專利名稱：：基于用于檢測(cè)病源微生物的呼氣試驗(yàn)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的方法涉及收集和分析呼氣樣本以檢測(cè)病源微生物。特別地，本發(fā)明提供一種基于呼氣樣本收集的方法，以及實(shí)施所述收集的組合工具，用于胃與十二指腸腔道中的幽門螺桿菌的檢測(cè)和診斷。
背景技術(shù)：
：幽門螺桿菌主要與例如胃或十二指腸癌、消化不良、胃非霍奇金淋巴瘤、以及胃癌相關(guān)。此外，胃與十二指腸腔道中幽門螺桿菌的存在還與其他的一些疾病相關(guān)，例如慢性蕁麻瘆、缺鐵性貧血、原發(fā)性血小板減少性紫癜等。與幽門螺桿菌相關(guān)的疾病的名單在持續(xù)不斷地增加。尿素呼氣試驗(yàn)為診斷幽門螺桿菌的可靠方法。然而，用于尿素呼氣試驗(yàn)的目前的黃金標(biāo)準(zhǔn)診斷方案需要攝入檸檬酸溶液(見(jiàn)DeBengoaVallejo,A.的美國(guó)專利No.6，171，811Bl)。另外，緣于口腔中固定化微生物的殘留尿素和尿素酶活性，所述診斷方案能夠?qū)е录訇幮?。部分地由于所述溶液?dǎo)致的胃排空的遲延，尿素呼氣試驗(yàn)中檸檬酸溶液的攝取已經(jīng)被認(rèn)為是合理的。然而，胃排空的遲延已經(jīng)被證實(shí)與檸檬酸溶液的攝取不相關(guān)(見(jiàn)shiotani,A.S.etal.，AlimentPharmacol.Ther.，15:1763-1767,2001)。jt匕夕卜，在尿素呼氣試驗(yàn)中吞咽檸檬酸溶液的患者會(huì)由于胃與十二指腸癥狀的惡化而抵制食用所述溶液，原因在于所述試驗(yàn)之前抗酸劑所需要的延遲，以及這樣的有道理的觀點(diǎn)如果他們喝下某些酸性物質(zhì)所述癥狀將變得更壞。此外，大量檸檬酸的攝入能導(dǎo)致惡心和嘔吐，特別是對(duì)兒童來(lái)說(shuō)?；颊哌€抱怨檸檬酸溶液的大劑量和不好的味道。此外，對(duì)檸檬酸過(guò)敏的患者不能采用當(dāng)前的所述黃金標(biāo)準(zhǔn)尿素呼氣試驗(yàn)。本發(fā)明提供一種基于尿素呼氣試驗(yàn)的方法，該方法不需要檸檬酸溶液，而且還能夠抑制口腔中尿素殘留的出現(xiàn)。本發(fā)明的所述方法提供一種診斷方案，該方案能使患者在幾分鐘后就能回家，而無(wú)任何不良反應(yīng)或者胃病癥狀的任何惡化。另外，本發(fā)明的所述方法像需要攝入檸檬酸溶液的當(dāng)前所述尿素呼氣試驗(yàn)一樣可靠或者說(shuō)更加可靠。本發(fā)明提供一種用于收集尿素呼氣樣本的容易、可靠的方法。尿素呼氣樣本的容易和可靠的收集將會(huì)促進(jìn)廣泛的流行病學(xué)研究，以便證實(shí)幽門螺桿菌與不斷增加的疾病種類之間的關(guān)聯(lián)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種基于尿素呼氣試驗(yàn)的用于檢測(cè)和診斷胃與十二指腸腸腔道中的幽門螺桿菌的方法，以及用于執(zhí)行所述方法的成套工具(kit)。所述方法包括從個(gè)體或患者身上收集第一基準(zhǔn)呼氣樣本；給所述個(gè)體標(biāo)記碳的尿素溶液；在緊接著的新的和獨(dú)立的步驟中，給所述個(gè)體適量的水以清除其口腔中的任何殘留尿素；以及在經(jīng)過(guò)不少于5分鐘之后，收集第二呼氣樣本。給所述個(gè)體適量水的所述獨(dú)立步驟具有雙重目的清除口腔中的任何殘留的標(biāo)記碳尿素，以及在胃腔中提供由胃幽門螺桿菌尿素酶催化的碳標(biāo)記尿素的快速擴(kuò)散和衰減的最理想的水溶液環(huán)境，由此消除可能的假陽(yáng)性結(jié)果。本發(fā)明的目的和附加的優(yōu)點(diǎn)在附圖、本發(fā)明的實(shí)施例以及權(quán)利要求的描述中將變得更為明確。圖1示出用于實(shí)施本發(fā)明的所述方法的組合工具及其部件。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的目的是提供一種基于用于檢測(cè)病源微生物的呼氣試驗(yàn)的方法，包括A.收集個(gè)體基準(zhǔn)呼氣的第一樣本；B.在收集所述基準(zhǔn)呼氣的第一樣本后，緊接著給所述個(gè)體口服具有標(biāo)5記碳的尿素溶液；C.在給出所述具有標(biāo)記碳的尿素溶液后，緊接著給所述個(gè)體口服適量的水；D.收集第二呼氣樣本，其中所述第二呼氣樣本自給出所述適量的水起經(jīng)過(guò)預(yù)設(shè)時(shí)間后被收集；E.測(cè)定并分析第一呼氣樣本以及第二呼氣樣本中存在的標(biāo)記碳的量；和其中有待檢測(cè)或診斷的病源微生物為幽門螺桿菌。在本發(fā)明的方法的一個(gè)優(yōu)選方面，所述適量的水介于100毫升和250毫升之間。然而，在本發(fā)明的方法的所述方面的最優(yōu)選實(shí)施例中，所述適量的水為200毫升。給所述個(gè)體適量(just)水的所述新的和獨(dú)立的步驟，以適時(shí)的方式(在給所述個(gè)體標(biāo)記碳的尿素溶液之后立即進(jìn)行)清除口腔中的任何殘留的標(biāo)記碳尿素，因而，消除了緣于口腔中固定化微生物的尿素酶的假陽(yáng)性的可能性。另外，所述適量的水，一旦進(jìn)入口腔，提供最理想的胃內(nèi)水溶液以及標(biāo)記碳(carbon)的碳尿素在胃內(nèi)的均勻分布，并由此提供由幽門螺桿菌尿素酶催化的標(biāo)記碳尿素的快速水解。在本發(fā)明的方法的其他優(yōu)選方面，所述具有標(biāo)記碳的尿素溶液介于15毫升和50毫升之間；具有標(biāo)記碳的尿素介于10毫克和50毫克之間；以及所述尿素的標(biāo)記碳為碳-13。均處于所提及范圍內(nèi)的所述尿素溶液以及所述標(biāo)記碳尿素的特定的量，根據(jù)所述呼氣樣本得以從其收集的個(gè)體的重量來(lái)被決定。兒童需要的量處在所述范圍的較下部分，同時(shí)成人需要的量處在所述范圍的較上部分。用碳-13標(biāo)記的所述尿素優(yōu)選地采用粉末的形式，其可廣泛地通過(guò)商業(yè)途徑獲得。為了本發(fā)明的目的，個(gè)體被定義為患者或個(gè)人，在這些患者或個(gè)人的胃與十二指腸腸道中^r測(cè)幽門螺桿菌。在本發(fā)明的方法的再又一個(gè)方面，所述第二呼氣樣本自給所述個(gè)體適量的水后超過(guò)4分59秒時(shí)被收集。在本發(fā)明的方法的該方面的最優(yōu)選實(shí)施例中，所述第二樣本自給所述個(gè)體適量的水后IO分鐘時(shí)被收集。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種通過(guò)呼氣試驗(yàn)檢測(cè)病源微生物的組合工具(圖l),其中所述組合工具包括a.盛水的容器1(圖1);b.盛標(biāo)記碳尿素的容器2;c.在所述呼氣試驗(yàn)的開(kāi)頭且在攝入標(biāo)記碳尿素之前收集第一呼氣樣本的第一容器3;d.在所述呼氣試驗(yàn)的結(jié)尾且在攝入適量的水之后收集第二呼氣樣本的第二容器4;和其中所述第一容器和第二容器具有帽狀部，所述帽狀部具有允許針狀傳感器引入的結(jié)構(gòu)(3A和4A),且其中行將被檢測(cè)或診斷的所述病源微生物為幽門螺桿菌。分別位于適當(dāng)區(qū)分開(kāi)的第一容器和第二容器內(nèi)的所述第一樣本和第二樣本，通過(guò)氣相色譜法和氣相光鐠測(cè)定法被分析以測(cè)定所述碳-13的量。在本發(fā)明的所述組合工具的一個(gè)方面，所述盛標(biāo)記碳尿素的容器盛有介于15毫克和50毫克之間的標(biāo)記碳尿素，且其中所述標(biāo)記石友尿素4皮溶解于水中，且其中用于溶解所述標(biāo)記碳尿素的水量介于15毫克和50毫克之間，且其中所述尿素的標(biāo)記碳為碳-13。在最優(yōu)選的實(shí)施例中，標(biāo)記碳尿素的量為50毫克。在本發(fā)明的所述組合工具的又一優(yōu)選方面，所述盛水的容器盛有的水介于200毫升和250毫升之間。然而，在本發(fā)明的所述組合工具的所述方面的最優(yōu)選實(shí)施例中，所述適量的水為200毫升。在本發(fā)明的所述組合工具的再又一個(gè)方面中，所述組合工具包括一對(duì)用于將所述第一呼氣樣本和第二呼氣樣本收集到所述第一容器和第二容器中的工具。在本發(fā)明的所述組合工具的此方面的優(yōu)選實(shí)施例中，將所述第一呼氣樣本和第二呼氣樣本收集進(jìn)所述第一容器和第二容器中的所述工具為一對(duì)吸管6。為了本發(fā)明的目的，容器被定義為具有氣密性的任何容器。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，所述容器為管狀容器。7在本發(fā)明的所述組合容器的再一個(gè)方面，箱體7容置所述盛水的容器、所述盛標(biāo)記碳尿素的容器、所述第一容器、第二容器以及所述的一對(duì)吸管。盡管本說(shuō)明書呈現(xiàn)出了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，但是可以進(jìn)行其它的變化，這些變化部分的形式和配置不遠(yuǎn)離包括在權(quán)利要求中的基本思想和原則。例子材料和方法患者本研究的人群包括70名健康的志愿者，這些志愿者沒(méi)有腸部和胃部癥狀。才艮據(jù)赫爾辛基宣言和哥倫比亞衛(wèi)生部1993年8430號(hào)決議，該研究被歸類為沒(méi)有生物學(xué)、生理學(xué)、心理學(xué)或社會(huì)方面的風(fēng)險(xiǎn)。標(biāo)記碳尿素(labeledcarbonurea)呼氣試驗(yàn)方案l:在禁食至少8小時(shí)后，收集第一基準(zhǔn)呼氣樣本(to);緊接著，給患者口服50mg溶解進(jìn)一杯15ml水中的13C標(biāo)記的尿素(urea);緊接著，給患者口服200ml的水；接著，在10(t!。)、20(t2。)和30(t3Q)分鐘后，收集呼氣樣本。方案2:在禁食至少8小時(shí)后，收集第一基準(zhǔn)呼氣樣本(t。)；緊接著，給患者口服50mg溶解進(jìn)一杯15ml水中的"C標(biāo)記的尿素；緊接著，給患者200ml的含有4.2g脫水檸檬酸的水；接著，在lO(t,o)、20(t2。)和30(t30)分鐘后，收集呼氣樣本。參考的標(biāo)準(zhǔn)方案針對(duì)哥倫比亞環(huán)境的標(biāo)準(zhǔn)化歐洲方案被用作參考方案，該參考方案已經(jīng)得到廣泛確認(rèn)具有接近100%的敏感度和特異性。實(shí)施侵入試驗(yàn)例如活組織檢查、人工培養(yǎng)和內(nèi)診鏡檢查曾經(jīng)被認(rèn)為是不合乎倫理。該參考方案被實(shí)施如下在禁食至少8小時(shí)后，給患者4.2溶解到100ml水中的檸檬酸；IO分鐘后，收集作為副本的基準(zhǔn)呼氣樣本(t。)；緊接著，給患者100mg溶解到30ml水中的13C標(biāo)記尿素；接著，30分鐘后，收集作為副本的尿素后呼氣樣本。對(duì)幽門螺桿菌感染的定義被幽門螺桿菌感染的狀態(tài)通過(guò)13C標(biāo)記的尿素呼氣試驗(yàn)被定義，該試驗(yàn)依據(jù)使用商業(yè)性組合工具(TAU-KIT,IsomedS丄.，Madrid,Spain)的所述參考方案。所述樣本的分析使用光語(yǔ)儀(ABCA，EuropaScientific,Cheshire,UnitedKingdom)在laboratorioClinicoHematologicoS.A.，Medellin，Colombia實(shí)施，依據(jù)的是針對(duì)這種試驗(yàn)的國(guó)際確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性結(jié)果為13C標(biāo)記尿素的呼氣試驗(yàn)的值等于或高于2.513C02德?tīng)査?513C02)。所述結(jié)果被表述為在基線之上的德?tīng)査?DOB)。每一種方案的中止點(diǎn)在不同的時(shí)間間隔(10、20和30分鐘)下在0.5到5.5間變動(dòng)。每種方案的有效性通過(guò)ROC曲線被評(píng)估。統(tǒng)計(jì)分析在所述描述性的分析中，絕對(duì)和相對(duì)分布被用作定性變量?；謴?fù)指示符被用作定量變量。關(guān)于數(shù)據(jù)的正規(guī)定則(Normalitycriteria)用夏皮洛-威爾克檢驗(yàn)(Shapiro-Wilk)來(lái)建立，并基于此，學(xué)生雙尾t檢驗(yàn)(t陽(yáng)Studenttest)、以及威氏符號(hào)范圍4企驗(yàn)(Wilcoxonsignrange)被應(yīng)用于建立獨(dú)立中值間的差異。X2獨(dú)立性檢驗(yàn)(independenceX2test)被用于分析定性變量之間的關(guān)聯(lián)。值p〈0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)顯著性。此外，敏感度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、有效性指數(shù)、尤登指數(shù)、陽(yáng)性結(jié)果(RV+)的真實(shí)原因、以及陰性結(jié)果(RV-)的真實(shí)原因被進(jìn)行計(jì)算。得到的數(shù)據(jù)的處理和分析使用SPSS(統(tǒng)計(jì)產(chǎn)品與服務(wù)解決方案)12.0版本以及EPIDATE3.0程序進(jìn)4亍。結(jié)果在本研究中，包括70名無(wú)癥狀的個(gè)體(24男和46女)，其中所述個(gè)體中男性平均年齡為39.63(SD±12.58)歲，女性平均年齡為34.33(SD士10.17);信度為95%。男性的平均年齡和女性的平均年齡間無(wú)顯著差異(t-Student=l,905p=0.061)。使用所述參考方案，46(65.7%)名個(gè)體呈幽門螺桿菌陽(yáng)性，以及24(34.3%)名個(gè)體呈幽門螺桿菌陰性。就性別來(lái)說(shuō)，17(70.8%)名男性和29(63%)名女性呈幽門螺桿菌陽(yáng)性。在男性和女性之間沒(méi)有顯著的統(tǒng)計(jì)差異(X2=0.425;p=0.515)。對(duì)于方案I和方案II,其結(jié)果可從表1中觀察到。表l."C標(biāo)記尿素呼氣試驗(yàn)。方案I和方案II在不同中止點(diǎn)(10、20和30分鐘)時(shí)的有效性指數(shù)(indicedevalidez)、尤登指數(shù)(indicedeYouden)、RV+和RV_。laboratorioClinicoHematologicoS.A.，Medellin,Colombia2006。有效性指標(biāo)尤登指數(shù)RV+RV-力TT但&p.C.方案/方案//方案/方案W方案/方案//萬(wàn)栗/方案//0,581.4385,710,46O鄰1,B52,610,03194,2991,430,830.776.004,700,031，598,5797,14O鄰0,9424.0023,480,022100,0098,571,00O鄰*省0,022,5100,0097，141.00O鄰**0,0498,5797,14O鄰O鄰M喻0,020.043'598,5797,14O鄰O鄰*M0,020,04497,1497,14O鄰0,960,040,044,595,7197,140,930.96*M0,070,04591,4397,140,870,96*0,130,045,590,0097.140.850,96****0'150,040,588,5785,710,670,603,002,610,03198,5790,000,960,7324,003,910.031,5100.0092.861.000.81"5,870,032100,0098,571,000,98***0,022，5100.0097,141.000.960,0420398,5797,14o鄰0,960'020'043,597,1497,14o鄰O鄰0,040'04斗92,8697,140,89O鄰0,"0,044,590,0097,140,85O鄰**0,150'04588,5797,140,83O鄰***0,170.045,588,5795,710,830,93***0,170,070,5B4，2980,000,540,442.181,810,05197'1488，570,920,6912,003,350,031,5100,0092.861,000,81"5,870'0397,1495.71O鄰0,89"11,740,040,022,594,2998,570,91O鄰**0,090,02加390,0097,140,85O鄰"**0,150,043,588,5797,140,83O鄰**0,170'04485,7197.140,78O鄰**M0,220,044,585,7197,140,78O鄰*,*0,220,04584.2997,140,76O鄰****0，240,045'581.4395,710,720,930,280,07*a:0**中+流行性65,71分鐘(Minuto)，值6P.C,(Valor5P.C,)，方案(Protocolo),最好的執(zhí)行中止點(diǎn)(cutoffpoint)，對(duì)于方案I來(lái)說(shuō)，^皮發(fā)現(xiàn)在1010分鐘，2.0和2.5德?tīng)枴非E(二者均為100%);20分鐘，1.5、2.0以及2.5德?tīng)査?三者均為100%);30分鐘，1.5德?tīng)査?100%);以及對(duì)于方案II在IO分鐘，2.0德?tīng)査?98.57%);20分鐘，2.0德?tīng)査?98.57%),30分鐘，2.5德?tīng)査?98.57%)。根據(jù)尤登指數(shù)，對(duì)所述13C標(biāo)記尿素呼氣試驗(yàn)效率的評(píng)估顯示，所述方案I在最好的執(zhí)行點(diǎn)時(shí)為理想的診斷試驗(yàn)。該功效可從所述RV+看出，所述RV+顯示方案I和方案II具有高的可能性將被幽門螺桿菌感染的個(gè)體歸類為陽(yáng)性，同時(shí)所述RV-顯示方案I和方案II具有接近于零(0)的可能性將未被幽門螺桿菌感染的個(gè)體歸類為陽(yáng)性。表2示出10、20和30分鐘下在最好的執(zhí)行中止點(diǎn)，所述130標(biāo)記尿素呼氣診斷試驗(yàn)對(duì)于方案I來(lái)說(shuō)具有100%的敏感度。相反地，在10、20和30分鐘下最好的執(zhí)行中止點(diǎn)，所述"C標(biāo)記尿素呼氣診斷試驗(yàn)對(duì)于方案II來(lái)說(shuō)具有97.83%的敏感度。對(duì)于方案I和方案II，所述特異性均為100%。于95%的信度下，在10分鐘(X2=0.9857;p=0.3208)、20分鐘(X2=0.9699;p=0.3247)、以及30分鐘(X2=0.9857;p=0.3208)下方案I和方案II之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)上的顯著差異。兩種方案的結(jié)果在10分鐘和30分鐘時(shí)相同。表2.13(:標(biāo)記尿素呼氣試驗(yàn)。方案I和方案II在IO、20和30分鐘下于不同中止點(diǎn)時(shí)的敏感度(Sens腿dad)、特異性(Especificidad)、陽(yáng)性予貞觀'H直(ValorPredictivo+)、和P月'f生予貞觀'H直(ValorPredictivo—)。labomtorioClinicoHematologicoS.A.，Medellin,Colombia2006。分鐘倍spc_敏感度_特異性_陽(yáng)性預(yù)測(cè)值_陰性預(yù)測(cè)值i且sp.c'~^!7f^!"J^!T^11^!"J^"WF分鐘(Minuto),值5P.C.(Valor5P.C.),方案(Protocolo)根據(jù)所述ROC區(qū)域(圖表1),方案I下的13C標(biāo)記尿素呼氣試驗(yàn)為理想的試驗(yàn)，其敏感度和特異性均等于1。圖表l.方案(Protocolos)I和方案II在10、20和30分鐘下的ROC曲纟戔(curva/s)只于比。laboratorioClinicoHematologicoS.A.，Medellin，Colombia2006。io分鐘roc曲線20分鐘k0c曲線30分鐘r0c曲線'nI,:::~.tz'n,::■■■■.—;-:—，P|.,i,i,-o,s-.—;卜一:…i.....i.................:—^—!——:'-——o，.....':——;——':——r—i-^^^一o.a......——f…;——-^^-.、:-—0,0.....—…;-…;…—.…卜.+…—..ofl.....亇….;…-;….f—r—.…o,'.......l..-.':—-—...:--...;—-;--;^^..;—-.0,7.......:.——;—;—卜.^j/^07......:;—;-;--^i<^--;…-';■…OO010,20.3(M0.50,60,70,8O,S,,D'DO010,20,30.O.S0,60,7W0;9，,OOfl0,1IU0,30,4O.SO,S0.70.80.91,0'.特異性'.特異件，'特異性I一方案i一一方案n敏感度(Sensibilidad),特異性(Especificidad)2045,8362,5083,3379,1795,8395,83100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100.00100.00100.00100,00100,0066,67右2,S095,8375,00100.0083,33100,00100.00100,00100.00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,0083.3390,0097,83100,00100.00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,00100,0096,0092,3182,7677,4275.0075,0054,1745,8380,7091,6770,8395,83100,0083,33100.00100,0091,67100,00100,00100,00100,00100,00100.00100,00100,00100,00100,00100.00100,00100,00100,00100,00100.00100,00100,00100,00100.00100,00100,0097,8397,83q7838365656565656565100,00100,00100.00,00,oo00OD3189004293.7595,0095,8396,00，31,31,3192.3192,3192,3192,3175,0070,5970,596B,5764,8695,6596.0092.3192,3192,3192,3192.3188,89i齒趙泡餒>s4<<1J-詣超§§叫叫§335868o,o，o，o，o,886497§加MM叫7,7,5，3，6,3C,C*J-44，濕7;2,7:oooooooo_0-7-00000000Mgoooooooo_6888666-7,，717T7,5,5,5，999999984叫加叫犯的353811c,o,o-o,o-8Co1766S加加加加PS,Js,s,s，K，s!j，3,455,133333555588,88866,667.7,7,7，7,5,5，5,5，999999999c,c_c，637622o71§的叫5,1，412-8,oo,6,KKK99887773，B,1，o，o,o,o，o,o,o,o.94440000000SSSSo-o，o，o_o,o，o,7,5,1,5,ooooooo5440111111-7,7,2033-3333_3,4,5,6，2.2，2，2，2，2,99999999997446421,4,5.999715,5,5,5，5，5,5，99999999§M6,6-2,00,o"7，KK999887222999。■o，o.""3加w仏s,wMM98712表3和圖表2示出方案I和方案II中幽門螺桿菌陽(yáng)性或陰性個(gè)體在10、20、30分鐘下中止點(diǎn)值[513(:02]的特性。表3.方案I和方案II在10、20和30分鐘下幽門螺桿菌陽(yáng)性或陰性個(gè)體的513C02<直分布。laboratorioClinicoHematologicoS.A.,Medellin,Colombia2006。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage14</image>表3和圖表2還示出^C標(biāo)記尿素呼氣試驗(yàn)一方案I中在IO分鐘下的幽門螺桿菌感染個(gè)體的513C02中值為13.64，同時(shí)方案II的513C02中值為12.02。在這兩類數(shù)值(Wilcoxon，p=0.121)之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)上的顯著差異。相反地，在20和30分鐘下，具有統(tǒng)計(jì)上的顯著差異(Wilcoxon,p分別等于0.006和0.001)。此外，表3和圖表2示出13C標(biāo)記尿素呼氣試驗(yàn)--方案I中未感染個(gè)體在10分鐘下的513C02中值為0.51，而方案II的513C02中值為0.32。這些數(shù)值在10、20和30分鐘下沒(méi)有統(tǒng)計(jì)上的顯著差異(Wilcoxon,p分別等于0,710、0.440和0.346)。討論所述結(jié)果提示，作為13C標(biāo)記尿素呼氣試驗(yàn)的一部分的檸檬酸的使用，或許是不必要的。方案I的敏感度和特異性也提示給被試個(gè)體適量水的所迷新的獨(dú)立步驟為一種替代膠嚢內(nèi)鏡胃內(nèi)灌輸?shù)倪m當(dāng)替代，以避免殘留的13C標(biāo)記尿素與其它可能的固定在口腔中的產(chǎn)生尿素酶的細(xì)菌接觸。方案I在IO分鐘下的結(jié)果，也提示給被試個(gè)體適量水的所述新的獨(dú)立步驟可以提供最理想的條件，用于胃脘中有尿素酶催化的13C標(biāo)記尿素的快速衰減。如表2中所示出的那樣，本研究的結(jié)果還提示50mg劑量的13C標(biāo)記尿素對(duì)關(guān)于敏感度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值來(lái)說(shuō)具有最理想條件的試驗(yàn)是足夠的。消除所述13C標(biāo)記尿素呼氣試驗(yàn)中的檸檬酸可得到忍耐性更好的試驗(yàn)，因?yàn)榫哂?。C標(biāo)記尿素的水溶液無(wú)色、無(wú)嗅、無(wú)味且無(wú)毒?？傊桨窱提供一種。c標(biāo)記尿素呼氣試驗(yàn)，該試驗(yàn)更好忍受、容易做、持續(xù)時(shí)間短，且其中減少了"C標(biāo)記尿素的用量。方案I試驗(yàn)的樣本收集可以間接進(jìn)行且收集到的樣本可以通過(guò)信件發(fā)送，原因在于收集到的樣本可以在室溫下被儲(chǔ)藏?cái)?shù)月而不會(huì)對(duì)個(gè)體呼氣中的13(3含量有負(fù)面影響。方案I提供一種試驗(yàn)，其能夠被大規(guī)模地應(yīng)用于流行病學(xué)研究和普遍地根除幽門螺桿菌。權(quán)利要求1、一種基于用于檢測(cè)病源微生物的呼氣試驗(yàn)的方法，包括A.收集個(gè)體基準(zhǔn)呼氣的第一樣本；B.緊隨收集基準(zhǔn)呼氣的第一樣本后，給所述個(gè)體口服具有標(biāo)記碳的尿素溶液；C.緊隨給出具有標(biāo)記碳的尿素溶液后，給所述個(gè)體口服適量的水；D.收集第二呼氣樣本，其中所述第二呼氣樣本自給出所述水起經(jīng)預(yù)定時(shí)間后被收集；和E.測(cè)定和分析所述第一呼氣樣本和第二呼氣樣本中標(biāo)記碳存在的量。2、如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述適量的水介于100毫升和250毫升之間。3、如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述具有標(biāo)記碳的尿素溶液介于15毫升和50毫升之間，且其中所述具有標(biāo)記碳的尿素介于15毫克和50毫克之間，且其中所述尿素的標(biāo)記碳為碳-13。4、如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述第二呼氣樣本在給所述個(gè)體所述適量的水后超過(guò)4分59秒后被收集。5、如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述病源微生物為幽門螺桿菌。6、一種通過(guò)呼氣試-驗(yàn)4全測(cè)病源;微生物的組合工具，其中該組合工具包括a.盛水的容器；b.盛具有標(biāo)記碳尿素的容器；c.在所述呼氣試^r的開(kāi)頭且在攝入標(biāo)記碳尿素之前收集第一呼氣樣本的第一容器；d.在所述呼氣試驗(yàn)的結(jié)尾且在攝入適量的水之后收集第二呼氣樣本的第二容器；和其中所述第一容器和第二容器具有帽狀部，所述帽狀部具有使得針狀傳感器引入的結(jié)構(gòu)。7、如權(quán)利要求6所述的組合工具，其中所述盛標(biāo)記碳尿素的容器盛有介于15毫克和50毫克之間的標(biāo)記碳尿素，且其中所述標(biāo)記石友尿素被溶解于水中，且其中用于溶解所述標(biāo)記碳尿素的水量介于15毫克和50毫克之間。8、如權(quán)利要求6所述的組合工具，其中所述標(biāo)記碳尿素用石灰-13進(jìn)行標(biāo)記。9、如權(quán)利要求6所述的組合工具，其中所述盛水的容器盛有介于200毫升和250毫升之間的水。10、如權(quán)利要求6所述的組合工具，其中所述組合工具包括一對(duì)用于將所述第一呼氣樣本和第二呼氣樣本分別收集到所述第一容器和第二容器中的工具。11、如權(quán)利要求IO所述的組合工具，其中用于收集所述第一呼氣樣本和第二呼氣樣本的所述工具為一對(duì)吸管。12、如權(quán)利要求11所述的組合工具，其中所述盛水的容器、所述盛標(biāo)記碳尿素的容器、所述第一容器、所述第二容器以及所述的一對(duì)吸管容置于箱體中。13、如權(quán)利要求IO所述的組合工具，其中所述病源微生物為幽門螺桿菌。全文摘要本發(fā)明提供一種基于尿素呼氣試驗(yàn)的檢測(cè)和診斷胃與十二指腸腔道中幽門螺桿菌的方法，以及一種用于執(zhí)行所述方法的組合工具。所述方法包括收集個(gè)體或患者第一基準(zhǔn)呼氣樣本；給所述個(gè)體標(biāo)記的碳尿素溶液；緊接著的新的和獨(dú)立的步驟，給所述個(gè)體適量的水以清除其口腔中的任何殘留尿素；以及在不少于5分鐘后，收集第二呼氣樣本。文檔編號(hào)G01N33/497GK101641597SQ200780051430公開(kāi)日2010年2月3日申請(qǐng)日期2007年12月14日優(yōu)先權(quán)日2006年12月17日發(fā)明者格爾曼·安東尼奧·坎普扎諾·瑪雅申請(qǐng)人:格爾曼·安東尼奧·坎普扎諾·瑪雅