專利名稱：：一種用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及化學(xué)分析檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法。
背景技術(shù)：
：氨基酸是煙葉中的重要組成部分，是與煙氣香味、巻煙品質(zhì)和品牌特征密切相關(guān)的煙草成分，氨基酸參與煙葉中的非酶棕色反應(yīng)，即美拉德反應(yīng)，此反應(yīng)可產(chǎn)生多種重要的致香成分。因此，測(cè)定煙草中的氨基酸對(duì)配方研制、工藝生產(chǎn)和品質(zhì)控制都有十分重要的意義。由于煙草中的氨基酸種類較多，且具有酸性、中性和堿性三種不同的化學(xué)性質(zhì)，加上煙草基質(zhì)復(fù)雜，因此對(duì)煙草中多種氨基酸的同時(shí)測(cè)定具有一定難度。目前，液相色譜(LC)法是較多使用的氨基酸測(cè)定方法之一。由于氨基酸不具有紫外和熒光檢測(cè)所需的發(fā)色基團(tuán)，若用液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，則必須對(duì)氨基酸進(jìn)行柱前或柱后衍生。衍生化操作步驟繁瑣，耗時(shí)耗力，而且衍生化合物的穩(wěn)定性難以直觀的評(píng)判，某些氨基酸衍生反應(yīng)的完全程度也難以保證，同時(shí)衍生反應(yīng)還可能生成非目標(biāo)衍生物，這些都會(huì)影響氨基酸的準(zhǔn)確測(cè)定。自動(dòng)氨基酸分析儀也存同樣的衍生問(wèn)題。煙草成分相當(dāng)復(fù)雜，用LC、自動(dòng)氨基酸分析儀、離子色譜(IC)和毛細(xì)管電泳(CE)等方法進(jìn)行氨基酸分析往往需要對(duì)樣品進(jìn)行固相萃取等繁雜的前處理，以減少干擾?，F(xiàn)有的固相萃取等前處理會(huì)在一定程度上造成某些氨基酸(或氨基酸衍生物)的損失，而且有些干擾雜質(zhì)也難以通過(guò)前處理消除。近年來(lái)，隨著電噴霧離子化(ESI)和串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)技術(shù)的發(fā)展，液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(LC-ESI-MS/MS)在復(fù)雜化合物分析中得到廣泛的應(yīng)用。LC-MS/MS方法的靈敏度高，選擇性優(yōu)異。由于MS/MS具有特征離子提取功能，與色譜方法相比，對(duì)待測(cè)物的色譜分離度要求并不難么嚴(yán)格。LC-MS/MS法可同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)多種氨基酸的分離提取以及物質(zhì)確證，可有效的解決共流出問(wèn)題，無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行衍生化和固相萃取等復(fù)雜的前處理，大大簡(jiǎn)化了分析步驟，提高了分析效率。本發(fā)明利用液相色譜與電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜(LC-ESI-MS/MS)聯(lián)用技術(shù)，建立了同時(shí)對(duì)煙草中20種非衍生化氨基酸的快速分析方法。結(jié)果顯示，該法重現(xiàn)性好、靈敏度和選擇性高，成功的應(yīng)用于對(duì)各種煙草樣品氨基酸的分析測(cè)定。本申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)，利用液相色譜與電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜(LC-ESI-MS/MS)聯(lián)用技術(shù)，建立同時(shí)對(duì)煙草中20種非衍生化氨基酸的快速分析方法,而對(duì)樣品進(jìn)行合適的前處理，獲得適合于這種技術(shù)的提取液是聯(lián)用技術(shù)獲得準(zhǔn)確和高靈敏度結(jié)果的關(guān)鍵。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)不足，提供一種用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法，這是對(duì)待進(jìn)行氨基酸分析的煙草樣品的一種簡(jiǎn)單、實(shí)用的前處理方法。本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)予以實(shí)現(xiàn)提供一種用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法，包括以下步驟(1)以含正纈氨酸的HC1溶液為萃取溶液，在超聲波震蕩下萃取煙末；(2)過(guò)濾。步驟(1)所述萃取煙末與萃取溶液的比例為0.10.2g:20ml。步驟(1)所述HC1溶液濃度為0.03M。步驟(1)所述萃取時(shí)間為15min。步驟(2)所述過(guò)濾采用0.2nm濾膜過(guò)濾。本發(fā)明所述制備方法制備得到的煙草提取液采用直接進(jìn)樣的方式應(yīng)用于液相色譜與電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用分析中。本發(fā)明的有益效果是針對(duì)現(xiàn)有煙草及其制品中所含氨基酸分析方法中樣品前處理技術(shù)的不足，選擇了合適的萃取溶液對(duì)煙草進(jìn)行萃取，并通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)總結(jié)得到萃取溶液的濃度、使用量、萃取時(shí)間等精確的條件，配合液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜(LC-ESI-MS/MS)聯(lián)用的技術(shù)，提供了一個(gè)完整的實(shí)驗(yàn)方案，不再需要對(duì)煙草樣品進(jìn)行繁瑣的柱前或柱后衍生化等復(fù)雜的前處理，實(shí)驗(yàn)獲得良好的色譜峰形以及適宜的色譜運(yùn)行時(shí)間，并且可使同分異構(gòu)體Leu和lie達(dá)到基線分離，從而獲得準(zhǔn)確的分析結(jié)果。圖120種氨基酸和內(nèi)標(biāo)正纈氨酸的提取離子流圖圖2加標(biāo)前l(fā)ie和Leu提取離子流圖圖3加標(biāo)后lie和Leu提取離子流圖圖4加標(biāo)前Val和Nva提取離子流圖圖5加標(biāo)后Val和Nva提取離子流圖圖626氨基酸的二級(jí)質(zhì)譜圖具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例11、儀器、材料與試劑美國(guó)熱電公司LC-MSLTQ液相色譜-離子阱質(zhì)譜儀，配備自動(dòng)進(jìn)樣器、四元梯度質(zhì)譜泵，LTQ離子阱質(zhì)譜帶電噴霧電離源(ESI)，Xcalibur1.4SRI系統(tǒng)控制軟件；意大利ClaindN2LCMS氮?dú)獍l(fā)生器；法國(guó)MilliporeElementA10純水機(jī)；美國(guó)Cole-Parmer8892超聲清洗器；SartoriousCP225D電子天平(Max220g，d=0.01mg(80g),0.1mg(220g));Whatman0.2尼龍針式濾頭；磨樣機(jī)磨出的煙草粉末。混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(Fluka公司)，含17種氨基酸，濃度各為ImM;內(nèi)標(biāo)物L(fēng)-正纈氨酸(上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司)；天冬酰胺.水(上海伯奧生物科技有限公司)；色氨酸，脯氨酸和谷氨酰胺(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；"r氨基丁酸(Sigma公司)；L-哌啶-2-羧酸、九氟戊酸(NFPA)(Aldrich公司)；甲醇和乙腈(MERCK公司)；優(yōu)級(jí)純濃鹽酸；Milli-Q級(jí)水，由MillioreElementA10制備，若不經(jīng)特別說(shuō)明，實(shí)驗(yàn)中用水均為Milli-Q級(jí)水。2、實(shí)驗(yàn)方法2.1色譜條件熱電HyPURITYC18色譜柱(200mmX2.1nrai，5Pm)，安捷倫Reliance保護(hù)柱套和EclipseXDB-C8保護(hù)柱(12.5X2.1mm,5Mm)。進(jìn)樣方式全環(huán)(5叱)；流速200ML/min;柱溫箱25°C;樣品盤溫度15°C;注射器沖洗體積(flushvolume):1000叱；洗針體積(washvolume):800PL。流動(dòng)相A:99%水-1%乙腈-O.1%NFPA;流動(dòng)相B:10%水-90%乙腈-0.1%NFPA。流動(dòng)相梯度見表l。表l流動(dòng)相梯度<table>complextableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2.2質(zhì)譜條件氮?dú)鈮毫?.64MPa;氦氣壓力0.38MPa;極性正電離；掃描形式全掃描；采集時(shí)間40min;激活時(shí)間30ms;吹掃氣OLTQ單位；噴霧電壓5kV;毛細(xì)管溫度350°C;掃描范圍標(biāo)準(zhǔn)；掃描速率標(biāo)準(zhǔn)；分段、分段時(shí)間、分離寬度、歸一化碰撞能量等設(shè)置見表2，其中第3分段的鞘氣和輔助氣分別為38LTQ單位和OLTQ單位，其余分段的鞘氣和輔助氣分別為46LTQ單位和19LTQ單位。其他參數(shù)由自動(dòng)調(diào)諧確定或依照LTQ質(zhì)譜的默認(rèn)設(shè)置。表2分段、分段時(shí)間、分離寬度、歸<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制作采用內(nèi)標(biāo)法定量。配制含內(nèi)標(biāo)正纈氨酸濃度為1.7|LiM的氨基酸混和標(biāo)準(zhǔn)溶液I(天冬氨酸(Asp)、絲氨酸(Ser)、谷氨酰胺(Gln)、蘇氨酸(Thr)、谷氨酸(Glu)、胱氨酸(Cys)、Y-氨基丁酸(Gaba)、哌啶酸(Pip)、纈氨酸(Val)、甲硫氨基酸(Met)、組氨酸(His)、酪氨酸(Tyr)、賴氨酸(Lys)、異亮氨酸(Ile)、精氨酸(Arg)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Try)的濃度均為50pM的0.03MHC1溶液)；配制含內(nèi)標(biāo)正纈氨酸濃度為1.7|uM的氨基酸混和標(biāo)準(zhǔn)溶液II(脯氨酸(Pro)和天冬酰胺(Asn)的濃度分別為500|iiM的0.03MHC1溶液)。用含正纈氨酸濃度為1.7^iM的0.03MHC1把標(biāo)準(zhǔn)溶液I和標(biāo)準(zhǔn)溶液II配成系列濃度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.4樣品處理稱取0.10.2g煙末置于錐形瓶中，加入20mL含正纈氨酸濃度為1.7|tiM的0.03MHC1溶液，超聲震蕩15min，搖蕩錐形瓶片刻使溶液濃度分配均勻，經(jīng)0.2Pm濾膜過(guò)濾后直接進(jìn)樣。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1色譜條件3.1.1氨基酸對(duì)溫度的要求溫度較高時(shí)，氨基酸混標(biāo)容易發(fā)生反應(yīng)，使某些氨基酸含量降低。因此，所有氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在不使用時(shí)應(yīng)及時(shí)保存在2。C以下，并且在分析樣品時(shí)把樣品盤設(shè)定在較低的溫度15°C。為了避免柱溫較高時(shí)氨基酸可能在柱內(nèi)產(chǎn)生變化，把柱溫箱設(shè)定在25°C。適當(dāng)降低柱溫的另一個(gè)好處是可以明顯增加同分異構(gòu)體亮氨酸(Leu)和異亮氨酸(lie)在色譜柱上的分離度，見附圖1。但柱溫不宜設(shè)定過(guò)低，以免柱壓過(guò)大，同時(shí)亦使Phe和Try出峰延遲，增加分析時(shí)間。3.1.2色譜柱和流動(dòng)相在Ci8分析柱上試驗(yàn)過(guò)多種流動(dòng)相，結(jié)果表明ThermoHyPURITYds配合99%水-1%乙腈-0.1%NFPA以及10%水-90%乙腈-0.1%NFPA作流動(dòng)相可以獲得良好的色譜峰形以及適宜的色譜運(yùn)行時(shí)間，并且可使同分異構(gòu)體Leu和Ile達(dá)到基線分離，見附圖1。NFPA用作流動(dòng)相改性劑。此外，NFPA還有利于增強(qiáng)電噴霧質(zhì)譜對(duì)氨基酸的正電離檢測(cè)信號(hào)。乙腈容易洗脫NFPA，過(guò)多的NFPA容易增加背景干擾，影響檢測(cè)靈敏度，因此，流動(dòng)相B的使用比例不易過(guò)高，實(shí)驗(yàn)把流動(dòng)相B的比例控制在25%以下，可達(dá)到良好分離檢測(cè)的效果。需注意的是，NFPA會(huì)在色譜柱內(nèi)不斷積聚并慢慢改變固定相的性質(zhì)，使氨基酸的出峰時(shí)間改變。為了保證良好的保留時(shí)間重現(xiàn)性，更方便的進(jìn)行定性定量分析，在進(jìn)樣100針后，用100%乙腈沖洗色譜柱30min，洗脫過(guò)多積聚的NFPA，再用流動(dòng)相平衡色譜柱后進(jìn)樣。3.1.3內(nèi)標(biāo)物的選擇正纈氨酸不存于煙草氨基酸中，在本實(shí)驗(yàn)條件下穩(wěn)定且能和其同分異構(gòu)體纈氨酸在色譜上完全分離，且價(jià)格較低，是比較理想的內(nèi)標(biāo)物。3.1.4氨基酸同分異構(gòu)體的鑒別亮氨酸(Leu)和異亮氨酸(Ile)、纈氨酸(Val)和正纈氨酸(Nva)互為同分異構(gòu)體，二級(jí)質(zhì)譜相似，無(wú)法單用質(zhì)譜加以鑒定，因此需結(jié)合色譜分離進(jìn)行區(qū)分。實(shí)驗(yàn)通過(guò)加標(biāo)法(分別加入一定量的lie和Val)對(duì)出峰順序進(jìn)行判斷。加入lie或Val標(biāo)準(zhǔn)后，前面流出的色譜峰高明顯增高，峰面積明顯增大，可以判定Ile和Val分別較Leu和Nva先流出，見附圖2附圖5提取離子流圖。3.2質(zhì)譜條件質(zhì)譜的條件的恰當(dāng)設(shè)置對(duì)氨基酸的準(zhǔn)確及高靈敏度檢測(cè)十分重要。實(shí)驗(yàn)對(duì)比了二級(jí)全掃描(FullMS2)和選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)兩種掃描模式。二級(jí)全掃描能有效地降低背景干擾，獲得更高的靈敏度，且選擇性優(yōu)于SIM，檢測(cè)效果較佳，因此實(shí)驗(yàn)選擇二級(jí)全掃描進(jìn)行定量分析。在21種氨基酸的二級(jí)質(zhì)譜中，見附圖626，除Arg和Cys外，其余氨基酸主要的離子碎片均為脫羧基、脫羥基或脫氨基峰，即[M-HCOOH+H]+、[M-H20+H]+或[M-N2H+H]+。定量離子的準(zhǔn)確選擇關(guān)系到質(zhì)譜定量的特征選擇性。定量離子優(yōu)先選取相對(duì)豐度較大的特征子離子，以獲得較好的靈敏度。對(duì)于Glu，因子離子m/zl30的特征性不強(qiáng)，有干擾峰重疊，因此選擇相對(duì)豐度次強(qiáng)的脫羧基峰m/z102。不同的分段(Segment)可調(diào)用獨(dú)立的調(diào)諧文件，有利于提高檢測(cè)的靈敏度。實(shí)驗(yàn)根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間間隔，劃為4個(gè)分段。適當(dāng)?shù)膾呙璺秶欣诮档捅尘霸胍艏半s質(zhì)干擾，提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度，實(shí)驗(yàn)對(duì)各氨基酸的掃描范圍進(jìn)行了優(yōu)化設(shè)置，見表2所示。3.3前處理?xiàng)l件3.3.1不同提取溶液對(duì)色譜峰形的影響實(shí)驗(yàn)用不同濃度的酸性溶液對(duì)煙草中的氨基酸進(jìn)行提取，包括甲酸、乙酸和鹽酸溶液。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，lmM乙酸提取溶液使Val、Nva、His、Ile和Leu等氨基酸的色譜峰分叉開裂，且隨著濃度的提高，色譜峰分叉開裂的現(xiàn)象越為明顯。甲酸提取溶液也有類似的現(xiàn)象。而HC1提取溶液則能在d8柱上獲得較好的峰形。3.3.2不同提取溶液的提取效果實(shí)驗(yàn)對(duì)比了幾種較常用的提取溶液的提取效果，即70%甲醇溶液、80%乙醇溶液和0.1MHC1。稱取等量的煙草樣品，通過(guò)對(duì)比氨基酸色譜峰面積，來(lái)比較三種溶液的提取效果。由表3可見，80%乙醇提取的氨基酸含量最低，70%甲醇提取的Val、His、Tyr、Lys、Phe和Try等多種氨基酸含量均明顯低于用0.1MHC1提取的。綜合比較，0.1M的鹽酸溶液的提取效果較好。表3不同提取溶液的提取效果對(duì)比<table>complextableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>3.3.3不同濃度的HCl溶液的提取效果稱取等量煙末樣品，對(duì)比不同濃度HCl提取溶液的提取效果見表4。0.1MHCl對(duì)Ser、Glu、Lys和Arg的提取效果較差，0.05MHC1的對(duì)Lys和Arg的提取效果均不好。0.03MHCl對(duì)Lys的提取效果明顯增加。綜合比較，選用0.03MHC1作為提取溶液。表4不同濃度的HCl溶液的提取效果對(duì)比<table>complextableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>3.3.4萃取時(shí)間稱取O.lg煙末，加入20mL萃取溶液，在超聲震蕩下分別萃取15min、30min、45min和60min，過(guò)0.2Mm濾膜后進(jìn)LC-MS分析。每個(gè)樣品進(jìn)兩針，峰面積取平均值。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，15min的提取時(shí)間已經(jīng)能達(dá)到提取效果。由于稱樣量較少，萃取溶劑量大大超過(guò)稱樣量，而氨基酸能較快的溶解于鹽酸溶液，因此能較快的達(dá)到溶解平衡。3.4方法驗(yàn)證20種待測(cè)氨基酸的在煙草中的含量相差懸殊，有的低于檢測(cè)限，如Cys，有的則含量高達(dá)0.2%以上，如Pro。為了同時(shí)測(cè)定20種氨基酸，實(shí)驗(yàn)建立了兩種不同濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即對(duì)含量較高的Pro和Asn建立一種濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)其他氨基酸建立另一種濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)曲線。這樣，一個(gè)樣品一次進(jìn)樣便可得出所有氨基酸的測(cè)試數(shù)據(jù)，達(dá)到節(jié)約時(shí)間，提高效率的目的。方法的檢出限通過(guò)實(shí)際測(cè)定系列低濃度的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)樣品，以S/N二3來(lái)確定。方法檢出限良好，在0.010.05ioM(S/N=3)之間，相關(guān)系數(shù)(。均大于0.9977，精密度在0.784.93RSD9&之間。實(shí)驗(yàn)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)加入法確定方法的回收率。準(zhǔn)確稱取煙末204.09mg，用20mL萃取液提取，平行測(cè)定5次，取平均值作為回收率計(jì)算的依據(jù)。然后稱取煙末三份，分別為191.60mg、209.80mg和159.33mg，根據(jù)2.4的樣品處理方法，分別加標(biāo)，使加標(biāo)濃度分別為1^M、10)liM和20^M。其中，對(duì)含量低于l^iM的氨基酸，只進(jìn)行l(wèi)iLiM加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，對(duì)含量低于1.5^iM的氨基酸，進(jìn)行1^M和10^iM加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，對(duì)于含量較高的Asn和Pro，進(jìn)行l(wèi)OjoM和20一加標(biāo)實(shí)驗(yàn)。氨基酸回收率基本在81108%之間，lie和Arg的回收率較低，分別為75%和53%。20種氨塞酸的檢出限、定量限、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、精密度和回收率見表5。表520種氨基酸的檢出限(LOD)、線性范圍、相關(guān)系數(shù)(r2)、精密度氨基酸檢出限線性范相關(guān)精密度回收率(加標(biāo)濃度)AminoLOD圍系數(shù)precisionrecovery(%)acidslinearity(n=6，(concentrationofadded(MM)RS闊standard(joM))Asn0.020.1-5000.99983.0991(10)，92(20)Asp0.020.1-500.99852.9199(1),93(10)，97(20)Ser0.020.1-500.99922.88100(1),100(10)，100(20)Gin0.010.05-500.99972.61101(1),100(10)，98(20)Thr0.010.1~500.99992.19101(1)，85(10)，83(20)Glu0.010.1-500.99971.99101(1)，90(10)，85(20)Pro0.010.05~5000.99932.08103(10)，105(20)Cys0.020.05-500.9998ND89(1)Gaba0.050.1-500.99870.78100(1)，100(10),96(20)Pip0.040.1~500.99782.8199(1),101(10)，100(20)Val0.020.05-500.99981.52102(1)，104(10)，105(20)Met0.020.05-500.99874.93100(1)His0,030.1-500.99993.37102(1)，93(10)，89(20)Tyr0.040.1-500.99903.05100(1)，99(10)，101(20)Lys0.040.1-200.99952.73105(1),108(10)De0.030.1-500.99872.9275(1)Arg0.050.1~500.99953.4553(1)Leu0.050.1~500.99923.0793(1)，81(10)Phe0.050.1-500.99982.56103(1)，101(10),97(20)Try0.050.1-500.99952.14100(1)，86(10),84(20)權(quán)利要求1、一種用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)以含正纈氨酸的HCl溶液為萃取溶液，在超聲震蕩下萃取煙末；(2)過(guò)濾。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法，其特征在于步驟(1)所述萃取煙末與萃取溶液的比例為0.l0.2g:20ml。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法，其特征在于步驟(1)所述HC1溶液濃度為0.030.1M。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法，其特征在于步驟(1)所述HC1溶液濃度為0.03M。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法，其特征在于步驟(1)所述萃取時(shí)間為15min。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法，其特征在于步驟(2)所述過(guò)濾采用0.2nm濾膜過(guò)濾。7、一種權(quán)利要求1所述制備方法制備得到的煙草提取液的應(yīng)用，其特征在于采用直接進(jìn)樣的方式應(yīng)用于液相色譜與電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用分析中。全文摘要本發(fā)明公開了一種用于氨基酸分析的煙草提取液的制備方法，以含正纈氨酸的HCl溶液為萃取溶液，在超聲震蕩下萃取煙末；過(guò)濾得到所述的提取液。所述提取液與液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜(LC-ESI-MS/MS)聯(lián)用技術(shù)相配合，提供了一個(gè)完整的實(shí)驗(yàn)方案，不再需要對(duì)煙草樣品進(jìn)行繁瑣的柱前或柱后衍生化操作，實(shí)驗(yàn)獲得良好的色譜峰形以及適宜的色譜運(yùn)行時(shí)間，并且可使同分異構(gòu)體Leu和Ile達(dá)到基線分離，從而獲得準(zhǔn)確的分析結(jié)果。文檔編號(hào)G01N30/00GK101344508SQ20081002769公開日2009年1月14日申請(qǐng)日期2008年4月25日優(yōu)先權(quán)日2008年4月25日發(fā)明者黃翼飛申請(qǐng)人:廣東中煙工業(yè)有限責(zé)任公司