專利名稱：：那西肽制劑含量的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物化學
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種飼料藥物添加劑及其各種制劑的含量檢測的改進方法，具體涉及含硫多肽類抗生素那西肽在稀釋過程中的保護方法。
背景技術(shù)：
：飼料安全是綠色環(huán)保食品的基本點，我國幅員遼闊，人口眾多，隨著改革開放的步伐加快，人民生活水平提高，畜禽水產(chǎn)的需求量也日益增多。另外我國是一個農(nóng)業(yè)大國，禽畜產(chǎn)品出口量很大，但藥物殘留問題很嚴重，因此研究和開發(fā)綠色飼料添加劑對保障人民身體健康和發(fā)展我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟十分必要。2001年7月農(nóng)業(yè)部頒發(fā)了《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》的通知，并列出了33種符合規(guī)范的飼料藥物添加劑，那西肽是其中之一。新獸藥那西肽(又名諾西肽，英文名Nosih印tide)是生物工程的產(chǎn)物，由Str印tomycesactuosus發(fā)酵產(chǎn)生，是一種新型非吸收型的飼用抗生素。其中的有效成分含硫多膚類抗生素那西肽，結(jié)構(gòu)為12種氨基酸及衍生物形成的多肽物質(zhì)，分子量為1222，分子式為C51H43N13012S6，結(jié)構(gòu)式(Merckindex，fourthedtion)參見結(jié)構(gòu)式1。那西肽純品是一種黃色結(jié)晶，為一種脂溶性產(chǎn)物，極難溶于非脂溶性或弱脂溶性體系中。結(jié)構(gòu)式1:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>那西肽作為飼料用添加劑具有以下特點1、動物專用抗生素，不引起交叉耐藥。2、在動物體內(nèi)不殘留，不污染食品。3、添加量少，2.5-10ppm，促生長效果明顯，提高增重8-10%，并提高飼料報酬。4、應用范圍廣，可用于畜、禽、魚等。那西肽是國外1961年發(fā)現(xiàn)的化合物，70年代法國朗普洛克公司曾對其進行研究，80年代未由日本三菱公司開發(fā)成新型非吸收型的詞用抗生素，并于19S7年12月25日被日本政府批準為法定的飼料添加劑，列入了日本飼料安全法，其商品名為PrilnofaX(Hess&Clark)。由于其在體內(nèi)不殘留的性質(zhì)，目前被歐共體、北美、日本等國廣泛使用1988年上海醫(yī)科大學對那西肽進行開發(fā)研究，1998年6月獲農(nóng)業(yè)部頒發(fā)那西肽新獸藥證書(三類)(原料藥和預混劑)。并經(jīng)中國獸藥監(jiān)察所對那西肽樣品的測試鑒定，產(chǎn)品質(zhì)量與國外同類產(chǎn)品完全一致。2002年，杭州匯能生物技術(shù)公司與復旦大學合作將那西肽產(chǎn)業(yè)化，商品名為"諾農(nóng)"。在禽、畜和水產(chǎn)上廣泛應用，獲得良好的社會效益。由于那西肽的結(jié)構(gòu)性質(zhì)決定了其為脂溶性物質(zhì)，在非脂溶性溶液體系中溶解性差而且不穩(wěn)定，如果用非脂溶性或弱脂溶性體系進行處理時，會發(fā)生溶解不完全、溶液中不穩(wěn)定或稀釋時不能完全定量轉(zhuǎn)移等問題?，F(xiàn)行規(guī)定的那西肽制劑含量測定方法(抗生素微生物檢定法)中，其制劑液的稀釋制備，所用的是脂溶性很差的混合稀釋液，因此在該方法操作過程中會產(chǎn)生測試結(jié)果的較大偏差和重復性不好的情況。必須進行有效改進后，測定的準確性精密性才會得到保障。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)行的那西肽制劑含量測定方法(抗生素微生物檢定法)中所用的稀釋液脂溶性差，檢測過程中會產(chǎn)生測試結(jié)果的較大偏差和重復性不好的情況，提供一種改進的檢測方法，使測定的準確性得到保障。本發(fā)明那西肽制劑含量檢測改進法是在那西肽制劑提取液用弱脂溶性溶液稀釋前，預先加入有機溶劑對其穩(wěn)定性進行保護。用于預先加入的有機溶劑是指對那西肽有相當脂溶性的有機溶劑系列，這些有機溶劑是指N,N-二甲基甲酰胺(N，N-dimethylformamideDMF)、二甲基亞砜、丙酮、氯仿、甲醇、乙醇其一。用于預先加入的對其穩(wěn)定性進行保護的脂溶性有機溶劑優(yōu)選為N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。本發(fā)明設計利用預先添加有機溶劑來保護那西肽的溶出及后處理中的穩(wěn)定性，以使得能夠被定量且穩(wěn)定地轉(zhuǎn)移到非脂溶性稀釋液中，從而使得含量能被準確測定，并且明顯改進方法的重復性。本發(fā)明以DMF為例來說明保護那西肽的效果。本發(fā)明涉及的檢測方法主要步驟如下1)待測液的制備按照中華人民共和國農(nóng)業(yè)部《獸藥質(zhì)量標準2003版》中那西肽項下規(guī)定的方法進行。2)其它測試用試液的制備按照中華人民共和國農(nóng)業(yè)部《獸藥質(zhì)量標準2003版》中那西肽項下規(guī)定的方法進行。3)參考液稀釋中保護取上述1)待用的參考貯備液5ml，置于50ml容量瓶中，加入lml的匿F進行保護，用國家規(guī)定的稀釋液稀釋到刻度，混合勻勻。精密移取該稀釋液2ml和lml，分別置于50ml容量瓶中，各加入lml的DMF進行保護，用近水溶性稀釋液稀釋到刻度，混勻成2單位每毫升和0.5單位每毫升的測定用液。4)稀釋待測液取上述l)獲得的制劑待測貯備液5ml，置于50ml容量瓶中，加入lml的面F進行保護，用近水溶性稀釋液稀釋到刻度，混合均勻。精密移取該稀釋液2ml和lml，分別置于50ml容量瓶中，各加入lml的DMF進行保護，用近水溶性稀釋液稀釋到刻度，混勻成2單位每毫升和0.5單位每毫升的測定用液。5)按照《中華人民共和國獸藥典2005版》一部附錄103頁的"抗生素微生物檢定法"進行培養(yǎng)、測定、結(jié)果的計算。具體實施例方式1、以1%那西肽預混劑8個批號分別按原有方法和本發(fā)明方法進行檢驗測定對比，結(jié)果具體如下表一。表一1%那西肽預混劑樣生物效價測定結(jié)果及相關(guān)偏差統(tǒng)計:<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2、以75%含量的那西肽提純品8個批號，分別按原有方法和發(fā)明方法進行檢驗測定對比，結(jié)果具體如下表二。表二75%那西肽提純品生物效價測定結(jié)果及相關(guān)偏差統(tǒng)計<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3、結(jié)果分析綜述:1)從上述兩表的對比結(jié)果可以看到不論是75%的那西肽純品或1%的預混劑，在檢驗測定操作中不添加有機溶劑進行預保護，測定結(jié)果明顯低于待測樣品的真實含量值，并且測定結(jié)果之間的平行性及重復性均不高。2)不論是75%的那西肽純品或1%的預混劑，在檢驗測定操作中先添加有機溶劑進行預保護的，測定結(jié)果非常接近待測樣品的真實含量值，并且測定結(jié)果之間的平行性及重復性均很好。3)由上述結(jié)果，我們可以得出結(jié)論為在那西肽及各種制劑在用任何方法溶解或提取后，如果希望用非脂溶性體系進行溶解、稀釋和分散，預先加入有機溶劑，可增加那西肽的溶出，稀釋中那西肽的定量轉(zhuǎn)移，從而達到提高含量測定的準確度和可靠性。在使用此同等保護概念的處理方法進行處理時，還可以用于那西肽的其它類似的分散處理，以保持其穩(wěn)定，以及定量地被轉(zhuǎn)移到非脂溶分散體系中。權(quán)利要求1、那西肽制劑的生物效價檢測方法，其特征在于在那西肽制劑用非脂溶性或弱脂溶性體系進行稀釋處理前，預先加入對那西肽有相當脂溶性的有機溶劑對其穩(wěn)定性進行保護。2、如權(quán)利要求1所述那西肽制劑的生物效價檢測方法，其特征在于用于預先加入的對那西肽有相當脂溶性的有機溶劑為N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、丙酮、氯仿、甲醇、乙醇其一。3、如權(quán)利要求1所述那西肽制劑的生物效價檢測方法，其特征在于用于預先加入的有機溶劑優(yōu)選為N，N-二甲基甲酰胺。全文摘要本發(fā)明那西肽制劑含量的檢測方法，其改進在于在那西肽制劑用非脂溶性或弱脂溶性體系進行稀釋處理前，預先加入有機溶劑對其穩(wěn)定性進行保護。用于預先加入的有機溶劑是指對那西肽有相當脂溶性的有機溶劑系列，如DMF，又如二甲基亞砜，還有如丙酮、氯仿、甲醇、乙醇等。優(yōu)選為DMF。本發(fā)明利用預先添加有機溶劑來保護那西肽的溶出及后處理中的穩(wěn)定性，以使得能夠被定量且穩(wěn)定地轉(zhuǎn)移到非脂溶性稀釋液中，從而使得含量能被準確測定，或用于其它目的的稀釋分散過程。本發(fā)明明顯改進了原檢測方法的準確性、精密性和重復性。文檔編號G01N1/38GK101299010SQ20081006241公開日2008年11月5日申請日期2008年6月6日優(yōu)先權(quán)日2008年6月6日發(fā)明者瑜丁,曹春華,陳貴才申請人:浙江匯能動物藥品有限公司