專利名稱：：一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種牛奶及其制品中納他霉素的含量的測(cè)定方法，特別是涉及一種通過效液相色i普儀對(duì)牛奶中納他霉素的含量進(jìn)行檢測(cè)的方法。
背景技術(shù)：
：納他霉素(Natamycin)也稱游鏈霉素(Pimaricin),商品名為霉克(Natamycin)是一種重要的多烯類大環(huán)內(nèi)酯抗菌素，能有效的抑制酵母菌和霉菌的生長(zhǎng)，阻止絲狀真菌中黃曲霉素的形成。1996年我國(guó)食品添加劑委員會(huì)會(huì)對(duì)納他霉素進(jìn)行評(píng)價(jià)并建議批準(zhǔn)使用，現(xiàn)已列入食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)我國(guó)《食品添加劑食用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB2760)規(guī)定，食品中最大殘留量是IO.Omg/kg。納他霉素已經(jīng)被作為食品的防腐劑而得到廣泛的應(yīng)用，不僅在牛奶中，牛奶制品如酸奶、干酪中也常常添加已起到防腐作用，但是目前還沒有制定牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法，因此建立一種快速、準(zhǔn)確、方便和經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)方法，有利于監(jiān)控奶制品生產(chǎn)廠家納他霉素的添加使用量，從而保障食品安全。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于，克服前處理沉降蛋白技術(shù)上的缺陷，通過摸索提取液最佳配比，最佳的提取時(shí)間和最佳色i普條件而提供一種牛奶及其制品中納他霉素的含量測(cè)定方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下設(shè)計(jì)方案本發(fā)明的一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法包括如下步驟充分混勻待測(cè)試樣2.0g加入曱醇和水(9+1)8.Oml,充分渦動(dòng)提取10min,稱重，z使試樣和所加甲醇水溶液總重量在10.OOOO士O.1g(試樣重量和提取液總重量控制在1:4左右)，記錄稱重?cái)?shù)據(jù)后，在4.(TC的條件下12000r/min高速冷凍離心10.Omin沉淀蛋白，濾膜過濾后獲得試樣處理液；稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并稱重后作為質(zhì)量濃度儲(chǔ)備液，然后進(jìn)一步用曱醇稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液；利用高效液相色譜4義對(duì)標(biāo)準(zhǔn)液和試樣處理液進(jìn)行;險(xiǎn)測(cè)；計(jì)算結(jié)果，試樣中納他霉素的計(jì)算公式為cx附i式中X-試樣中納他霉素的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c-試樣處理液濃度(mg/kg);^-試樣和提取液總質(zhì)量，單位為克(g);m2-試樣質(zhì)量，單位為克(g)。優(yōu)選地，所述^是耳又:容劑為曱醇和水，比例為9:1。4尤選;也，渦動(dòng)l是耳又時(shí)間為10min。優(yōu)選地，所述待測(cè)試樣在整個(gè)的制備過程中采用質(zhì)量濃度進(jìn)行操作和計(jì)算。優(yōu)選地，4。C的條件下12000r/min高速冷凍離心10.Omin沉淀蛋白。優(yōu)選地，利用高效液相色i普儀對(duì)試樣處理液進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)條件為.-色^普;)i:AgilentC185.0|um,250x4.6mm流動(dòng)相曱醇+水=70+30流速1.0ml/min;進(jìn)樣系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)樣器；進(jìn)樣量lOpl;溫度30°C;并根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是采用本發(fā)明的方法檢測(cè)牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法，快速有效，誤差率小于5%，檢出限為1.Omg/kg。由此可見，本發(fā)明的方法，為檢測(cè)牛奶中納他霉素的含量，提供了一種可靠的便于實(shí)施的方法，能夠滿足研究和生產(chǎn)中的需要。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1,液體奶中納他霉素含量的精密度和回收率4企測(cè)稱取充分混勻的待測(cè)試樣2.0024g，(精確稱量至0.0001克)，置于50ml的離心管中，加入曱醇和水(9+1)6.0ml,充分渦動(dòng)提取10min,稱重，^使試才羊和所加曱醇水溶液總重量在10.019g(試樣重量和曱醇水溶液總重量控制在l:4左右)，記錄稱重?cái)?shù)據(jù)后，在4.(TC的條件下12000r/min高速冷凍離心10.0min沉淀蛋白，濾膜過濾后獲得試樣處理液。稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品(純度97.5°/。美國(guó)Aldrick)10.00mg,用曱醇溶解并稱重至10.OOOOg,濃度為1000mg/kg的儲(chǔ)備液，然后進(jìn)一步用曱醇稀釋50倍作為標(biāo)準(zhǔn)使用液，再稀釋為0.1、0.5、1.0、20.Omg/kg的標(biāo)準(zhǔn)使用液。檢測(cè)儀器為現(xiàn)有的島津-20A高效液相色語儀檢測(cè)條件為色i普;f主AgilentC185.0|um，250x4.6mm流動(dòng)相曱醇+水=70+30流速1.0ml/min;進(jìn)樣系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)樣器；進(jìn)樣量lOpl;溫度30°C;根據(jù)其質(zhì)譜峰定性，外標(biāo)法定量。計(jì)算結(jié)果，試樣中納他霉素的計(jì)算公式為:式中X-試樣中納他霉素的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c-試樣處理液濃度(mg/kg);^-試樣和提取液總質(zhì)量，單位為克(g);柳2-試樣質(zhì)量，單位為克(g)。經(jīng)過計(jì)算，結(jié)果為試樣中納他霉素的含量按公式(1)進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實(shí)施例2,固體干酪中納他霉素精密度和回收率的檢測(cè)稱取充分混勻的待測(cè)試樣2.0001g,(精確稱量至0.0001克)，置于50ml的離心管中，加入曱醇和水(9+1)6.0ml,充分渦動(dòng)提取10min,稱重，使試樣和所加曱醇水溶液總重量在10.0340g(試樣重量和甲醇7水溶液重量控制在l:4左右)，記錄稱重?cái)?shù)據(jù)后，在4.0。C的條件下12000r/min高速冷凍離心10.0min沉淀蛋白，濾膜過濾后獲得試樣處理液。稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品(純度97.5%美國(guó)Aldrick)10.00mg,用甲醇溶解并稱重至10.0000g,濃度為1000mg/kg的儲(chǔ)備液，然后進(jìn)一步用甲醇稀釋50倍作為標(biāo)準(zhǔn)使用液，再稀釋為0.1、0.5、1.0、20.0mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)4吏用液。檢測(cè)儀器為現(xiàn)有的島津-20A高效液相色語儀檢測(cè)條件為色語柱AgilentC185.0jum，250x4.6mm流動(dòng)相曱醇+水=70+30流速1.0ml/min;進(jìn)樣系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)樣器；進(jìn)樣量10|li1;溫度30°C;根據(jù)其質(zhì)鐠峰定性，外標(biāo)法定量。計(jì)算結(jié)果，試樣中納他霉素的計(jì)算公式為式中-.X-試樣中納他霉素的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c-試樣處理液濃度(mg/kg);^-試樣和提取液總質(zhì)量，單位為克(g);附2-試樣質(zhì)量，單位為克(g)。經(jīng)過計(jì)算，結(jié)果為試樣中納他霉素的含量按公式(1)進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>顯而易見，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，可以用發(fā)明的一種通過高效液相色譜儀對(duì)牛奶及其制品中納他霉素含量進(jìn)行測(cè)定。上述實(shí)施例僅供說明本發(fā)明之用，而并非是對(duì)本發(fā)明的限制，有關(guān)
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，因此所有等同的技術(shù)方案也應(yīng)屬于本發(fā)明的范疇，本發(fā)明的專利保護(hù)范圍應(yīng)由各權(quán)利要求限定。權(quán)利要求1、一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法，其特征在于所述測(cè)定方法包括如下步驟稱取充分混勻的待測(cè)試樣2.0000+±0.1g，加入甲醇和水(9+1)8.0ml，充分渦動(dòng)提取10min，稱重，使試樣和所加提取液總重量在10.0000±0.0100g(試樣重量和提取液總重量控制在1∶4左右)，記錄稱重?cái)?shù)據(jù)后，在4.0℃的條件下12000r/min高速冷凍離心10.0min沉淀蛋白，濾膜過濾后獲得試樣處理液，。稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并稱重后作為質(zhì)量濃度儲(chǔ)備液，然后進(jìn)一步用甲醇稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液；利用高效液相色譜儀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)液和試樣處理液進(jìn)行檢測(cè)；計(jì)算結(jié)果，試樣中納他霉素的計(jì)算公式為2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法，其特征在于所述曱醇和水(9+1)提取，理想的提取液配比，很好的控制了雜質(zhì)的千擾，并保證了回收率。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法，其特征在于渦動(dòng)提取時(shí)間為10min,此條件下具有最好的混合提耳又效率。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法，其特征在于所述試樣重量和提取液總重量控制在1:4左右，此條件下具有最佳提取和沉降蛋白效率。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法，其特征在于4.(TC的條件下12000r/min高速冷凍離心10.Omin沉淀蛋白，具有很好的沉降效果。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法，其特征在于所述利用高效液相色譜4義對(duì)試樣處理液進(jìn)行檢測(cè)的條件為色譜柱AgilentC185.0fim,250x4.6mm流動(dòng)相甲醇+水=70+30流速1.0ml/min;進(jìn)樣系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)樣器；進(jìn)樣量10^1;溫度30°C;此條件下具有4艮好的分離效果7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法，其特征在于利用較為普遍、適用的高效液相色語儀對(duì)牛奶及其制品中納他霉素的含量進(jìn)行檢測(cè)。全文摘要本發(fā)明涉及一種通過高效液相色譜儀對(duì)牛奶及其制品中納他霉素含量的測(cè)定方法。即待測(cè)試樣中加入甲醇和水(9+1)，充分渦動(dòng)提取，稱重后高速冷凍離心沉降蛋白，然后過濾凈化獲得試樣液；稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并稱重后作為質(zhì)量濃度儲(chǔ)備液，然后進(jìn)一步用甲醇稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液；利用高效液相色譜儀對(duì)試樣處理液進(jìn)行檢測(cè)；然后便可計(jì)算出結(jié)果。采用本發(fā)明的方法檢測(cè)牛奶中納他霉素的含量，快速有效，相對(duì)平均偏差小于5.0％，由此可見，本發(fā)明的方法，為牛奶及其制品中納他霉素含量的檢測(cè)，提供了一種可靠的便于實(shí)施的方法，能夠滿足研究和生產(chǎn)中的需要。文檔編號(hào)G01N30/00GK101221154SQ200810057140公開日2008年7月16日申請(qǐng)日期2008年1月30日優(yōu)先權(quán)日2008年1月30日發(fā)明者薇宋申請(qǐng)人:譜尼測(cè)試科技(北京)有限公司