專利名稱：：透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種透明質(zhì)酸(hyaluronicacid,以下簡稱HA)生物素-親和素間接包被技術(shù)結(jié)合化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)測定試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
：透明質(zhì)酸是一種大分子氨基多糖，由間質(zhì)細胞合成，在體內(nèi)參與基質(zhì)的構(gòu)成，主要由肝竇內(nèi)皮細胞攝取和分解。由于HA主要在肝臟內(nèi)代謝，肝病患者尤其是肝硬化患者HA代謝障礙，血中HA濃度顯著升高，因而HA是肝硬化的一個良好血清學(xué)指標(biāo)。HA實驗室檢測方法主要為免疫分析，常用檢測方法為放射免疫分析(RIA)和酶免疫分析(EIA),目前使用最廣的為酶免疫分析(EIA)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay,CLIA)是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析，是繼放射免疫分析(RIA)和酶免疫分析(EIA)之后發(fā)展起來的一種超高靈敏度的微量測定技術(shù)。具有高靈敏度、檢測范圍寬、操作簡便快速、標(biāo)記物穩(wěn)定性好、無污染、儀器簡單經(jīng)濟等優(yōu)點。它是放射性免疫分析與普通酶免疫分析的取代者，是目前免疫定量分析最理想的方法。親和素-生物素系統(tǒng)在ELISA中的應(yīng)用有多種形式，其中包括反應(yīng)信號放大、間接包被等形式。反應(yīng)信號放大即為生物素化的抗原或抗體與酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)體系，其優(yōu)點是利用生物素-親和素放大效應(yīng)提高檢測靈敏度，缺點為親和素的等電點較高，對聚苯乙烯等固相載體有較高的非特異吸附而導(dǎo)致較高的本底。本發(fā)明以親和素包被固相載體，通過親和素-生物素系統(tǒng)間接包被生物素化的抗體，不僅便于放大生產(chǎn)、易于監(jiān)控生產(chǎn)過程，而且避免了直接包被固相存在的活性損失大、工藝優(yōu)化繁瑣等缺點，同時保證了批次間的穩(wěn)定性。本發(fā)明的目的是為了解決目前臨床上放免試劑有效期短、放射性廢棄物污染危害以及酶免試劑靈敏度低、精密性差等不足。本發(fā)明的透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光測定試劑盒，經(jīng)臨床實驗證明，操作簡便，靈敏度高，特異性好，與肝活檢結(jié)果符合度極高，提供了一種高效、靈敏、穩(wěn)定、特異的無創(chuàng)肝纖維化診斷技術(shù)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明將生物素-親和素間接包被技術(shù)結(jié)合化學(xué)發(fā)光技術(shù)與透明質(zhì)酸的免疫分析法有效地結(jié)合，提供了一種能夠簡便、快速、靈敏、'穩(wěn)定地檢測透明質(zhì)酸的試劑盒。本發(fā)明的試劑盒克服了放免試劑和酶免試劑的諸多不足，適于在產(chǎn)業(yè)上有效地推廣應(yīng)用。本發(fā)明的目的是提供一種生物素-親和素間接包被技術(shù)結(jié)合化學(xué)發(fā)光免疫分析測定透明質(zhì)酸的試劑盒。本發(fā)明的再一目的是提供一種制備上述試劑盒的方法。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒包括l)透明質(zhì)酸校準(zhǔn)品；2)親和素化的固相載體；3)生物素化的透明質(zhì)酸多克隆抗體或單克隆抗體；4)透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白標(biāo)記物；以及5)上述標(biāo)記物所作用的化學(xué)發(fā)光底物。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，其中，所述固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒；所述標(biāo)記物為酶標(biāo)記物或化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物；所述酶為^5威性磷酸酶或辣根過氧化物酶；所述化學(xué)發(fā)光劑為吖啶酯、魯米諾、異魯米諾；所述化學(xué)發(fā)光底物為1,2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾、異魯米諾或過氧化氫，其中所述l，2-二氧乙烷類衍生物為(金剛烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-1,2-二氧乙烷(AMPPD)、CSPD或CDP-Star。進一步，本發(fā)明提供了一種制備上述試劑盒的方法，包括以下步驟1)以透明質(zhì)酸純品配制透明質(zhì)酸校準(zhǔn)品；2)固相載體包被親和素；3)使透明質(zhì)酸的多克隆抗體或單克隆抗體生物素化；4)標(biāo)記透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白；5)配制化學(xué)發(fā)光底物；6)配制洗滌液；7)分裝上述透明質(zhì)酸校準(zhǔn)品、生物素化的透明質(zhì)酸的多克隆抗體或單克隆抗體、透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物和洗滌液；以及8)組裝為成品。本發(fā)明的方法，其特征在于，所述固相載體包被親和素的步驟2)采用以下方法用0.050MpH值為9.6的碳酸鹽緩沖液配制成所需濃度的親和素包被液，并將包被液負(fù)載于固相載體上；經(jīng)生理鹽水洗滌、BSA封閉，抽濕干燥后用鋁箔袋密封。在上述方法中，優(yōu)選，所述親和素的固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒；所述標(biāo)記物為酶標(biāo)記物或化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物；所述酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶；所述化學(xué)發(fā)光劑為吖啶酯、魯米諾、異魯米諾；所述化學(xué)發(fā)光底物為1，2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾、異魯米諾或過氧化氫，其中所述l,2-二氧乙烷類衍生物為(金剛烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3〃-磷酰氧基)苯基-1,2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。具體的上述試劑盒可以包括透明質(zhì)酸校準(zhǔn)品、親和素化的微孔板、生物素化的抗體、酶標(biāo)記物與化學(xué)發(fā)光底物液、20倍濃縮洗滌液等。其中，所述透明質(zhì)酸校準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn)級，純度不低于卯％,親和素化的微孔板為48或96孔的微孔板條，標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶(HRP),化學(xué)發(fā)光底物液為魯米諾，濃縮洗滌液為PBST,或者標(biāo)記酶為堿性磷酸酶(ALP),化學(xué)發(fā)光底物液為AMPPD,濃縮洗滌液。本發(fā)明"透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒"可以非常專一地檢測出血清或血漿中透明質(zhì)酸的含量，可以根據(jù)透明質(zhì)酸含量的多少判斷肝纖維化的治療效果及其病情的變化。它具有簡便、快速、靈敏、穩(wěn)定等優(yōu)點。該透明質(zhì)酸測定試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)的各項指標(biāo)均達到同類試劑盒的分析法水平。并且，根據(jù)本發(fā)明的檢測系統(tǒng)為開放式操作，簡便快速，不需要昂貴的全自動化學(xué)發(fā)光測量儀，特別適合廣大的中小醫(yī)院推廣使用，為臨床診斷和科研工作提供一種非常有價值的檢測手段。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，載體上包被的親和素、生物素化抗體、被測樣品的透明質(zhì)酸以及標(biāo)記的透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白形成"夾心"結(jié)構(gòu)，本發(fā)明采用的"兩步法"反應(yīng)模式，既有效地利用了化學(xué)發(fā)光技術(shù)原理，又確保了檢測的靈敏度。本發(fā)明的試劑盒以氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生的光信號代替酶免疫分析中的顯色底物，因而具有與酶免疫分析同等的特異性，而靈敏度大大提高。本發(fā)明的試劑盒也可以采用親和素包被固相，與生物素化抗體和待測樣本中透明質(zhì)酸形成固相親和素-生物化抗體-透明質(zhì)酸復(fù)合物，再與吖咬酯標(biāo)記的透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白形成固相親和素-生物素化抗體-透明質(zhì)酸-吖。定酯標(biāo)記透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白夾心復(fù)合物，然后加入化學(xué)發(fā)光底物，利用化學(xué)發(fā)光儀檢測相對發(fā)光強度，定量分析待測樣本中透明質(zhì)酸的含量，從而避免了酶免試劑存在的靈敏度低、內(nèi)源性酶干擾、底物大部分有毒或致癌等缺點，該試劑盒具有反應(yīng)速度快、光信號不受溫度變化影響、成本低、易儲存等優(yōu)勢，可為肝纖維化診斷提供更為特異、快速、可靠的診斷依據(jù)。圖1為實施例1所制備的試劑盒中的校準(zhǔn)品線性圖。圖2本發(fā)明試劑盒與HA酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的相關(guān)性具體實施例方式實施例1制備本發(fā)明的透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒一、酶標(biāo)透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白的制備和生物素偶聯(lián)抗體的制備1、采用戊二醛法或改良的過碘酸鈉法將透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白與辣根過氧化物酶偶聯(lián)。2、生物素偶聯(lián)透明質(zhì)酸多克隆抗體或單克隆抗體的制備(1)用常規(guī)方法將生物素(BNHS)溶于N,N-二甲基曱酰胺(DMF)配成lmg/mL;(2)用0.1mol/LpH值為9.0的NaHC03將純化的透明質(zhì)酸的多克隆抗體或單克隆抗體稀釋為1~2mg/mL;(3)按BNHS與抗體容積比為1:8或重量比1:7左右混合，室溫?fù)璋柘路磻?yīng)2~4h.'(4)裝入透析對0.05mol/LpH值為7.2的PBS,4。C透析過夜，結(jié)合物加等體積甘油，小量分裝，-20。C以下保存?zhèn)溆谩?、生物素化單抗、酶標(biāo)記透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白稀釋液的配制Tris12.120g脇Proclin300lmL雙蒸水lOOOmL4、生物素化單抗和酶標(biāo)記透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白工作液的配制將制備的生物素化單抗、酶標(biāo)記透明質(zhì)酸用稀釋液分別稀釋成不同濃度，使用棋盤滴定法選擇出最佳的稀釋度為分別為1:4000、1:5000。二、透明質(zhì)酸校準(zhǔn)品的制備用透明質(zhì)酸純品配制，分裝0、50、100、200、400、800ng/mL共6瓶。三、親和素化的固相微孔板制備(1)包被無7jc碳酸鈉0.795g碳酸氫鈉1.47g雙蒸水500mL溶解混勻后，調(diào)整pH至9.6,加入適量的親和素混勻，然后加入微孔板各孔中，每孔130pL，4'C放置24h。(2)洗滌用生理鹽水洗三次。(3)封閉NaH2P042H200.2gNa2HP0412H202.9gBSAProclin300雙蒸水5glmL定容至lOOOmL將上述試劑稱量好放入潔凈容器中，加雙蒸水定容，溶解混勻，測定pH值為7.0。每孔分別加入封閉液120|aL,室溫放置4小時。甩掉封閉液，在吸水紙上拍干。室溫除濕干燥24小時。立即進行真空封袋。封袋后放置15分鐘檢查無漏氣，如果有漏氣需重新封袋。貼簽后置2~8'C保存。四、化學(xué)發(fā)光底物A液魯米諾4-羥基聯(lián)苯4-缺苯硼酸硼酸硼砂雙蒸水pH8.0-10.0I.7716g0.051g0.012gII.4g4.9g定溶lOOOmL五、化學(xué)發(fā)光底物B液過氧化脲Tween-200.329glmlNa2HP0412H20NaH2P042H20雙蒸水51.58g8.74g定溶lOOOmLpH7.0~7.6使用時A液與B液等比例混合。六、洗滌液Na2HP0412H2058gNaH2P042H202gNaCl160gTween-20lmLProclin300lmL去離子水lOOOmL調(diào)整pH至7.27.4。使用時雙蒸水稀釋20倍。七、半成品及成品組成上述步驟所得產(chǎn)品分裝即為半成品。抽出三份經(jīng)過特異性、精密性、靈敏度及穩(wěn)定性檢定合格才能組裝成透明質(zhì)酸測定試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)。組裝成試劑盒后還需抽檢合格后才能出廠。綜上，在本發(fā)明的研究過程中，本發(fā)明的發(fā)明人首先對所用的原材料進行了篩選試驗和質(zhì)量鑒定，包括標(biāo)記抗體與生物素化抗體的活性、親和素化載體(如不透光的白色微孔板)的吸附性能和變異大小、HRP的活性、化學(xué)發(fā)光底物的發(fā)光強度及發(fā)光持續(xù)時間等。然后對親和素化載體的方法進行了研究，用不同的包被緩沖液和封閉液進行試驗，選擇出最適合的包被緩沖液和封閉液，通過親和素不同包被濃度試驗找到最佳的濃度條件。對于生物素偶聯(lián)抗體和對于HRP的標(biāo)記可以有不同的方法，通過反復(fù)探索和對比試驗最終找到了簡便、產(chǎn)率高、成本低、質(zhì)量可靠的標(biāo)記方法，并對生物素偶聯(lián)抗體和酶標(biāo)記物使用的稀釋液進行了長期的考察試驗，配制出了能夠使生物素偶聯(lián)抗體和酶標(biāo)記物長期保持活性而穩(wěn)定的稀釋液。再次通過多次方陣交叉試驗確定了生物素化的抗體、酶標(biāo)記物的最佳稀釋比例分別為1:4000、1:5000。本發(fā)明的發(fā)明人還對試劑盒的反應(yīng)模式和反應(yīng)條件進行了試驗研究，最終確定了兩步法反應(yīng)模式，并就不同的反應(yīng)時間對試驗結(jié)果的影響進行了試驗，確定最適合的反應(yīng)時間。通過對化學(xué)發(fā)光底物液發(fā)光持續(xù)時間的測定及不同發(fā)光時間對測定值的影響試驗表明在加入化學(xué)發(fā)光底物液后5~30分鐘之間進行測量為最佳，其結(jié)果也較為準(zhǔn)確。實施例2-3制備本發(fā)明的透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒除以塑料珠、塑料管作為載體其余均以與實施例1相同的方法制備透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒。實施例4制備本發(fā)明的透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒除以磁性顆粒作為載體、通過EDC偶聯(lián)法制備磁顆粒固相化親和素外，其余均以與實施例1相同的方法制備透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒。實施例5制備本發(fā)明的透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒除以堿性磷酸酶標(biāo)記透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白、以AMPPD作為化學(xué)發(fā)光底物，其余均以與實施例1相同的方法制備透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒。實施例6-8制備本發(fā)明的透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒除以吖啶酯、魯米諾、異魯米諾標(biāo)記透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白、以過氧化氫作為化學(xué)發(fā)光底物，其余均以與實施例1相同的方法制備透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒。1、吖啶酯標(biāo)記透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白的制備方法(1)將lmg/ml的待標(biāo)記的透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白500ml(pH7.20.050MPBS)加入棕色玻璃并瓦；(2)將10p1的吖啶酯(5mMDMF溶液)加入上述棕色玻璃弁瓦，與透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白室溫避光反應(yīng)30min;(3)加入30mg/ml的賴氨酸溶液100(J1終止反應(yīng)；(4)采用葡聚糖凝膠柱分離、純化吖啶酯標(biāo)記物；(5)將純化的吖啶酯標(biāo)記物加入1%BSA、50%甘油分裝凍存。2、化學(xué)發(fā)光底物的配制(1)化學(xué)發(fā)光底物液A將10.0mL65%HN03、2.0mL過氧化氬、lmLProclin300用雙蒸水定溶至畫mL。(2)化學(xué)發(fā)光底物液B將lO.OgNa2OH、20mLTritonX-100、lmLProclin300用雙蒸水定溶至1000mL。實施例9本發(fā)明的試劑盒的使用方法以上實施例1制備的透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒的具體操作如下1)自4'C冰箱中取出試劑盒，室溫平衡15分鐘。2)取出包被板條，插入板架上。3)每次試驗設(shè)空白1孔，分別將各濃度點校準(zhǔn)品0、50、100、200、400、800ng/ml和待測樣本50|iL加入相應(yīng)微孔，然后除空白孔外每孔加生物素化的抗體50pL,充分振蕩混勻，37。C溫育30分鐘。4)甩去反應(yīng)液，每孔加滿稀釋后的洗滌液，洗板5次，最后在干凈的吸水紙上扣干。5)除空白孔外，每孔分別加入100pL透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白標(biāo)記物，37。C溫育30分鐘。6)甩去反應(yīng)液，每孔加滿稀釋后的洗滌液，洗板5次，最后在干凈的吸水紙上扣干。7)各孔加化學(xué)發(fā)光底物液A、B各50tiL，用微量震蕩器充分振蕩混合均勻，室溫(20~25。C)避光反應(yīng)5分鐘。6)必須于加化學(xué)發(fā)光底物液后的第5-30分鐘內(nèi)測量，在化學(xué)發(fā)光測量儀上依序測量各孔的發(fā)光強度(RLU),測量時間1秒/孔。7)以校準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，RLU值為縱坐標(biāo)繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，以各待測血清RLU值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出該樣本的透明質(zhì)酸濃度。實施例10本發(fā)明的試劑盒與酶聯(lián)免疫試劑的平行對比試驗正常對照樣本161例，確診急性肝炎樣本36例，慢性肝炎樣本78例，肝纖維化樣本134例，診斷符合1995年中華醫(yī)學(xué)會《病毒性肝炎防治方案》中的肝纖維化標(biāo)準(zhǔn)。采用本發(fā)明的試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)與透明質(zhì)酸檢測試劑(酶聯(lián)免疫法)進行平行檢測，檢測程序和結(jié)果判斷嚴(yán)格按照各試劑說明書進行。對上述兩種透明質(zhì)酸檢測試劑盒分別進行精密性、特異性、靈敏度、準(zhǔn)確性(回收率)等性能指標(biāo)評價。表1兩種透明質(zhì)酸檢測試劑的性能指標(biāo)評價<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表2兩種透明質(zhì)酸檢測試劑臨床樣本含量檢測結(jié)果(單位ng/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表3兩種透明質(zhì)酸檢測試劑的檢測結(jié)果匯總<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表1-3所述數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明試劑盒精密性、特異性、回收率優(yōu)于透明質(zhì)酸酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，靈敏度顯著優(yōu)于酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢出3份假陽性、2份假陰性，而本發(fā)明試劑盒檢測結(jié)果與臨床結(jié)果完全相符，與酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的符合率為98.78%、相關(guān)系數(shù)為R2=0.9245(見圖2)。權(quán)利要求1、一種透明質(zhì)酸化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括1)透明質(zhì)酸校準(zhǔn)品；2)親和素化的固相載體；3)生物素化的透明質(zhì)酸多克隆抗體或單克隆抗體；4)透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白的標(biāo)記物；5)上述標(biāo)記物所作用的化學(xué)發(fā)光底物；以及6)洗滌液。2、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述親和素化的固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或^f茲性顆粒。3、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述標(biāo)記物為酶或化學(xué)發(fā)光劑。4、如權(quán)利要求3所述的標(biāo)記物，其特征在于，所述酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶；所述化學(xué)發(fā)光劑為吖啶酯、魯米諾、異魯米諾。5、如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物為1,2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾、異魯米諾或過氧化氫。6、一種制備權(quán)利要求1所述試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟1)以透明質(zhì)酸純品配制透明質(zhì)酸校準(zhǔn)品；2)固相載體包被親和素；3)使透明質(zhì)酸的多克隆抗體或單克隆抗體生物素化；4)用標(biāo)記物標(biāo)記透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白；5)配制化學(xué)發(fā)光底物；6)配制洗滌液；7)分裝上述透明質(zhì)酸^f交準(zhǔn)品、生物素化的透明質(zhì)酸多克隆抗體或單克隆抗體、透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物和洗滌液；以及8)組裝為成品。7、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述固相栽體包被親和素的步驟2)采用以下方法用0.050MpH值為9.6的碳酸鹽緩沖液配制成所需濃度的親和素包被液，并將包被液負(fù)載于固相載體上；經(jīng)生理鹽水洗滌、BSA封閉，抽濕干燥后用鋁蕩袋密封。8、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白標(biāo)記物為酶標(biāo)記物或化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物。9、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶，化學(xué)發(fā)光劑為吖啶酯、魯米諾、異魯米諾。10、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物為1,2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾、異魯米諾或過氧化氬。全文摘要本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種透明質(zhì)酸測定試劑盒及其制備方法。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒包括1)透明質(zhì)酸校準(zhǔn)品；2)親和素化的固相載體；3)生物素化的透明質(zhì)酸多克隆抗體或單克隆抗體；4)透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白的標(biāo)記物；5)化學(xué)發(fā)光底物；以及6)洗滌液。進一步，根據(jù)本發(fā)明制備上述試劑盒的方法包括以下步驟1)以透明質(zhì)酸純品配制校準(zhǔn)品；2)以親和素包被載體；3)使透明質(zhì)酸的多克隆抗體或單克隆抗體生物素化；4)用標(biāo)記物標(biāo)記透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白；5)配制化學(xué)發(fā)光底物；6)配制洗滌液；7)分裝上述校準(zhǔn)品、標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物和洗滌液；以及8)組裝為成品。本發(fā)明的試劑盒具有簡便、快速、靈敏、穩(wěn)定等優(yōu)點。文檔編號G01N33/543GK101533028SQ20081010200公開日2009年9月16日申請日期2008年3月14日優(yōu)先權(quán)日2008年3月14日發(fā)明者宋勝利,應(yīng)希堂,彭京勝,胡國茂,鄭金來申請人:北京科美東雅生物技術(shù)有限公司