專利名稱：：動植物或微生物代謝物或海水中活性成分的降冪篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種動植物或微生物代謝物或海水中活性成分的降冪篩選方法。
背景技術(shù)：
：目前分離篩選動植物或微生物代謝物或海水中活性成分常用的方法很多。按現(xiàn)有的分離篩選方法，例如將涉及l(fā)(T種成分的樣品進(jìn)行分離篩選，必須先將該樣品中1()M個組分分離，然后對10M個組分分別用篩選模型(如生物培養(yǎng)篩選模型、體外抗腫瘤培養(yǎng)篩選模型、生物抗菌培養(yǎng)篩選模型等等)實驗進(jìn)行篩選，盡管篩選出的是一種活性最強的成分，但其他10M-1種組分的分離篩選實驗必須全部進(jìn)行，程序復(fù)雜，工作繁重，費時費力
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種動植物或微生物代謝物或海水中活性成分的降冪篩選方法，它能克服現(xiàn)有技術(shù)上的上述缺點。一種動植物或微生物代謝物或海水中活性成分的降冪篩選方法，其特征是將含有待降冪篩選活性成分的樣品，用公知的紙色譜或薄層色譜或電泳展開；將紙色譜的紙或薄層色譜上的涂布層或凝膠電泳上的凝膠分成N份，再將N份中的每份分成二部分，成為2N份，將其中N份分別用公知的篩選模型實驗進(jìn)行篩選；將另N份保存?zhèn)溆?；用篩選模型實驗篩選出促進(jìn)生長或抑制生長的活性最高的第X份或活性較高的第Y份，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對第X份或第Y份進(jìn)行成分檢測；如果檢測出的成分不單一，可將備用的第X份或第Y份再進(jìn)行同樣的篩選，直至用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、核磁共振儀及紅外光譜儀鑒定出所需要的活性成分結(jié)構(gòu)為止。本發(fā)明的優(yōu)點在于樣品中含有NM種成分，每次分為N份，按本發(fā)明的方法進(jìn)行M次降冪篩選，組分由N"降為N"即一個，只須做NM個模型篩選實驗，不必做N"個模型篩選實驗就可將最強的活性成分篩選鑒定出來，用的裝置簡單，省時省力，快捷準(zhǔn)確，能提高工作效率；應(yīng)用領(lǐng)域廣泛；市場前景及產(chǎn)業(yè)化后經(jīng)濟(jì)、社會效益可觀。具體實施方式實施例1植物黨參中促進(jìn)黑曲霉真菌生長的活性成分的降冪篩選應(yīng)用公知的紙色譜結(jié)合公知的生物培養(yǎng)篩選模型實驗對植物黨參中促進(jìn)黑曲霉真菌生長的活性成分進(jìn)行降冪篩選，實施步驟如下先制備含黨參30%(重量百分濃度，下同)的黨參水浸取液。將新文紙剪成20cm(寬)x30cm(高)的長方形，將其立于玻璃槽上，制成公知的紙色鐠裝置，用市售的微量注射器吸取上述黨參水浸取液，滴加到上述的色"^普紙下沿，滴加面積為20cm(寬)xlcm(高)，以蒸鎦水作為展開劑進(jìn)行展開后，將上述紙色譜裝置平放，涼干。將涼干后的色譜紙縱向等距離分成10份，再將各份分為二部份，每部分都為10份，同一部分中每份的面積都相同，分別標(biāo)記為l1/4，13/4';21/4,2〗/4;3i/4,3〗/4，;4i〃，4〗/4;5i〃，53.,4，;61"，63/4，;7i/4,73/4';8〃4，83/4';91/4,93/4';101/4，103/4',第一部分中一份的面積為另一部份中一份面積的1/3,將其中的一組10份(l1/4，21/4,31/4,41/4，51/4,61/4,71/4,81/4,91/4,101/4)分別放于含有10%葡萄糖的黑曲霉培養(yǎng)液中，滅菌后接入黑曲霉菌種，使其在黑曲霉培養(yǎng)液中的濃度為1%，于35。C有氧培養(yǎng)24h，對照組采用同樣大小的本底紙。其余的10份(13/4,，2s/4，,〗3/4，43/4，，53/4，，6'3/4，73/4，,83/4，,93/4'，10〗/4，)置無菌箱中保存?zhèn)溆?。用紫外吸收光譜法測定培養(yǎng)液中還原糖的濃度，還原糖的濃度用公知的3,5—二硝基水楊酸比色法檢測，檢測結(jié)果第7!/4份色譜紙的實驗組與對照組比較OD54Qn值最低，第7:/4份活性最高。用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定第71/4份色譜紙上的成分不單一。重復(fù)上述分離篩選實驗，用備用的第73/4'份色譜紙，制備出水浸取液，用上述同樣的紙色譜裝置展開，將色譜紙再等分成10份，，每部分都為10份，再將各份分為二部份，同一部分中每份的面積都相同，分別標(biāo)記為l/4，I3/4;2〃4,23/4;3〃4，〗3/4;4i/4,43/4，;5〃4，53〃，;6〃4，6〗/4，;71/4，73/4';81/4,83/4';91/4，93/4';101/4,103/4'，第一部分中一份的面積為另一部份中一份面積的1/3，將其中的一組IO份(l1/4，21/4,31/4,41/4，51/4，61/4，71/4,81/4，91/4，101/4)分別放于黑曲霉培養(yǎng)液中，滅菌后接入黑曲霉菌種，使其在黑曲霉培養(yǎng)液中的濃度為1%,于35。C有氧培養(yǎng)24h，對照組采用同樣大小的本底紙。其余的10份(13/4',23/4',33/4',43/4',53/4',6'3/4，73/4'，83/4',93/4',103/4')置于無菌操作箱中保存?zhèn)溆?，篩選結(jié)果對黑曲霉增殖最大的是其中的第41/4份。用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用初步測定第41/4份的成分不單一。再用無菌箱保存的對應(yīng)的第43/4'份色譜紙制備出水浸取液，用上述同樣的紙色譜裝置展開，重復(fù)上述篩選實驗，篩選結(jié)果以第51/4份對黑曲霉增殖最大。將備用的第53/4'份再進(jìn)行同上述步驟的降冪篩選后，取對黑曲霉增殖最大的一份，用丙酮提取活性成分，用氣相色鐠-質(zhì)譜聯(lián)用儀,、核磁共振儀及紅外光語儀鑒定出對黑曲霉增殖最大的活性成分結(jié)構(gòu)。'本實施例通過黨參植物水浸取液促進(jìn)黑曲霉生長的培養(yǎng)降冪篩選實驗，依據(jù)黑曲霉的增殖速率，篩選出化感作用最強或較強的植物天然成分，根據(jù)黨參活性成分的結(jié)構(gòu)進(jìn)行化感機理探討。用于黑曲霉發(fā)酵生產(chǎn)葡萄糖酸，能縮短發(fā)酵周期，達(dá)到節(jié)能降耗的目的。上述方法不僅應(yīng)用于物種之間產(chǎn)生化感作用的活性成分的降冪篩選，還可用于抗腫瘤中草藥活性成分的降冪篩選，也可用于癌癥多發(fā)地區(qū)的病因普查、海洋和淡水系及污泥中抗癌、抗菌藥物活性成分的降冪篩選。上述方法的建立對國際通行標(biāo)準(zhǔn)促進(jìn)大宗中藥材、化學(xué)及生物合成新藥、中成藥與以中藥材為原料出口的新產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了應(yīng)用及分析方法；對于中藥制藥篩選研究，建立既符合中醫(yī)藥傳統(tǒng)理^侖又能與國際新藥標(biāo)準(zhǔn)中藥制備工藝、中藥質(zhì)量控制、藥理藥效學(xué)評價、安全性評價提供了應(yīng)用及分析方法，具有廣闊應(yīng)用前景。實施例2植物栝樓中促進(jìn)光合細(xì)菌生長的活性成分的降冪篩選應(yīng)用公知的薄層色i普法結(jié)合公知的生物培養(yǎng)篩選模型實驗對植物栝樓中促進(jìn)光合細(xì)菌生長的活性成分進(jìn)行降冪篩選，實施步驟如下先制備30%栝樓水浸取液，再將長方形玻璃板20cm(寬)x25cm(高)用蒸餾水沖洗。將顆粒直徑為20-25納米的市售的二氧化硅溶膠與聚乙烯醇水溶液的混合物(兩者的重量比為1:1)涂布于玻璃板上，制成公知的薄層色譜裝置，用市售的微量注射器吸取栝樓水浸取液滴加到薄層涂布物下沿，滴加面積為20cm(寬)xicm(高)，'以蒸餾水作為展開劑進(jìn)行展開后，將薄層色譜裝置平放，涼干。將涼干后的薄層涂布物層從上述玻璃板上取下，然后縱向等距離分成10份，再將各份分為二部份，每部分都為10份，同一部分中每份的面積都相同，分另l)才示"i己為li/4,2丄/4，2s/4，;3〃4,33/4，;4i,4,43/4，;5〃4,53/4，;61/4，63/4，;7〃4,73/4，;81/4,83//;91/4,93/4';101/4,103/4',第一部分中一份的面積為另一部份中一份面積的1/3，將其中的一組IO份(11/4,2l/4，3i/4,4i/4,5i/4，61/4，7〃4，81/4，91/4,101/4)分別放于滅菌后的光合細(xì)菌培養(yǎng)液中，接入光合細(xì)菌菌種，使其在光合細(xì)菌培養(yǎng)液中的濃度為10%,于35。C經(jīng)24h的無氧培養(yǎng)，對照組采用同樣大小的薄層本底涂布物，其余的10份(13,4',23/4',33/4',43/4',53/4'，6'3/4，73/4',83/4',93/4',103/4')置無菌操作箱中保存?zhèn)溆?。用紫外吸收光譜法測定光合細(xì)菌培養(yǎng)液的吸光度，用OD"』值依據(jù)公式N=(7.62xOD66。nm+0.146)x109計算光合細(xì)菌的數(shù)量，實驗組與對照組比較，0D6,m值為第5!/4份最高。用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定第51/4份的成分不單一。重復(fù)上述分離篩選實驗，用與光合細(xì)菌增殖最大的對應(yīng)的第53/4'份制備出水浸取液，用上述同樣薄層色譜展開，將薄層色譜涂布層再等分成10份，再將各份分為二部份，每部分都為10份，同"部分中每份的面積都相同，分別標(biāo)記為11/4，13/4';21/4,23/4';31/4,33/4';4i"，4^/4;5〃4,5〗/4;6〃4,63/4;7"4，7〗/4;8i/4,83//;9i",93/4';101/4，103/4',第一部分中的一份的面積為另一部份中一份的面積的1/3，將其中的一組10份(11/4，21/4,31/4，41/4,51/4,61/4，71/4,81/4，91/4,101/4)分別放于培養(yǎng)液中，滅菌后接入光合細(xì)菌菌種，使其在光合細(xì)菌培養(yǎng)液中的濃度為10%,于35。C無氧培養(yǎng)24h,對照組采用同樣大小的薄層本底涂布物。其余的10份(13/4'，23/4',33/4',43/4'，5〗/4',6'3/4,73/4，,83/4',93/4',103/4')于無菌操作箱中備用，篩選結(jié)果為第81/4份對光合細(xì)菌增殖最大。用氣相色語-質(zhì)鐠聯(lián)用測定第81/4份的成分不單一。再用對應(yīng)的無菌箱保存的薄層第83/4'份制備出水浸取液，再進(jìn)行上述同樣的降冪篩選實驗，結(jié)果對光合細(xì)菌生長的影響以第41/4份為最好，第61/4份次之，第61/4份視為促進(jìn)作用較強的活性成分。用備用的第43/4'份和第63/4'份分別制備出水浸取液，再進(jìn)行同上述步驟的降冪篩選后，取對光合細(xì)菌增殖最大和較大的二份分別用丙酮浸取天然活性成分，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、核磁共振儀及紅外光i普儀鑒定出活性成分結(jié)構(gòu)，活性成分是1—十八烷烯。本實施例對于建立中醫(yī)藥理論和療效的中醫(yī)藥數(shù)據(jù)獲取、中藥復(fù)方多成分、多靶點、整體作用的研究提供了應(yīng)用及分析方法；對建立中藥多成分體系質(zhì)量控制，評價方法及技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)制訂提供了應(yīng)用及參考方法，具有廣泛應(yīng)用前景。實施例3植物半枝蓮中抑制腫瘤細(xì)胞活性成分的降冪篩選，本實施例應(yīng)用公知的薄層色譜法結(jié)合公知的S18Q抗腫瘤體外細(xì)胞培養(yǎng)篩選模型，對植物半枝蓮中抑制癌細(xì)胞Sm生長的活性成分進(jìn)行降冪篩選，實施步驟如下先制備濃度為30%的半枝蓮水浸取液，再將長方形玻璃板20cm(寬)x25cm(高)用蒸餾水清洗。將市酬的顆粒直徑為20-25納米的市售二氧化硅溶膠與聚乙烯醇水溶液的混合物(兩者的重量比為1:l)涂布于玻璃板上，制成公知的薄層色譜裝置，用市售的微量注射器吸取半枝蓮水浸取液滴加到薄層涂布物的下沿，滴加面積為20cm(寬)x1cm(高)，以蒸餾水作為展開劑進(jìn)行展開后，將薄層色譜裝置平放，涼干。將涼干后的薄層涂布物層從玻璃板上取下，然后縱向等距離分成8份，再將各份分為二部份，每部分都為8份，同一部分中每份的面積都相同，分別標(biāo)記為11/4,13/4';21/4,23/4';31/4,.33/4';41/4，43/4';51/4，53/4';61/4,63/4';71/4，73/4';81/4，83/4'，第一部分中一份的面積為另一部份中一份面積的1/3，將其中的一組8份(11/4,21/4,31/4,41/4,51/4,61/4,71/4，81/4)進(jìn)行公知的Su。體外實驗。取接種Su。小鼠腹水，無菌培養(yǎng)，3天傳代一次，傳至6代后供實驗使用。調(diào)S18。濃度為1Xl()5個/ml。用公知的方法布板每組4個復(fù)孔；對照組(0濃度)將100ml細(xì)胞水懸液加入到100ml培養(yǎng)基；陽性組將'100ml細(xì)胞水懸液加入到100ml培養(yǎng)基，稀釋conA100ml;實驗組將100ml細(xì)胞水懸液加入到100ml培養(yǎng)基，分別加入到8份(11/4,21/4,8:/4)中，培養(yǎng)68h后，向每孑L力口入iaTT，4h后加酸化異丙醇溶解，對照組采用同樣大小的薄層本底涂布物。其余的8份(13/4',23/4'，33/4'，43/4'，53/4'，6'3/4，73/4'，83/4')置無菌操作箱中保存?zhèn)溆?。用酶?biāo)儀于570nm波長測定培養(yǎng)液吸光度進(jìn)行篩選，篩選結(jié)果與對照組比較為第51/4份抑制作用最強。用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測得第51/4份的成分不單一。將與之對應(yīng)的第53/4'份備用的薄層涂布層制得水浸取液，重復(fù)上述降冪篩選實驗，進(jìn)行上述薄層色譜法展開后，將薄層涂布物層等分成5份，再將各份分為二部份，每部分都為5份，同一部分中每份的面積都相同，分別標(biāo)記為A1/4，A3/4';B1/4，B3/4';C1/4,C'3/4;D1/4,D3/4';E1/4,E3/4'，第一部分中一份面積為另一部份中一份面積的1/3。將其中的5份(A1/4,B1/4，C1/4，D山，E1/4)進(jìn)行上述Su。體外實驗篩選，對照組采用同樣大小的薄層本底涂布物。其余的5份(A3/4，,B3/4'，C3/4'，D3/4'，E3/4')置無菌操作箱中備用，篩選結(jié)果為C山份抑制作用最大。用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測得第Ci/4份的成分不單一。將對應(yīng)的在無菌箱中保存的C3/4'制得水浸取液，再進(jìn)行上述同樣的降冪篩選實驗，將薄層涂布層等分成10份，重復(fù)上述Sm體外篩選實驗，篩選結(jié)果以第91/4份為最好。用備用的93/4'份再制出水浸取液，進(jìn)行與上述步驟相同的降冪篩選后，取對Sm抑制作用最強的一組用丙酮浸取天然活性成分，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、核磁共振儀及紅外光譜儀鑒定出半枝蓮抑制Su?；钚猿煞值慕Y(jié)構(gòu)。本實施例對于治療腫瘤、重大傳染性疾病(病毒)、內(nèi)分泌及代謝性疾病等的中藥有效單體研究提供了應(yīng)用及參考方法。實施例4促進(jìn)T細(xì)胞生長的海水中活性成分(包括微生物菌落群的代謝產(chǎn)物)的降冪篩選本實施例應(yīng)用公知的凝膠電泳分離細(xì)菌方法結(jié)合體外細(xì)胞培養(yǎng)篩選模型對海水中促進(jìn)T細(xì)胞生長的海洋細(xì)菌及其代謝物進(jìn)行降冪篩選，實施步驟如下取青島市棧橋附近的海水1升，取50ml海水，在室溫下，在凝膠電泳儀的凝膠層上展開。將凝膠層縱向分成8份，再將各份分為二部份，每部分都為8份，同一部分中每份的面積都相同，分別標(biāo)記為11/4,]3/4，;2〃4，2〗/4;3"4,3〗/4;4〃4,43/4';5"4,5〗/4;'6"4，63/4，;7〃4，73/4';81/4,3/48',第一部分中一份面積為另一部份中一份面積的1/3。取li/4—8i/4(ll/4，2"4，3i/4，4i/4,5i/4，61/4，7i/4，81/4)份進(jìn)行T細(xì)胞體外培養(yǎng)實驗，將其他13/4'-8'3/4(13/4',23/4',33/4，，43/4'，53/4'，63/4'，73/4',83/4')份置無菌箱內(nèi)貯存，以備再進(jìn)一步實驗。應(yīng)用公知的T細(xì)胞體外培養(yǎng)實驗篩選模型的操作流程，制備T細(xì)胞的水懸液，無菌取胸腺，應(yīng)用公知的方法制備T細(xì)胞的水懸液，調(diào)T細(xì)胞濃度為5Xl()6個/ml，用公知的方法布板每組4個復(fù)孔；對照組(0濃度)將100mlT細(xì)胞水懸液加入到100ml培養(yǎng)基；陽性組將100mlT細(xì)胞水懸液加入到100ml培養(yǎng)基，稀釋conA100ml;實驗組將100mlT細(xì)胞水懸液加入到100ml培養(yǎng)基，分別加入到8份(11/4,21/4，31/4，4m，51/4,61/4,71/4，81/4)中，培養(yǎng)68h后，向每孑L力口入jnTT，4h后加酸化異丙醇，溶解后，用酶標(biāo)儀于570nm波長測試T細(xì)胞培養(yǎng)液吸光度，將實驗樣與對照樣吸光度對比進(jìn)行篩選。按上述步驟重復(fù)降冪篩選2次。結(jié)果114，n5,ns組分經(jīng)鑒定為光合細(xì)菌。如表l所示n4組光合細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物對T細(xì)胞有明顯的促進(jìn)作用(p<0.05);n5及ns組的光合細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物對T細(xì)胞有顯著的促進(jìn)作用(p<0.01)。表lT細(xì)胞體外實驗篩選結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本實施例對研究中藥、保健藥、保健品制備及質(zhì)量控制、藥理藥效學(xué)評價、安全性評價以及的中藥、新藥、保健食品毒理、保健機理研究等方面提供了應(yīng)用及參考方法。實施例5促進(jìn)B細(xì)胞生長的海洋活性成分(包括微生物菌落群)降冪篩選本實施例應(yīng)用公知的凝膠電泳分離細(xì)菌方法結(jié)合體外細(xì)胞培養(yǎng)篩選模型法對海水中促進(jìn)B細(xì)胞生長的海洋細(xì)菌及其代謝物進(jìn)行降冪篩選，實施步驟如下取青島市棧橋附近的海水1升，取5Qml海水，在室溫下，在凝膠電泳儀的凝膠上展開。將凝膠縱向分成8份，再將各份分為二部份，每部分都為8份，同一部分中每份的面積都相同，分別標(biāo)記為l1/4，1_3"';2〃4，23/4';3〃4,33"';4〃4,43"';5i"，53"';6〃4,63//;7^"，73/4';81/4,3/48'，第一部分中一份的面積為另一部份中一份面積的1/3。取li/4-8i/4(l"4，2i/4,3i/4,4i,4,5i/4,61/4，7〃4，81/4)份進(jìn)行T細(xì)胞體外培養(yǎng)實驗，將其他13/4'-83/4'份(13/4',23/4'，33/4'，43/4'，53/4'，63/4'，73/4'，83/4')置無菌箱內(nèi)貯存，以備再進(jìn)一步實驗。應(yīng)用公知的B細(xì)胞體外培養(yǎng)實驗篩選模型的操作流程制備分離細(xì)菌方水懸液，無菌取脾，用公知方法制備B細(xì)胞的水懸液，調(diào)B細(xì)胞濃度為5X106個/ml，用公知的方法布板每組4個復(fù)孔；對照組(0濃度)將IOOml細(xì)胞水懸液加入到100ml培養(yǎng)基；陽性組將100m細(xì)胞水懸液加入到100ml培養(yǎng)基，稀釋conA100ml;實-瞼組將100ml細(xì)月包水懸液力口入到100ml培養(yǎng)基，分另'J力口入到8l分(l1/4，21/4，31/4，41/4，51/4,61/4，71/4,81/4)中，培養(yǎng)68h后，每孑L力口入juTT，4h后力口酸化異丙醇，溶解后，用酶標(biāo)儀于570nm波長測試B細(xì)胞培養(yǎng)液吸先度將實驗樣與對照樣吸光度對比進(jìn)行篩選。按上述步驟重復(fù)降冪篩選2次。結(jié)果n"ns組分經(jīng)鑒定為光合細(xì)菌。如表2所示116組光合細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物對B細(xì)胞有明顯的促進(jìn)作用(p<0.05);ns組光合細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物對B細(xì)胞有顯著的促進(jìn)作用(p<0.01)。表2B細(xì)胞體外實驗篩選結(jié)果__If^照導(dǎo)123456780.32±0.382±0.146±0.270±0.358±0.392±0.454±0.428*0.434±0.4250.0200.0180.0200.0230.0160.0350.0310.0730.1390.140本實施例對研究中藥、保健藥、保健品質(zhì)量控制、藥理藥效學(xué)評價、安全性評價以及的中藥、新藥、保健食品毒理、保健機理都提供了參考方法。實施例6海洋活性成分(包括微生物菌落群)對S^生長影響的降冪篩選本實施例應(yīng)用公知的凝膠電泳分離細(xì)菌方法結(jié)合體外細(xì)胞培養(yǎng)篩選模型法對海水中抑制S18。細(xì)胞生長的海洋細(xì)菌及其代謝物進(jìn)行降冪篩選，實施步驟如下取青島市棧橋附近的海水10升，取50ml海水，在室溫下，進(jìn)行在凝膠電泳儀的凝膠上展開，將展開組分的凝膠縱向分成8份，再將各份分為二部份，每部分都為8份，同一部分中每份的面積都相向，分另寸才示"i己為11/4，13/4';21"，23/4,;3〃4，33/4，;4〃4，43,4，;5!/4，53/4，;61/4,63/4';71/4，73/4';81/4，3/48',第一部分中一份的面積為另一部份中一份的面積的1/3。耳又11/4—81/4(11/4,21/4，31/4,41/4，51/4，61/4，71/4,81/4)份進(jìn)行Su。細(xì)胞體外培養(yǎng)實驗，'將其他13/4'-83/4'份(13/4'，23/4'，33/4，43/4,53/4，63",73/4'，83/4')置無菌箱內(nèi)貯存，以備再進(jìn)一步實驗。取接種Sm小鼠腹水，無菌培養(yǎng)，3天傳代一次，傳至6代后供實驗使用。調(diào)Sm濃度為lXl(T個/ml。用公知的方法布板每組4個復(fù)孔；對照組(G濃度)將100mlS18。細(xì)胞水懸液加入到100ml培養(yǎng)基；陽性組將100mlS18。細(xì)胞水懸液加入到100ml培養(yǎng)基，稀釋conA100ml;實驗組將100mlS18。細(xì)胞水懸液加入100ml培養(yǎng)基，分別加入到8寸分(l1/4，21/4,31/4,41/4，51/4，61/4，71/4，81/4)中，培養(yǎng)68h后，向每孔加入jiTT,4h后加酸化異丙醇溶解，用酶標(biāo)儀于570nm波長測試S^。培養(yǎng)液吸光度，按上述步驟重復(fù)降冪篩選2次。將實驗樣與對照樣吸光度進(jìn)行對比，對比結(jié)果如表3所示，實驗樣li/4_8i/4(li/4,2i/4,3〃4，4!/4，5i/4,61/4,7i/4,81/4)與對照樣無明顯差另'J,li/4,21/4,31/4，41/4,51/4,61/4,71/4,.81/4經(jīng)培養(yǎng)鑒定為光合細(xì)菌，說明光合細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物對Sm無顯著的刺激增殖作用表3S180體外實驗篩選結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>本實施例將為今后天然抗癌活性成分的篩選建立方法，可與16種抗腫瘤篩選模型及若干種抗菌篩選模型相結(jié)合進(jìn)行降冪篩選，有可，見的應(yīng)用前景。本發(fā)明中的各實施例的具體實施步驟需要無菌操作時均在無菌操作箱內(nèi)進(jìn)行操作。所屬的活性成分來源除上述實施例中的動植物或微生物代謝物或海水外，還可以是化學(xué)、生物合成物。權(quán)利要求1、動植物或微生物代謝物或海水中活性成分的降冪篩選方法，其特征是將含有待降冪篩選活性成分的樣品，用公知的紙色譜或薄層色譜或電泳展開；將紙色譜的紙或薄層色譜上的涂布層或凝膠電泳上的凝膠分成N份，再將N份中的每份分成二部分，成為2N份，將其中N份分別用公知的篩選模型實驗進(jìn)行篩選；將另N份保存?zhèn)溆茫挥煤Y選模型實驗篩選出促進(jìn)生長或抑制生長的活性最高的第X份或活性較高的第Y份，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對第X份或第Y份進(jìn)行成分檢測；如果檢測出的成分不單一，可將備用的第X份或第Y份再進(jìn)行同樣的篩選，直至用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、核磁共振儀及紅外光譜儀鑒定出所需要的活性成分結(jié)構(gòu)為止。全文摘要一種動植物或微生物代謝物或海水中活性成分的降冪篩選方法，其特征是將含有待降冪篩選活性成分樣品，用公知的紙色譜或薄層色譜或電泳展開；將紙色譜的紙或薄層色譜上的涂布層或凝膠電泳上的凝膠分成N份，再將N份中的每份分成二部分，成為2N份，將其中N份分別用公知的篩選模型實驗進(jìn)行篩選；將另N份保存?zhèn)溆?；用篩選模型實驗篩選出促進(jìn)生長或抑制生長的活性最高的第X份或活性較高的第Y份，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)對第X份或第Y份進(jìn)行成分檢測；如果成分不單一，可將備用的第X份或第Y份再進(jìn)行同樣的篩選實驗，直至用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、核磁共振譜及紅外光譜鑒定出所需要的活性成分結(jié)構(gòu)為止。本發(fā)明裝置簡單，快捷準(zhǔn)確，能提高工作效率。文檔編號G01N30/02GK101419199SQ200810016549公開日2009年4月29日申請日期2008年6月1日優(yōu)先權(quán)日2008年6月1日發(fā)明者李蘭生申請人:李蘭生