專利名稱：氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡及其檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測氯丙嗪、地西泮類藥物的器具，特別是涉及 一種氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡。
背景技術(shù)：
氯丙嗪系吩噻嗪類代表藥物，為中樞多巴胺受體的阻斷劑，具有 抗精神病、鎮(zhèn)吐、降溫和增強催眠麻醉等多種藥理活性。在動物飼料 和運輸過程中使用可降低動物的維持需要和減少途中失重、死亡率。 安定又名地西泮為苯二氮卓類，是臨床常用的鎮(zhèn)靜、催眠藥物。近幾 年來，有些飼料企業(yè)為了追求飼料的轉(zhuǎn)化率和高額利潤，在飼料中隨 意添加鎮(zhèn)靜、催眠類違禁藥物，在動物組織中殘留導(dǎo)致畜產(chǎn)品的不安全。2002年下半年全國飼料和飼料添加劑質(zhì)量監(jiān)督抽査結(jié)果中，共有 258批次樣品檢出了違禁藥物和違規(guī)添加藥物，其中安定120批次占 全部1650批次不合格樣品的7.2%。為此國家有關(guān)部門也下文將安定 類明確定為禁用藥物之一。為了打擊非法使用違禁藥物，保護消費者 的健康安全，我們除了健全法律法規(guī)，建立有效的監(jiān)督管理體系外， 還需要健全相應(yīng)的檢測方法。因此，建立快速、靈敏、有效的氯丙嗪、 地西泮殘留檢測方法具有重要的意義。目前氯丙嗪、地西泮的檢測技術(shù)主要有色譜技術(shù)。色譜技術(shù)為經(jīng) 典技術(shù)，主要有高壓液相色譜(HPLC )，高壓液相色譜/熒光 (HPLC/FLD )，液相色譜-質(zhì)譜連用(LC-MS ),氣相色譜-質(zhì)譜連用 (GC-MS )，毛細管電泳等方法。這些方法靈敏準確，但是樣品處理煩瑣費時，成本高，而且需要有經(jīng)過專門訓(xùn)練的專業(yè)人員來操作復(fù)雜的 儀器設(shè)備。因此，很有必要研究更加簡單快捷方便的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有氯丙嗪、地西泮的檢測技術(shù)復(fù)雜的技術(shù)缺陷。本發(fā) 明的目的在于提供一種能同時檢測氯丙嗪、地西泮的二聯(lián)檢測卡。本 發(fā)明的另外一個目的是提供一種簡單快捷方便的檢測方法。為了實現(xiàn)第一個目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡，包括外殼和試紙條，外殼由上板和下 板組成，上板有檢測窗和加樣孔，試紙條包括底板和在底板上依次粘 貼的樣品吸收墊、膠體金標記墊、檢測反應(yīng)區(qū)及吸收墊，樣品吸收墊 正對加樣孔，檢測反應(yīng)區(qū)正對檢測窗。上述的膠體金標記墊含氯丙嗪 特異性抗體和地西泮特異性抗體膠體金標記物，上述的檢測反應(yīng)區(qū)至 少含有一條質(zhì)控線和兩條檢測線，兩條檢測線分別包被氯丙嗪、地西 泮與載體蛋白偶聯(lián)形成的偶合物。上述的底板為一面涂有不干膠的不吸水的韌性材料，如PVC板， 起固定支持試紙其他組成部分的作用。上述的樣品吸收墊為玻璃纖維或醋酸纖維或尼龍膜，檢測時起 吸收樣品溶液的作用，便于樣品溶液向上移動。上述的樣品膠體金標記墊為玻璃纖維或聚酯膜或醋酸纖維或尼 龍膜，其上標記的物質(zhì)為膠體金標記的氯丙嗪特異性抗體和地西泮特 異性抗體的混合物。上述的檢測反應(yīng)區(qū)為硝酸纖維膜，其上邊包被氯丙嗪檢測用抗 原和地西泮檢測用抗原線作為檢測線。此即為檢測反應(yīng)區(qū)，該部分主要作用是將反應(yīng)結(jié)果以肉眼可見的顏色表征出來。上述的吸收墊將吸水紙室溫干燥后，作為吸收墊，作用在于將 移動上來的多余的樣品溶液吸收。上述的試紙組裝在試紙的底板上先粘貼檢測反應(yīng)區(qū)，吸收墊一 段與檢測反應(yīng)區(qū)一端相疊，膠體金標記墊一段與檢測反應(yīng)區(qū)另一端相 疊，樣品吸收墊一段與膠體金標記墊另一端相疊，即成氯丙嗪、地西 泮檢測試紙條。作為優(yōu)選，上述的載體蛋白為鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白、牛血清 白蛋白、兔血清蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或血藍蛋白。作為再 優(yōu)選，上述的氯丙嗪、地西泮與載體蛋白的偶聯(lián)物分別通過將氯丙嗪、 地西泮和載體蛋白用碳化二亞胺法進行偶聯(lián)得到。作為優(yōu)選，上述的氯丙嗪抗體和地西泮抗體分別為抗氯丙嗪和抗 地西泮單克隆抗體或多克隆抗體。作為優(yōu)選，上述的質(zhì)控線包被有抗兔抗體或抗鼠抗體。 為了實現(xiàn)上述的第二個目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案 氯丙嗪-地西泮的檢測方法，被檢測樣品為尿液、奶、血清樣品， 直接采用上述任意一個技術(shù)方案所述的氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡，直 接進行檢測。被檢測樣品為飼料樣品，稱取0.5 2g飼料樣品，加入1 4ml 樣品抽取提液，振蕩器混勻0. 5 2min，靜置5 20min，取清亮上層 液作檢測樣品，采用上述任意一個技術(shù)方案所述的氯丙嗪-地西泮二聯(lián) 檢測卡，進行檢測。被檢測樣品為動物組織、肉或肝臟樣品，稱取0.5 2g勻漿動物組織、肉或肝臟樣品，80 95°。水浴2 10min，恢復(fù)至室溫，取滲出 液作檢測樣品，采用上述任意一個技術(shù)方案所述的氯丙嗪-地西泮二聯(lián) 檢測卡，進行檢測。本發(fā)明的優(yōu)點是能同時檢測出尿液或飼料、動物組織、肉、肝臟 中含有的氯丙嗪和地西泮，易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便，檢 測快速，靈敏度高，結(jié)果準確。


圖1是本發(fā)明檢測卡外殼及測試條在外殼內(nèi)的安置圖。 圖2是本發(fā)明的檢測試紙條結(jié)構(gòu)示意圖。 圖3是檢測結(jié)果判定示意圖。
具體實施方式
本發(fā)明結(jié)合具體實施例參見附圖進一步說明如下 氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡，它是在檢測卡外殼中設(shè)置試紙條1， 檢測卡外殼的結(jié)構(gòu)及試紙條1的設(shè)置參見附圖1 ，檢測卡外殼為長 條扁平狀塑料卡，長7cm ，寬lcm ，厚0. 3cm ，殼壁厚0. lcm ，由 工程塑料制成。檢測卡外殼由上板1與下板7相嵌而成，在上板l上 有檢測窗2和加樣孔6。試紙條1放置在下板7卡座內(nèi)。試紙條1是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，長6.0cm ，寬0.4cm 。試紙 條1是多層結(jié)構(gòu)底板8 ，為PVC板，長6. Ocm ，寬0. 4cm，厚0. 5mm ; 距底板8 —端15mm粘貼硝酸纖維素膜11，硝酸纖維素膜厚0. 5mm，長 25mm，寬0. 4cm。硝酸纖維素膜11上有三條橫向線3、 4、 5，參見附 圖1，橫向線4是檢測線T1，含氯丙嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，橫向線5是檢 測線T2，含地西泮蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，橫向線3是質(zhì)控線C，含抗兔抗體或抗鼠抗體。底板8—端粘貼吸水墊12，底板8另一端粘貼樣品吸收 墊9，吸水墊12內(nèi)端和膠體金標記墊10內(nèi)端分別與硝酸纖維素膜11 一端重疊，樣品吸收墊9與膠體金標記墊10 —端重疊，膠體金標記墊 10是含氯丙嗪和抗地西泮單克隆抗體或多克隆抗體膠體金標記物的 玻璃纖維膜。膠體金標記墊10厚0. 7mm，長5mm ,寬0. 4cm。樣品吸 收墊9厚0. 7mm，長20mm ，寬0. 4cm。吸水墊12厚0. 7mm，長18mm ， 寬0.4cm 。膠體金標記墊10、樣品吸收墊9、吸水墊12和硝酸纖維 素膜11相互間重疊部分長度為2-3mm。吸水墊12材料是吸水紙，樣 品吸收墊9和膠體金標記墊IO材料是吸水玻璃纖維膜。本發(fā)明氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡用于檢測畜牧飼料、動物尿樣、 奶、血清、動物組織、肉、肝臟中是否含有氯丙嗪、地西泮，據(jù)此加 強畜牧食品的安全性。對于不同的檢測樣品，有不同的處理方法尿液、奶、血清樣品直接用作檢測樣品。飼料樣品稱取lg飼料樣品，加入2ml樣品抽取提液，振蕩器混 勻lmin，靜置10min，取清亮上層液作檢測樣品。動物組織、肉、肝臟樣品稱取lg勻漿動物組織、肉、肝臟樣品， 9(TC水浴5min，恢復(fù)至室溫，取滲出液作檢測樣品。操作方法在氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡加樣孔6中滴3滴待檢測 樣品液進行檢測，由于虹吸作用原理，帶動待檢測的樣品液及膠體金 標記墊10所含的抗氯丙嗪和地西泮單克隆或多克隆抗體膠體金標記 物一起向硝酸纖維素膜11泳動，3- 5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。檢測卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金標記的抗體，在檢測線上分別與包被的氯丙嗪蛋白質(zhì) 偶聯(lián)物、地西泮蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，以及質(zhì)控線包被的抗兔抗體或抗鼠抗 體結(jié)合，形成紅色條帶。若樣品中有相應(yīng)的待檢氯丙嗪和地西泮，當(dāng) 樣品加入后即與相應(yīng)的抗體發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)所形成的結(jié)合物不會與相 應(yīng)的檢測線上所包被的氯丙嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、地西泮蛋白質(zhì)偶聯(lián)物反 應(yīng)，從而檢測線不顯色。但反應(yīng)所形成的結(jié)合物會與質(zhì)控線包被的抗 兔抗體或抗鼠抗體結(jié)合，形成紅色條帶，即無論是否含有氯丙嗪、地 西泮質(zhì)控線都顯色。檢測結(jié)果有圖3所示1 、如16所示檢測線T1、 T2和質(zhì)控線C都顯紅色，表示檢測結(jié)果為陰性，說明被檢測樣品中不含氯丙嗪和地西泮。2 、如15所示檢測線Tl、 T2不顯色，只有質(zhì)控線C顯紅色，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中同時含有氯丙嗪和地西泮。3 、如17所示檢測線T1、 T2和質(zhì)控線C都不顯紅色，則表明檢測試條失效。4 、如14所示檢測線Tl不顯色，檢測線T2和質(zhì)控線C都顯紅色， 檢測結(jié)果為氯丙嗪陽性，表明被檢測樣品中含有氯丙嗪。5 、如13所示檢測線T2不顯色，檢測線Tl和質(zhì)控線C都顯紅色， 檢測結(jié)果為地西泮陽性，表明被檢測樣品中含有地西泮。
權(quán)利要求
1.氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡，包括外殼和試紙條，外殼由上板和下板組成，上板有檢測窗和加樣孔，試紙條包括底板和在底板上依次粘貼的樣品吸收墊、膠體金標記墊、檢測反應(yīng)區(qū)及吸收墊，樣品吸收墊正對加樣孔，檢測反應(yīng)區(qū)正對檢測窗，其特征在于膠體金標記墊含氯丙嗪特異性抗體和地西泮特異性抗體膠體金標記物，檢測反應(yīng)區(qū)至少含有一條質(zhì)控線和兩條檢測線，兩條檢測線分別包被氯丙嗪、地西泮與載體蛋白偶聯(lián)形成的偶合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡，其特征在于 載體蛋白為鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、 人血清白蛋白、卵清蛋白或血藍蛋白。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡，其特征在于 氯丙嗪、地西泮與載體蛋白的偶聯(lián)物分別通過將氯丙嗪、地西泮和 載體蛋白用碳化二亞胺法進行偶聯(lián)得到。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡，其特征在于 氯丙嗪特異性抗體和地西泮特異性抗體分別為抗氯丙嗪和抗地西 泮單克隆抗體或多克隆抗體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡，其特征在于 質(zhì)控線包被有抗兔抗體或抗鼠抗體。
6. 氯丙嗪-地西泮的檢測方法，其特征在于被檢測樣品為尿液、奶、 血清樣品，直接采用如權(quán)利要求1 5任意一項權(quán)利要求所述的氯 丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡，直接進行檢測。
7. 氯丙嗪-地西泮的檢測方法，其特征在于被檢測樣品為飼料樣品，稱取0. 5 2g飼料樣品，加入1 4ml樣品抽取提液，振蕩器混勻0.5 2min，靜置5 20min，取清亮上層液作檢測樣品，采用如權(quán) 利要求1 5任意一項權(quán)利要求所述的氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡， 進行檢測。
8.氯丙嗪-地西泮的檢測方法，其特征在于被檢測樣品為動物組織、 肉或肝臟樣品，稱取0. 5 2g勻漿動物組織、肉或肝臟樣品，80 95"C水浴2 10min，恢復(fù)至室溫，取滲出液作檢測樣品，采用如權(quán) 利要求1 5任意一項權(quán)利要求所述的氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡， 進行檢測。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測氯丙嗪、地西泮類藥物的器具，特別是涉及一種氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡。氯丙嗪-地西泮二聯(lián)檢測卡，包括外殼和試紙條，試紙條包括底板和在底板上依次粘貼的樣品吸收墊、膠體金標記墊、檢測反應(yīng)區(qū)及吸收墊，膠體金標記墊含氯丙嗪抗體和地西泮抗體膠體金標記物，檢測反應(yīng)區(qū)至少含有一條質(zhì)控線和兩條檢測線，兩條檢測線分別包被氯丙嗪、地西泮與載體蛋白偶聯(lián)形成的偶合物。本發(fā)明的優(yōu)點是能同時檢測出尿液或飼料、動物組織、肉、肝臟中含有的氯丙嗪和地西泮，易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結(jié)果準確。
文檔編號G01N33/577GK101236202SQ20081005982
公開日2008年8月6日 申請日期2008年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月6日
發(fā)明者傅小偉, 軍 劉, 張明洲, 王旻子, 曄 程, 胡華軍, 陳宗倫, 魏建良 申請人:中國計量學(xué)院;杭州迪恩科技有限公司