專利名稱：靈芝孢子破壁率的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及真菌孢子破壁率的測(cè)定方法，尤其是靈芝孢子破壁率的測(cè)定 方法。
背景技術(shù)：
靈芝孢子有兩層十分堅(jiān)實(shí)的孢壁，不容易受化學(xué)和外力破壞，對(duì)孢子內(nèi) 部有一定的保護(hù)作用，因而不利于人體的消化和有效功能成分的吸收，甚至 服用后，部分孢子在糞便中仍然完整無缺。為了提高靈芝孢子粉的保健、藥 效功能，破壁處理是靈芝孢子產(chǎn)品加工過程中的一項(xiàng)非常重要的工序，孢子 的破壁率已經(jīng)成為靈芝孢子產(chǎn)品質(zhì)量鑒定的必要指標(biāo)之一。目前常用的方法 是用一定濃度孢子的水懸浮液，點(diǎn)滴于血球計(jì)數(shù)板上，在顯微鏡下讀出破壁 前后完整孢子的數(shù)量，然后計(jì)算出單位重量所含完整孢子的數(shù)量，利用公式
破壁后完整的孢子
孢子破壁率(％) - (l— -■ ) X100%
破壁前完整抱子數(shù)
計(jì)算出孢子的"破壁率"。在檢測(cè)中，孢子在懸浮液中的分散均勻度對(duì)測(cè)定 數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性有極大的影響。 一個(gè)分布不均、結(jié)塊太多的孢子懸浮液，不僅 難以讀出孢子數(shù)量，更無法保證讀數(shù)的精確性和代表性。目前只能通過增加 孢子的水懸浮液的密度和黏度，來改進(jìn)孢子的懸浮性(如在孢子的水懸浮液 中加蔗糖、食鹽或硫酸鋅等)，以及使用高速剪切攪拌來達(dá)到均勻分散孢子 的目的。盡管如此，孢子平均分散的程度和可靠性還是不能保證，這可從圖
1、圖2中看出。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，提供一種使孢子平 均分散的程度較高，能較為精確的測(cè)定靈芝孢子破壁率的方法。
本發(fā)明為一種靈芝孢子破壁率的測(cè)定方法，其要點(diǎn)在于(1)取適量同 一批次的靈芝未破壁孢子粉A和破壁后孢子粉B，在未破壁孢子粉及破壁孢 子粉B分別加入固體分散劑充分混合，用液體溶劑分別稀釋上述兩種混合物， 定容后，混合均勻；
(2)分別取上述兩份靈芝孢子粉懸浮液點(diǎn)滴在血球計(jì)數(shù)板上，在顯微 鏡下，讀出孢子粉破壁前后所含完整孢子的數(shù)量，計(jì)算出單位重量所含完整 孢子的數(shù)量，利用公式
破壁后完整孢子數(shù)
孢子破壁率(％) = (l— - ) xioo%
破IL前完整抱子數(shù)
計(jì)算出孢子破壁率。
本發(fā)明利用"干物顆粒間的均勻混合"原理，在孢子粉與溶劑混合成懸 浮液之前先與固體分散劑進(jìn)行均勻混合，避免孢子結(jié)團(tuán)以及不能均勻分散的 缺陷，達(dá)到了計(jì)數(shù)精確、檢測(cè)結(jié)果具有代表性的目的。
在未破壁孢子粉A或破壁孢子粉B中所加的固體分散劑量為所取未破壁 孢子粉A或破壁孢子粉B量的0. 5倍至它在溶劑中的飽和濃度量。液體溶劑 一般選用蒸餾水，.固體分散劑為顆粒微小、不結(jié)塊、并可以完全溶解于所選 用的液體溶劑的固體粉未或晶體，如蔗糖、食鹽、硫酸鋅等，可以由一種物 質(zhì)構(gòu)成，也可由多種物質(zhì)混合而成，大小為20-200目之間，最好是50-100 目的細(xì)糖粉。當(dāng)它們?nèi)芙庠谒锖?，也有增加水的密度和黏度的作用，有?于孢子在懸浮液中的物理穩(wěn)定性，但這不是本專利所采用的"固體分散劑" 最重要的原因。為了計(jì)量準(zhǔn)確最好將靈芝未破壁孢子粉A和破壁后孢子粉B在與固體分 散劑混合前先進(jìn)行烘干。烘干溫度為5(TC-8(TC，烘千時(shí)間大約3-5小時(shí)即 可。
為了增加孢子在水中的分散性和減少孢子重新聚集，在定容前往混合液 中加入表面活性劑，所加的量占未破壁孢子粉A重量的0. 05%—5%之間。表 面活性劑可為土溫80，也可以使用其他類同的水溶性表面活性劑或清潔劑， 如家用洗滌劑、清潔劑、或乳化劑TERGIT0L等。
所謂的機(jī)械攪拌是指可以使用如超聲震蕩器、乳化機(jī)、磁振蕩機(jī)或旋渦 混合器等來促進(jìn)懸浮液的均勻混合。
由于孢子破壁后，單位重量中所含完整的未破壁的孢子數(shù)較少，為了計(jì) 量準(zhǔn)確，所取的破壁孢子粉B的量為未破壁孢子粉A的1. 5—3倍。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于利用"干物顆粒間的均勻混合"原理，在孢子粉與水 混合成懸浮液之前先與固體分散劑進(jìn)行均勻混合，避免孢子結(jié)團(tuán)以及在懸浮 液中不能均勻分散的缺陷，從而達(dá)到了計(jì)數(shù)精確、檢測(cè)結(jié)果具有代表性的目 的。


圖1顯微鏡下在加糖的水溶液里的孢子分布狀態(tài)。
圖2顯微鏡下在加糖和土溫的水溶液里的孢子分布狀態(tài)
圖4顯微鏡下在用本專利方法處理后破壁孢子分布狀態(tài)。
具體實(shí)施例方式
為了充分公開本發(fā)明的靈芝孢子粉破壁率的測(cè)定方法，以下結(jié)合實(shí)施例 加以說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1 :芝孢子粉破壁率的測(cè)定，具體步驟如下 1.制備孢子懸浮液(1 )取適量的破壁前后的靈芝孢子粉A(未破壁孢子)和B(破壁孢子)， 在烘箱60。C下烘干5小時(shí)。
(2)精確定量稱取經(jīng)烘干的孢子粉A(W.、=Q. 20g)和破壁孢子粉B (WB=0. 40g)。
(3 )分別稱取5g經(jīng)過研磨、過60目篩的蔗糖粉末與孢子粉A及破壁 孢子粉B充分混合，使混合后的干粉外觀顏色均勻。
(4)用蒸餾水分別溶解上述兩個(gè)混合千粉，在孢子粉和破壁孢子粉樣 品溶液中各加0. lmL表面活性劑土溫80 (Tween80)，并用蒸餾水定容到100ml 的容量瓶中，再以超聲震蕩30min，使孢子在水溶液中充分分散。
2. 觀察與計(jì)數(shù)
(1 )用吸管吸取一滴上述檢測(cè)用孢子懸浮液，置于蓋玻片的邊緣，使 液體緩緩滲入，多余的液體用吸水紙吸除。稍等片刻后，在顯微鏡下觀察孢 子。如圖3、圖4所示，孢子平均分散。
(2 )在16 x 40倍數(shù)的顯微鏡下，分別讀取血球計(jì)數(shù)板4個(gè)對(duì)角與中 央的中格(共5個(gè)中格)里所含有完整的孢子數(shù)。重復(fù)上述步驟(1)、 (2) 三次，然后計(jì)算它們的平均數(shù)，NA和NB。
3. 數(shù)據(jù)計(jì)算
每毫升溶液靈芝孢子數(shù)卜(每個(gè)中格平均數(shù)n/16 ) x 400x 10000 分別算出NA和NB
(2)每克干重孢子粉含完整靈芝孢子的平均數(shù) NA=NAxl00/WA ; NB=NBxiOO/WB
(3 )靈芝孢子破壁率X- ( 1- NB/ NA) xioo% 實(shí)施例2 芝孢子粉破壁率的測(cè)定具體步驟如下 1制備孢子懸浮液
(1) 取適量的破壁前后的靈芝孢子粉A (未破壁孢子)和B (凌壁孢 子)，在烘箱60。C下烘干3小時(shí)。
7(2)精確定量稱取經(jīng)烘干的孢子粉A(WA=Q. 2Qg)和破壁孢子粉B (WB=0. 40g)。
(3 )分別稱取5g的硫酸鋅與孢子粉A及破壁孢子粉B充分混合，使混 合后的干粉顏色均勻。
(4 )用蒸餾水分別溶解上述兩個(gè)混合干粉，在孢子粉和破壁孢子粉樣 品溶液中各加0. lmL表面活性劑土溫80 (Tween 80)，并用蒸餾水定容到 100ml的容量瓶中，再以旋渦混合器攪拌lmin，使孢子在水溶液中充分分散。 2.觀察與計(jì)數(shù)-同實(shí)施例1 3數(shù)據(jù)計(jì)算-同實(shí)施例1
實(shí)施例3 芝孢子粉破壁率的測(cè)定具體步驟如下 1制備孢子懸浮液
(1) 取適量的破壁前后的靈芝孢子粉A (未破壁孢子)和B (破壁孢 子)，在烘箱80。C下烘干5小時(shí)。
(2) 精確定量稱取經(jīng)烘干的孢子粉A (WA=Q. 20g)和破壁孢子粉B (WB=0. 40g).
(3 )分別稱取5g經(jīng)過研磨、過60目篩的食鹽粉末與孢子粉A及破壁 孢子粉B充分混合，使混合后的干粉顏色均勻。
(4)用蒸餾水分別溶解上述兩個(gè)混合干粉，在孢子粉和破壁孢子粉樣 品溶液中各加一滴家用洗潔精，并用蒸餾水定容到100ml的容量瓶中，再以 乳化機(jī)攪拌5min，使孢子在水溶液中充分分散。 2觀察與計(jì)數(shù)-同實(shí)施例1 3數(shù)據(jù)計(jì)算-同實(shí)施例1
三個(gè)實(shí)施例所得的鏡檢結(jié)果和孢子破壁率都很一致，表明本發(fā)明的實(shí)用 性和可^"性極高。 '
權(quán)利要求
1. 一種靈芝孢子破壁率的測(cè)定方法，其特征在于(1)取適量同一批次的靈芝未破壁孢子粉A和破壁后孢子粉B，在未破壁孢子粉及破壁孢子粉B中分別加入固體分散劑充分混合，用液體溶劑分別稀釋上述兩種混合物，定容后，混合均勻；(2)分別取上述兩份靈芝孢子粉懸浮液點(diǎn)滴在血球計(jì)數(shù)板上，在顯微鏡下，讀出孢子粉破壁前后所含完整孢子的數(shù)量，計(jì)算出單位重量所含完整孢子的數(shù)量，利用公式計(jì)算出孢子破壁率。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靈芝孢子破壁率的測(cè)定方法，其特征在于， 在未破壁孢子粉A或破壁孢子粉B中所加的固體分散劑量為所取未破壁 孢子粉A或破壁孢子粉B量的0. 5倍至它在溶劑中的飽和濃度量。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靈芝孢子破壁率的測(cè)定方法，其特征在于， 固體分散劑為顆粒微小、不結(jié)塊、并可以完全溶解于所選用的液體溶劑 的固體粉未或晶體。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靈芝孢子破壁率的測(cè)定方法，其特征在于， 固體分散劑的顆粒大小為20-200目。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種靈芝孢子破壁率的測(cè)定方法，其特征在于， 固體分散劑為20-100目的細(xì)糖粉。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定靈芝孢子破壁率的方法，其特征在于， 靈芝未破壁孢子粉A和破壁后孢子粉B在與固體分散劑混合前先進(jìn)行烘 千。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靈芝孢子破壁率的測(cè)定方法，其特征在于， 所述的定容后，混合均勻，是指使用機(jī)械攪拌來使混合液混合均勻'，使 用超聲震蕩器或乳化機(jī)或磁振蕩機(jī)或旋渦混合器來促進(jìn)懸浮液的均勻混 合。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靈芝孢子破壁率的測(cè)定方法，其特征在于， 在混合液加入蒸餾水定容前加入表面活性劑，所加的量占未破壁孢子粉 A重量的0. 05--5%之間。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種測(cè)定靈芝孢子破壁率的方法，其特征在于， 表面活性劑為土溫8 0或?yàn)槠渌愅乃苄员砻婊钚詣┗蚯鍧崉?br> 10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定靈芝孢子破壁率的方法，其特征在 于，破壁孢子粉B的量為未破壁孢子粉A的1. 5—3倍。
全文摘要
本發(fā)明涉及真菌孢子破壁率的測(cè)定方法，尤其是靈芝孢子破壁率的測(cè)定方法。本發(fā)明為一種測(cè)定靈芝孢子破壁率的方法，其要點(diǎn)在于取適量同一批次的靈芝未破壁孢子粉A和破壁后孢子粉B，在未破壁孢子粉及破壁孢子粉B分別加入固體分散劑充分混合，用液體溶劑分別稀釋上述兩種混合物，定容后，混合均勻，在顯微鏡下觀察并計(jì)算出單位重量所含完整孢子數(shù)量，得出孢子破壁率。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于利用“干物顆粒間的均勻混合”原理，在孢子粉與水混合成懸浮液之前先與固體分散劑進(jìn)行均勻混合，避免孢子結(jié)團(tuán)以及不能均勻分散的缺陷，達(dá)到了計(jì)數(shù)精確、檢測(cè)結(jié)果具有代表性的目的。
文檔編號(hào)G01N33/48GK101446581SQ20081007186
公開日2009年6月3日 申請(qǐng)日期2008年10月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月6日
發(fā)明者曄 李, 柯斌榕, 黃晉之, 黎志銀 申請(qǐng)人:福建仙芝樓生物科技有限公司