專利名稱：：在氧化物層上形成鈍化表面的中間體和方法及由其產(chǎn)生的產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本申請(qǐng)一般涉及表面改性技術(shù)，并具體涉及在氧化物層上形成鈍化表面的中間體和方法及由其產(chǎn)生的產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
：實(shí)時(shí)DNA測(cè)序需要探詢由聚合酶引起的各個(gè)并入事件，優(yōu)選在表面上。通常，這些并入事件通過(guò)檢測(cè)在并入的核苷上作為單個(gè)分子的標(biāo)記物(即單分子檢測(cè))來(lái)鑒定。最常見的標(biāo)記物是熒光染料。被標(biāo)記的核苷在表面上甚至很小的非特異性吸收都會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的陽(yáng)性信號(hào)。因此，底物與表面的結(jié)合應(yīng)當(dāng)最小化。仍然亟需改進(jìn)的鈍化技術(shù)，其將允許形成薄的鈍化層并使表面顯示出對(duì)生物分子的最小吸收。概述根據(jù)第一實(shí)施方案，提供了改性載體表面的方法，其包括使表面與金屬試劑接觸，其中所述表面包含羥基和/或氧化物陰離子基團(tuán)；以及使金屬試劑與表面上的羥基和/或氧化物陰離子基團(tuán)反應(yīng)以形成改性表面；ii其中金屬試劑具有下式所示的結(jié)構(gòu)Y(L-Pol)m其中Y是過(guò)渡金屬、^!或鋁；L是氧、硫、硒或胺；每一"Pol"基團(tuán)獨(dú)立地表示聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物；并且m是整數(shù)。該實(shí)施方案所述的方法還能夠包括使改性表面與多價(jià)試劑接觸，所述多價(jià)試劑包含鈍化部分和與Y反應(yīng)或與Y形成配合物的多個(gè)官能團(tuán)，其中鈍化部分選自取代的聚乙二醇、未取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物和取代的碳氟化合物。根據(jù)第二實(shí)施方案，提供了如下的式(I)、式(n)或式(ni)所表示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>則其中X是O、N或亞曱基基團(tuán)；R3是聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物；并且R4是N(R2)4或M，其中M是Li、Na、K或Cs并且其中R2是烷基基團(tuán)。根據(jù)第三實(shí)施方案，提供了包含與鈍化劑軛合的金屬絡(luò)合劑的化合物，其中所述金屬絡(luò)合劑選自羧酸酯、多巴胺和anachelin;并且其中所述鈍化劑選自聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物和取代的碳氟化合物。根據(jù)第四實(shí)施方案，提供了下式表示的化合物Y(L-Pol)m其中Y是過(guò)渡金屬、鎂或鋁，L是氧、硫、硒或胺，每一"Pol"基團(tuán)獨(dú)立地表示聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物，并且m是整數(shù)。根據(jù)第五實(shí)施方案，提供了方法，其包括使下式的第一化合物Y(OR6)m與一個(gè)或多個(gè)第二化合物反應(yīng)，每一所述第二化合物如下所示Pol畫LH以形成下式的金屬酯化合物Y(L-Pol)m其中Y是過(guò)渡金屬、鎂或鋁，R6是d-Q烴，L是氧、硫、硒或胺，每一"Pol"基團(tuán)獨(dú)立地表示聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物，并且m是整數(shù)。根據(jù)第六實(shí)施方案，提供了固體載體，其包含包含硅、鋁、鍺、鎵、銦、鎂或錫的氧化物的氧化物層；和在氧化物層的表面上的部分，該部分具有如下的式(I)或式(II)所示的結(jié)構(gòu)3(n》^、"I其中X是O、N或亞曱基基團(tuán)；Y是過(guò)渡金屬、鎂或鋁；L是氧、硫、硒或胺或L是金屬絡(luò)合劑；每一"Pol"基團(tuán)獨(dú)立地表示聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物；并且R3是聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物；并且其中氧原子在氧化物層中與相同的或不同的硅、鋁、鍺、鎵、銦或錫原子結(jié)合。所述金屬絡(luò)合劑的非限制性實(shí)例包括羧酸酯、多巴胺和anachelin。根據(jù)第七實(shí)施方案，提供了固體載體，其包含包含硅、鋁、鍺、鎵、銦、鎂或錫的氧化物的氧化物層；與氧化物層結(jié)合的選自過(guò)渡金屬、鎂和鋁的金屬原子；以及包含鈍化部分的鈍化試劑，所述鈍化部分選自取代的聚乙二醇、未取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物和取代的碳氟化合物；其中鈍化試劑在多個(gè)位置與一個(gè)或多個(gè)金屬原子共價(jià)結(jié)合或形成配合物。14附圖簡(jiǎn)述戎^乂^會(huì)理席，如7摩迷的岸/恩農(nóng)^于說(shuō)效的《的。餘^不以任/^r才4^很劍本發(fā)效教^的志風(fēng)。圖1A是描述根據(jù)一實(shí)施方案能夠被鈍化的、包含羥基的氧化物表面的示意圖。圖1B是描述根據(jù)另一實(shí)施方案能夠被鈍化的、包含氫氧化物陰離子基團(tuán)的表面的示意圖。圖2顯示了能夠用來(lái)改性氧化物表面的金屬試劑的制備。圖3顯示了由金屬試劑化合物與氧化物表面的反應(yīng)得到的改性表面。圖4A、4B和4C說(shuō)明了含有磷酸酯基團(tuán)的鈍化劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)，所述磷酸酯基團(tuán)能夠與用金屬試劑處理的表面反應(yīng)以形成鈍化表面。圖5是顯示用金屬試劑處理過(guò)的表面與包含磷酸酯基團(tuán)的鈍化劑相互作用結(jié)果的示意圖。圖6示出用包含多個(gè)羥基基團(tuán)的多價(jià)PEG鈍化劑在表面上置換不穩(wěn)定的單價(jià)鈍化劑。圖7A至7E是顯示具有TaPEG55()/TEG磷酸酯改性表面的蓋玻片的共焦熒光成像的結(jié)果的圖表，其中所述圖表是100x100jLim圖像像素的計(jì)數(shù)率柱狀圖。圖8A至8C是顯示使用硫代-LizdCTP的TaPEG55。(無(wú)磷酸酯)改性表面的計(jì)數(shù)率柱狀圖的圖表。圖9A是得自在常規(guī)制備的5%PEG硅烷(Pegsilane)改性蓋玻片上的0.1nMLiz-dGTP的相關(guān)曲線，其在長(zhǎng)的滯后時(shí)間(例如10ms)時(shí)顯示拖尾(tail)，該拖尾表示表面上的粘性染料。圖9B和9C顯示了得自在TaPEGs5o表面改性蓋玻片上擴(kuò)散的玫瑰精染料和硫代LizdCTP的稀釋溶液的熒光相關(guān)譜(FCS)的相關(guān)曲線。圖IOA顯示了用Ta(單曱基-PEG55o)5處理然后用五(羥基)單曱基-PEGs5o的乙醇溶液處理的石英表面上的1nm熒光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。圖IOB顯示了用Ta(單曱基-PEG55o)5處理然后用五(羥基)單曱基-PEG55Q的乙醇溶液處理石英表面，在緩沖液的存在下4小時(shí)后，該改性表面上的1nm焚光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。圖IOC顯示了用Ta(單曱基-PEG55o)5處理然后用五(羥基)單曱基-￡055。的乙醇溶液處理的石英表面上的100nm熒光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。圖IOD顯示了用Ta(單曱基-PEGs5())5處理然后用五(羥基)單曱基-￡055。的乙醇溶液處理石英表面，在緩沖液的存在下4小時(shí)后，該改性表面上的100nm熒光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。圖IIA顯示了用Ta(單曱基-PEGs5())5處理的石英表面上的1nM熒光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。圖IIB顯示了用Ta(單曱基-PEG55。)5處理的石英表面上的100nM熒光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。圖IIC顯示了用Ta(單曱基-PEG55o)5處理石英表面，在緩沖液的存在下4小時(shí)后，該改性表面上的1nM熒光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。圖12A和12B是顯示在DNA延伸緩沖液中孵育之前(圖14A)和之后(圖14B)用TaPEGsso然后用PEG35o-三石粦酸酯處理的熔融硅石的照片，其中所述硅石片用100nMLIZ-dATP孵育然后用水清洗以除去任何未粘附的染料。發(fā)明詳述本x炎^的"-戈"《示"和/4"，/^#^才說(shuō)效威者^(guò)眉"和/威"效^不合這對(duì)。本義炎^的冠^"""《^"一個(gè)^,個(gè)"，/^#;|說(shuō)效-戈者^(guò)^"一個(gè)-戈；個(gè)"努^不合這秒。"逸^Ycom;n'化尸、"^舍和"逸括(7"c/M^ZgT的炎^乂^5^的7fi不^f很浙。j^//>，^一個(gè)減多個(gè),滋才黃的溜迷炎^術(shù)語(yǔ)"逸^Ycom;n'w'"g)"^，本凝誠(chéng)戎^乂^會(huì)理,，在|些#定/#況7"，然多炎^^語(yǔ)"差本由...*成"和/威"由...逸^"^逸她^迷該^^才黃威這些-滋才黃。還^^理席，^16^些-施才黃哞，^本發(fā)效的教^效^r橫/，的餘況7"，#嚴(yán)的/#>^威迷存《些凝#的乂#^^€#^的。^#，^^些,滋才黃哞，兩個(gè)減^個(gè),潔-戈襲^"游多/^#迷/戶。本發(fā)明提供了在氧化物(例如二氧化硅)表面上形成非常薄的鋁或過(guò)渡金屬化合物(例如酯)的技術(shù)，目的是產(chǎn)生用于在鈍化劑尾部與官能團(tuán)反應(yīng)的鈍化表面或改性表面。所述鈍化劑能夠是不自組裝的聚乙二醇(即PEG)。所述官能團(tuán)能夠是具有四丁基銨抗衡離子的磷酸鹽基團(tuán)或二磷酸鹽基團(tuán)，使試劑適合在有機(jī)溶劑中使用。Ta(5+)、Ti(4+)和Zr(4+)的過(guò)渡金屬酯是可商購(gòu)的(如曱基酯、乙基酯和異丙基酯)。然而，這些酯與痕量水的反應(yīng)產(chǎn)生不溶的氧化物，阻止了它們?cè)谒h(huán)境中用于涂層表面。另外，它們?cè)谟袡C(jī)溶劑中的溶解度有限，尤其是可商購(gòu)的Ti(4+)的酯，阻止了這些試劑在許多有機(jī)溶劑中的使用。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，可商購(gòu)的Ta(5+)和Ti(4+)的酯能夠與四或更多當(dāng)量的中分子量(即2個(gè)或更多EO單元)的PEG單曱基酯反應(yīng)以產(chǎn)生在大多數(shù)有機(jī)溶劑中具有優(yōu)異溶解度的試劑，并且該試劑能夠以可很好預(yù)測(cè)的方式在諸如二氧化硅表面的氧化物表面上形成那些金屬的很薄的層。在某些情況下，所述沉積產(chǎn)生適合用于單分子檢測(cè)方案的鈍化表面。在其它情況下，改性表面還能夠與PEG的磷酸酯或二磷酸酯衍生物或另一鈍化劑反應(yīng)而產(chǎn)生期望的表面。整體方案總結(jié)在圖1至圖5中。圖1A是含有反應(yīng)性羥基基團(tuán)的氧化物材料(例如硅酸鹽玻璃或石英)的表面的示意性描述。通過(guò)用堿處理能夠?qū)⒈砻嫔系牧u基基團(tuán)轉(zhuǎn)化成氫氧化物陰離子。圖1B是含有反應(yīng)性氫氧化物陰離子基團(tuán)的氧化物材料(例如硅酸鹽玻璃或石英)的表面的示意性描述。根據(jù)一實(shí)施方案，通過(guò)用四丁基銨氫氧化物處理能夠?qū)⒈砻嫔系牧u基基團(tuán)轉(zhuǎn)化成氫氧化物陰離子。這導(dǎo)致了能夠在有機(jī)介質(zhì)中非常容易溶解的季銨鹽的形成。在鈍化之前能夠用氧等離子體或用四丁基銨氬氧化物、曱醇中的氫氧化鉀、硫酸中的過(guò)氧化氫(即"食人魚(piranha)"溶液)、碌u酸中的硝酸(即"王水")、氨水中的過(guò)氧化氫(即"RCA"溶液)、硫酸、氬氟酸、EDTA或這些處理的相繼結(jié)合來(lái)處理氧化物表面。圖2示出能夠用來(lái)改性氧化物表面的金屬試劑的制備。為了合成該試劑，能夠添加多于所需當(dāng)量數(shù)(即m)的Pol-LH化合物，使金屬上的低分子量醇全部置換。在添加至金屬酯之前應(yīng)當(dāng)將PEG干燥。數(shù)小時(shí)后，能夠?qū)⒃撊芤号趴找猿椭偈狗磻?yīng)完成的被置換的低分子量醇。圖3顯示了金屬試劑與氧化物表面的反應(yīng)結(jié)果。大體上，殘余的"Pol"(例如PEG)基團(tuán)留在金屬酯的未反應(yīng)部位上，其后來(lái)被用于轉(zhuǎn)化成不溶的金屬伴倡(metal-partner)對(duì)。這些"Pol"基團(tuán)的存在使得能夠使用多種溶劑(例如作為實(shí)例的乙酸乙酯、曱苯、二氯曱烷)以利用不同的極性和回流溫度，如果需要其中任何一種來(lái)優(yōu)化沉積速度的話。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，用金屬試劑改性表面導(dǎo)致在多種條件下形成很薄的層(由通過(guò)XPS對(duì)表面進(jìn)行的元素分析所證實(shí))。在某些情況下，用金屬試劑處理氧化物表面得到鈍化表面。在其它情況下，通過(guò)用金屬試劑處理形成的改性表面是用另外的鈍化步驟處理形成鈍化表面的中間產(chǎn)物。圖4A顯示具有諸如磷酸酯基團(tuán)或膦酸酯基團(tuán)的絡(luò)合劑的聚合鈍化劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)，所述鈍化劑能夠用來(lái)處理金屬試劑改性的氧化物表面以形成鈍化表面。在圖4A中，取代基R3能夠是聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物。如圖4B和4C所示，能夠?qū)⒘姿狨マD(zhuǎn)化成它們的鹽(例如四丁基銨鹽)以改善在多種有機(jī)溶劑中的溶解度。在圖4B和4C中，取代基R4能夠是N(R2)4或M，其中R2是烷基基團(tuán)并且M是Li、Na、K或Cs并且取代基R3能夠是聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物。另外，聚合鈍化劑能夠含有取代基以提供全部或部分具有期望功能性的表面。例如，圖4A至閨4C中所示的磷酸酯的R3取代基可以包括生物素部分。另外，金屬試劑處理的表面能夠與包含具有不同聚合元素的鈍化劑的混合物的組合物接觸以提供為具體的最終用途應(yīng)用18而優(yōu)化的表面。例如，鈍化制劑可以包含PEG磷酸酯或二磷酸酯與碳氟化合物磷酸酯或二磷酸酯的混合物以便獲得期望的表面性質(zhì)。期望的表面性質(zhì)能夠通過(guò)試驗(yàn)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)確定。在圖4A至圖4C中，X能夠是O、N或亞甲基基團(tuán)并且R3取代基能夠是聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的^灰氟化合物。而且在圖4B和4C中，每一R4取代基能夠是N(R2)4或M，其中M是Li、Na、K或Cs并且其中R2是烷基基團(tuán)。圖5顯示通過(guò)用包含磷酸酯基團(tuán)的鈍化劑處理氧化物表面形成的表面，其中所述氧化物表面已經(jīng)預(yù)先用金屬試劑處理。從圖5能夠看出，這種技術(shù)在氧化物表面上形成鈍化劑薄層。在圖5中，R3取代基能夠是聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物。而且在圖5中，Y能夠是過(guò)渡金屬、鎂或鋁并且Z能夠是O、N或亞曱基基團(tuán)。使用本文所述的金屬試劑能夠在各種氧化物表面上受控制地形成很薄的金屬前體層。另外，所述表面能夠在很溫和的條件下形成。金屬試劑也易于制備并且在使用前不需要純化。使用金屬試劑前置層和磷酸酯功能鈍化劑使得能夠使用易于獲得的功能性磷酸酯以用于沉積期望的表面。磷酸酯能夠由氧氯化磷和鈍化劑的醇溶液方便地合成。合成的磷酸酯能夠被轉(zhuǎn)化成易溶于多種溶劑的衍生物(例如季銨衍生物)，并且該衍生物仍保持它們與金屬試劑改性表面的反應(yīng)性。磷酸酯與表面的反應(yīng)不需要有尾的磷酸酯在表面上的大范圍加熱或自組裝。使用金屬試劑和磷酸酯功能鈍化劑還使得能夠通過(guò)設(shè)計(jì)具有不同聚合基團(tuán)的磷酸酯而產(chǎn)生多種表面類型和性質(zhì)。例如，在與金屬試劑處理過(guò)的氧化物表面接觸之前，能夠?qū)N、碳氟化合物和PEG醇的磷酸酯混合以獲得對(duì)特定應(yīng)用具有期望性質(zhì)的改性表面。另外，能夠使用含有特定功能性(例如生物素)的磷酸酯以獲得會(huì)結(jié)合另一分子(例如鏈霉親和素)的表面。眉,,祐^浙義理^^屬試浙攻^Mt面根據(jù)某些實(shí)施方案，隨后能夠用多價(jià)鈍化劑處理上述用金屬試劑處理的載體的表面，所述多價(jià)鈍化劑包含鈍化部分和能夠在表面上與金屬原子形成共價(jià)鍵或形成配合物的多個(gè)官能團(tuán)。例如，多價(jià)鈍化劑能夠在過(guò)渡金屬氧化物表面置換單價(jià)鈍化劑，同時(shí)保留氧化物表面和鈍化劑之間的過(guò)渡金屬層。用多價(jià)鈍化劑置換單價(jià)鈍化劑的示意性描述如圖6所示。這樣，多價(jià)鈍化劑能夠賦予鈍化表面基本的水解穩(wěn)定性。多價(jià)鈍化劑上的鈍化部分能夠是選自取代的聚乙二醇、未取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物和取代的碳氟化合物的部分。與表面上的金屬原子起反應(yīng)或與表面上的金屬原子形成配合物的多個(gè)官能團(tuán)能夠是羥基基團(tuán)、胺基基團(tuán)、磷酸酯基團(tuán)、膦酸酯基團(tuán)、硫醇基團(tuán)、烷基磷酸酯基團(tuán)、羧基基團(tuán)或其組合。多價(jià)鈍化劑的通式如下所示。q其中R是H、烷基、芳基或官能團(tuán)；L是連接基團(tuán)或共價(jià)鍵；每一W和Y獨(dú)立地是O、NH、S或膦酸酯；每一X和Z獨(dú)立地是H、磷酸酯、烷基曱?；蛲榛姿狨ィ籲是3至100;o是l至8;p是0至8;并且q是l至3。如上式所示，多價(jià)鈍化劑包含未取代的聚乙二醇作為鈍化部分。盡管描述了未取代的聚乙二醇鈍化部分，但也能夠-使用如上所述的其它鈍化部分。合成包含聚乙二醇鈍化部分和多個(gè)羥基官能團(tuán)的多價(jià)鈍化劑的方法Jtn下所示。20如以上的反應(yīng)方案所示，包含聚乙二醇部分的氨基功能性化合物能夠在80。C下與3，4,5-三羥基-6-(羥甲基)四氫-2i7-吡喃-2-酮反應(yīng)而形成多價(jià)鈍化劑。對(duì)于這種多價(jià)鈍化劑，以上通式中變量的定義如下R是曱基；n是ll，s是l，q是l，M是CK)，N是-NH-C-C-NH-(CK))-，o是4，W和Y是O，X和Z是H，并且p是l。如上所述，上式中的連接符號(hào)L能夠是連接基團(tuán)。示例性的連接基團(tuán)包括但不限于式-(C)s-(C-O)-Q-R，-Q-(C-O)-所示的基團(tuán)，其中每一Q獨(dú)立地是-O-或-NH-，R，是脂肪族或芳香族基團(tuán)并且s是0至10的整數(shù)。與以上通式對(duì)應(yīng)的示例性多價(jià)試劑由下式表示其中n是正整數(shù)。例如，n能夠是3至100。根據(jù)某些實(shí)施方案，多價(jià)試劑能夠通過(guò)下式表示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>其中n是正整數(shù)。例如，n能夠是3至100。本發(fā)明還提供了具有用如上所述的多價(jià)鈍化劑處理的表面的固體載體。根據(jù)某些實(shí)施方案，本發(fā)明提供了固體載體，其包含包含硅、鋁、鍺、鎵、銦、鎂或錫的氧化物的氧化物層；與氧化物層結(jié)合的選自過(guò)渡金屬、鎂和鋁的金屬原子；以及包含鈍化部分的鈍化試劑，所述鈍化部分選自取代的聚乙二醇、未取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物和取代的碳氟化合物；其中鈍化試劑在多個(gè)位置與一個(gè)或多個(gè)金屬原子共價(jià)結(jié)合或形成配合物。如上所述，用金屬酯進(jìn)行表面改性使得能夠在很溫和的條件下在多種氧化物表面形成很受控制的、很薄的金屬前體層的沉積。金屬酯非常易于制備，并且使用前不需要純化。金屬酯沉積然后多價(jià)鈍化劑沉積的聯(lián)合使用能夠產(chǎn)生各種表面類型和性質(zhì)。例如，在最后的表面改性期間，能夠使用具有不同官能團(tuán)的多價(jià)鈍化劑處理表面。逸舍禪磁游命為、時(shí)多伊祐化浙時(shí)合4使用已知的化學(xué)合成技術(shù)能夠容易地合成所述多價(jià)鈍化劑。對(duì)于包含作為鈍化部分的聚乙二醇和能夠與載體表面上的金屬原子結(jié)合的多個(gè)羥基官能團(tuán)的多價(jià)鈍化劑，示例性的合成技術(shù)如上所述。合成包含聚乙二醇鈍化部分和多個(gè)磷酸酯部分的多價(jià)鈍化劑的方法描述如下。磷酸酯部分能夠與載體表面上的金屬原子形成配合物。f差i^G雄r乙^"合成與^^該方法的第一步包括合成曱基PEG20(xr乙酸中間體。這種中間體能夠通過(guò)如下過(guò)程合成。平均分子量2000:2012+/-(44)ng8r'0平均分子量2000:2026+/-(44)nHC!,pH1.0平均分子量2000:2070+/-(44)n該過(guò)程描述如下。1)將曱基-PEG2,醇(100克，平均0.05摩爾)溶于添加了NaOH(60.15摩爾)并在氮中于冰上冷卻的100ml無(wú)水二氯曱烷(DCM)中。2)攪拌下分批加入溴乙酸正丁酯(30g,0.15摩爾)。將最終混合物在室溫下攪動(dòng)(由于形成NaBr固體而使攪拌變得困難)24小時(shí)。3)通過(guò)離心或傾析除去NaBr沉淀。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去大部分DCM。添加己烷以萃取出未反應(yīng)的溴乙酸正丁酯。用HC1(濃縮)將傾析出己烷后的半固體調(diào)節(jié)至pH1.0并在室溫下攪拌過(guò)夜。4)用DCM萃取產(chǎn)物三次(總共500ml)，用鹽水洗滌，并用無(wú)水NaS04干燥。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去大部分DCM。攪拌下逐滴添加至冷己烷以使產(chǎn)物沉淀。235)收集白色固體產(chǎn)物(85克)，用己烷洗滌，真空干燥，并用基質(zhì)輔助激光解吸電離(MALDI)的正和負(fù)兩種模式的質(zhì)譜(MS)表征。收率為83%。w/^G2fiT乙^扇差-7Ws-舉時(shí)^S戎力在趟^然后曱基PEG2K-乙酸中間體反應(yīng)產(chǎn)物能夠與2-氨基-2-(羥曱基)丙烷-l,3-二醇如下所述進(jìn)行反應(yīng)，形成包含多個(gè)羥基基團(tuán)的第二中間體(即mPEG2K乙酰氨基-Tris-醇)。平均分子量2000:2070+/-(44)n平均分子量2000:2173+/-(44)n該過(guò)程描述如下。1)將曱基PEG加o。-乙酸(12克，平均0.006摩爾)與無(wú)水曱苯和乙腈分別共蒸發(fā)三次(每次30ml)并再溶解在干燥的二氯曱烷(10ml)中。干氮中添加三乙胺(TEA)(0.75ml，0.006摩爾)。攪拌下在氮中分批添加琥珀酰氨基碳酸酯(DSC)(3克，0.012摩爾)。使反應(yīng)在室溫下進(jìn)行4小時(shí)并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。添加無(wú)水二氧雜環(huán)己烷(IOml)以溶解殘余物，并在劇烈攪拌下將溶液逐滴加入至飽和的三羥曱基氨基曱烷(Tris堿)水溶液中。使反應(yīng)在室溫下進(jìn)行兩小時(shí)然后用DCM萃取三次(總共100ml)。用硫酸鈉干燥DCM相并在除去溶劑后獲得油狀粗產(chǎn)三乙胺/DCM242)在用5。/。MeOH-DCM填充的硅膠(100ml)柱上純化殘余物并用5%MeOH-DCM洗脫。流份12至20通過(guò)MALDI-MS和質(zhì)子核》茲共振譜(HNMR)被鑒定為期望產(chǎn)物(9.5克)。收率為76%。3)產(chǎn)物在二氧化硅TLC板上、10%MeOH-DCM中的Rf值為約0.5。f差i^G-2fiT乙應(yīng)桌差-7>&-_￡褲磁/^時(shí)合減與^化mPEG2000乙酰氨基-Tris-醇中間體隨后能夠如下所述與雙(2-氰基乙基)二異丙基亞磷酰胺反應(yīng)而形成多價(jià)鈍化劑。<image>imageseeoriginaldocumentpage25</image>該過(guò)程描述如下。1)將mPEG2K乙酰氨基-Tris-醇(2.2克，1毫摩爾)與無(wú)水曱苯和乙腈分別共蒸發(fā)三次(每次30ml)。在氮中添加雙(2-氰基乙基)二異丙基亞磷酰胺(FW:271.6，1.22g，4.5毫摩爾)和四唑乙腈溶液(15ml,0.45M，6.75毫摩爾)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)。添加^又丁基過(guò)氧化氫(70%水溶液，6ml，45毫摩爾)并在室溫下攪拌該混合物2小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。用DCM萃取殘余物三次并用重碳酸鈉緩沖液(pH9)洗滌，并用硫酸鈉干燥。殘余物用硅膠柱純化，洗脫劑為DCM中的10%曱醇。流份15至20通過(guò)MS和HNMR被鑒定為期望產(chǎn)物。2)產(chǎn)物在二氧化硅TLC板上、10%MeOH-DCM中的Rf為0.55。3)將純化的膦酸酯放入NH3.H20(5ml)中并在室溫下孵育過(guò)夜。在真空下除去氨水，再溶解于水中并在SephadexDEAEA-25柱(用2M重碳酸鉀平衡并用水徹底清洗)上純化。用2M醋酸三乙胺緩沖液洗脫磷酸酯。通過(guò)反復(fù)與水在真空下共蒸發(fā)除去緩沖液，并通過(guò)MALDI-MS、質(zhì)子NMR和磷NMR表征產(chǎn)物(1.7克)。收率是70%。f差/，五G-350乙嵌《差-7Ws-三褲磁/^時(shí)合成'與磁化使用平均分子量為350的起始材料曱基PEG350醇，按照與甲基PEG-2K乙酰氨基-Tris-三磷酸酯相同的合成步驟合成曱基PEG-350乙酰氨基-Tris-三磷酸酯。紐本發(fā)'效的全j在教^還^r以旅拔以T,滋辦遽/f理席，摩迷'^滋辦不應(yīng)以任/^r才4被席^^Mf本發(fā)'效教^龍房的很賴。^金屬試浙和褲虔港A理^Mt面在表面上進(jìn)行如下操作以后，鉭PEG酯改性的二氧化硅表面的XPS數(shù)據(jù)如下表所示在77。C下，用15mM鉭(5)的溶液處理石英蓋玻片16小時(shí)，所述鉭(5)已經(jīng)通過(guò)在乙酸乙酯中用PEG550交換乙基醇鹽而被轉(zhuǎn)化成它的PEG550(單曱基酯)酯；然后在110。C下用曱苯中的20mM四乙二醇(單曱基)單磷酸酯(TEG磷酸酯)的四(正丁基)銨鹽處理4天。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>在表面上進(jìn)行如下操作以后，鈦PEG酯改性的二氧化硅表面的XPS數(shù)據(jù)如下表所示在二氯曱烷回流下用0.0002M鈦(4)的溶液處理石英蓋玻片18小時(shí)，所述鈦(4)已經(jīng)通過(guò)在二氯甲烷溶劑中用PEG550交換乙基醇鹽而-坡轉(zhuǎn)化成它的PEG550(單曱基酯)酯；然后在二氯曱烷回流下用二氯曱烷溶劑中的0.005M四乙二醇(單曱基)單磷酸酯的四(正丁基)銨鹽處理24小時(shí)。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>通過(guò)測(cè)量用熒光標(biāo)記的生物分子孵育后表面的熒光來(lái)測(cè)試生物分子在這些改性表面的吸收。圖7A至7E是顯示具有TaPEG55()/TEG磷酸酯改性表面的蓋玻片的共焦熒光成像的結(jié)果的圖表。這些圖表是100x100/xm圖像像素的計(jì)數(shù)率柱狀圖。圖7A表明，在添加任何染料之前，背景熒光信號(hào)在2.5kHz左右達(dá)到最高。圖7B和7C表明，當(dāng)添加1nMA488溶液時(shí)，計(jì)數(shù)率柱狀圖峰轉(zhuǎn)移至70kHz并在除去染料時(shí)重新降回與背景相當(dāng)?shù)男盘?hào)水平。用1nMR110溶液在相同的100x100/rni區(qū)域重復(fù)該過(guò)程，如圖7D所示。結(jié)果再次表明，當(dāng)將R110從蓋玻片上除去時(shí)熒光信號(hào)回到背景水平(圖7E)。這些結(jié)果證實(shí)了玫瑰精染料A488和R110不非特異性地與改性表面結(jié)合。圖8A至8C是顯示使用疏代-LizdCTP的TaPEG55()(無(wú)磷酸酯)改性表面的類似的計(jì)數(shù)率柱狀圖的圖表，其表明，該改性表面阻止硫代-LizdCTP非特異性地與蓋玻片結(jié)合。甚至當(dāng)向表面上添加(圖8B)和除去(圖8C)高濃度硫代-LizdCTP溶液時(shí)也觀察到了該結(jié)果。這些結(jié)果再次表明硫代-LizdCTP不非特異性地與改性表面結(jié)合。圖9A至9C示出得自與TaPEG55o和硅烷PEG表面改性蓋玻片接觸的以上的玫瑰精染料和硫代LizdCTP的稀釋溶液的熒光相關(guān)譜(FCS)的相關(guān)曲線的比較。該相關(guān)曲線的衰減速率提供了溶液中有關(guān)游離染料的擴(kuò)散速率的信息。因此，如果染料粘附于表面，則相關(guān)曲線會(huì)較慢地衰減。為了比較，圖9A是在長(zhǎng)的滯后時(shí)間(例如10ms)時(shí)顯示拖尾的相關(guān)曲線的實(shí)例，該拖尾表示表面上的粘性染料。圖9A的數(shù)據(jù)得自常規(guī)制備的5%PEG硅烷改性蓋玻片上的0.1nMLiz-dGTP，其中PEG硅烷由回流的曱苯沉積。圖9B是顯示來(lái)自在改性表面上擴(kuò)散的A488和R110的稀釋溶液的相關(guān)曲線的圖表。該圖表還顯示用于比較的在已知的非粘性表面上自由擴(kuò)散的A488的相關(guān)曲線。還使用硫代-LizdCTP的稀釋溶液進(jìn)行了FCS試驗(yàn)，其結(jié)果如圖9C所示。該圖表顯示了來(lái)自改性蓋玻片上不同位置處的三種不同的FCS測(cè)量的結(jié)果。合起來(lái)，以上這些FCS結(jié)果和熒光成像結(jié)果表明，熔融硅石底物上的TaPEGs5o改性表面不會(huì)非特異性地與A488、R110和硫代-LizdCTP結(jié)合。眉,,趟化浙義^^省試浙炎遂W或面用乙醇Ta(單曱基-PEGs50)5處理石英表面以形成改性表面。然后用被命名為五(羥基)-單曱基-PEGs5。的具有如下結(jié)構(gòu)的多價(jià)鈍化劑的乙醇溶液處理所述改性表面28結(jié)果如圖IOA至IOD所示。圖IOA顯示了用Ta(單曱基-PEG55o)5處理然后用五(羥基)單曱基-PEG55o的乙醇溶液處理的石英表面上的1nm熒光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。圖IOB顯示了用Ta(單曱基-PEG55。)5處理然后用五(羥基)單曱基-PEGs50的乙醇溶液處理的石英表面在其在Tris緩沖溶液中孵育4小時(shí)之后，該改性表面上的1nm焚光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。圖IOC顯示了用Ta(單曱基-PEG55o)5處理然后用五(羥基)單曱基-PEG55o的乙醇溶液處理的石英表面上的100nm熒光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。圖IOD顯示了用Ta(單曱基-PEGs5o)5處理然后用五(羥基)單曱基-PEG55。的乙醇溶液處理的石英表面在其在Tris緩沖溶液中孵育4小時(shí)后，該改性表面上的100nm焚光LIZ染料溶液的非特異性結(jié)合數(shù)據(jù)。從圖IOA至IOD能夠看出，用多價(jià)鈍化劑處理得到的表面，其在緩沖液的存在下甚至4小時(shí)以后仍阻止100nMLiz熒光染料的水溶液的非特異性吸收。相反，如圖IIA至IIC所示，在用Ta(單曱基-PEGs5o)5處理的未用多價(jià)鈍化劑處理的石英片上觀察到了lnM焚光Liz染料(圖IIA)和100nM熒光Liz染料(圖IIB)的某些粘附。在緩沖液存在下，4小時(shí)后觀察到了廣泛的粘附(圖IIC)。在用多價(jià)鈍化劑(即多(羥基)-單曱基-PEG)處理后Ta表面的完整性通過(guò)如下所示的多(幾基)-單曱基-PEG改性前后的改性石英表面的XPS來(lái)證實(shí)。^rfl/^c55。試浙義理^Mt面^jw^炎疾<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>鉭0.66硅26.71眉7VlP五(55。試浙^t^^,(秀4)-卓f差-/，五(？^埋的《面的A7^炎拔元素百分比氧52.3氮2.5碳26.8鉭0.43硅18.0圖12A和12B顯示了在DNA延伸緩沖液中孵育之前(圖12A)和之后(圖12B)用TaPEGs5o然后用PEG35()三磷酸酯處理的熔融硅石表面。PEG35Q三磷酸酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下0=p>~OHPOH其中n的值使得聚乙二醇部分的平均分子量為約350。用100nMLIZ-dATP孵育經(jīng)處理的表面，然后用水清洗以除去未粘附到表面的任何染料。從圖12B能夠看出，甚至在用DNA延伸緩沖液孵育經(jīng)處理的石英片之后，100nMLIZ-dATP仍顯示出在改性表面的最小粘附。雖然前述說(shuō)明書教導(dǎo)了本發(fā)明的原則，并出于解釋的目的而提供了實(shí)施例，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員從閱讀本公開內(nèi)容中應(yīng)當(dāng)理解，在不偏離本發(fā)明的本質(zhì)范圍下能夠?qū)π问胶图?xì)節(jié)作出各種改變。30權(quán)利要求1.改性載體表面的方法，所述方法包括使所述表面與金屬試劑接觸，其中所述表面包含羥基和/或氧化物陰離子基團(tuán)；以及使所述金屬試劑與所述表面上的羥基和/或氧化物陰離子基團(tuán)反應(yīng)以形成改性表面；其中所述金屬試劑具有下式所示的結(jié)構(gòu)Y(L-Pol)m其中Y是過(guò)渡金屬、鎂或鋁，L是氧、硫、硒或胺，每一“Pol”基團(tuán)獨(dú)立地表示聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物，并且m是整數(shù)。2.如權(quán)利要求l所述的方法，其還包括使所述改性表面與包含以下式(I)、式(n)或式(m)的化合物的鈍化組合物接觸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中X是O、N或亞曱基基團(tuán)；R3是聚乙二醇、取代的聚乙二醇、取代的碳氟化合物；并且R4是N(R2)4或M，其中M是Li、基基團(tuán)。烴、取代的烴、碳氟化合物或Na、K或Cs并且其中R2是烷3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述鈍化組合物包含所述式(II)的化合物或所述式(in)的化合物。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中R4是N(R》4，其中R2是烷基基團(tuán)。5.如權(quán)利要求l所述的方法，其還包括在使所述載體的表面與所述金屬試劑接觸之前預(yù)處理所述載體的表面，其中預(yù)處理包括用氧等離子體處理所述載體的表面或使所述載體的表面與四丁基銨氫氧化物、曱醇中的氬氧化鉀、硫酸中的過(guò)氧化氬、硫酸中的硝酸、氨水中的過(guò)氧化氫、硫酸、氬氟酸、EDTA或其組合接觸。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中使所述載體的表面與堿接觸并且其中所述堿是四丁基銨氫氧化物。7.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述載體包含金屬氧化物。8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述栽體包含硅、鋁、鍺、鎵、銦、鎂或錫的氧化物。9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一種"Pol"基團(tuán)是聚乙二醇或取代的聚乙二醇。10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中至少一種"Pol"基團(tuán)是包含生物素部分的聚乙二醇。11.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述鈍化組合物包含具有第一R3基團(tuán)的所述式(1)、(II)或(III)的第一磷酸酯化合物和具有第二R3基團(tuán)的所述式(i)、(n)或(in)的第二磷酸酯化合物，并且其中所述第一R3基團(tuán)與所述第二R3基團(tuán)不同。12.如權(quán)利要求2所述的方法，其中R3是聚乙二醇或取代的聚乙二醇。13.載體，其由權(quán)利要求1所述的方法制備。14.載體，其由權(quán)利要求2所述的方法制備。15.以下式(I)、式(II)或式(III)的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中X是O、N或亞曱基基團(tuán)；R3是聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的》灰氟化合物；以及R4是N(R2)4或M,其中M是Li、Na、K或Cs并且其中R2是烷基基團(tuán)。16.如權(quán)利要求15所述的化合物，其中所述化合物是所述式(II)的化合物或所述式(III)的化合物。17.如權(quán)利要求16所述的化合物，其中R4是N(R2)4。18.如權(quán)利要求17所述的化合物，其中R2是丁基基團(tuán)。19.如權(quán)利要求15所述的化合物，其中R3是聚乙二醇或取代的聚乙二醇。20.組合物，其包含權(quán)利要求15所述的化合物。21.如權(quán)利要求20所述的組合物，其中所述組合物包含所述式(i)、(n)或(ni)的第一磷酸酯化合物和與所述第一磷酸酯化合物不同的所述式(i)、(n)或(ni)的第二磷酸酯化合物。22.下式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中Y是過(guò)渡金屬、鎂或鋁，L是氧、硫、硒或胺，每一"Pol"基團(tuán)獨(dú)立地表示聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物，并且m是整數(shù)。23.如權(quán)利要求22所述的化合物，其中Y選自Ta、Ti、Nb、Zr和Al。24.組合物，其包含權(quán)利要求22所述的化合物。25.方法，其包括使下式的第一化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>與一個(gè)或多個(gè)下式的第二化合物反應(yīng)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>以形成下所述式的金屬酯化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中.-Y是過(guò)渡金屬、鎂或鋁，R6是C廣Cs烴，L是氧、硫、硒或胺，每一"Pol"基團(tuán)獨(dú)立地表示聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物，并且m是整數(shù)。26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中使所述一個(gè)或多個(gè)第二化合物與所述第一化合物以至少m:l的摩爾比反應(yīng)。27.固體載體，其包含包含硅、鋁、鍺、鎵、銦、鎂或錫的氧化物的氧化物層；以及所述氧化物層的表面上的部分，所述部分具有以下式(I)或式(II)所示的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中:X是O、N或亞曱基基團(tuán)Y是過(guò)渡金屬、鎂或鋁，L是氧、硫、竭或胺或L是金屬絡(luò)合劑，每一"Pol"基團(tuán)獨(dú)立地表示聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物，R3是聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物或取代的碳氟化合物，以及m是整數(shù)；并且其中所述氧原子在所述氧化物層中與相同的或不同的硅、鋁、鍺、鎵、銦、鎂或錫原子結(jié)合。28.如權(quán)利要求27所述的載體，其中Y選自Ta、Ti、Nb、Zr和Al。29.化合物，其包含與鈍化劑軛合的金屬絡(luò)合劑，其中所述金屬絡(luò)合劑選自羧酸酯、多巴胺和anachelin;并且所述鈍化劑選自聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物和取代的碳氟化合物。30.如權(quán)利要求l所述的方法，其還包括使所述改性表面與包含與鈍化劑軛合的金屬絡(luò)合劑的鈍化組合物接觸，其中所述金屬絡(luò)合劑選自羧酸酯、多巴胺和anachelin;并且所述鈍化劑選自聚乙二醇、取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物和取代的碳氟化合物。31.如權(quán)利要求27所述的固體載體，其中L是選自羧酸酯、多巴胺和anachelin的金屬絡(luò)合劑。32.如權(quán)利要求l所述的方法，其還包括j吏所述改性表面與包含鈍化部分和與Y反應(yīng)或與Y形成配合物的多個(gè)官能團(tuán)的多價(jià)試劑接觸，其中所述鈍化部分選自取代的聚乙二醇、未取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物和取代的碳氟化合物。33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中與Y反應(yīng)或與Y形成配合物的所述多個(gè)官能團(tuán)選自羥基基團(tuán)、胺基基團(tuán)、磷酸酯基團(tuán)、膦酸酯基團(tuán)、硫醇基團(tuán)、烷基磷酸酯基團(tuán)、羧基基團(tuán)及其組合。34.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述多價(jià)試劑用下式表示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中R是H、烷基、芳基或官能團(tuán)；L是連接基團(tuán)或共價(jià)鍵；每一W和Y獨(dú)立地是O、NH、S或膦酸酯；每一X和Z獨(dú)立地是H、磷酸酯、烷基曱?；蛲榛姿狨?n是3至100;o是1至8;p是0至8;以及q是1至3。35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述連接基團(tuán)L用式-(C)s-(CO)-Q-R，-Q-(CK))-表示，其中每一Q獨(dú)立地是-O-或-NH-,R，是脂肪族或芳香族基團(tuán)并且s是O至IO的整數(shù)。36.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述多價(jià)試劑用下式表示:其中n是正整數(shù)。37.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述多價(jià)試劑用下式表示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中是正整數(shù)。38.載體，其由權(quán)利要求32所述的方法制備。39.固體載體，其包含包含硅、鋁、鍺、鎵、銦、鎂或錫的氧化物的氧化物層；與所述氧化物層結(jié)合的選自過(guò)渡金屬、鎂和鋁的金屬原子；以及包含鈍化部分的鈍化試劑，所述鈍化部分選自取代的聚乙二醇、未取代的聚乙二醇、烴、取代的烴、碳氟化合物和取代的碳氟化合物；其中所述鈍化試劑在多個(gè)位置與一個(gè)或多個(gè)所述金屬原子共價(jià)結(jié)合或形成配合物。全文摘要本發(fā)明描述了在氧化物層上形成鈍化表面的中間體和方法及由其產(chǎn)生的產(chǎn)品。使氧化物表面上的羥基或氫氧化物基團(tuán)與式Y(jié)(L-Pol)_m的金屬試劑反應(yīng)，其中Y是過(guò)渡金屬、鎂或鋁，L是氧、硫、硒或胺，并且“Pol”表示諸如聚乙二醇、烴或碳氟化合物的鈍化劑。還能夠使所得的改性表面與具有磷酸酯官能團(tuán)的鈍化劑或包含鈍化部分和與Y反應(yīng)或形成配合物的多個(gè)官能團(tuán)的多價(jià)試劑反應(yīng)。所述鈍化劑還能夠包括諸如生物素的官能團(tuán)以便提供具有期望的功能性的表面。所述鈍化表面顯示出對(duì)生物分子的最小結(jié)合并且能夠用于單分子檢測(cè)方案。文檔編號(hào)G01N33/543GK101568835SQ200780032645公開日2009年10月28日申請(qǐng)日期2007年11月21日優(yōu)先權(quán)日2006年11月21日發(fā)明者克里斯蒂娜·E·英曼,史蒂文·M·門徹恩,李漢東,羅紅凱,陳石明申請(qǐng)人:應(yīng)用生物系統(tǒng)公司