兆子癇高風(fēng)險(xiǎn)婦女相比較斜率更低。然后，建立截止值用于鑒別在最佳的敏感性/特異性平衡下處于風(fēng)險(xiǎn)增加之中的婦女所需的PP13斜率。(6)評(píng)價(jià)婦女似然比(LR)以形成基于模型的病變。在這種方法中，模型涉及考慮到相對(duì)于正常結(jié)果可能性的所述PP13水平，就婦女形成先兆子癇的可能性評(píng)估LR。MoM值的檢驗(yàn)顯示PP13的分布不適合高斯分布，或者不能轉(zhuǎn)化或經(jīng)過(guò)log轉(zhuǎn)化后不適合高斯分布。因此，為了模擬LRs進(jìn)行了對(duì)數(shù)回歸，假設(shè)PP13水平?jīng)Q定所述風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)數(shù)回歸提供了先兆子癇的比值比(oddsratio)。然后，可以進(jìn)行計(jì)算L(Rrp13^0Rppi3/PP是孕婦人群中先兆子癇的百分比。對(duì)于以上任何方法來(lái)說(shuō)，數(shù)據(jù)應(yīng)擬合為統(tǒng)計(jì)學(xué)模型以繪制受試者操作特征曲線(xiàn)(ROC),從而評(píng)價(jià)所述測(cè)定的截止值，所述截止值用于建立敏感性和特異性以在(先兆子癇的)病例和對(duì)照之間加以區(qū)分。發(fā)現(xiàn)MoM、斜率和LR的使用獨(dú)立于所檢查的人群和進(jìn)行試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室，而PP13濃度根據(jù)上述因素變化。因此，應(yīng)用后三者測(cè)定提供了獨(dú)立的人群標(biāo)準(zhǔn)，而所述準(zhǔn)確的濃度(pg/ml)可能在人群和實(shí)驗(yàn)室之間發(fā)生變化?？v向監(jiān)測(cè)圖2描述了正常和先兆子癇孕婦血清中PP13隨時(shí)間變化的縱向監(jiān)測(cè)結(jié)果。相應(yīng)地，人們可以鑒別幾個(gè)參數(shù)以區(qū)分正常未受影響的婦女和患有先兆子癇婦女。對(duì)于監(jiān)測(cè)藥物有效性來(lái)說(shuō)，有效的藥物可以降低在正常人群和高風(fēng)險(xiǎn)患者之間的差異。表1顯示了圖2的數(shù)據(jù)，所述數(shù)據(jù)在獲得MoM值后得到。在每個(gè)相應(yīng)的試驗(yàn)周期，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以比較正常和先兆子癇PP13MoM值。結(jié)果表明在妊娠前期和妊娠后期，而不是妊娠中期，在先兆子癇和正常孕婦之間，MoMPP13值有顯著性差異(在妊娠前期先兆子癇很少，且在妊娠后期先兆子癇很多，而在妊娠中期恢復(fù)正常)。而且，所述表格顯示與安慰劑比較，用抗凝劑治療如何能改善未經(jīng)治療而處于風(fēng)險(xiǎn)中婦女的MoM(但不是對(duì)照的)。表l:整個(gè)妊娠期的PP13MoM(*-P<0.05，**P<0,001)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>1)妊娠前期在妊娠前期，可以將PP13作為一個(gè)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)用于評(píng)價(jià)以后形成先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)圖2和表1，在妊娠前期，大多數(shù)將形成先兆子癇的婦女的PP13水平很低，而大多數(shù)具有正常結(jié)果的婦女的PP13水平較高。在總結(jié)在表2和圖3的一項(xiàng)試驗(yàn)中，在妊娠第8周，從50個(gè)繼續(xù)形成先兆子癇的病例和290個(gè)具有正常結(jié)果病例中測(cè)定PP13水平。采用妊娠期-特異中值倍數(shù)(MoM)的方法，在MoM截止值為0.45時(shí)，假陽(yáng)性率為10°/且敏感性為87%。這意味著50例先兆子癇的病例中的43例和290例正常中的29例被鑒定處于高風(fēng)險(xiǎn)中。因此，在總?cè)巳褐蠵P13的風(fēng)險(xiǎn)為5%，而在PP13低于0.45的組中，先兆子癇的發(fā)生頻率是59%(為沒(méi)有測(cè)定的人數(shù)中發(fā)生頻率的IO倍以上)。基于指定的0.45的MoM截止值，通過(guò)受試者操作特征(R0C)分析計(jì)算敏感性和特異性。在表2中對(duì)于10%的假陽(yáng)性率以百分比的形式提供敏感性值。通過(guò)兩種計(jì)算方法，確定形成病變的比值比U建模，在考慮在人群中病變流行之后，如上面已經(jīng)描述的計(jì)算比值比，和2)四分位數(shù)評(píng)價(jià)程序，基于比較最低四分位數(shù)(25%)和第3在表2中提供了這兩種方法計(jì)算的結(jié)果，并且在圖3提供了四分位數(shù)方法的說(shuō)明。根據(jù)圖3，跟蹤在妊娠第8周已經(jīng)進(jìn)行測(cè)試的婦女直到分娩。290名正常分娩。把她們分成四組使得能鑒別PP13的4個(gè)四分位數(shù)和它們?cè)诿總€(gè)四分位數(shù)相對(duì)應(yīng)的PP13濃度，所述相應(yīng)的PP13濃度分別是0-75pg/ml，76-139pg/ml，140-229pg/ml和229pg/ml以上。然后，根據(jù)她們的PP13值，分配先兆子癇的病例到4個(gè)四分位數(shù)。圖3顯示，在所有繼續(xù)形成先兆子癇的婦女中的86%處于較低的四分位數(shù)，8%處于第2四分位數(shù)，4%處于第3四分位數(shù)，而2%處于第4四分位數(shù)。實(shí)施例1:評(píng)價(jià)通過(guò)低劑量阿司匹林治療的有效性如果在上述指定的周期應(yīng)用藥物治療，期望相應(yīng)于婦女降低的形成先兆子癇的可能性，使她的PP13水平恢復(fù)到第2和第3甚至第4四分位數(shù)。在表2中所描述的實(shí)施例中，具有形成先兆子癇風(fēng)險(xiǎn)增加的婦女從妊娠第8周開(kāi)始進(jìn)行阿司匹林100mg/kg(低劑量阿司匹林)口服治療2周或3周。其表明足夠早期給予阿司匹林能減少隨后形成先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)。因此，接受治療的婦女期望能降低形成先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)，并且改善她們的結(jié)果。如表2中所示，在試驗(yàn)中，在第8周150名婦女經(jīng)測(cè)試認(rèn)為處于高風(fēng)險(xiǎn)，50名未經(jīng)治療，50名經(jīng)阿司匹林治療兩周和50名經(jīng)阿司匹林治療三周。結(jié)果顯示，在未經(jīng)治療組，大多數(shù)婦女仍在低PP13四分位數(shù)。在接受治療2或3周后的小組，與第1四分位數(shù)相比，在第2和第3四分位數(shù)的患者數(shù)量明顯增加。因此，她們的預(yù)期風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算值降低。與未經(jīng)治療組相比，分娩結(jié)果符合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)，其中先兆子癇病例的數(shù)目在治療組中明顯降低。相應(yīng)地，從第1到第2和第3四分位數(shù)的頻率變化可以作為一種措施用于評(píng)價(jià)形成先兆子癇風(fēng)險(xiǎn)的降低和治療的有效性。表2:分配到PP13四分位數(shù)患者<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>當(dāng)特異性固定為90%時(shí)(95%CI:86%-93%)，相應(yīng)于29/292的假陽(yáng)性病例(10%)，敏感性的百分比值如上所示。實(shí)施例2:評(píng)價(jià)通過(guò)抗凝藥物治療的有效性認(rèn)為處于風(fēng)險(xiǎn)增加之中的婦女從妊娠第8周每日給予抗凝劑治療(低分子量肝素，抑酶肽或其它)，持續(xù)2周。發(fā)現(xiàn)她們的PP13MoM分別增加到0.48(妊娠周11-15)(P<0.05)和0.73(妊娠周16-20)，而后者實(shí)際上與正常水平難以區(qū)別(l士O.29，中值正常MoM土9W置信區(qū)間)。正常風(fēng)險(xiǎn)婦女的PP13MoM不受影響。治療婦女相應(yīng)的結(jié)果是在整個(gè)周期，沒(méi)有接受治療組，所有5名具有風(fēng)險(xiǎn)增加的婦女形成嚴(yán)重先兆子癇，而在治療組僅一名形成嚴(yán)重先兆子癇，一名輕度先兆子癇和一名未受影響。實(shí)施例3:用胎盤(pán)提取物評(píng)價(jià)藥物益處評(píng)價(jià)藥物益處的一種備用方法是通過(guò)使用胎盤(pán)絨毛(細(xì)胞或外植體)，所述胎盤(pán)絨毛通過(guò)絨毛膜絨毛取樣獲自妊娠9-10周的婦女。胎盤(pán)細(xì)胞/外植體培養(yǎng)48小時(shí)，并通過(guò)ELISA(以如圖1描述同樣的方式)在培養(yǎng)基中測(cè)定PP13。結(jié)果如下表3所示。表3顯示先兆子癇的3個(gè)病例(病例#3，4，5)，在6%的氧氣(含氧量正常的)的情況下，與正常婦女(病例#1和2)的14，100和15，700相比較，釋放量明顯減少(3,010，3，500和6,300)。在與抗氧化劑維生素C(其已經(jīng)顯示出在治療高風(fēng)險(xiǎn)婦女中的希望)培養(yǎng)48小時(shí)后，在全部3名高風(fēng)險(xiǎn)婦女中，PP13釋放水平恢復(fù)幾乎至正常水平，分別達(dá)到12,030，9，230和15,790(即高3-4倍)。在20°/。氧氣(氧過(guò)多)情況下，由于氧氣自身(與6%氧氣相比3,010，3，500和6，300pg/ml，大約2倍)而沒(méi)有維生素C額外的作用，PP13釋放分別增加到5，000，4，300和7，900。正如所見(jiàn)，不是對(duì)所有用這種方式治療的個(gè)體婦女均顯示同樣的效果，其表明可進(jìn)一步利用本發(fā)明方法的潛力，以考慮中止治療、增加藥物水平或針對(duì)個(gè)體患者選擇不同的治療。盡管應(yīng)用胎盤(pán)提取物評(píng)價(jià)先兆子癇風(fēng)險(xiǎn)使婦女免于接受不必要的藥物，但是她卻暴露于風(fēng)險(xiǎn)干預(yù)過(guò)程。因此，這僅適用于那些無(wú)論如何都要經(jīng)歷胎盤(pán)組織介入取樣的婦女。表3:從妊娠9-IO周培養(yǎng)的絨毛膜絨毛的PP13釋放<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>2)妊娠前期到妊娠中期的斜率實(shí)施例4:通過(guò)妊娠前期-妊娠中期斜率評(píng)價(jià)藥物益處如圖2所述，在妊娠前期到妊娠中期期間，在正常婦女中PP13水平僅適度改變?？梢酝ㄟ^(guò)以下公式計(jì)算斜率Slope-(PP13(妊媒中期))一PP13(妊嫌前期)/GW(妊嫌中期)一GW(妊嫌前期)正常vs先兆子癇斜率如圖4所示，在正常和先兆子癇之間的截止值達(dá)到80%敏感性時(shí)斜率為3.5。該斜率有助于進(jìn)一步檢驗(yàn)先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)。如圖4所示，在6-10周先兆子癇的病例中，PP13水平比正常病例PPU水平低，早期應(yīng)用維生素E使PP13釋放加倍，趨向于正常水平，而不影響正?；颊叩腜P13釋放。在16-20周，證明維生素E沒(méi)有明顯作用。在24-28周，當(dāng)先兆子癇婦女PP13釋放高于正常婦女時(shí)，維生素E減少PP13釋放恢復(fù)到正常水平。圖5顯示，如何通過(guò)使用妊娠前期中PP13MoM水平和妊娠前期到妊娠中期的斜率的結(jié)合分析減少固定預(yù)測(cè)敏感性的假陽(yáng)性水平。本圖表明妊娠前期的MoM和斜率給每一個(gè)15%的假陽(yáng)性率提供了80°/。的敏感性。結(jié)合考慮兩個(gè)參數(shù)，即妊娠前期的MoM和妊娠前期到妊娠中期的斜率，通過(guò)結(jié)合分析使假陽(yáng)性率減少到6%而不損失敏感性。在一個(gè)偶然方法中(隨機(jī)性)，僅對(duì)妊娠前期MoM值低的婦女再次進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合分析顯示對(duì)于同樣的敏感性，假陽(yáng)性率是8%。因此，似乎對(duì)于在第一次試驗(yàn)中被認(rèn)為處于風(fēng)險(xiǎn)中的婦女，妊娠中期的測(cè)定是必需的。如果通過(guò)兩次測(cè)試建立風(fēng)險(xiǎn)后，處于高風(fēng)險(xiǎn)中的該婦女每天通過(guò)給予抗氧化劑維生素E接受治療給藥，且所治療的婦女具有更低的斜率(圖4)。從相對(duì)大的置信水平，人們能了解不是所有婦女以同樣方式受到影響。因此，進(jìn)一步應(yīng)用本方法使人們能了解通過(guò)藥物如何降低斜率以及其與降低形成病變的風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)，從而考慮到中斷治療、增加藥物水平或針對(duì)個(gè)體患者選擇不同的治療。結(jié)合方法和隨機(jī)方法表明，僅對(duì)于處于風(fēng)險(xiǎn)中的婦女來(lái)說(shuō)，多次測(cè)試是必要的，而低風(fēng)險(xiǎn)患者可以避免重復(fù)測(cè)試。實(shí)施例5:通過(guò)滋養(yǎng)層評(píng)價(jià)藥物益處通過(guò)查看得自羊水的滋養(yǎng)層來(lái)監(jiān)測(cè)受試者。例如，滋養(yǎng)層可在培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)2周，所述培養(yǎng)條件帶有或不帶有1.4mMMgCl2和維生素C的耝合。與得自正常婦女(其PP13釋放實(shí)際上保持不變)的胚胎滋養(yǎng)層相比，來(lái)自形成先兆子癇婦女的培養(yǎng)物中的滋養(yǎng)層顯示了逐曰增加的PP13釋放(表明增加的形成先兆子癇風(fēng)險(xiǎn))(圖6)。與未處理的滋養(yǎng)層相比，與Mg和維生素C培養(yǎng)的滋養(yǎng)層對(duì)正常培養(yǎng)物沒(méi)有影響，但卻防止了增加的PP13釋放，其表明了確定治療個(gè)體病例有效性/無(wú)效性的一種方法。再一次地，預(yù)期一些病例將沒(méi)有應(yīng)答，因此可以通過(guò)繼續(xù)、中止或用其它不同藥物替代，采用所述步驟定制治療。3)妊娠后期實(shí)施例6:評(píng)價(jià)氧氣的益處通過(guò)胎盤(pán)(絨毛)外植體獲得下列結(jié)果，所述胎盤(pán)外植體來(lái)源于16例正常婦女，12例先兆子癇以及3例HELLP婦女，其在6%或20%02下在DMEM/F12中培養(yǎng)48小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后，收集條件培養(yǎng)基，測(cè)定總蛋白和PP13。PP13釋放與總蛋白有關(guān)。由圖7可見(jiàn)，在高氧水平(20%)下的培養(yǎng)物中，氧氣對(duì)來(lái)自正常婦女胎盤(pán)提取物的PP13釋放沒(méi)有影響，但是明顯降低來(lái)自先兆子癇婦女的胎盤(pán)提取物的PP13釋放，甚至在來(lái)自HELLP病例的胎盤(pán)提取物中更是這樣，其表明氧氣對(duì)胎盤(pán)組織有害。實(shí)施例7:通過(guò)氧氣和Mg組合評(píng)價(jià)益處除兩個(gè)氧氣水平之外，使用鎂的兩個(gè)不同水平，即0.7mM和1.4mM對(duì)在實(shí)施例6中檢測(cè)的外植體再次進(jìn)行測(cè)定。由圖8可見(jiàn)，在高氧氣(20。/。)和MgCl2(1.4mM)水平下的培養(yǎng)物中，來(lái)自正常孕婦的外植體沒(méi)有受到影響，但是在20%而不是6%氧氣的條件下，鎂使得先兆子癇外植體恢復(fù)到正常水平。通過(guò)20%02使HELLP病例中PP13釋放水平降低到正常水平以下。實(shí)施例8:通過(guò)氧氣、Mg和維生素C和E的組合評(píng)價(jià)益處加入維生素C和E，重復(fù)在上述實(shí)施例6和7中所描述的試驗(yàn)。由圖9可見(jiàn)，在6%氧氣條件下，特別是在提高鎂的條件下，維生素的加入有助于將PP13恢復(fù)到正常水平。注意后者的組合也影響HELLP病例。實(shí)施例9:通過(guò)氧氣、Mg和抗凝素(anticoagulent)組合評(píng)價(jià)益處加入各種抗凝素，重復(fù)上述實(shí)施例6和7中描述的試驗(yàn)。由圖IO可見(jiàn)，加入抗凝素、特別是如果它們與鎂組合是有益的。實(shí)施例10:通過(guò)氧氣、Mg和抗凝劑組合評(píng)價(jià)益處在本實(shí)施例中，在先前的實(shí)施例的所述條件下，在體外測(cè)試肝素和抑酶肽對(duì)來(lái)自正常、先兆子癇和HELLP胎盤(pán)的絨毛外植體的PP13釋放的影響。結(jié)果在圖11A-11D中顯示。在圖11A中，在正常條件(含氧量正常(6。/。)和正常Mg(0.7mM))下培養(yǎng)外植體。來(lái)源于先兆子癇和HELLP患者外植體的PP13釋放明顯高于來(lái)源于正常對(duì)照的PP13釋放。在圖11B中，在含氧量正常和提高的Mg(1.4mM)情況下導(dǎo)致HELLP患者的PP13釋放增加。在圖11C中，在(氧過(guò)多(20%)和正常Mg)條件下，與含氧量正常相比，來(lái)自先兆子癇的外植體中PP13釋放明顯減少，而對(duì)照組保持同樣水平。注意到從HELLP患者的PP13釋放幾乎完全停止。增加鎂(圖IID)致使HELLP患者的PP13釋放增加。關(guān)于抗凝劑，在含氧量正常和高M(jìn)g(圖11B)條件下，抑酶肽使來(lái)源于HELLP患者外植體的PP13釋放幾乎恢復(fù)到正常。在氧過(guò)多和正常Mg(圖11C)條件下，肝素使PP13幾乎恢復(fù)到正常。因此，本發(fā)明的方法可用于預(yù)測(cè)哪一種治療組合將在克服形成先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)方面是最有效的。非常重要的是注意到，在上述所有描述的實(shí)施例中，并不是以與先兆子癇同樣的方式對(duì)先兆子癇的嚴(yán)重亞型-HELLP產(chǎn)生影響。因此，通過(guò)使用外植體系統(tǒng)體外測(cè)試作用，所述外植體系統(tǒng)可以有助于選擇適當(dāng)?shù)闹委煟约搬槍?duì)個(gè)體婦女和疾病評(píng)價(jià)適當(dāng)?shù)闹委煛Ｓ捎诳梢酝ㄟ^(guò)冷藏儲(chǔ)存外植體，有可能使它們標(biāo)準(zhǔn)化而用于進(jìn)一步評(píng)價(jià)和定制藥物干預(yù)。實(shí)施例11:通過(guò)給予VEGF評(píng)價(jià)益處發(fā)現(xiàn)sfltl，血管EGF(VEGF)受體的一種可溶形式，在妊娠后期的婦女血清中具有較高水平，所述婦女在5星期后持續(xù)形成先兆子癇。該分子與天然血細(xì)胞受體竟?fàn)幖に豓EGF。試驗(yàn)?zāi)Ｐ鸵呀?jīng)顯示，給予VEGF能防止/減少先兆子癇的嚴(yán)重性。體外跟蹤治療益處的一種途徑是檢測(cè)PP13水平，如果降低至正常水平，其可以用來(lái)評(píng)價(jià)治療的益處。4)縱向監(jiān)測(cè)實(shí)施例12下列是預(yù)見(jiàn)性實(shí)施例，其描述了在整個(gè)妊娠期如何使用本發(fā)明方法跟蹤婦女先兆子癇風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于多個(gè)未受影響(正常)婦女來(lái)說(shuō)，定義PP13水平的MoM為1。如果在第10周(妊娠前期)測(cè)試母體血清，并且如在各自妊娠周的統(tǒng)計(jì)學(xué)的多個(gè)孕婦所限定的，婦女的PP13水平對(duì)應(yīng)為0.11MoM，則確定該婦女處于高先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)之中。PP13MoM-0.45是80%特異性和85%敏感性的截止值。從這個(gè)模型，發(fā)現(xiàn)她的似然比(LR)高于正常(5%)9倍，或處于45°/。的風(fēng)險(xiǎn)之中。如果在兩周的治療后，MoM沒(méi)有越過(guò)截止值-她仍然處在高風(fēng)險(xiǎn)之中。然后，在4周后(已經(jīng)妊娠中期，妊娠期=16周)再次檢測(cè)她的PP13。她的MoM現(xiàn)在是1.24，在兩點(diǎn)之間計(jì)算的斜率是7，而斜率截止值是3.0。因此，認(rèn)定這名婦女處于持續(xù)的高風(fēng)險(xiǎn)之中。從這個(gè)模型，計(jì)算她的LR是高于正常(風(fēng)險(xiǎn)=42%)8.4倍。因此，她的平均風(fēng)險(xiǎn)是43.5°/?！，F(xiàn)在評(píng)價(jià)用抗氧化劑的另一項(xiàng)治療，她的MoM恢復(fù)到1.0，表明現(xiàn)在她的風(fēng)險(xiǎn)已經(jīng)降低。從這個(gè)模型來(lái)看，她的LR-2(對(duì)應(yīng)10%風(fēng)險(xiǎn))。然后，在第30周(妊娠后期)第三次對(duì)她進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)她的MoM是1.5，而那一周的高風(fēng)險(xiǎn)截止值是1.4MoM。相應(yīng)地，她的LR-8.5倍于正常，且她的風(fēng)險(xiǎn)仍然是42.5%。現(xiàn)在，通過(guò)抗氧化劑再次對(duì)她治療，并在34周再次檢測(cè)。然后，發(fā)現(xiàn)她的MoM下降到1.2(低于截止值)。她的LR-2，風(fēng)險(xiǎn)是10%?，F(xiàn)在繼續(xù)治療，且她到期分娩且血壓為85/135和蛋白尿1+(不認(rèn)為屬于先兆子癇)。實(shí)施例13.外植體標(biāo)準(zhǔn)化以測(cè)定各種藥物的作用(預(yù)測(cè)性實(shí)施例)通過(guò)妊娠前期標(biāo)記物如PP13或PP13結(jié)合多普勒儀，鑒定婦女處于先兆子癇的高風(fēng)險(xiǎn)之中-外植體如何有助于對(duì)她定制預(yù)防性治療？方案l:通過(guò)不同藥物簡(jiǎn)單直接定制我們已經(jīng)對(duì)用于妊娠前期外植體或來(lái)自分娩之后的外植體的培養(yǎng)條件進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。外植體可以是由分娩后的患者制成或來(lái)自妊娠10-12周通過(guò)絨毛膜絨毛取樣(CVS)獲得的那些樣本，或如病例那樣的其它胎盤(pán)活組織檢查。標(biāo)準(zhǔn)化指限定的中值存活力指數(shù)，外植體中蛋白含量，釋放到培養(yǎng)基中的總蛋白，在外植體中PP13含量和從PP13外植體的釋放等。體外藥物作用是從24小時(shí)后到7天，應(yīng)用于培養(yǎng)基的藥物對(duì)來(lái)自胎盤(pán)外植體的PP13釋放的作用。所述作用與在不加藥物情況下所測(cè)得的基線(xiàn)釋放比較。因此，治療指數(shù)是當(dāng)應(yīng)用到外植體時(shí)，所述藥物的體外相對(duì)有效性，如上所述，在使存活力，蛋白含量等標(biāo)準(zhǔn)化后，通過(guò)帶有(PP13D1)和不帶有(PP13。)藥物的PP13釋放之間的差異，通過(guò)下列方程所測(cè)定的(PP13。-PP13m)/PP13Q,假設(shè)所有其它參數(shù)是相同的。重要的是注意到，在妊娠前期(妊娠6-13周)，患病的患者中的PP13低于正常人。因此，治療指數(shù)是恢復(fù)PP13釋放，計(jì)算為提高PP13釋放的藥物。在妊娠后期(妊娠26周和以上)，先兆子癇患者中的PP13高于正常人，于是，治療指數(shù)是降低PP13釋放至正常。根據(jù)體外治療指數(shù)，可以選擇一種藥物或藥物組合來(lái)進(jìn)行體內(nèi)干預(yù)藥物治療。隨訪(fǎng)在給患者選擇服用藥物之后，推薦通過(guò)測(cè)定血中PP13進(jìn)行每?jī)芍芤淮悟?yàn)血隨訪(fǎng)，并且進(jìn)行計(jì)算。PP13斜率s((PP13GW2-PP13GW1)/(GW廣GWi)，其中GWi和GWa分別代表在PP13檢測(cè)的第一和第二時(shí)期的妊娠周。公式的結(jié)果被定義為斜率，計(jì)算所述斜率用于每個(gè)個(gè)體。對(duì)于先兆子癇病例與正常病例，將該斜率與典型中值斜率進(jìn)行比較。如果對(duì)于第一時(shí)期(妊娠6-13周)正常斜率是3.1，而且先兆子癇的斜率是10，在治療后每個(gè)測(cè)試與治療前比較，斜率是降低的，那么表明治療是有效的。否則，推薦轉(zhuǎn)換使用那些治療指數(shù)次好的藥物。方案2:定制先兆子癇"類(lèi)型"在妊娠前期，我們測(cè)定婦女體液中PP13的水平非常低，表明她處于先兆子癇增加的風(fēng)險(xiǎn)之中。我們證實(shí)多種其它特征(如低多普勒脈動(dòng)指數(shù)或低PAPP-A)基于這些特征-我們表征患者為先兆子癇組A，所謂先兆子癇組A是對(duì)應(yīng)先兆子癇的一種類(lèi)型(如早期先兆子癇發(fā)作)。另一組患者在妊娠前期僅PP13低，但沒(méi)有其它變化，被指定為B組。隨后，發(fā)現(xiàn)藥物l對(duì)類(lèi)型A的體外外植體有作用，而組B的外植體治療指數(shù)表明僅藥物2有效。相應(yīng)地，一旦鑒別患者的標(biāo)志物屬于組A，那么選擇藥物l治療組l，反之亦然。隨訪(fǎng)在給患者選擇服用藥物之后，如上所述，為了確定斜率實(shí)施每?jī)芍芤淮蜳P13驗(yàn)血測(cè)試，評(píng)論-現(xiàn)在，我們從先兆子癇多樣性中知道了什么，本方法至少使合適的治療手段的目錄明顯縮窄到針對(duì)一組人的1-2個(gè)候選藥物。這看上去更適合IVF病例，所述病例中要對(duì)每一個(gè)婦女實(shí)許多試驗(yàn)。因此，可以應(yīng)用一大套標(biāo)志物調(diào)整"患者類(lèi)型"(組)。方案3:間接方法我們使用于來(lái)自分娩后已知結(jié)果的患者A的胎盤(pán)外植體的生長(zhǎng)條件標(biāo)準(zhǔn)化。我們發(fā)現(xiàn)藥物對(duì)這些組的外植體有效。測(cè)定許多藥物后，形成了藥物有效性的標(biāo)準(zhǔn)。在來(lái)自正常人的血清和來(lái)自先兆子癇提高風(fēng)險(xiǎn)的患者血清存在下，我們將這些標(biāo)準(zhǔn)化外植體與它們的標(biāo)準(zhǔn)化藥物有效性指數(shù)暴露于各自藥物之下(表l)。*我們?cè)谠O(shè)定的暴露于藥物之下以及設(shè)定的與正?；颊哐宓呐囵B(yǎng)下，發(fā)現(xiàn)了最有效的藥物，并在來(lái)自被鑒定處在先兆子癇風(fēng)險(xiǎn)增加的婦女的血清存在下比較效果。*我們選擇受患者血清損傷最小的藥物并在患者體內(nèi)應(yīng)用此藥物。*其為受患病患者血清損傷較小的藥物，并對(duì)該患者定制它。這個(gè)方案假定處于先兆子癇增加的風(fēng)險(xiǎn)之中，所述患者體液含有各種因子如sflit，estriol,shbg或其它損傷/提高藥物有效性以及甚至可能引起先兆子癇的因素。如果這樣，當(dāng)與患者的樣本同時(shí)應(yīng)用時(shí)，那些對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)外植體看上去有益的藥物可能無(wú)效。實(shí)際的試驗(yàn)結(jié)果在下表4中顯示?？梢钥闯?，來(lái)自處于先兆子癇高風(fēng)險(xiǎn)患者的血清使許多類(lèi)型的治療的受到嚴(yán)重抑制。本發(fā)明方法允許對(duì)治療進(jìn)行選擇，更有可能證明有效性。表4如在胎盤(pán)外植體中通過(guò)測(cè)定PP13向培養(yǎng)基的釋放所評(píng)價(jià)的患者血清對(duì)于抗先兆子癇藥物治療有效性的阻斷影響<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>權(quán)利要求1.用于測(cè)定治療孕婦先兆子癇有效性的方法，所述孕婦處于先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)之中，包括(a)測(cè)定得自治療前所述婦女身體物質(zhì)中胎盤(pán)蛋白13(PP13)的第一濃度；(b)測(cè)定得自開(kāi)始治療后所述婦女身體物質(zhì)中的PP13的第二濃度；并且(c)比較所述第一和第二濃度與對(duì)應(yīng)的PP13正常水平，并在所述比較的基礎(chǔ)之上，確定治療的有效性。2.權(quán)利要求l的方法，其中所述PP13的第一濃度選自(a)多個(gè)未經(jīng)治療的孕婦中所述身體物質(zhì)的中值PP13濃度的預(yù)定范圍，所述孕婦處于先兆子癇的類(lèi)似風(fēng)險(xiǎn)之中；或(b)接受所述治療之前的所述孕婦身體物質(zhì)的測(cè)定的PP13濃度。3.權(quán)利要求l的方法，其中所述身體物質(zhì)選自血清、羊水、尿、唾液、胎盤(pán)組織和標(biāo)準(zhǔn)的胎盤(pán)絨毛。4.權(quán)利要求1的方法，其中所述比較是在單次測(cè)定的所述第一濃度和所述第二濃度之間進(jìn)行的。5.權(quán)利要求1的方法，其中所述比較是在第一斜率和第二斜率之間進(jìn)行的，所述第一斜率是由所述婦女妊娠期間兩個(gè)或更多個(gè)連續(xù)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的多個(gè)所述第一濃度計(jì)算得到的，且所述第二斜率是由所述婦女妊娠期間兩個(gè)或更多個(gè)連續(xù)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的多個(gè)所述第二濃度計(jì)算得到的。6.權(quán)利要求l的方法，用于測(cè)定兩種或更多種不同的先兆子癇治療的相對(duì)有效性，所述方法包括(a)測(cè)定得自治療前所述婦女胎盤(pán)組織外植體中PP13的第一濃度；(b)使外植體與第一種治療接觸；(c)測(cè)定所述治療后的外植體中PP13的第二濃度；(d)比較所述第一和第二濃度與對(duì)應(yīng)的PP13正常水平，且在所述比較的基礎(chǔ)之上，確定所述笫一種治療的有效性；(e)用一種或多種另外治療重復(fù)步驟(a)到(d);并且(f)比較兩種或更多種不同治療的相對(duì)有效性。7.權(quán)利要求6的方法，其中在胎盤(pán)外植體與治療接觸后的1-4天內(nèi)測(cè)定所述第二濃度。8.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟(d)中，如下確定治療的有效性(a)如果第一和笫二濃度之間沒(méi)有顯著性差異，所述治療是無(wú)效的；(b)如果第二濃度與所迷PP13正常水平之間的差異明顯低于第一濃度與所述正常水平之間的差異，治療是有效的；(c)如果第二濃度與所述PP13正常水平之間的差異明顯高于第一濃度與所述正常水平之間的差異，所述治療是有害的。9.權(quán)利要求8的方法，其中多個(gè)所迷濃度的每一個(gè)與對(duì)應(yīng)的多個(gè)PP13的正常水平比較。10.權(quán)利要求8的方法，其中在2-3周的周期內(nèi)測(cè)定多個(gè)濃度。11.權(quán)利要求l的方法，其中所述比較基于中值的倍數(shù)(MoM)、斜率和婦女似然比(LR)，受試者操作特征曲線(xiàn)(R0C)用于建立敏感性和特異性的截止值。12.權(quán)利要求1的方法，其中所述比較基于正常和患者群體的孕婦，所述孕婦被分為多個(gè)四分位數(shù)，而且將PP13濃度分在合適的四分位數(shù)內(nèi)。13.測(cè)定用于孕婦先兆子癇的兩種或更多種不同治療相對(duì)有效性的方法，所述孕婦處在先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)之中，包括(a)提供多個(gè)對(duì)于應(yīng)答不同的先兆子癇治療釋放PP13而標(biāo)準(zhǔn)化的胎盤(pán)組織外植體；(b)使婦女身體物質(zhì)與第一胎盤(pán)組織外植體接觸；(c)使所述外植體與第一種治療接觸，并且在所述第一種治療之后測(cè)定所述外植體的PP13濃度；(d)用一種或更多種另外的外植體和治療；重復(fù)步驟(b)和(c)并且(e)測(cè)定在所述治療后PP13的濃度與相應(yīng)的PP13正常水平之間的差異，引起最小差異的治療是最有效的。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)化的胎盤(pán)外植體是冷藏的。15.用于實(shí)施權(quán)利要求13的方法的診斷試劑盒，包括(a)—套抗先兆子癇的藥物；和(b)—套標(biāo)準(zhǔn)化的胎盤(pán)外植體。16.根據(jù)權(quán)利要求15的試劑盒，進(jìn)一步包括計(jì)算機(jī)軟件，所述計(jì)算機(jī)軟件提供一種計(jì)算模型用以基于所測(cè)定的PP13值確定所述藥物的有效性。全文摘要用于測(cè)定治療孕婦先兆子癇有效性的方法，所述孕婦處于先兆子癇的風(fēng)險(xiǎn)之中，所述方法包括(a)測(cè)定來(lái)自治療前的婦女的身體物質(zhì)中胎盤(pán)蛋白13(PP13)的第一濃度。(b)測(cè)定來(lái)自開(kāi)始治療后的婦女的身體物質(zhì)中PP13的第二濃度。(c)比較第一和第二濃度與各自所對(duì)應(yīng)的PP13的正常水平，基于所述比較，確定所述治療的有效性。還公開(kāi)了用于實(shí)施本方法的診斷試劑盒。文檔編號(hào)G01N33/68GK101416060SQ200780008753公開(kāi)日2009年4月22日申請(qǐng)日期2007年2月1日優(yōu)先權(quán)日2006年2月2日發(fā)明者H·梅里申請(qǐng)人:診斷技術(shù)有限公司