專利名稱：水體及水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留的快速檢測方法和該方法所用的檢測盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水體及水產(chǎn)品中的殘留物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種水體及水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留的快速檢測方法。
背景技術(shù)：
孔雀石綠(Malachite green, MG)又名堿性綠、孔雀綠、苯胺綠、維多利亞綠或中國綠，是一種具有金屬光澤的翠綠色結(jié)晶體，屬三苯甲烷類染料，它既是殺菌劑又是染色劑，廣泛應(yīng)用于真絲、羊毛、皮革、棉布、麻制品和陶瓷制品等的染色。它易溶于水、乙醇和甲醇，其水溶液呈藍綠色?？兹甘G進入人體或動物機體后，可以通過生物轉(zhuǎn)化，還原代謝成脂溶性的隱性孔石綠(Leucomalachitegreen, LMG)。孔雀石綠作為一種殺菌劑、殺蟲劑、消毒劑，具有價廉、易得、高效、用量少的特點，對防治各類水產(chǎn)動物的水霉病、鰓霉病和小瓜蟲病等有較好的效果，因而被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中。但近年來的科學研究發(fā)現(xiàn)孔雀石綠及其代謝產(chǎn)物隱性孔雀石綠具有高殘留、致癌、致畸和致突變等毒副作用。LMG由于不溶于水，其殘留毒性比MG更強。鑒于孔雀石綠的危害性，國際上一些發(fā)達國家如美國、日本、英國)已宣布禁止其在經(jīng)濟魚類(觀賞魚除外)養(yǎng)殖過程中使用。我國也于2002年5月將孔雀石綠列入《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》，禁止用于所有食品動物。
目前，國內(nèi)外已建立的測定孔雀石綠和隱性孔雀石綠檢測方法包括高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。這幾種檢測方法都比較繁瑣，前處理操作步驟多，耗時較長，特別是質(zhì)譜法所用儀器較昂貴，無法實現(xiàn)快速檢測，更無法實現(xiàn)現(xiàn)場檢測。
孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留對水體及水產(chǎn)品的危害大，嚴重影響了水產(chǎn)品的加工出口和消費，危害了消費者的身體健康，運用可以在現(xiàn)場進行快速
檢測的技術(shù)，是今后的發(fā)展方向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的任務(wù)在于提供一種水體及水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留的快速檢測方法。該方法操作步驟少、檢測時間短、無需借助于昂貴的儀器設(shè)備并且能進行現(xiàn)場檢測。
本發(fā)明的任務(wù)還在于提供一種檢測盒，以保障現(xiàn)場檢測。本發(fā)明的任務(wù)是這樣來完成的， 一種水體及水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留的快速檢測方法，其是將待測樣品和提取劑I振蕩混合均勻后，加入提取劑II振蕩混合后靜置，取上清液加入到富集柱中，觀察富集柱中最下層的顯色劑顏色變化，若形成綠色環(huán)帶，則判斷待測樣品中含有孔雀石綠
或無色孔雀石綠；
所述的提取劑I為乙腈、二氯甲垸、正己烷和對甲苯磺酸的混合液，其中乙腈、二氯甲烷與正己垸的體積比為1:1:1 3:2:1，而對甲苯磺酸與乙腈、二氯甲烷和正己垸的混合液的體積比為1: 10;
所述的提取劑II為二氧化鉛(Pb02)和酸性氧化鋁的混合物，二氧化鉛(Pb02)和酸性氧化鋁的質(zhì)量比為1:5 10;
所述的的待測樣品為待檢測水體樣品或待檢測水產(chǎn)品樣品。
在本發(fā)明的一個具體的實施例中，所述的待檢測水體樣品與提取劑I的體積比為1:1 5;待檢測水體樣品的體積和提取劑II的質(zhì)量比為10:1。
在本發(fā)明的另一個具體的實施例中，所述的待檢測水產(chǎn)品樣品質(zhì)量與提取劑I的體積比為1: 5 9;待檢測水產(chǎn)品樣品和提取劑II的質(zhì)量比為5:1。
本發(fā)明的還一任務(wù)是這樣來完成的， 一種檢測盒，它包括配置在盒內(nèi)的提取劑I 、提取劑II 、富集柱3和孔雀石綠標品，所述的提取劑I為乙腈、二氯甲烷、正己垸和對甲苯磺酸混合液體，其中乙腈、二氯甲烷與正己垸的體積比為1:1:1 3:2:1，而對甲苯磺酸與乙腈、二氯甲垸和正己烷的混合液的體積比為1: 10;所述的提取劑II為二氧化鉛(Pb02)和酸性氧化鋁的
混合物，二氧化鉛(Pb02)和酸性氧化鋁的質(zhì)量比為1:5 10;所述的富集柱3包括設(shè)在富集柱柱腔中的第一、第二、第三擋板31、 32、 33和推桿34以及富集柱頂蓋35，其中，第一擋板31與第二擋板32之間填充有填充物，而第二擋板32與第三擋板33之間填充有顯色劑，推桿34與富集柱3的富集柱柱腔相配合，富集柱頂蓋35蓋配在富集柱3的頂部。
在本發(fā)明的再一個具體的實施例中，所述的檢測盒還包括配置在盒內(nèi)的待測樣品管、上清液吸管、吸耳球、取樣刀和取樣勺。
在本發(fā)明的又一個具體的實施例中，所述的顯色劑為硅膠、中性氧化鋁和732陽離子樹脂混合物，硅膠、中性氧化鋁和732陽離子樹脂的質(zhì)量比為4:5:1;所述的第一、第二、第三擋板31、 32、 33的材料為高分子材料。
在本發(fā)明的更而一個具體的實施例中，所述的填充物為脫脂棉和無水硫酸鈉(Na2S04)。
在本發(fā)明的進而一個具體的實施例中，所述的無水硫酸鈉(Na2S04)敷置在脫脂棉上，其量為0.8 2.5^
在本發(fā)明的又更而一個具體的實施例中，所述的高分子材料為聚氯乙烯、聚氨酯或醋酸纖維素中的任意一種。
本發(fā)明所提供的技術(shù)方案具有操作簡單并且步驟少，不需要使用昂貴的儀器設(shè)備，能體現(xiàn)對現(xiàn)場檢測的方便、靈活性。


圖1為本發(fā)明所述的配備于檢測盒中的富集柱3的一個實施例示意圖。圖2為本發(fā)明的檢測方法示意圖。
具體實施例方式
見圖l，在該圖中給出了配置于檢測盒中的富集柱3的直徑為15mm，柱體長度為85咖，容量為10ml，并且在柱體上有刻度。很顯然，富集柱3的容量是不受本實施例的圖示的限制的，其大小可以隨著待檢樣品的不同而改變，其容量可以是lmL， 3mL, 5mL， 6mL， 10mL， 20mL， 25mL， 50mL等不同的規(guī)格，柱體的直徑和長度可以變化，柱體的長度不能太小，長度要求不小于65mm，直徑不小于3mm，否則對富集柱3造成裝填難。關(guān)于對富集柱3的裝填，申請人作如下敘述在富集柱3的柱腔最下端安裝第三擋板33，第三擋板33與柱腔腔壁之間聯(lián)接比較緊密，防止所填的顯色劑隨提取劑流出，在第三擋板33上面添加富集顯色用的顯色劑1 2.5g，然后輕敲富集柱3的柱體，使得顯色劑填充均勻平實；裝入第二擋板32，在第二擋板32上面裝入少量的脫脂棉，在脫脂棉之上填充無水硫酸鈉(Na2S04)，輕輕敲實，脫脂棉要填充平實，藉以防止無水硫酸鈉粉末流入到顯色劑中，無水硫酸鈉(Na2S04)的作用主要是吸附掉上清液中的少量水分。最后安裝第一擋板31，防止無水硫酸鈉(Na2S04)粉末倒出。在不使用狀態(tài)下，將富集柱頂蓋35蓋置在富集柱3上，推桿34放置在檢測盒中，在檢測盒中還配備有樣品管、上清液吸管、吸耳球、取樣品刀和取樣勺以及孔雀石綠標品。
在檢測樣品時，為了控制上清液流經(jīng)顯色劑層的速度，用推桿34從富集柱上口加壓，加快流速，建議檢測水產(chǎn)品時提取液3mL通過富集柱3的時間為0.2 0.7min;水體樣品提取液10mL樣液通過富集柱3的時間為0.8 2.0min。富集柱3中的顯色劑層在檢測樣品之前，要用提取劑I進行活化，活化時用的乙腈、二氯甲垸與正己垸的的混合液，乙腈、二氯甲烷與正己烷體積比=2:1:1。實施例1:
水體中總孔雀石綠殘留的檢測。
用提取劑I活化富集柱中的由硅膠、中性氧化鋁和732陽離子樹脂按重量份比為4:5:1所混合而成的顯色劑，裝填的顯色劑質(zhì)量為lg，活化時用的乙腈、二氯甲垸與正己烷的混合液10mL，乙腈、二氯甲垸與正己垸體積比=2:1:1;填充的無水硫酸鈉(Na2S04)的質(zhì)量為0. 8g。
取待檢測水體樣品于樣品管中，加入提取劑I和提取劑II ，提取劑I為乙腈、二氯甲垸、正己烷和對甲苯磺酸混合液體，其中乙腈、二氯甲垸與正
己烷的體積比為1:1:1，對甲苯磺酸1.0mol/L的溶液，乙腈、二氯甲烷和正己烷的混合液與對甲苯磺酸溶液體積比=10: 1;提取劑II為二氧化鉛(Pb02)和酸性氧化鋁(pH4 4.5)的混合物，二氧化鉛(Pb02)和酸性氧化鋁的質(zhì)量比為1:5。待檢測水體樣品與加入提取劑I的體積比為1:1，待檢測水體樣品的體積和提取劑II的質(zhì)量比為10:1。充分振蕩10min，靜置5min，待有機相和水相分層之后，用吸管取有機相中的上清液于圖1或圖2所示的50mL富集柱3中；
將樣品管中的有機相上清液分次全部加入富集柱3中，每次最大加液量為10mL,用推桿34從富集柱上口加壓，加快流速，建議10mL樣液通過柱子的時間為lmin。讓樣液流至與富集柱3最上層篩板平齊，停止推動推桿34。
觀察結(jié)果觀察富集柱3中最下層顯色劑劑顏色變化，若該顯色劑逐漸形成綠色環(huán)帶，可初步判斷待測水體樣品中含有孔雀石綠或是無色孔雀石綠。
實施例2:
僅將富集柱中裝填顯色劑的質(zhì)量改為1. 5g;將填充的無水硫酸鈉(Na2S04)的質(zhì)量改為為1. 4g，其余同對實施例1的描述。實施例3:
僅將富集柱中裝填顯色劑的質(zhì)量改為2. 5g;將填充的無水硫酸鈉(Na2S(U的質(zhì)量改為為2. 5g,其余同對實施例1的描述。實施例4:
僅將乙腈、二氯甲烷與正己烷的體積比改為2:2:1，其余同對實施例1的描述。
實施例5:
僅將乙腈、二氯甲烷與正己烷的體積比改為3:2:1,其余同對實施例1的描述。
實施例6:僅將水體樣品與加入提取劑I的體積比改為1:4.5，其余同對實施例1的描述。
僅將水體樣品與加入提取劑I的體積比改為1:4.5，其余同對實施例4的描述。
實施例8:
僅將水體樣品與加入提取劑I的體積比改為1:4.5，其余同對實施例5的描述。
實施例9:
僅將水體樣品與加入提取劑I的體積比改為1:5，其余同對實施例1的描述。
實施例10:
僅將水體樣品與加入提取劑I的體積比改為1:5，其余同對實施例4的描述。
實施例11:
僅將水體樣品與加入提取劑I的體積比改為1:5，其余同對實施例5的描述。
實施例12:
水產(chǎn)品中總孔雀石綠殘留的檢測。
用提取劑I活化富集柱中的由硅膠、中性氧化鋁和732陽離子樹脂按重量份比為4:5:1所混合而成的顯色劑，裝填的顯色劑質(zhì)量為lg，活化時用的乙腈、二氯甲垸與正己烷的混合液10mL，乙腈、二氯甲烷與正己烷體積比=2:1:1;填充的無水硫酸鈉(Na2S04)的質(zhì)量為0. 8g。
取待檢測水產(chǎn)品樣品可食部分充分絞碎后，將待檢測水產(chǎn)品樣品置于樣品管中，分別加入提取劑I和提取劑II，提取劑I為乙腈、二氯甲烷、正己垸和對甲苯磺酸混合液體，其中 腈、二氯甲烷與正己烷的體積比=1:1:1，對甲苯磺酸1.0mol/L的溶液，乙腈、二氯甲烷和正己烷的混合液與對甲苯磺酸溶液體積比=10: 1;提取劑II為二氧化鉛(Pb02)和酸性氧化(pH4 4.5)的混合物，二氧化鉛(Pb02)和酸性氧化鋁的質(zhì)量比=1:5，振搖10min，靜置2min后，取上清液于圖l或圖2所示的10mL的富集柱3中；
將樣品管中的提取樣液分次全部加入富集柱3中，每次最大加液量為3mL,按圖2所示用推桿34從富集柱3的上口加壓，加快流速，建議3mL樣液通過柱子的時間為0.5min。讓樣液流至與上層擋板板平齊，停止推動推桿34。
觀察結(jié)果觀察富集柱3中最下層顯色劑劑顏色變化，若該顯色劑逐漸形成綠色環(huán)帶，可初步判斷樣品中含有孔雀石綠。實施例13:
僅將富集柱中裝填顯色劑的質(zhì)量改為1. 5g;將填充的無水硫酸鈉(Na2S04)的質(zhì)量改為1. 4g，其余同對實施例12的描述。實施例14:
僅將富集柱中裝填顯色劑的質(zhì)量改為2.5g;將填充的無水硫酸鈉(Na2S04)的質(zhì)量改為為2. 5g，其余同對實施例12的描述。
僅將乙腈、二氯甲烷與正己烷的體積比改為2:2:1，其余同對實施例12的描述。
實施例16:
僅將乙腈、二氯甲烷與正己烷的體積比改為3:2:1，其余同對實施例12的描述。
實施例17:
僅將待測水產(chǎn)品樣品質(zhì)量與加入提取劑I的體積比改為1:7，其余同對實施例12的描述。實施例18:僅將待測水產(chǎn)品樣品質(zhì)量與加入提取劑I的體積比改為1:7，其余同對 實施例15的描述。 實施例19:
僅將待測水產(chǎn)品樣品質(zhì)量與加入提取劑I的體積比改為1:7,其余同對 實施例16的描述。 實施例20:
僅將待測水產(chǎn)品樣品質(zhì)量與加入提取劑I的體積比改為1:9，其余同對 實施例12的描述。 實施例21:
僅將待測水產(chǎn)品樣品質(zhì)量與加入提取劑I的體積比改為1:9，其余同對 實施例15的描述。 實施例22-
僅將待測水產(chǎn)品樣品質(zhì)量與加入提取劑I的體積比改為1:9，其余同對 實施例16的描述。
由上述實施例可知，本發(fā)明方法是通過提取劑I將待檢樣品中的孔雀石 綠提取出來，然后通過提取劑II衍生化，將無色孔雀石綠氧化成孔雀石綠， 靜置后，取上清液到富集柱中，通過顯色劑的不斷將上清液中的孔雀石綠吸 附富集，使得顯色劑顯色。檢測水產(chǎn)品中的孔雀石綠時，取水產(chǎn)品的可食用 部分，檢測水體樣品時，直接取水樣，然后通過提取劑提取衍生化之后，經(jīng) 富集柱吸附富集，可以直接通過富集柱中最底層的顯色劑的顏色變化，判斷 待檢測樣品中是否含有孔雀石綠，如果顯色劑層形成綠色環(huán)帶，則說明待測 樣品中含有孔雀石綠或是無色孔雀石綠。
權(quán)利要求
1、一種水體及水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留的快速檢測方法，其特征在于其是將待測樣品和提取劑I振蕩混合均勻后，加入提取劑II振蕩混合后靜置，取上清液加入到富集柱中，觀察富集柱中最下層的顯色劑顏色變化，若形成綠色環(huán)帶，則判斷待測樣品中含有孔雀石綠或無色孔雀石綠；所述的提取劑I為乙腈、二氯甲烷、正己烷和對甲苯磺酸的混合液，其中乙腈、二氯甲烷與正己烷的體積比為1∶1∶1～3∶2∶1，而對甲苯磺酸與乙腈、二氯甲烷和正己烷的混合液的體積比為1∶10；所述的提取劑II為二氧化鉛和酸性氧化鋁的混合物，二氧化鉛和酸性氧化鋁的質(zhì)量比為1∶5～10；所述的待測樣品為待檢測水體樣品或待檢測水產(chǎn)品樣品。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水體及水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留的快速檢測方法，其特征在于所述的待檢測水體樣品與提取劑I的體積比為1:1 5;待檢測水體樣品的體積和提取劑II的質(zhì)量比為10:1。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的水體及水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留的快速檢測方法，其特征在于所述的待檢測水產(chǎn)品樣品質(zhì)量與提取劑I的體積比為l:5 9;待檢測水產(chǎn)品樣品和提取劑II的質(zhì)量比為5:1。
4、 一種如權(quán)利要求1所述水體及水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留的快速檢測方法所用的檢測盒，其特征在于它包括配置在盒內(nèi)的提取劑I、提取劑II、富集柱3和孔雀石綠標品，所述的提取劑I為乙腈、二氯甲垸、正己烷和對甲苯磺酸混合液體，其中乙腈、二氯甲烷與正己垸的體積比為1:1:1 3:2:1，而對甲苯磺酸與乙腈、二氯甲烷和正己烷的混合液的體積比為l: 10;所述的提取劑II為二氧化鉛和酸性氧化鋁的混合物，二氧化鉛和酸性氧化鋁的質(zhì)量比為1:5;所述的富集柱3包括設(shè)在富集柱柱腔中的第一、第二、第三擋板31、 32、 33和推桿34以及富集柱頂蓋35，其中，第一擋板31與第二擋板32之間填充有填充物，而第二擋板32與第三擋板33之間填充有顯色劑，推桿34與富集柱3的富集柱柱腔相配合，富集柱頂蓋35蓋配在富集柱3的頂部。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測盒，其特征在于所述的檢測盒還包括配置在盒內(nèi)的待測樣品管、上清液吸管、吸耳球、取樣刀和取樣勺。
6、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測盒，其特征在于所述的顯色劑為硅膠、中性氧化鋁和732陽離子樹脂混合物，硅膠、中性氧化鋁和732陽離子樹脂的質(zhì)量比為4:5:1，裝填的顯色劑的質(zhì)量為l 2.5g;所述的第一、第二、第三擋板31、 32、 33的材料為高分子材料。
7、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測盒，其特征在于所述的填充物為脫脂棉和無水硫酸鈉。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測盒，其特征在于所述的無水硫酸鈉敷置在脫脂棉上，其量為0.8 2.5經(jīng)。
9、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測盒，其特征在于所述的高分子材料為聚氯乙烯、聚氨酯或醋酸纖維素中的任意一種。
全文摘要
一種水體及水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留的快速檢測方法，屬于水體及水產(chǎn)品中的殘留物檢測技術(shù)領(lǐng)域。其是將待測樣品和提取劑I振蕩混合均勻后，加入提取劑II振蕩混合后靜置，取上清液加入到富集柱中，觀察富集柱中最下層的顯色劑顏色變化，若形成綠色環(huán)帶，則判斷待測樣品中含有孔雀石綠或無色孔雀石綠；提取劑I為乙腈、二氯甲烷、正己烷和對甲苯磺酸的混合液；提取劑II為二氧化鉛和酸性氧化鋁的混合物；待測樣品為待檢測水體樣品或待檢測水產(chǎn)品樣品。優(yōu)點具有操作簡單并且步驟少，不需要使用昂貴的儀器設(shè)備，能體現(xiàn)對現(xiàn)場檢測的方便、靈活性。
文檔編號G01N21/78GK101566574SQ20081002504
公開日2009年10月28日 申請日期2008年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月25日
發(fā)明者丁建英, 凡 尹, 張根華, 張海蕓, 詹月華 申請人:常熟理工學院