專利名稱：骨通貼巴布膏含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種骨通貼巴布膏的質(zhì)量檢測方法，具體地說，是涉及骨通貼巴 布膏中的麻黃含量的測定方法。
背景技術(shù)：
骨通貼巴布膏是一種治療骨關(guān)節(jié)炎的純中藥制劑，它采用麻黃、當(dāng)歸、三 七、丁公藤、樟腦等十多種中藥材精制而成，具有驅(qū)風(fēng)散寒、活血止痛之功能， 可用于局部關(guān)節(jié)疼痛腫脹、麻木重著等證候。
骨通貼巴布膏含量測定的國家標(biāo)準(zhǔn)是用薄層掃描色譜法測定麻黃的含量， 薄層掃描色譜法具有檢測誤差較大、重現(xiàn)性較差，受環(huán)境和操作的影響大等局 限，己逐漸遭到淘汰。高效液相色譜法具有靈敏度高、分離度好、適用范圍廣、 穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好、操作簡單可行等優(yōu)點，所以用高效液相色譜法測定要優(yōu)于 使用薄層掃描色譜法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對用薄層掃描法測定骨通貼巴布膏中麻黃含量存在的 缺陷，提供一種用高效液相一紫外檢測器法測定骨通貼巴布膏中主要活性成分 麻黃含量的測定方法，該方法操作簡單、測定準(zhǔn)確，有助于完善骨通貼巴布膏 的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)
--種用高效液相-紫外檢測器法測定骨通貼巴布膏中麻黃含量的方法，具體 按下述步驟進行
供試品溶液的制備取本品1 3片，除去蓋襯，加氯仿分次洗脫貼膏，合并氯仿液，用鹽酸 溶液振搖提取數(shù)次，鹽酸提取液合并，用氯仿洗滌，棄去氯仿液，用氫氧化鈉 的飽和溶液調(diào)節(jié)pH值至12，用氯仿振搖提取數(shù)次，合并氯仿提取液，加入鹽酸 乙醇溶液(1—20)適量，混勻，于6(TC減壓蒸干，取殘渣，溶解后移至10ml量 瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續(xù)濾液，即得。
對照品溶液的制備
取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，制成每lml含10-90yg的溶液， 作為對照品溶液。
測定方法
固定相為C8或ds;流動相為甲醇-乙腈-水，必要時可加入離子對試劑。其
中甲醇的比例為0 60,乙腈的比例為0 40，水的比例為20 100;水相pH為 2 5， pH調(diào)節(jié)劑為磷酸、醋酸、磷酸鹽、醋酸鹽、三乙胺、二乙胺中的一種或 幾種的組合物，離子對試劑為十二垸基硫酸鈉、庚烷磺酸鈉；檢測波長為 200-220nm。
本發(fā)明的優(yōu)點
本方法進一步推動了骨通貼巴布膏含量分析方法研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善，并 為工業(yè)化生產(chǎn)節(jié)約了人力物力，是值得推廣的簡便易行的好方法。 本發(fā)明與現(xiàn)有的薄層掃描法比較，優(yōu)點有
1. 靈敏度高，測量誤差??；
2. 分離度好；
3. 穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，受環(huán)境和操作影響??；
4. 用量少；
5. 操作簡單。
具體實施方式
實施例1:
照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用WatersC18柱(4.6X150咖，5um);流動 相為乙腈-O. 1%磷酸溶液(12:88);檢測波長為210nm;流速為lml/min;柱溫 室溫。進樣量20ul;結(jié)果保留時間10min;檢測限0.6ng;線性范圍5.0 60.6ug/ml;精密度1.64免。
供試品溶液的制備取本品2片，除去蓋襯，加氯仿100ml分次洗脫貼膏， 合并氯仿液，用1%鹽酸溶液振搖提取4次(40、 30、 30、 30ml)，鹽酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗滌，棄去氯仿液，用氫氧化鈉的飽和溶液調(diào)節(jié)pH值至12， 用氯仿振搖提取3次，每次50ml，合并氯仿提取液，加入鹽酸乙醇溶液(1— 20)3ml，混勻，于60'C減壓蒸干，殘渣加乙腈-0.1%磷酸溶液(1:1)使溶解，移 至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續(xù)濾液， 即得。
對照品溶液的制備取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加乙腈-0.1%磷 酸溶液(l:l)制成每lml含10-90u g的溶液，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20nl，注入高效液相色譜 儀，記錄色譜圖，計算即得。
測定結(jié)果表明，本法可以方便的測定鹽酸麻黃堿的含量，有效的控制制劑 中麻黃的量，方便易行，準(zhǔn)確度高，易于操作。 實施例2:
照高效液相色譜法(+國藥典2005年版附錄VI D)測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用DiscoveryC18柱(4.6X150mm, 5um);
流動相為O. 05mol/L磷酸二氫鉀-甲醇-三乙胺(75:25:0. 2);檢測波長為207nm;
流速為lml/min;柱溫室溫。進樣量20ul;結(jié)果保留時間17min;檢測限2. lng;線性范圍5.0 60.6ixg/ml;精密度1. 10%。
供試品溶液的制備取本品2片，除去蓋襯，加氯仿100ml分次洗脫貼膏， 合并氯仿液，用1%鹽酸溶液振搖提取4次(40、 30、 30、 30ml)，鹽酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗滌，棄去氯仿液，用氫氧化鈉的飽和溶液調(diào)節(jié)pH值至12, 用氯仿振搖提取3次，每次50ml，合并氯仿提取液，加入鹽酸乙醇溶液(1 — 20)3ml,混勻，于6(TC減壓蒸干，殘渣加流動相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm)濾過，取續(xù)濾液，即得。
對照品溶液的制備取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成 每lml含10-90 U g的溶液，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20ul，注入髙效液相色譜 儀，記錄色譜圖，計算即得。
測定結(jié)果表明，本法可以方便的測定鹽酸麻黃堿的含量，有效的控制制劑 中麻黃的量，方便易行，準(zhǔn)確度高，易于操作。 實施例3:
照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VI D)測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用Restek C18柱(4.6X150ram, 5um):流 動相為甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖液(用磷酸調(diào)pH3.0) (18:82);檢測 波長為210nm;流速為lml/min;柱溫室溫。進樣量20ul;結(jié)果保留時間 15min;檢測限1.8ng;線性范圍5. 0 60. 6 u g/ml;精密度1.60%。
供試品溶液的制備取本品2片，除去蓋襯，加氯仿100ml分次洗脫貼膏， 合并氯仿液，用1%鹽酸溶液振搖提取4次(40、 30、 30、 30ml)，鹽酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗滌，棄去氯仿液，用氫氧化鈉的飽和溶液調(diào)節(jié)pH值至12， 用氯仿振搖提取3次，每次50ml，合并氯仿提取液，加入鹽酸乙醇溶液(1— 20)3ml，混勻，于60'C減壓蒸干，殘渣加流動相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續(xù)濾液，即得。對照品溶液的制備取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成
每lml含10-90 ug的溶液，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20U1，注入高效液相色譜
儀，記錄色譜圖，計算即得。
測定結(jié)果表明，本法可以方便的測定鹽酸麻黃堿的含量，有效的控制制劑 中麻黃的量，方便易行，準(zhǔn)確度高，易于操作。
實施例4:
照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用Restek C18柱(4.6X150mm， 5um);流 動相甲醇-乙腈-1%十二烷基硫酸鈉溶液(25 : 30 : 45)(冰醋酸調(diào)pH值3. 0);檢 測波長為210nm;流速為l.ml/min;柱溫室溫。進樣量20ul;結(jié)果保留時 間10min;檢測限3.5ng;線性范圍5. 0 60. 6 y g/ml;精密度1. 30%。
供試品溶液的制備取本品2片，除去蓋襯，加氯仿100ml分次洗脫貼膏， 合并氯仿液，用1%鹽酸溶液振搖提取4次(40、 30、 30、 30ml),鹽酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗滌，棄去氯仿液，用氫氧化鈉的飽和溶液調(diào)節(jié)pH值至12, 用氯仿振搖提取3次，每次50ml,合并氯仿提取液，加入鹽酸乙醇溶液(1— 20)3ml，混勻，于60'C減壓蒸干，殘渣加流動相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45ym)濾過，取續(xù)濾液，即得。
對照品溶液的制備敢鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成 每lml含10-90 " g的溶液，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20ul，注入高效液相色譜 儀，記錄色譜圖，計算即得。
測定結(jié)果表明，本法可以方便的測定鹽酸麻黃堿的含量，有效的控制制劑 中麻黃的量，方便易行，準(zhǔn)確度高，易于操作。 實施例5:
7照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VI D)測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用Restek C18柱(4.6X150mra, 5ym);流 動相乙腈-水(含O. 1%磷酸和0. 1%三乙胺)(10:90);檢測波長為210nm;流速 為lml/min;柱溫室溫。進樣量20ul;結(jié)果保留時間12min;檢測限2.8ng; 線性范圍5.0 60.6ug/ml;精密度1.73%。
供試品溶液的制備取本品2片，除去蓋襯，加氯仿100ml分次洗脫貼膏， 合并氯仿液，用1%鹽酸溶液振搖提取4次(40、 30、 30、 30ml)，鹽酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗滌，棄去氯仿液，用氫氧化鈉的飽和溶液調(diào)節(jié)pH值至12， 用氯仿振搖提取3次，每次50ml，合并氯仿提取液，加入鹽酸乙醇溶液(1 — 20)3ml，混勻，于6(TC減壓蒸干，殘渣加流動相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續(xù)濾液，即得。
對照品溶液的制備取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成 每lml含10-90 u g的溶液，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20ul，注入高效液相色譜 儀，記錄色譜圖，計算即得。
測定結(jié)果表明，本法可以方便的測定鹽酸麻黃堿的含量，有效的控制制劑 中麻黃的量，方便易行，準(zhǔn)確度高，易于操作。 實施例6:
照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VI D)測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用WatersC18柱(4.6X150ram， 5um);流動 相甲醇-乙腈-1%庚垸磺酸鈉(20 : 25 : 55)(冰醋酸調(diào)pH值3.2);檢測波長為 207nm;流速為lml/min;柱溫室溫。進樣量20ul;結(jié)果保留時間14min; 檢測限5.8ng;線性范圍5.0 60.6ug/ml;精密度2. 50%。
供試品溶液的制備取本品2片，除去蓋襯，加氯仿100ml分次洗脫貼膏, 合并氯仿液，用1%鹽酸溶液振搖提取4次(40、 30、 30、 30ml)，鹽酸提取液合并，用氯仿30 ml洗滌，棄去氯仿液，用氫氧化鈉的飽和溶液調(diào)節(jié)pH值至12， 用氯仿振搖提取3次，每次50ml，合并氯仿提取液，加入鹽酸乙醇溶液(1 — 20)3ml，混勻，于60'C減壓蒸干，殘渣加流動相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45ixm)濾過，取續(xù)濾液，即得。
對照品溶液的制備取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成 每lml含10-90ug的溶液，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20ul，注入高效液相色譜 儀，記錄色譜圖，計算即得。
測定結(jié)果表明，本法可以方便的測定鹽酸麻黃堿的含量，有效的控制制劑 中麻黃的量，方便易行，準(zhǔn)確度高，易于操作。 實施例7:
照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VI D)測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用WatersC18柱(4.6X150mm， 5um);流動 相甲醇-O. Olmol/L的醋酸銨溶液(用冰醋酸調(diào)pH值3. 0) (20 : 80);檢測波長 為207nm;流速為lml/min;柱溫室溫。進樣量20ul;結(jié)果保留時間16min; 檢測限4.2ng;線性范圍&.0 60.6ug/ml;精密度1. 45%。
供試品溶液的制備取本品2片，除去蓋襯，加氯仿100ml分次洗脫貼膏， 合并氯仿液，用1%鹽酸溶液振搖提取4次(40、 30、 30、 30ml)，鹽酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗滌，棄去氯仿液，用氫氧化鈉的飽和溶液調(diào)節(jié)pH值至12, 用氯仿振搖提取3次，每次50ml,合并氯仿提取液，加入鹽酸乙醇溶液(1 — 20)3ml，混勻，于6(TC減壓蒸干，殘渣加流動相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續(xù)濾液，即得。
對照品溶液的制備取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成 每lml含10-90 u g的溶液，作為對照品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計算即得。
測定結(jié)果表明，本法可以方便的測定鹽酸麻黃堿的含量，有效的控制制劑 中麻黃的量，方便易行，準(zhǔn)確度高，易于操作。
以上對本發(fā)明所提供的骨通貼巴布膏的含量測定方法進行了詳細(xì)介紹，本 文中應(yīng)用了具體個例對本發(fā)明的實施方式進行了闡述，以上實施例的說明只是
用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時，對于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員， 依據(jù)本發(fā)明的思想，在具體實施方式
及應(yīng)用范圍上均會有改變之處，綜上所述， 本說明書不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。
權(quán)利要求
1、一種骨通貼巴布膏中麻黃的含量測定方法，其特征在于用高效液相-紫外檢測器法測定骨通貼巴布膏中麻黃的含量。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的骨通貼巴布膏中麻黃的含量測定方法，其樣品處 理特征在于按下述步驟進行取本品1 3片，除去蓋襯，加氯仿分次洗脫貼膏, 合并氯仿液，用鹽酸溶液振搖提取數(shù)次，鹽酸提取液合并，用氯仿洗滌，棄去氯仿液，用氫氧化鈉的飽和溶液調(diào)節(jié)pH值至12，用氯仿振搖提取數(shù)次，合并氯 仿提取液，加入鹽酸乙醇溶液(1—20)適量，混勻，于60'C減壓蒸干，取殘渣， 溶解后移至IO ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過， 取續(xù)濾液，即得。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨通貼巴布膏中麻黃的含量測定方法，其HPLC 方法學(xué)特征在于固定相為Cs或d8;流動相為甲醇-乙腈-水，必要時可加入離 子對試劑。其中甲醇的比例為0 60，乙腈的比例為0 40,水的比例為20 100; 水相pH為2 5， pH調(diào)節(jié)劑為磷酸、醋酸、磷酸鹽、醋酸鹽、三乙胺、二乙胺 中的一種或幾種的組合物，離子對試劑為十二垸基硫酸鈉、庚垸磺酸鈉；檢測 波長為200-220nm。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用高效液相—紫外檢測器法測定骨通貼巴布膏中麻黃含量的方法。包括供試品溶液的制備，對照品溶液的制備，測定色譜條件等。該方法與現(xiàn)有測定方法相比具有靈敏度高、分離度好、適用范圍廣、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好、操作簡單可行等優(yōu)點，有助于完善骨通貼巴布膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
文檔編號G01N30/06GK101498691SQ200810020518
公開日2009年8月5日 申請日期2008年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月3日
發(fā)明者鄒巧根 申請人:鄒巧根