專利名稱：紅細(xì)胞免疫體外中藥藥敏實驗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及紅細(xì)胞免疫功能檢測技術(shù)，具體涉及一種利用紅細(xì)胞免疫功能 檢測方法進(jìn)行藥敏實驗的方法，本發(fā)明首次利用紅細(xì)胞免疫功能進(jìn)行體外中藥 藥敏實驗。
技術(shù)背景自1658年紅細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)后， 一直認(rèn)為其是氧氣和二氧化碳的運輸者。隨著 科技的進(jìn)步，人們逐漸認(rèn)識到了紅細(xì)胞的更多功能。1981年，美國生殖免疫學(xué) 家Siegel在前人研究的基礎(chǔ)上，首先提出了 "紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)"的新概念，更 新了人們對紅細(xì)胞功能的認(rèn)識。隨著天然免疫研究的升溫，1990年，Paccaud 對紅細(xì)胞膜補體受體進(jìn)行了比較研究，發(fā)現(xiàn)了其簇狀分布的結(jié)合位點。2004年 郭峰提出"紅細(xì)胞天然免疫主干道理論"，認(rèn)為抗原進(jìn)入血液中，首先被補體系 統(tǒng)識別，抗原旁路激活補體黏附補體成份，然后絕大部分附有補體成份的抗原 被紅細(xì)胞天然免疫黏附，最終由紅細(xì)胞遞交給白細(xì)胞，引發(fā)白細(xì)胞產(chǎn)生一系列 免疫反應(yīng)。當(dāng)今，紅細(xì)胞免疫已成為多學(xué)科研究的橋梁與工具。紅細(xì)胞數(shù)目眾多，其免疫功能是其他免疫細(xì)胞所無法替代的。紅細(xì)胞免疫 的基礎(chǔ)是紅細(xì)胞表面具有C3b受體(C3bR)，紅細(xì)胞膜上的C3bR具有免疫黏附、攜帶及清除循環(huán)液相中抗原異物的功能，尤其清除循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)是紅細(xì) 胞最主要的免疫功能。通過C3bR與C3b調(diào)理過的CIC結(jié)合，將其運送到肝脾等網(wǎng) 狀內(nèi)皮系統(tǒng)加以清除，防止CIC在體內(nèi)沉積，從而避免血管或組織的損傷。而這 種免疫能力主要取決于紅細(xì)胞膜上的C3bR數(shù)量，因此，紅細(xì)胞C3bR是衡量紅細(xì) 胞免疫功能狀態(tài)的主要指標(biāo)，在運送和清除免疫復(fù)合物(ic)方面起著重要作 用。現(xiàn)已建立的各種紅細(xì)胞免疫功能檢測方法多以紅細(xì)胞表面的C3bR為基礎(chǔ)設(shè) 計，主要有紅細(xì)胞C3bR花環(huán)及IC花環(huán)試驗、紅細(xì)胞SPA酵母混合花環(huán)試驗、單克隆抗體Coombs試驗、抗C3bR單克隆抗體法、ELISA、放射配體結(jié)合法、紅細(xì)胞促 吞噬作用測定法等。其中紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率和IC花環(huán)率可作為紅細(xì)胞免疫黏附 功能的指標(biāo)，如二項指標(biāo)都低下，判為原發(fā)性細(xì)胞免疫功能低下，為紅細(xì)胞C3bR 受到破壞和影響所致；如果紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率低，而IC花環(huán)率高，為繼發(fā)性紅 細(xì)胞免疫功能低下，是由于CIC增加，紅細(xì)胞黏附IC過多引起。中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院郭峰等人根據(jù)Siegel的紅細(xì)胞 免疫黏附試驗原理，建立了簡易的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)試驗與紅細(xì)胞IC花環(huán)試驗 (郭峰改良法)。該試驗方法釆用致敏和未致敏的酵母菌試劑作為紅細(xì)胞免疫功 能檢測試劑，C3b致敏酵母菌試劑用于紅細(xì)胞C3bR花環(huán)試驗，未致敏酵母菌試 劑用于紅細(xì)胞IC花環(huán)試驗。郭峰改良法檢測紅細(xì)胞免疫黏附功能簡單易行，檢 測結(jié)果可靠，成為了目前開展紅細(xì)胞免疫黏附功能檢測的主要方法。紅細(xì)胞免疫是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究的一個新領(lǐng)域，各國學(xué)者都在致力于探索并努 力將研究成果應(yīng)用于臨床診斷，而對于紅細(xì)胞免疫功能檢測方法的運用則是其 中的一個重要課題，將有助于人類確診和檢測生理性、病理性疾病的起因、演 化，并獲取治療效果的監(jiān)測數(shù)據(jù)。將紅細(xì)胞免疫功能檢測方法應(yīng)用于體外中藥藥敏實驗，并對其免疫學(xué)原理 進(jìn)行研究，目前尚未見有報道。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為中醫(yī)臨床用藥及治療機理研究提供一種安全、簡便、客 觀有效的體外藥敏實驗方法，以避免中藥應(yīng)用的主觀性和隨意性。本發(fā)明的紅細(xì)胞免疫體外中藥藥敏實驗方法是采用紅細(xì)胞免疫酵母菌花環(huán) 試驗為基礎(chǔ)，將中藥藥物作為干預(yù)因素，分別對加入中藥的藥物干預(yù)組、無干 預(yù)的空白對照組、生理鹽水干預(yù)的實驗對照組的紅細(xì)胞免疫指標(biāo)RBC-C3bRR進(jìn) 行檢測，據(jù)檢測結(jié)果確定該中藥的敏感程度。如果該中藥對紅細(xì)胞RBC-C3bRR 發(fā)生正向調(diào)節(jié)，表現(xiàn)為RBC-C3bRR升高，則判屬為敏感有效藥物；如果發(fā)生負(fù)向調(diào)節(jié)或不發(fā)生調(diào)節(jié)作用，為不敏感或無效藥物。本發(fā)明的實驗方法對中醫(yī)辨 證施治可起到體外以藥測證的作用，將中醫(yī)辨證施治客觀指標(biāo)化。本發(fā)明的紅細(xì)胞免疫體外中藥藥敏實驗的具體方法為 無干預(yù)的空白對照組1) 、取動物肝素抗凝血，離心分離，提取血漿備用，將紅細(xì)胞配制成 1. 25xl07/mL的細(xì)胞懸液；2) 、將酵母菌配制成1. OxlOVmL的酵母菌溶液；3) 、取等體積的細(xì)胞懸液、血漿和酵母菌溶液一起混勻，37。C水洛30min 后，0.25%戊二醛溶液固定，涂片，干燥，甲醛固定，姬姆薩氏染色液染色，顯 微鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附有二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽性花 環(huán)，計算出紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。加入中藥的藥物干預(yù)組1) 、取動物肝素抗凝血，離心分離，提取血漿備用，將紅細(xì)胞配制成 1. 25xl07mL的細(xì)胞懸液；2) 、將酵母菌配制成l. OxlOVmL的酵母菌溶液；3) 、取等體積的細(xì)胞懸液、血漿、酵母菌溶液和對血紅細(xì)胞形態(tài)不發(fā)生影 響的最佳敏感濃度的中藥注射液一起混勻，37。C水洛30min后，0. 25%戊二醛溶 液固定，涂片，干燥，甲醛固定，姬姆薩氏染色液染色，顯微鏡下計數(shù)100個 紅細(xì)胞，以黏附有二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽性花環(huán)，計算出紅細(xì)胞 C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。生理鹽水干預(yù)的實驗對照組方法同加入中藥的藥物干預(yù)組，只是將中藥注射液替換為等體積的生理鹽 水即可。根據(jù)免疫學(xué)原理，中藥制劑屬多糖制劑，具有抗原性又稱兔疫原性，可直 接作用于血細(xì)胞與血漿，引發(fā)免疫過程，激活補體，成為攜帶有紅細(xì)胞補體大片段(C3b)的致敏外源性抗原(Ag-C3b分子)。紅細(xì)胞膜上具有C3bR (免疫黏 附受體或I型補體受體CR1),能夠與Ag-C3b分子中的C3b相結(jié)合，對紅細(xì)胞膜 直接發(fā)生調(diào)節(jié)作用。如果發(fā)生正向調(diào)節(jié)，則增強了紅細(xì)胞膜的免疫功能(C3bR-免疫黏附受體的黏附作用增強)，紅細(xì)胞對血液循環(huán)中的CIC黏附作用增強，表 現(xiàn)為隨后對酵母菌進(jìn)行黏附形成花環(huán)的花環(huán)率增高，為敏感有效藥物(酵母菌 經(jīng)煮沸后暴露的表面多糖能激活補體，吸附C3b成為致敏的酵母菌。在二者比 例合適的條件下，紅細(xì)胞可通過膜表面的C3bR黏附C3b致敏的酵母菌形成花 環(huán))。而如果發(fā)生負(fù)向調(diào)節(jié)或不發(fā)生調(diào)節(jié)作用，則表現(xiàn)為對酵母菌進(jìn)行黏附形成 花環(huán)的花環(huán)率降低或不變，為不敏感或無效藥物。本發(fā)明的紅細(xì)胞免疫體外中藥藥敏實驗方法的運用，避免了中藥應(yīng)用的主 觀性和隨意性，將促進(jìn)中藥臨床研究的現(xiàn)代化。 本發(fā)明實驗方法的優(yōu)勢還在于1、 自身血漿較異體血漿更容易獲得，絕無異體血液成份干擾。且血漿即取 即用，補體無失活。無需致敏酵母菌試劑的制備，檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，容 易判斷，易于普及推廣。2、 本發(fā)明使用的細(xì)胞懸液是提取血漿后的全血細(xì)胞配制成的紅細(xì)胞計數(shù)為 1."xlOVmL的全血細(xì)胞懸液，更加真實地反應(yīng)了體內(nèi)環(huán)境的情況，使檢測結(jié) 果更加真實可靠。
具體實施方式
實施例11、細(xì)胞懸液的配制取觀察對象空腹靜脈血l 2mL，肝素抗凝，與生理鹽水平衡后，2500r/min 離心分離5min,提取血漿加入一支試管中，并作標(biāo)記備用。將約4mL生理鹽水注入另一支試管，于分離后的全血細(xì)胞'中間層提取10uL 全血細(xì)胞，加入生理鹽水試管中，吹打均勾，鏡下計數(shù)紅細(xì)胞，配制成紅細(xì)胞計數(shù)為1. 25xl07/mL的全血細(xì)胞懸液，并作標(biāo)記備用。
2、 酵母菌溶液的配制
1. OxlOVmL的酵母菌溶液由上海第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院血液免疫研究室提供。
將冷凍的酵母菌溶液剪開，常溫解凍，吹打至均勻即可使用。
3、 無干預(yù)的空白對照組
取上述細(xì)胞懸液、酵母菌溶液、血漿各50uL加入1支試管中，3rC水洛Mmin 后，添加O. 25。/。戊二醛溶液50uL、生理鹽水50uL作涂片、吹干或涼干后以甲醛 固定，姬姆薩氏染色液染色，顯微鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附二個或以上 酵母菌的紅細(xì)胞為l個陽性花環(huán)，計算出無干預(yù)的空白對照組的紅細(xì)胞C3bR花 環(huán)率RBC-C3bRR (CR1 )。
4、 加入中藥的藥物干預(yù)組
取上述細(xì)胞懸液、酵母菌溶液、血漿各50uL加入l支試管中，再加入50uL 對血紅細(xì)胞形態(tài)不發(fā)生影響的最佳敏感濃度的中藥注射液一起混勻，37'C水浴 30min后，添加0. 25%戊二醛溶液50uL、生理鹽水50uL作涂片、吹干或涼干后 以甲醛固定，姬姆薩氏染色液染色，顯微鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附二個 或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽性花環(huán)，計算出加入中藥的藥物干預(yù)組的紅細(xì) 胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。
5、 生理鹽水干預(yù)的實驗對照組
步驟同加入中藥的藥物干預(yù)組，只是將50uL中藥注射液替換為50uL生理 鹽水。計算出生理鹽水干預(yù)的實驗對照組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。
6、 結(jié)果判斷
以無干預(yù)的空白對照組紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率為基數(shù)進(jìn)行比較，如果加入中藥 的藥物干預(yù)組紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率明顯升高，則表示該藥物為有效敏感藥物，如 果加入中藥的藥物干預(yù)組紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率不發(fā)生變化或降低，則表示該藥物為不敏感或無效藥物。 實施例2
對于腦梗死病例，西醫(yī)一般是按照其梗死部位、面積和責(zé)任血管進(jìn)行分型 的。而中醫(yī)卻采用辨證分型， 一般分為氣虛血瘀證、痰濁血瘀證、氣陰兩虛證
等。辨證分型不同，其治則與用藥則不同。 一般地
氣虛血瘀證，治宜益氣活血，藥用黃芪注射液+丹參注射液； 痰濁血瘀證，治宜化痰逐瘀，醒腦開竅，藥用復(fù)方麝香注射液； 氣陰兩虛證，治宜益氣養(yǎng)陰，活血化瘀，藥用生脈注射液。 然而中醫(yī)辨證的主觀因素較多，往往很難準(zhǔn)確地辯證施治。 根椐免疫學(xué)原理，以中藥多糖對紅細(xì)胞免疫酵母菌花環(huán)率影響的變化作為
中醫(yī)辨證的客觀指標(biāo)，則可以起到"以藥測證"的作用。 無干預(yù)的空白對照組
取肝素抗凝血2mL， 2500r/m離心5min,提取血漿備用；將紅細(xì)胞配制成 1.25xl0VmL的細(xì)胞懸液。
取細(xì)胞懸液(1. 25 x 107mL )、酵母菌溶液(1. 0 x 10VmL )、血漿各50uL加 入1支試管中，37'C水洛30min后，添加0. 25°/。戊二醛溶液50uL、生理鹽水50uL 作涂片，吹干或涼干后甲酸固定、染色，顯微鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附 二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽性花環(huán)，計算出無干預(yù)的空白對照組的紅 細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。
黃芪注射液+丹參注射液的藥物干預(yù)組
取肝素抗凝血2mL， 2500r/m離心5min，提取血漿備用；將紅細(xì)胞配制成 1.25xl07mL的細(xì)胞懸液。
取細(xì)胞懸液(1. 25 x lOVmL )、酵母菌溶液(1. 0 x 10VmL )、血漿各50uL加 入1支試管中，再加入由黃芪注射液、丹參注射液與等量生理鹽水配制成的對 血紅細(xì)胞形態(tài)不發(fā)生影響的最佳敏感濃度的中藥注射液50uL, 37。C水浴30min后，添加0.25y。戊二醛溶液50uL、生理鹽水50uL作涂片，吹干或涼干后甲醛固 定、染色，顯微鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1 個陽性花環(huán)，計算出黃芪注射液+丹參注射液藥物干預(yù)組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率 RBC-C3bRR。
復(fù)方麝香注射液藥物干預(yù)組
取肝素抗凝血2mL, 2500r/m離心5min，提取血漿備用；將紅細(xì)胞配制成 1. 25 x 107mL的細(xì)胞懸液。
取細(xì)胞懸液(1. 25 x 107/mL )、酵母菌溶液(1. 0 x 10VmL )、血漿各50uL加
入1支試管中，再加入由復(fù)方麝香注射液與等量生理鹽水配制成的對血紅細(xì)胞 形態(tài)不發(fā)生影響的最佳敏感濃度的中藥注射液50uL， 37'C水浴30min后，添加 0.25%戊二醛溶液50uL、生理鹽水50uL作涂片，吹干或涼干后以甲醛固定、染 色，顯微鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽 性花環(huán)，計算出復(fù)方麝香注射液藥物干預(yù)組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。 生脈注射液藥物干預(yù)組
取肝素抗凝血2mL, 2500r/m離心5min，提取血漿備用；將紅細(xì)胞配制成 1.25xl0VmL的細(xì)胞懸液。
取細(xì)胞懸液(1.25xl0VmL)、酵母菌溶液(1. OxlOVmL)、血漿各50uL加 入1支試管中，再加入由生脈注射液與等量生理鹽水配制成的對血紅細(xì)胞形態(tài) 不發(fā)生影響的最佳敏感濃度的中藥注射液50uL， 37。C水洛30min后，添加0. 25% 戊二醛溶液50uL、生理鹽水50uL作涂片，吹干或涼干后，甲醛固定、染色，在 顯微鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽性花 環(huán)，計算出生脈注射液藥物干預(yù)組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。
生理鹽水干預(yù)的實驗對照組
在藥物干預(yù)組實驗的基礎(chǔ)上，將中藥注射液替換為50uL生理鹽水即可。計 算出生理鹽水干預(yù)的實驗對照組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。以無干預(yù)的空白對照組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率為基數(shù)，對各藥物干預(yù)組的紅 細(xì)胞C3bR花環(huán)率進(jìn)行比較，花環(huán)率升高最明顯的藥物為有效敏感藥物。同時還 可以以藥測證，由此確立出此腦梗死患者屬于中醫(yī)何種證型。
實施例3
對于喘證患者，西醫(yī)一般分為肺源性與心源性。而中醫(yī)卻是辨證分型，分 為肺氣虛證、痰熱阻肺證、水凌心肺證等。辨證分型不同，其治則與用藥則不 同。
肺氣虛證，治宜益氣平喘，藥用黃芪注射液；
痰熱阻肺證，治宜清肺化痰，藥用痰熱清注射液；
水凌心肺證，治宜溫陽利水，藥用參附注射液。
然而中醫(yī)辨證的主觀因素較多，往往很難準(zhǔn)確地辯證施治。
根椐免疫學(xué)原理，以中藥多糖對紅細(xì)胞免疫酵母菌花環(huán)率影響的變化作為 中醫(yī)辨證的客觀指標(biāo)，則可以起到"以藥測證"的作用。
可以將喘證的證型與治療藥物對應(yīng)列出，并進(jìn)行紅細(xì)胞免疫花環(huán)試驗，以 藥測證，從而確立有效的治療藥物。
無干預(yù)的空白對照組
取肝素抗凝血2mL， 2500r/m離心5min，提取血漿備用；將紅細(xì)胞配制成 1.25xl0VmL的細(xì)胞懸液。
取細(xì)胞懸液(1. 25 x 107mL )、酵母菌溶液(L 0 x l08/mL )、血漿各50uL加 入1支試管中，37。C水浴30min后，添加0. 25%戊二醛溶液50uL、生理鹽水50uL 作涂片，吹干或涼干后甲醛固定、染色，顯微鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附 二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽性花環(huán)，計算出無干預(yù)的空白對照組的紅 細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。
黃芪注射液的藥物干預(yù)組
取肝素抗凝血2mL, 2500r/m離心5tnin，提取血漿備用；將紅細(xì)胞配制成1. 25 x 107mL的細(xì)胞懸液。
取細(xì)胞懸液U.25xl0VmL)、酵母菌溶液(1. OxioVmL)、血漿各50uL加
入1支試管中，再加入由黃芪注射液與等量生理鹽水配制成的對血紅細(xì)胞形態(tài) 不發(fā)生影響的最佳敏感濃度的中藥注射液50uL, 37'C水浴30min后，添加Q. 25%
戊二醛溶液50uL、生理鹽水50uL作涂片，吹干或涼干后甲醛固定、染色，顯微
鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，黏附二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽性花環(huán)，計 算出黃芪注射液藥物干預(yù)組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。
痰熱清注射液藥物干預(yù)組
取肝素抗凝血2mL， 2500r/m離心5min，提取血漿備用；將紅細(xì)胞配制成 1. 25 x 10VmL的細(xì)胞懸液。
取細(xì)胞懸液(1. 25 x 10VmL )、酵母菌溶液(1. 0 x io8/mL )、血漿各50uL加
入1支試管中，再加入由痰熱清注射液與等量生理鹽水配制成的對血紅細(xì)胞形 態(tài)不發(fā)生影響的最佳敏感濃度的中藥注射液50uL， 37匸水浴30min后，添加
0. 25%戊二醛溶液50uL、生理鹽水50uL作涂片，吹干或涼干后以甲醛固定、染 色，顯微鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽 性花環(huán)，計算出痰熱清注射液藥物干預(yù)組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。
參附注射液藥物干預(yù)組
取肝素抗凝血2mL, 2500r/m離心5min,提取血漿備用；將紅細(xì)胞配制成
1. 25 x 10VmL的細(xì)胞懸液。
取細(xì)胞懸液(1. 25 x l07/mL )、酵母菌溶液(1. 0 x ioVmL )、血漿各50uL加
入1支試管中，再加入由參附注射液與等量生理鹽水配制成的對血紅細(xì)胞形態(tài) 不發(fā)生影響的最佳敏感濃度的中藥注射液50uL, 37'C水洛30min后，添加0. 25% 戊二醛溶液50uL、生理鹽水50uL作涂片，吹干或涼干后，甲醛固定、染色，在 顯微鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽性花 環(huán)，計算出參附注射液藥物干預(yù)組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。生理鹽水干預(yù)的實驗對照組
在藥物干預(yù)組實驗的基礎(chǔ)上，將中藥注射液替換為50uL生理鹽水即可。計 算出生理鹽水干預(yù)的實驗對照組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR。
以無干預(yù)的空白對照組的紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率為基數(shù)，對各藥物干預(yù)組的紅 細(xì)胞C3bR花環(huán)率進(jìn)行比較，花環(huán)率升高最明顯的藥物為有效敏感藥物。同時還 可以以藥測證，由此確立出此喘證患者屬于中醫(yī)何種證型。
權(quán)利要求
1、紅細(xì)胞免疫體外中藥藥敏實驗方法，是采用紅細(xì)胞免疫酵母菌花環(huán)試驗為基礎(chǔ)，將中藥藥物作為干預(yù)因素，分別對加入中藥的藥物干預(yù)組、無干預(yù)的空白對照組、生理鹽水干預(yù)的實驗對照組的紅細(xì)胞免疫指標(biāo)RBC-C3bRR進(jìn)行檢測，據(jù)檢測結(jié)果確定該中藥的敏感程度。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的紅細(xì)胞免疫體外中藥藥敏實驗方法，其特征是該 方法具體為1) 、無干預(yù)的空白對照組取動物肝素抗凝血，離心分離，提取血漿備用，將紅細(xì)胞配制成1. 25xl07/mL 的細(xì)胞懸液；將酵母菌配制成1. 0xl0VmL的酵母菌溶液；取等體積的細(xì)胞懸液、血漿和酵母菌溶液一起混勻，37。C水洛30min后， 0.25%戊二醛溶液固定，涂片，干燥，甲醛固定，姬姆薩氏染色液染色，顯微鏡 下計數(shù)100個紅細(xì)胞，以黏附有二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽性花環(huán)， 計算出紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率RBC-C3bRR;2) 、加入中藥的藥物干預(yù)組取等體積的細(xì)胞懸液、血漿、酵母菌溶液和對血紅細(xì)胞形態(tài)不發(fā)生影響的 最佳敏感濃度的中藥注射液一起混勻，37"C水洛30min后，0. 25°/ 戊二醛溶液固 定，涂片，干燥，甲醛固定，姬姆薩氏染色液染色，顯微鏡下計數(shù)100個紅細(xì) 胞，以黏附有二個或以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個陽性花環(huán)，計算出紅細(xì)胞C3bR 花環(huán)率RBC-C3bRR;3) 、生理鹽水干預(yù)的實驗對照組方法同加入中藥的藥物干預(yù)組，只是將中藥注射液替換為等體積的生理鹽水。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的紅細(xì)胞免疫體外中藥藥敏實驗方法，其特征是如 果該中藥對紅細(xì)胞RBC-C3bRR發(fā)生正向調(diào)節(jié)，表現(xiàn)為RBC-C3bRR升高，則為敏感有效藥物；如果發(fā)生負(fù)向調(diào)節(jié)或不發(fā)生調(diào)節(jié)作用，則為不敏感或無效藥物。
全文摘要
紅細(xì)胞免疫體外中藥藥敏實驗方法，采用紅細(xì)胞免疫酵母菌花環(huán)試驗為基礎(chǔ)，中藥藥物作為干預(yù)因素，分別對加入中藥的藥物干預(yù)組、無干預(yù)的空白對照組、生理鹽水干預(yù)的實驗對照組的紅細(xì)胞免疫指標(biāo)RBC-C3bRR進(jìn)行檢測，據(jù)檢測結(jié)果確定該中藥的敏感程度。如果該中藥對RBC-C3bRR發(fā)生正向調(diào)節(jié)，則為敏感有效藥物；發(fā)生負(fù)向調(diào)節(jié)或不發(fā)生調(diào)節(jié)作用為不敏感或無效藥物。本發(fā)明的實驗方法對中醫(yī)辨證施治可起到體外以藥測證的作用，將中醫(yī)辨證施治客觀指標(biāo)化，避免了中藥應(yīng)用的主觀性和隨意性。
文檔編號G01N33/554GK101294960SQ20081005524
公開日2008年10月29日 申請日期2008年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月19日
發(fā)明者常國良 申請人:常國良