專利名稱：用于小型動物肝臟淋巴細(xì)胞分離的肝臟灌注方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別涉及用于小型動物肝臟淋巴細(xì)胞分離的肝臟 灌注方法。
背景技術(shù)：
正常的肝組織由動脈和門靜脈供血，其中70% -85%的供血來源于門靜脈。 門靜脈收集來自胃、小腸、大腸(直腸后部除外)，胰和脾的血液，經(jīng)肝門入肝， 在肝內(nèi)反復(fù)分支匯入竇狀隙，最后集合為數(shù)支肝靜脈匯入后腔靜脈。肝臟淋巴細(xì)胞與肝臟疾病關(guān)系密切，可能參與了肝炎、肝硬化、肝癌等諸 多肝臟疾病的發(fā)生與發(fā)展，此外，與自身免疫性疾病和器官移植免疫等也有一 定關(guān)系。要深入研究肝臟淋巴細(xì)胞在上述疾病中的表型變化和意義，前提是要 建立有效的肝臟淋巴細(xì)胞分離方法。影響肝臟淋巴細(xì)胞分離的因素較多，其中 肝臟的預(yù)處理最為重要。國外常用門靜脈肝灌注法以排除過客淋巴細(xì)胞的影響， 但是該技術(shù)較難操作，特別是當(dāng)實驗動物為小鼠等體型較小的動物時，由于其 門靜脈很細(xì)，解剖結(jié)構(gòu)位置較深，需仔細(xì)剝離周圍韌帶，操作難度很大，而且 穿刺針不易固定，容易脫落和刺破門靜脈，經(jīng)常會出現(xiàn)穿刺針刺入小葉分支靜 脈而導(dǎo)致各葉肝產(chǎn)生大小不等的盲區(qū)(即有血液殘留的區(qū)域)的情況，由此造 成循環(huán)血液排除不充分，后續(xù)分離得到的肝臟淋巴細(xì)胞中混雜有過客淋巴細(xì)胞， 從而對實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性造成明顯影響；此外，門靜脈肝灌注法還需要恒流泵 等灌流裝置以及外科顯微鏡等，操作比較繁瑣、耗時。發(fā)明內(nèi)容有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種用于小型動物肝臟淋巴細(xì)胞分離的 肝臟灌注方法，可以克服門靜脈肝灌注法在小鼠等小型實驗動物體上操作時存在的缺陷，適用于小型實驗動物的肝臟淋巴細(xì)胞分離，可以充分排除肝內(nèi)循環(huán) 血液以避免過客淋巴細(xì)胞的千擾，同時操:作簡便、快速、成本低。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案用于小型動物肝臟淋巴細(xì)胞分離的肝臟灌注方法，將動物處死后，經(jīng)后腔 靜脈進(jìn)行肝臟灌注。進(jìn)一步，所述肝臟灌注方法是將動物脫頸處死后，消毒，解剖腹部，暴露 后腔靜脈，將穿刺針自后腔靜脈遠(yuǎn)端刺入，緩慢注入灌注液至可見肝臟表面毛 細(xì)血管網(wǎng)，肝臟由深紅色褪色至無灌注盲區(qū)為止。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明的肝臟灌注方法與門靜脈肝灌注法比較，具有如下優(yōu)點(1)由于 后腔靜脈較門靜脈粗，分離及穿刺操作非常簡單，操作時間比門靜脈肝灌注法 縮短近l小時；(2)遠(yuǎn)離門靜脈進(jìn)行充分灌注，循環(huán)血液排除充分，可以避免未 灌注完全的盲區(qū)的存在；(3)可以普通的小兒頭皮針及一次性注射器替換恒流 泵等灌流裝置，可克服恒流泵安裝復(fù)雜、間斷性灌流的缺點，而且降低實驗成 本，筒化搡作步驟。研究證明，本發(fā)明的肝臟灌注方法能夠達(dá)到理想的肝灌注 效果，適合于大多數(shù)實驗室在進(jìn)行小鼠等小型動物肝臟淋巴細(xì)胞分離時采用， 具有良好的推廣應(yīng)用價值。


為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合附圖對本 發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，其中圖1為小鼠門靜脈和后腔靜脈解剖示意圖；圖2為小鼠灌注前的肝臟解剖示意圖；圖3為小鼠經(jīng)后腔靜脈肝灌注后的肝臟解剖示意圖；圖4為經(jīng)后腔靜脈肝灌注后分離出的小鼠完整肝臟；圖5為經(jīng)門靜脈肝灌注后分離出的小鼠完整肝臟。
具體實施例方式
以下將參照附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。 本發(fā)明的用于小型動物肝臟淋巴細(xì)胞分離的肝臟灌注方法，以已經(jīng)死亡的 動物為實施對象，經(jīng)后腔靜脈進(jìn)行灌注。
本實施例是將Balb/c小鼠脫頸處死后，用濕潤的酒精棉球擦身消毒，解剖 腹部，將胃腸移向左側(cè)，暴露后腔靜脈，將接有一次性注射器(體積為15 ml) 的4號小兒頭皮針自后腔靜脈遠(yuǎn)端刺入，并用眼科彎鑷夾住以固定，緩慢注入 預(yù)冷的Hank's平衡鹽溶液至可見肝臟表面毛細(xì)血管網(wǎng)為止，實驗過程中可見肝 臟逐漸膨脹，并由深紅色逐漸褪色，最后整個肝臟呈均勻土黃色，基本無盲區(qū) 存在。
參見圖1-圖5,圖1為小鼠門靜脈和后腔靜脈解剖示意圖，從圖可知，門 靜脈為分支靜脈，很細(xì)，且解剖位置較深(圖中是將肝臟貼向膈面以暴露肝底)， 故懸空穿刺且視野較暗，操作極為不便；而后腔靜脈為主靜脈，很粗淺，將腸 管翻向右側(cè)即可見，且其緊貼腹后壁，穿刺固定非常容易；圖2為小鼠灌注前 的肝臟解剖示意圖，可見小鼠灌注前的肝臟呈深紅色；圖3為小鼠經(jīng)后腔靜脈 肝灌注后的肝臟解剖示意圖，可見小鼠灌注后的肝臟呈均勻土黃色；圖4為經(jīng) 后腔靜脈肝灌注后分離出的小鼠完整肝臟，可見各葉肝均灌注良好，無盲區(qū)存 在；圖5為經(jīng)門靜脈肝灌注后分離出的小鼠完整肝臟，方框所指區(qū)域即為未灌 注完全的盲區(qū)。
最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡 管通過參照本發(fā)明的優(yōu)選實施例已經(jīng)對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但本領(lǐng)域的普通 技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不 偏離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的精神和范圍。
權(quán)利要求
1、用于小型動物肝臟淋巴細(xì)胞分離的肝臟灌注方法，其特征在于將動物處死后，經(jīng)后腔靜脈進(jìn)行肝臟灌注。
2、 權(quán)利要求1所述的用于小型動物肝臟淋巴細(xì)胞分離的肝臟灌注方法，其 特征在于將動物脫頸處死后，消毒，解剖腹部，暴露后腔靜脈，將穿刺針自 后腔靜脈遠(yuǎn)端刺入，緩慢注入灌注液至可見肝臟表面毛細(xì)血管網(wǎng)，肝臟由深紅 色褪色至無灌注盲區(qū)為止。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于小型動物肝臟淋巴細(xì)胞分離的肝臟灌注方法，將動物處死后，經(jīng)后腔靜脈進(jìn)行灌注；本發(fā)明方法操作簡便、快速，循環(huán)血液排除充分，且不需要特殊設(shè)備，實驗成本低，能夠達(dá)到理想的肝灌注效果，適合于大多數(shù)實驗室在進(jìn)行小鼠等小型動物的肝臟淋巴細(xì)胞分離時采用，具有良好的推廣應(yīng)用價值。
文檔編號G01N1/28GK101329227SQ200810069978
公開日2008年12月24日 申請日期2008年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月14日
發(fā)明者兵 倪, 吳玉章, 健 李, 沈小麗, 王慶紅, 王靖雪, 易 田, 田志強(qiáng), 石晶磊, 賈正才, 韌 趙, 黃澤民 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)