專利名稱：四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化學(xué)分析方法，特別是涉及一種抗?jié)兯幬锏氖?性分離分析方法。
技術(shù)背景毛細(xì)管電泳技術(shù)為上世紀(jì)80年代興起的一種分離分析技術(shù)，具備以 下特點(diǎn)(1)毛細(xì)管柱一般不需要填充或復(fù)雜的處理，價(jià)格相對(duì)較低； (2)運(yùn)行環(huán)境是在水介質(zhì)緩沖溶液中，不造成二次污染；(3)樣品消耗 量很少，每次進(jìn)樣量?jī)H為納升級(jí)；(4)在電場(chǎng)的驅(qū)動(dòng)下運(yùn)行，緩沖溶液 的消耗約為液相色譜中溶劑消耗的百萬(wàn)分之一；(5)分離柱效高；(6) 應(yīng)用范圍廣，而且對(duì)樣品的預(yù)處理要求較低。四個(gè)抗?jié)兯幬餅橘|(zhì)子泵 抑制劑(PPIs)包括泰妥拉唑，泮托拉唑，蘭索拉唑和雷貝拉唑。PPIs 主要用于治療十二指腸潰瘍、胃潰瘍、反流性食管炎等與胃酸分泌相關(guān) 的疾病。PPIs具有相似的分子結(jié)構(gòu)，分子中具有一個(gè)手性硫原子中心， 存在R， S兩個(gè)對(duì)映異構(gòu)體，臨床以外消旋體的形式使用。目前，此類藥物中第一代PPI奧美拉唑左旋體-S-奧美拉唑(商品名耐信)在美國(guó)上市，成為世界上銷量最大的抗?jié)n瘍藥。對(duì)此類抗?jié)兯幬飭我粚?duì)映體的 研究開發(fā)已成為熱點(diǎn)。由于兩個(gè)對(duì)映體具有相似的理化性質(zhì)，常規(guī)的方 法很難分離，目前對(duì)此類藥物手性分離分析方法主要采用手性固定相高 效液相色譜法。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種采用毛細(xì)管電泳法(CE)，以環(huán)糊精衍 生物為手性選擇劑，分離分析四個(gè)抗?jié)兯幬飳?duì)映體。用于此類抗?jié)?手性藥物的體內(nèi)分析和產(chǎn)品光學(xué)純度檢測(cè)，為此類手性藥品的研究開發(fā) 提供技術(shù)保障。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離分析方法，包括設(shè)置電泳分離 條件、樣品操作、洗柱和進(jìn)樣四個(gè)步驟a. 電泳分離條件為泮托拉唑，蘭索拉唑、雷貝拉唑?qū)τ澈吞┩桌?唑?qū)τ丑w分離背景電解質(zhì)、分離電壓、紫外檢測(cè)波長(zhǎng)；b. 樣品操作背景電解質(zhì)和樣品溶液過(guò)濾，并超聲脫氣；c. 洗柱方式毛細(xì)管柱依次用O. 1M NaOH沖洗，二次蒸餾水沖洗， 背景電解質(zhì)沖洗后走基線，待基線平穩(wěn)后進(jìn)樣；d. 進(jìn)樣方式采用虹吸進(jìn)樣，正極進(jìn)樣負(fù)極檢測(cè)。所述的四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離分析方法，其所述的 電泳分離條件泮托拉唑，蘭索拉唑和雷貝拉唑?qū)τ?。背景電解質(zhì)50mM硼砂含30g/L的磺丁基-3 -CD用NaH2P(UI pH 至7.0;分離電壓15kv;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)290 nm。其所述的電泳分離條件泰妥拉唑?qū)τ丑w背景電解質(zhì)50mM硼砂含50g/L磺丁基-P-CD用NaH2PCU)§ pH至6.6;分離電壓10kv;檢測(cè)波長(zhǎng)306腿。所述的四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離分析方法，其所述的樣品操作背景電解質(zhì)和樣品溶液均經(jīng)0.45 um微孔濾膜過(guò)濾，并超 聲脫氣，樣品用O. 1M NaOH溶解，4 。C冰箱保存?zhèn)溆谩Ｋ龅乃膫€(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離分析方法，其所述的 洗柱方式毛細(xì)管總長(zhǎng)55cm,有效長(zhǎng)度38 cm，內(nèi)徑50 y m;毛細(xì)管 柱依次用0. 1M NaOH沖洗5 min， 二次蒸餾水沖洗5 min，背景電解質(zhì) 沖洗3min后走基線，待基線平穩(wěn)后約2min左右進(jìn)樣。所述的四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離分析方法，其所述的進(jìn) 樣方式采用虹吸進(jìn)樣，進(jìn)樣高度差10cm，進(jìn)樣時(shí)間10s，正極進(jìn)樣負(fù) 極檢測(cè)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與效果是本發(fā)明采用毛細(xì)管電泳法(CE)簡(jiǎn)單、環(huán)保、成本低，可以用于此 類抗?jié)兪中运幬锏捏w內(nèi)分析和產(chǎn)品光學(xué)純度檢測(cè)，為此類手性藥品的 研究開發(fā)提供技術(shù)保障。


圖l是本發(fā)明CE分離泮托拉唑?qū)τ丑w色譜圖； 圖2是本發(fā)明CE分離蘭索拉唑?qū)τ丑w色譜圖； 圖3是本發(fā)明CE分離雷貝拉唑?qū)τ丑w色譜圖； 圖4是本發(fā)明CE分離泰妥拉唑?qū)τ丑w色譜圖。
具體實(shí)施方式
下面參照附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。CE在手性藥物分離中已得到廣泛應(yīng)用。圖1為CE分離泮托拉唑?qū)τ丑w色譜圖，兩對(duì)映體分析時(shí)間在23分鐘內(nèi)，分離度為1.7。圖2為CE分離蘭索拉唑?qū)τ丑w色譜圖，兩對(duì)映體分析時(shí)間在17分 鐘內(nèi)，分離度為3.3。圖3為CE分離雷貝拉唑?qū)τ丑w色譜圖，兩對(duì)映體分析時(shí)間在14分 鐘內(nèi)，分離度為1.6。圖4為CE分離泰妥拉唑?qū)τ丑w色譜圖，兩對(duì)映體分析時(shí)間在14分 鐘內(nèi)，分離度為1.6。 實(shí)施例一1. 精密稱取泮托拉唑，蘭索拉唑和雷貝拉唑消旋體各10mg，分別 置10ml容量瓶中，用0. 1MNa0H定容至刻度，制備成lmg/mL的樣品儲(chǔ) 備液，4 r冰箱保存。從儲(chǔ)備液中精密量取lml至10ml容量瓶中，用 0. 1M NaOH定容至刻度，配置成三個(gè)濃度為100 u g/mL供試液，經(jīng)0. 45 ix m微孔濾膜過(guò)濾備用。2. 配制50mM硼砂含30g/L的磺丁基-P -環(huán)糊精，用NaH2P(Uj| pH 至7.0經(jīng)0.45 um微孔濾膜過(guò)濾，并超聲脫氣備用。毛細(xì)管柱依次用 0. 1M NaOH沖洗5 min， 二次蒸餾水沖洗5 min，背景電解質(zhì)沖洗3 min 后走基線，待基線平穩(wěn)后(大約2min左右)采用虹吸進(jìn)樣，進(jìn)樣高度 差10cm，進(jìn)樣時(shí)間10s，記錄電泳圖。進(jìn)樣間用背景緩沖液沖洗3 min 及走基線2min后進(jìn)行下一個(gè)樣品進(jìn)樣。分離電壓15kv，紫外檢測(cè)波 長(zhǎng)290 nm。分離電泳圖見圖1_圖3，泮托拉唑，蘭索拉唑和雷貝拉 唑?qū)τ丑w得到分離度大于1. 5的基線分離。實(shí)施例二1. 精密稱取10mg泰妥拉唑消旋體，置10ml容量瓶中，用0. 1MNa0H 定容至刻度，制備成lmg/mL的儲(chǔ)備液，4 "C冰箱保存。從儲(chǔ)備液中精 密量取lml至10ml容量瓶中，用0. 1M NaOH定容至刻度，配置成濃度 為100ug/mL供試液，經(jīng)0.45 um微孔濾膜過(guò)濾備用。2. 配制50 mM硼砂含50g/L磺丁基-P -環(huán)糊精用NaH2P(UJi pH至 6.6;經(jīng)0.45 um微孔濾膜過(guò)濾，并超聲脫氣備用。毛細(xì)管柱依次用 0. 1M NaOH沖洗5 min， 二次蒸餾水沖洗5 min，背景電解質(zhì)沖洗3 min 后走基線，待基線平穩(wěn)后(大約2min左右)進(jìn)樣。采用虹吸進(jìn)樣，進(jìn) 樣高度差10cm，進(jìn)樣時(shí)間10s，記錄電泳圖。分離電壓10kv，紫外檢 測(cè)波長(zhǎng)306 nm。分離電泳圖見圖4，泰妥拉唑?qū)τ丑w得到分離度大于 1.5的基線分離。
權(quán)利要求
1.四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離分析方法，包括設(shè)置電泳分離條件、樣品操作、洗柱和進(jìn)樣四個(gè)步驟，其特征在于a.電泳分離條件為泮托拉唑，蘭索拉唑、雷貝拉唑?qū)τ澈吞┩桌驅(qū)τ丑w分離背景電解質(zhì)、分離電壓、紫外檢測(cè)波長(zhǎng)；b.樣品操作背景電解質(zhì)和樣品溶液過(guò)濾，并超聲脫氣；c.洗柱方式毛細(xì)管柱依次用0.1M NaOH沖洗，二次蒸餾水沖洗，背景電解質(zhì)沖洗后走基線，待基線平穩(wěn)后進(jìn)樣；d.進(jìn)樣方式采用虹吸進(jìn)樣，正極進(jìn)樣負(fù)極檢測(cè)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離分析方法，其特征在于所述的電泳分離條件泮托拉唑，蘭索拉唑和 雷貝拉唑?qū)τ潮尘半娊赓|(zhì)50mM硼砂含30 g/L的磺丁基-P -環(huán)糊精用NaH2P04 調(diào)pH至7.0;分離電壓15kv;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)290 nm;所述的電泳分離條件泰妥拉唑?qū)τ丑w背景電解質(zhì)50mM硼砂含50 g/L磺丁基-3-環(huán)糊精用NaH2P04 調(diào)pH至6.6;分離電壓10kv;檢測(cè)波長(zhǎng)306腦。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離分析方法，其特征在于所述的樣品操作背景電解質(zhì)和樣品溶液均經(jīng)0.45 "m微孔濾膜過(guò)濾，并超聲脫氣，樣品用O. 1M NaOH溶解， 4 "C冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離 分析方法，其特征在于所述的洗柱方式毛細(xì)管總長(zhǎng)55cm，有效長(zhǎng) 度38 cm，內(nèi)徑50 um;毛細(xì)管柱依次用0. 1M NaOH沖洗5 min， 二次蒸餾水沖洗5 min，背景電解質(zhì)沖洗3 min后走基線，待基線 平穩(wěn)后約2min左右進(jìn)樣。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離 分析方法，其特征在于所述的進(jìn)樣方式采用虹吸進(jìn)樣，進(jìn)樣高度差 10cm，進(jìn)樣時(shí)間10s，正極進(jìn)樣負(fù)極檢測(cè)。
全文摘要
四個(gè)抗?jié)兯幬锩?xì)管電泳手性分離分析方法，涉及一種化學(xué)分析方法，包括設(shè)置電泳分離條件、樣品操作、洗柱和進(jìn)樣四個(gè)步驟，電泳分離條件為泮托拉唑，蘭索拉唑、雷貝拉唑?qū)τ澈吞┩桌驅(qū)τ丑w分離背景電解質(zhì)、分離電壓、紫外檢測(cè)波長(zhǎng)；樣品操作背景電解質(zhì)和樣品溶液過(guò)濾，并超聲脫氣；洗柱方式毛細(xì)管柱依次用0.1M NaOH沖洗，二次蒸餾水沖洗，背景電解質(zhì)沖洗后走基線，待基線平穩(wěn)后進(jìn)樣；進(jìn)樣方式采用虹吸進(jìn)樣，正極進(jìn)樣負(fù)極檢測(cè)。本發(fā)明用于此類抗?jié)兪中运幬锏捏w內(nèi)分析和產(chǎn)品光學(xué)純度檢測(cè)，為此類手性藥品的研究開發(fā)提供技術(shù)保障。
文檔編號(hào)G01N27/447GK101334376SQ20081001262
公開日2008年12月31日 申請(qǐng)日期2008年8月5日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月5日
發(fā)明者瑾 關(guān), 李發(fā)美, 爽 石, 峰 閻 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)化工學(xué)院