專利名稱：：一種分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，特別涉及一種采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法。
背景技術(shù)：
：香加皮(戶en》/oca^e^w)又名北五加皮、杠柳皮，為蘿摩科植物杠柳Pe—/oca^/訓(xùn)Bge的干燥根皮。香加皮味辛、苦、溫；有毒，歸肝、腎、心經(jīng)，可祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨，用于治療風(fēng)濕痹痛、腰膝酸軟、心悸氣短、下肢浮腫。現(xiàn)代臨床用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、乳腺癌等；用其總皂苷治療慢性充血性心力衰竭效果顯著(鄧士賢，王德成，王懋德，等.滇杠柳苷的強(qiáng)心作用[J].ActaPharmaceuticaSinica(藥學(xué)學(xué)報(bào))，1964，11(2):75.HedejiI,XuJP.PregnaneGlycosidefromanAntitumourFractionofPeriplocasepium.Phytochemistry,1988,27(4):1173.)。香加皮的主要化學(xué)成分包括皂苷類、強(qiáng)心甙類以及香氣成分?；钚栽囼?yàn)表明根皮甲醇提取物中C21甾體類化合物和強(qiáng)心苷類成分有顯著抗小鼠腹水癌作用(張?jiān)?，王鋒鵬.杠柳屬植物化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].NaturalProductResearchandDevelopment(天然產(chǎn)物研究與開發(fā))，2003，15(2):157-161.KaoruU，NaomiS,"StudiesonDifferentiationInducers.V.SteroidGlycosidesfromPeriplocaeRadicisCortex[J].Chem.Pharm.Bull.1995,43(9):1565-1568.)。史清華等人采用試管預(yù)試和圓形濾紙層析預(yù)試法，初步判定香加皮根皮中含有脂肪酸類化學(xué)成分(史清華，馬養(yǎng)民，等.杠柳根皮化學(xué)成分及殺蟲活性的初步研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2005,14(6):141-144.)。目前，國內(nèi)、外均尚未見有關(guān)其脂肪酸成分提取及分析的報(bào)道。脂肪酸類化合物具有抗血小板凝集、降血脂及鎮(zhèn)靜作用。研究證明，高級不飽和脂肪酸具有增強(qiáng)人體免疫力、降血脂、抗動脈粥樣硬化和抗血栓形成等功效(MuYM，YanassT，efa/.SaturatedFFAs,palmiticacidandstearicacid,inducedapoptosisinhumangranulosecells[J].Endocrinologyl.2001,142:3590-3597.)。為全面闡明香加皮的藥用價(jià)值，本發(fā)明采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對香加皮脂肪酸成分進(jìn)行了分析，為香加皮的開發(fā)與研究提供了科學(xué)依據(jù)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，該方法包含以下步驟(a)從香加皮中提取脂肪酸；(b)對脂肪酸進(jìn)行甲酯化得脂肪酸甲酯；(c)用GC-MS聯(lián)用方法檢測脂肪酸甲酯；其中，上述步驟(c)中GC-MS聯(lián)用的色譜條件是色譜柱為石英毛細(xì)管色譜柱；載氣為高純氦氣；進(jìn)樣口溫度為23027(TC，最好為25(TC;分流比為8:112:1，最好為10:1;流速為0.81.2mlvmin"，最好為l.OmL.min陽1。其中，上述步驟(c)中GC-MS聯(lián)用的質(zhì)譜條件是:離子源為EI離子源；四極桿溫度為120170°C，最好為150°C;傳輸線溫度為270310'C，最好為29(TC;倍增管電壓為18002200V，最好為2000V;GC-MS接口溫度為21025(TC，最好為23(TC。上述石英毛細(xì)管色譜柱優(yōu)選為DB-17石英毛細(xì)管色譜柱，其規(guī)格最好為30mx0.25mm;測定過程中可以采用以下方式程序升溫初始溫度130170°C，最好為15(TC，以36。C'min"(最好為5"C'min")升溫至230270°C，最好為25(TC，停留38min，最好為5min。上述離子源電離能量可以為70eV;離子源溫度可以為270280°C。上述步驟(a)中提取脂肪酸的方法可以包括香加皮藥材粉碎，用沸程為609(TC石油醚回流提取610h，最好為8h，過濾后減壓濃縮，揮干溶劑得脂肪酸提取物。上述步驟(b)中脂肪酸甲酯化的方法可以包括取適量脂肪酸樣品，加入2%氫氧化鈉一甲醇溶液，置60。C水浴加熱1530min，再加入三氟化硼一乙醚溶液反應(yīng)5min后，精密加入正己烷，保持5min，反應(yīng)液冷卻至室溫后，加入飽和氯化鈉適量，振搖15min，靜置分層，取上清液即得甲酯化的脂肪酸溶液。本發(fā)明提供的GC-MS聯(lián)用技術(shù)分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法為全面闡明香加皮的藥用價(jià)值以及為香加皮的開發(fā)與研究提供了科學(xué)依據(jù)。應(yīng)該理解，上述色譜條件為典型條件，實(shí)際應(yīng)用中根據(jù)所使用儀器的不同特點(diǎn)，可以對各參數(shù)做出適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以期獲得最佳的效果。圖1表示香加皮中脂肪酸甲酯的總離子色譜圖。具體實(shí)施例方式為了更加清楚地對本發(fā)明進(jìn)行說明，以下通過具體實(shí)施例對本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行更為詳細(xì)地說明。但是應(yīng)該理解，以下所述具體實(shí)施例僅用于對本發(fā)明進(jìn)行示例性說明，而非用于對本發(fā)明進(jìn)行任何性質(zhì)的限定，其中所用材料、試劑、儀器及操作條件等僅為代表性的，其并不限于所列舉的情況。所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員通過閱讀以下說明可以對本發(fā)明做出不脫離本發(fā)明權(quán)利要求所限定的保護(hù)范圍的改動和改進(jìn)，這些改動和改進(jìn)也處于本發(fā)明所要求保護(hù)的范圍內(nèi)。1儀器、材料與試劑1.1儀器GC-MS聯(lián)用儀(SfflMADZU6010NGCSystem/SfflMADZU601ONMSSystem);AGBP210S電子天平(德國satorious公司)。1.2藥材與試劑香加皮，購自沈陽市藥材公司，由沈陽藥科大學(xué)中藥系孫啟時(shí)教授鑒定為正品。所用試劑均為分析純試劑。2實(shí)驗(yàn)部分2.1脂肪酸提取香加皮藥材100g，粉碎后用石油醚(6090°C)回流提取8h，過濾后減壓濃縮，揮干溶劑得脂肪酸。2.2樣品甲酯化取2滴脂肪酸樣品，加入2%氫氧化鈉一甲醇溶液2mL置6(TC水浴15min,再加入2mL三氟化硼一乙醚溶液反應(yīng)5min。精密加入2mL正己垸，再保持5min，反應(yīng)液冷卻至室溫后，加入飽和氯化鈉適量，振搖15min，靜置分層，取上層清液備用。2.3GC-MS分析條件2.3.1色譜條件載氣高純氦氣；DB-17石英毛細(xì)管柱(30mx0.25mm)分流比10:1;進(jìn)樣口溫度250°C;程序升溫初始溫度15(TC，以5'Omin"升溫至25(TC，停留5min;進(jìn)樣量lpL;流速l.OmL'min-l。2.3.2質(zhì)譜條件EI離子源；電離能量70eV;離子源溫度280°C;四極桿溫度150°C;傳輸線溫度290°C;倍增管電壓2000V;掃描質(zhì)量范圍30450amu;GC-MS接口溫度230°C。3分析鑒定結(jié)果取甲酯化的脂肪酸樣品溶液，注入氣質(zhì)聯(lián)用儀分析，各峰經(jīng)質(zhì)譜分析與標(biāo)準(zhǔn)譜庫核對和已知化合物對照法，確認(rèn)18種脂肪酸。GC-MS分析香加皮中脂肪酸甲酯的總離子色譜圖如圖l所示。其定性、定量結(jié)果見下表l。表l香加皮中得到確認(rèn)的脂肪酸及其含量峰號保留時(shí)間化合物分子式分子量質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>611.74未鑒定出2.151712.02未鑒定出0.946813.40十六烷酸(棕櫚酸)C16H320225638.18913.579-十六碳烯酸(棕櫚烯酸)G16H30O22543.4591013.72十六碳一烯酸G16H30O22551.9911115.18十七烷酸C17H34022700.8581217.22十八烷酸(硬脂酸)G18H36O22841.4481317.409-十八碳烯酸(油酸)G18H34O22827.0211417.518-十八碳烯酸C18H34022822.4871517.929,12-十八碳二烯酸(亞油酸)C18H320228032.671618.549,12,15-十八碳三烯酸(o-亞麻酸)G18H30O22783.7731719.07二十垸酸(花生酸)C20H40O23120.1541821.52二十碳四烯酸C20H32O23040.1411921.69二十二烷酸C22H44O23400.2922022.03二十二碳四烯酸C22H36023320.172在所鑒定的脂肪酸成分中，棕櫚酸(38.18%)含量最高，其次是亞油酸(32.67%)，這2種酸占總量的70.85%，不飽和脂肪酸(即9-十六碳烯酸(棕櫚烯酸)、十六碳一烯酸、9-十八碳烯酸(油酸)、8-十八碳烯酸、9,12-十八碳二烯酸(亞油酸)、9，12，15-十八碳三烯酸(o-亞麻酸)、二十烷酸(花生酸)、二十碳四烯酸、二十二碳四烯酸)占總量的51.71%，其中單不飽和脂肪酸(即9-十六碳烯酸(棕櫚烯酸)、十六碳一烯酸、9-十八碳烯酸(油酸)、8-十八碳烯酸)占14.96%，多不飽和脂肪酸(即9，12-十八碳二烯酸(亞油酸)、9,12,15-十八碳三烯酸(a-亞麻酸)、二十碳四烯酸、二十二碳四烯酸)占36.76%。實(shí)施例二1儀器、材料與試劑1.1儀器GC-MS聯(lián)用儀(SHIMADZU6010NGCSystem/SHIMADZU601ONMSSystem);AGBP21OS電子天平(德國satorious公司)。1.2藥材與試劑香加皮，購自沈陽市藥材公司，由沈陽藥科大學(xué)中藥系孫啟時(shí)教授鑒定為正品。所用試劑均為分析純試劑。2實(shí)驗(yàn)部分2.1脂肪酸提取香加皮藥材100g，粉碎后用石油醚(60°C90°C)回流提取6h，過濾后減壓濃縮，揮干溶劑得脂肪酸。2.2樣品甲酯化取2滴脂肪酸樣品，加入2%氫氧化鈉一甲醇溶液2mL置6(TC水浴15min,再加入2mL三氟化硼一乙醚溶液反應(yīng)5min。精密加入2mL正己烷，再保持5min，反應(yīng)液冷卻至室溫后，加入飽和氯化鈉適量，振搖15min，靜置分層，取上層清液備用。2.3GC-MS分析條件2.3.1色譜條件載氣高純氦氣；DB-17石英毛細(xì)管柱(30mx0.25mm)分流比8:1;進(jìn)樣口溫度230°C;程序升溫初始溫度13(TC,以6。Omin"升溫至23(TC，停留3min;進(jìn)樣量lpL;流速0.8mLmin國1。2.3.2質(zhì)譜條件EI離子源；電離能量70eV;離子源溫度270°C;四極桿溫度120°C;傳輸線溫度310°C;倍增管電壓1800V;掃描質(zhì)量范圍30450amu;GC-MS接口溫度210°C。3分析鑒定取甲酯化的脂肪酸樣品溶液，注入氣質(zhì)聯(lián)用儀分析，各峰經(jīng)質(zhì)譜分析與標(biāo)準(zhǔn)譜庫核對和已知化合物對照法，確認(rèn)脂肪酸。實(shí)施例三1儀器、材料與試劑1.1儀器GC-MS聯(lián)用儀(SHIMADZU6010NGCSystem/SHIMADZU60IONMSSystem);AGBP210S電子天平(德國satorious公司)。1.2藥材與試劑香加皮，購自沈陽市藥材公司，由沈陽藥科大學(xué)中藥系孫啟時(shí)教授鑒定為正品。所用試劑均為分析純試劑。2實(shí)驗(yàn)部分2.1脂肪酸提取香加皮藥材100g，粉碎后用石油醚(60°C％°C)回流提取10h，過濾后減壓濃縮，揮干溶劑得脂肪酸。2.2樣品甲酯化取2滴脂肪酸樣品，加入2%氫氧化鈉一甲醇溶液2mL置60。C水浴15min，再加入2mL三氟化硼一乙醚溶液反應(yīng)5min。精密加入2mL正己烷，再保持5min，反應(yīng)液冷卻至室溫后，加入飽和氯化鈉適量，振搖15min，靜置分層，取上層清液備用。2.3GC-MS分析條件2.3.1色譜條件載氣高純氦氣；DB-17石英毛細(xì)管柱(30mx0.25mm)分流比12:1;進(jìn)樣口溫度270°C;程序升溫初始溫度17(TC，以3。C'min"升溫至27(TC，停留6min;進(jìn)樣量l|iL;流速1.2mL'mirT1。2.3.2質(zhì)譜條件EI離子源；電離能量70eV;離子源溫度270°C;四極桿溫度170°C;傳輸線溫度270°C;倍增管電壓2200V;掃描質(zhì)量范圍30450amu;GC-MS接口溫度250°C。3分析鑒定取甲酯化的脂肪酸樣品溶液，注入氣質(zhì)聯(lián)用儀分析，各峰經(jīng)質(zhì)譜分析與標(biāo)準(zhǔn)譜庫核對和已知化合物對照法，確認(rèn)脂肪酸。10權(quán)利要求1.一種分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，包括下列步驟(a)從香加皮中提取脂肪酸；(b)對脂肪酸進(jìn)行甲酯化得脂肪酸甲酯；(c)用GC-MS聯(lián)用方法檢測脂肪酸甲酯；其中，上述步驟(c)中GC-MS聯(lián)用的色譜條件是色譜柱為石英毛細(xì)管色譜柱；載氣為高純氦氣；進(jìn)樣口溫度為230～270℃；分流比為8:1～12:1；流速為0.8～1.2mL·min-1；其中，上述步驟(c)中GC-MS聯(lián)用的質(zhì)譜條件是離子源為EI離子源；四極桿溫度為120～170℃；傳輸線溫度為270～310℃；倍增管電壓為1800～2200V；GC-MS接口溫度為210～250℃。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，其特征在于GC-MS聯(lián)用的色譜條件中進(jìn)樣口溫度為25(TC;分流比為10:1;流速為l.OmL'min";GC-MS聯(lián)用的質(zhì)譜條件中四極桿溫度為150°C;傳輸線溫度為290°C;倍增管電壓為2000V;GC-MS接口溫度為230。C。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，其特征在于所述石英毛細(xì)管色譜柱為DB-17石英毛細(xì)管色譜柱，其規(guī)格為30mx0.25mm。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法,其特征在于所述色譜條件采用以下方式程序升溫初始溫度130170°C，以36。C.min"升溫至230270°C，停留38min。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，其特征在于所述色譜條件采用以下方式程序升溫:初始溫度150°C，以5'。min—1升溫至25(TC,停留5min。6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，其特征在于所述離子源電離能量為70eV;離子源溫度為270280°C。7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，其特征在于所述步驟(a)中提取脂肪酸的方法包括香加皮藥材粉碎，用沸程為609(TC石油醚回流提取610h，過濾后減壓濃縮，揮干溶劑得脂肪酸提取物。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，其特征在于所述步驟(a)中提取脂肪酸的方法包括香加皮藥材粉碎，用沸程為609(TC石油醚回流提取8h，過濾后減壓濃縮，揮干溶劑得脂肪酸提取物。9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，其特征在于所述步驟(b)中脂肪酸甲酯化的方法包括取適量脂肪酸樣品，加入2%氫氧化鈉一甲醇溶液，置6(TC水浴加熱1530min，再加入三氟化硼一乙醚溶液反應(yīng)5min后，精密加入正己院，保持5min,反應(yīng)液冷卻至室溫后，加入飽和氯化鈉適量，振搖15min，靜置分層，取上清液即得甲酯化的脂肪酸溶液。全文摘要本發(fā)明提供一種分析香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的方法，該方法包含以下步驟(a)從香加皮中提取脂肪酸；(b)對脂肪酸進(jìn)行甲酯化；(c)用GC-MS聯(lián)用方法檢測甲酯化的脂肪酸；其中，GC-MS聯(lián)用的色譜條件是色譜柱為石英毛細(xì)管色譜柱；載氣為高純氦氣；進(jìn)樣口溫度為230～270℃；分流比為8∶1～12∶1；流速為0.8～1.2mL·min^-1；質(zhì)譜條件是離子源為EI離子源；四極桿溫度為120～170℃；傳輸線溫度為270～310℃；倍增管電壓為1800～2200V；GC-MS接口溫度為210～250℃。本發(fā)明的方法經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證準(zhǔn)確可靠，可用于香加皮中脂肪酸化學(xué)成分的分析。文檔編號G01N30/00GK101498702SQ20081000640公開日2009年8月5日申請日期2008年2月2日優(yōu)先權(quán)日2008年2月2日發(fā)明者玲佟,周水平,莉李,畢開順,潔馬,鈞高申請人:天津天士力制藥股份有限公司