專利名稱：一種胃泌素釋放肽前體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明提供了一種胃泌素釋放肽前體(31-98)(proGRP(31-98))的化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒及其制備方法，本發(fā)明方法采用一步免疫分析方法，以鏈親合素-生物素系統(tǒng)包被proGRP(31-98)單克隆抗體。本發(fā)明試劑盒具有操作簡便、性能可靠、靈敏、準(zhǔn)確特點，為小細(xì)胞肺癌的早期診斷提供了可靠的檢測方法。

背景技術(shù)：
工業(yè)化社會里，肺癌的發(fā)病率和死亡率均位居惡性腫瘤的首位。主要原因是由于工業(yè)和交通發(fā)達(dá)地區(qū)，石油，煤等燃燒后產(chǎn)生的含有苯并芘致癌烴等可致肺癌的有害物質(zhì)污染大氣有關(guān)。另外吸煙為導(dǎo)致肺癌的主要個人因素，我國吸煙的情況非常嚴(yán)重，近3億人口有吸煙習(xí)慣，青少年中吸煙者亦為數(shù)不少。長期吸煙可引致支氣管粘膜上皮細(xì)胞增生，磷狀上皮惡化生長，誘發(fā)鱗狀上皮癌即肺癌或未分化小細(xì)胞癌。世界各國都加強了對肺癌的研究，然而肺癌的確切病因至今仍然沒有完全了解。對肺癌的治療仍需要早期診斷，早期治療，從而提高癌癥的治愈率。另外肺癌的治愈率也主要取決于肺癌的類型，肺癌有小細(xì)胞肺癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)兩種，兩種肺癌需要不同的治療手段，且預(yù)后效果不同，因此需要區(qū)別SCLC和NSCLC，從而采取不同的治療手段，達(dá)到做好的治療效果。其中SCLC在肺癌中的比例約為20-25％。
為了早期診斷、早期治療小細(xì)胞肺癌，癌胚抗原、鱗狀上皮細(xì)胞抗原、組織角蛋白三種腫瘤標(biāo)志物廣泛的用來作為特異的神經(jīng)特異性抗原(NSE)的補充標(biāo)志物。但由于這三種標(biāo)志物特異性很低，并且與其它腫瘤有交叉，所以沒有達(dá)到理想的早期診斷效果。另外由于NSE的靈敏度不高，需要兩種標(biāo)志物進行聯(lián)合檢測。
有報道指出胃泌素釋放肽(GRP)在小細(xì)胞肺癌病人血液中有表達(dá)，且特異性很高。但是GRP在血液中含量低且不穩(wěn)定，容易分解，從而給GRP的檢測帶來了極大的不方便。近年來，胃泌素釋放肽前體(proGRP)得到深入研究，已證實其特異性、靈敏性均高于其他的腫瘤標(biāo)志物，在小細(xì)胞肺癌的早期診斷中成為特異的腫瘤標(biāo)志物。正是由于proGRP針對小細(xì)胞肺癌的診斷特異性不斷得到證實，proGRP的特異抗體性能不斷得到提高，proGRP單克隆抗體的成功制備為proGRP的免疫分析提供了可靠的原材料。proGRP有三個肽段即1-27的信號肽段，該段在GRP的表達(dá)中不起作用；28-30封閉肽段，該段蛋白氨基化或者胰島素化；另外就是31-98肽段，該肽段是對GRP表達(dá)的主要肽段。proGRP的31-98多肽片斷在SCLC血液中含量升高最顯著，大概是GRP含量的400多倍，因此，proGRP(31-98)多肽片斷的檢測就是本發(fā)明試劑盒的檢測對象。
proGRP(31-98)的免疫分析多采用酶聯(lián)免疫吸附(ELSIA)分析技術(shù)。ELISA技術(shù)由于其分析靈敏度不高，因而限制了其發(fā)展和使用?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法結(jié)合了免疫反應(yīng)的高特異性和化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高靈敏性，儀器簡單，成本低廉，可達(dá)到10-18摩爾檢測水平，且檢測范圍可達(dá)6個數(shù)量級，因而得到了越來越多的關(guān)注。鏈親合素-生物素包被系統(tǒng)早已廣泛應(yīng)用在免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。鏈親合素包被固相載體，生物素化抗體，因此在鏈親合素-生物素包被系統(tǒng)中，固相載體采用共價鍵結(jié)合生物素化的抗體，從而實現(xiàn)定向的共價鍵包被抗體，既有利于保持抗體的活性，又能充分暴露抗體的結(jié)合位點。與化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)結(jié)合檢測待測物，可大大節(jié)省原材料的使用量，大大提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性。


發(fā)明內(nèi)容
(一)需要解決的技術(shù)問題 本發(fā)明為了解決小細(xì)胞肺癌早期診斷的特異性問題，以化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)為技術(shù)平臺，建立了proGRP(31-98)的免疫分析方法，并實現(xiàn)試劑盒的制備，滿足臨床檢測的需要。本發(fā)明采用鏈親合素-生物素系統(tǒng)包被抗體，節(jié)省抗體原料用量，延長包被固相的使用期限，從而為試劑盒的廣泛推廣應(yīng)用提供了有利因素。
本發(fā)明的目的是提供一種定量測定proGRP(31-98)化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，并提供一種制備上述試劑盒的方法。
(二)技術(shù)方案 本發(fā)明所述檢測proGRP(31-98)化學(xué)發(fā)光免疫分析方法及組裝試劑盒中包括proGRP(31-98)校準(zhǔn)品；proGRP(31-98)單克隆抗體包被的微孔板；辣根過氧化物酶標(biāo)記的proGRP單克隆抗體；發(fā)光底物液；濃縮洗滌液。
本發(fā)明所述試劑盒包括以下制備步驟 a、選擇合適的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液；以選擇的牛血清稀釋液稀釋proGRP(31-98)純品，稀釋濃度分別為0pg/ml、30pg/ml、150pg/ml、300pg/ml、600pg/ml、1200pg/ml； b、proGRP(31-98)單克隆抗體微孔板首先，在微孔板表面包被鏈親合素，同時生物素化proGRP(31-98)單克隆抗體；進一步將生物素化proGRP抗體加入鏈親合素包被微孔板中，形成proGRP(31-98)單克隆抗體包被微孔板；抗體包被的微孔板需要經(jīng)過封閉，再干燥密封，置于4℃密封儲存?zhèn)溆谩?br> c、采用戊二醛偶聯(lián)法制備辣根過氧化物酶標(biāo)記的proGRP(31-98)單克隆抗體；選擇Tris緩沖液做酶標(biāo)記物稀釋液，及確定酶標(biāo)記物稀釋濃度為1:10000；其中Tris緩沖液配制酶標(biāo)記物稀釋液如下三羥甲基氨基甲烷12.1g/L，氯化鈉8.8g/L，牛血清白蛋白10g/L，Proclin300生物防腐劑1.0ml/L，食品紅0.1ml/L，鹽酸調(diào)pH至7.5，純化水定容。
d、配制化學(xué)發(fā)光底物液；本發(fā)明所述發(fā)光底物液包括A液與B液，其中A液包括10mM魯米諾、0.3mM4-羥基聯(lián)苯、0.05mM4-碘苯硼酸、0.2M pH8.7硼酸-硼砂緩沖液，其pH值為8.0～10.0；所述化學(xué)發(fā)光底物B液，包括3.5mM過氧化脲、0.1％Tween20、0.2M pH7.2磷酸鹽緩沖液，其pH值為7.0～7.6。使用時A液B液1:1混合使用。
e、配制濃縮洗滌液；本發(fā)明所述濃縮洗滌液稀釋20倍使用。具體的配制如下磷酸氫二鈉58g/L，磷酸二氫鈉2g/L，氯化鈉160g/L，Tween-20 1ml/L，Proclin 300生物防腐劑1ml/L，去離子水定容，鹽酸調(diào)pH至7.5使用時稀釋20倍使用。
f、分裝上述校準(zhǔn)品、抗體包被微孔板、酶標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物液、濃縮洗滌液，并組裝為成品試劑盒。
本發(fā)明“胃泌素釋放肽前體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒”一方面應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)實現(xiàn)靈敏地檢測小細(xì)胞肺癌人體內(nèi)的胃泌素釋放肽前體含量，對于小細(xì)胞肺癌患者的早期診斷、早期治療提供可靠的臨床參考價值；另一方面結(jié)合使用鏈親合素-生物素化包被系統(tǒng)，大大提高了胃泌素釋放肽前體檢測的線性范圍、降低了包被抗體的用量、增強了包被固相的穩(wěn)定性?？傮w來說，本發(fā)明試劑盒具有集實用性、先進性、經(jīng)濟性于一體等優(yōu)點。
該“胃泌素釋放肽前體化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒”采用雙抗體夾心免疫反應(yīng)模式，即酶標(biāo)記的抗體與載體上包被的抗體和被測樣品的胃泌素釋放肽前體結(jié)合形成雙抗體夾心復(fù)合物。試劑盒各項指標(biāo)均符合臨床應(yīng)用的要求。試劑盒在使用過程中，操作簡便適用性廣，既可應(yīng)用于開放式的半自動化學(xué)發(fā)光測量儀，也可用于全自動的測量系統(tǒng)，可實現(xiàn)大批量快速檢測，使用成本低，更易推廣應(yīng)用，特別適合廣大中小醫(yī)院推廣使用，為臨床診斷和科研工作提供一種非常有價值的檢測手段。



圖1為實施例1所制備的試劑盒中的校準(zhǔn)品線性圖 圖2為實施例1所制備的試劑盒的健全試驗曲線 圖3為本發(fā)明同ELSIA試劑盒臨床血樣測值比對圖
具體實施例方式 實施例1 制備本發(fā)明的胃泌素釋放肽前體(31-98)化學(xué)法光免疫分析測定試劑盒 一.標(biāo)準(zhǔn)品的配制 選擇成牛血清為標(biāo)準(zhǔn)品基質(zhì)液稀釋proGRP(31-98)純品，濃度分別為0pg/ml、30pg/ml、150pg/ml、300pg/ml、600pg/ml、1200pg/ml； 二.酶標(biāo)記物的制備及酶稀釋濃度的確定 1、改良的戊二醛交聯(lián)法標(biāo)記辣根過氧化物酶(HRP)，其步驟如下 a、將12mgHRP溶于含5mgproGRP單克隆抗體的1mlPBS(0.1Mol/L pH6.8)中，緩慢攪拌下加入1％戊二醛溶液4mL，置室溫3小時。
b、加入0.1mL0.2mol/L賴氨酸(0.29g溶于10mL蒸餾水)，4℃放置2h，以封閉殘留的醛基，終止反應(yīng)。
c、裝入透析袋，以0.01mol/L、pH7.2的PBS，4℃透析過夜。
d、將透析產(chǎn)物移入試劑瓶加入1％BSA，再加入等量60％甘油，混勻，小量分裝，-20℃保存。
2、酶標(biāo)抗體濃度選定 試驗證明，采用方陣法選擇酶標(biāo)抗體的工作濃度范圍為1:10000。
3、酶標(biāo)記抗體稀釋液的選擇 采用棋盤試驗確定的酶標(biāo)記抗體的稀釋液組成為 三.固相抗體的制備 a、鏈親合素包被微孔板pH9.6，0.05mol/L碳酸緩沖液稀釋鏈霉親和素到10mg/L，制成抗體包被液，然后取100μL/孔加入微孔板，4℃過夜，次日取出，洗滌3次。洗板液用0.05％吐溫20，pH7.4 0.01mol/L PBS。再用牛血清封閉液37℃封閉30min；具體的牛血清封閉液配方如下 b、生物素化proGRP(31-98)抗體用0.1M NaHCO3溶液將純化的proGRP(31-98)單克隆抗體稀釋為1mg/ml，將生物素酰一N羥基丁二酰亞胺酯用二甲基甲酰胺溶解，濃度20mg/ml，在1ml抗體溶液中加入BNHS液20μl，混勻后置室溫反應(yīng)2小時，然后在4℃中對PBS透析2小時，滴定工作濃度后即可使用。
c、包被proGRP(31-98)單克隆抗體將生物素化proGRP(31-98)抗體100μL/孔加入鏈親合素化微孔板中，37℃溫育3小時； d、清洗、封閉用pH值為7.4、含吐溫一20和疊氮化鈉防腐劑的磷酸鹽洗滌緩沖液清洗3～5次，再用水解明膠封閉液封閉，干燥密封于4℃保存。封閉配方如下 四、化學(xué)發(fā)光底物A液 魯米諾10mM 1.7716g 4-羥基聯(lián)苯0.3mM0.051g 4-碘苯硼酸0.05mM 0.012g 硼酸 11.4g 硼砂 4.9g 雙蒸水定溶 1000mL pH 8.0～10.0 五、化學(xué)發(fā)光底物B液 過氧化脲 3.5mM 0.329g Tween20 0.1％ 1ml Na2HPO4·12H2O 51.58g NaH2PO4·2H2O 8.74g 雙蒸水定溶1000mL pH7.0～7.6 使用時A液與B液等比例混合。
六、洗滌液緩沖液 Na2HPO4·12H2O 58g NaH2PO4·2H2O 2g NaCl 160g Tween-20 1ml Proclin3001ml 去離子水 1000ml 調(diào)整pH至

，使用時稀釋20倍使用。
七、成品試劑盒的組裝 上述六個步驟所得產(chǎn)品分裝、組合后即為試劑盒試劑組成。作為成品試劑盒，需要對所制備的試劑盒進行臨床應(yīng)用的考察。
實施例2 本發(fā)明的胃泌素釋放肽前體化學(xué)法光免疫分析測定試劑盒使用方法 一.樣品前處理 取人的空腹血清，2000-4000rpm離心10min，取上清液，無需其它特殊處理便可進行分析。
二.檢測步驟 使用本試劑盒進行檢測前，需先取出試劑盒內(nèi)分裝好的各組分包被板、酶標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品室溫靜置，平衡到室溫后使用；將恒溫箱或者水浴鍋調(diào)至37℃；準(zhǔn)備好合適的微量加樣器及對應(yīng)吸頭并且檢查化學(xué)發(fā)光儀是否正常工作。
使用本試劑盒的具體操作步驟如下 1)取出試劑盒平衡到室溫； 2)每孔加入25μL血清樣品或系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液，再加入標(biāo)記物50μL，每次試驗設(shè)空白1孔，然后除空白孔外，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體溶液50μL； 3)37℃恒溫溫育45分鐘； 4)取出微孔板，棄去溶液。用稀釋20倍后的洗滌液洗板5次； 5)每孔加發(fā)光底物100μL，室溫(22～28℃)靜置5分鐘； 6)用化學(xué)發(fā)光儀測相對發(fā)光值(RLU)，測量時間1秒/孔； 7)分別對校準(zhǔn)品濃度和對應(yīng)RLU取對數(shù)，在建立的雙對數(shù)曲線上建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以各待測血清RLU值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出該血清的proGRP(31-98)的濃度，計算檢測結(jié)果； 8)打印檢測結(jié)果報告。
本試劑盒的校準(zhǔn)曲線見附圖1，其中，I為發(fā)光強度，C為proGRP(31-98)濃度(單位為pg/mL)，相關(guān)系數(shù)R2＝0.9983，Y＝1.8549+1.3149X。
實施例3 本發(fā)明的試劑盒的方法學(xué)指標(biāo) 按照本領(lǐng)域中常規(guī)的制造及檢定規(guī)程對實施例1中制備的試劑盒進行檢定，結(jié)果如下 1.試劑盒靈敏度 靈敏度即可與零劑量點可區(qū)分開的濃度。同時測定10個零標(biāo)準(zhǔn)點，得RLU的平均值與標(biāo)準(zhǔn)偏差。計算RLU平均值與兩倍標(biāo)準(zhǔn)偏差的差值，由內(nèi)插法，從工作曲線中得出其對應(yīng)濃度值。實驗中測定的靈敏度為1.37pg/ml。
2.試劑盒精密度 將實施例1中制備的試劑盒分別取三批進行精密度實驗。以實施例1中所抽取的試劑盒測定三份高\中\(zhòng)低值樣本110pg/mL和220pg/mL的proGRP樣品各8次。計算測定濃度的變異系數(shù)。實施例1中的三批試劑盒的測定結(jié)果如表2、表3，表4所示，結(jié)果表明變異系數(shù)小于8.0％。
表1.低值血清20pg/ml的變異系數(shù)
表2.中值血清樣本389pg/ml的變異系數(shù)

表3.高值血清樣本890pg/ml的變異系數(shù)
3.試劑盒準(zhǔn)確度測定 在混合人血清中加入一定值1000pg/ml，537pg/ml，60pg/ml的proGRP(31-98)標(biāo)準(zhǔn)品，配成溶液，濃度分別為。再根據(jù)工作曲線，實際檢測該溶液中proGRP含量.則樣品的測定值減去血清本底值，再除以proGRP(31-98)標(biāo)準(zhǔn)濃度值，得到回收率?；厥章嗜绫?所示，三個樣本的回收率分別為95％，93％，104％，即回收率在95-104％之間，符合臨床應(yīng)用的需要. 表4 血清樣本回收率/方法準(zhǔn)確度試驗 4.健全性試驗 用成牛血清稀釋高值血清，檢測稀釋血清的proGRP含量值，一方面可以分析高值血清稀釋后測值的可靠性，另一方面分析成牛血清作基質(zhì)是否與人血清有交叉。如附圖2所示是成牛血清以1:2，1:4，1:8，1:16稀釋高值樣品的測值曲線.由相關(guān)系數(shù)R＝0.9998表明稀釋倍數(shù)與濃度呈良好的線性關(guān)系，牛血清緩沖液作基質(zhì)不存在基質(zhì)效應(yīng)。
5.特異性實驗 在血清樣本中加入小細(xì)胞肝癌聯(lián)合檢測的腫瘤標(biāo)志物，如癌胚抗原(CEA)、鱗狀上皮細(xì)胞抗原(SCC)、組織角蛋白(CYFRA，TPA，TPS)，神經(jīng)特異性抗原(NSE)，通過測值確定與proGRP(31-98)的交叉性。結(jié)果如下，可以看出，交叉反應(yīng)率均在0.5-3％之間，符合臨床要求。
經(jīng)過上面所述大量實驗，得出本發(fā)明試劑盒的方法學(xué)指標(biāo)如下 檢測范圍0～1200pg/ml； 靈敏度最小檢出限為1.37pg/ml； 精密度變異系數(shù)小于8.0％(n＝10)； 準(zhǔn)確性加標(biāo)回收率在95～110％之間； 特異性和CEA、SCC、CYFRA、TPA、TPS、NSE、常見小細(xì)胞肺癌腫瘤標(biāo)志物的交叉反應(yīng)率小于3％。
實施例4 本發(fā)明的試劑盒同ELSIA試劑盒臨床血樣測值比對 本發(fā)明試劑盒檢測100份臨床血清樣品，其中正常血清15例，非小細(xì)胞肺癌15例，小細(xì)胞肺癌70例。測值及陰性、陽性檢出結(jié)果如表5所示。
表5 本發(fā)明試劑盒對100例臨床血清的測值與臨床診斷對照 用本發(fā)明的試劑盒和德國IBL公司ELSIA試劑盒對100份臨床血清樣品同時進行檢測。其檢測結(jié)果見附圖3，以本發(fā)明方法測定的血樣proGRP結(jié)果為橫坐標(biāo)，以ELSIA試劑盒測定的結(jié)果為縱坐標(biāo)作回歸分析，相關(guān)系數(shù)r2＝0.9796。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果表明，本發(fā)明方法同ELSIA試劑盒臨床血樣測值相關(guān)性良好。
本發(fā)明為了滿足小細(xì)胞肺癌早期診斷的需要，并區(qū)分非小細(xì)胞肺癌，解決了現(xiàn)行的小細(xì)胞肺癌早期診斷難題，即采用高靈敏的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法結(jié)合鏈親合素-生物素包被系統(tǒng)，提供了一種高靈敏、高特異、操作簡便、價格適宜的定量檢測proGRP(31-98)化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒。本試劑盒不需要昂貴的檢測儀器，便于臨床推廣，具有良好的市場價值。
權(quán)利要求
1.一種胃泌素釋放肽前體(31-98)化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒組分為胃泌素釋放肽前體(31-98)校準(zhǔn)品、胃泌素釋放肽前體(31-98)單克隆抗體包被的微孔板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的胃泌素釋放肽前體(31-98)單克隆抗體、化學(xué)發(fā)光底物液、濃縮洗滌液。
2.如權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征在于，包被抗體與酶標(biāo)記抗體均為單克隆抗體，只是針對proGRP的不同位點。
3.如權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物液包含A液和B液，其中A液/B液使用時需要1:1混合。
4.一種制備權(quán)利要求1所述試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟
a、以胃泌素釋放肽前體(31-98)純品配制校準(zhǔn)品；b、制備胃泌素釋放肽前體(31-98)單克隆抗體包被的微孔板；c、制備辣根過氧化物酶標(biāo)記的胃泌素釋放肽前體(31-98)單克隆抗體；d、配制化學(xué)發(fā)光底物液；e、分裝上述校準(zhǔn)品、抗體包被微孔板、酶標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液，并組裝為成品。
5.如權(quán)力要求4所述的方法，所述制備酶標(biāo)記的胃泌素釋放肽前體(31-98)單克隆抗體，其特征在于，以改良的戊二醛偶聯(lián)法進行生物素標(biāo)記抗體。
6.如權(quán)利要求4所述的方法，所述胃泌素釋放肽前體(31-98)單克隆抗體包被的微孔板，其特征在于，采用生物素-鏈親合素系統(tǒng)包被抗體。
7.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物液包含A液和B液，其中，化學(xué)發(fā)光底物A液，包括10mM魯米諾、0.3mM4-羥基聯(lián)苯、0.05mM4-碘苯硼酸、0.2M pH8.7硼酸-硼砂緩沖液，其pH值為8.0～10.0；化學(xué)發(fā)光底物B液，包括3.5mM過氧化脲、0.1％ Tween20、0.2M pH7.2磷酸鹽緩沖液，其pH值為7.0～7.6。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，所述采用生物素-鏈親合素系統(tǒng)包被抗體，其特征在于，包括以下包被步驟制備鏈親合素包被的微孔板；以牛血清封閉液封閉鏈親合素包被的微孔板；制備生物素化胃泌素釋放肽前體(31-98)單克隆抗體；在鏈親合素包被的微孔板中加入生物素化的胃泌素釋放肽前體(31-98)單克隆抗體，制成抗體包被板；再以水解明膠封閉液封閉抗體包被板；除濕干燥后封袋，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述封閉鏈親合素包被的微孔板的牛血清封閉液體積分?jǐn)?shù)10％牛血清、磷酸二氫鈉0.2g/L、磷酸氫二鈉2.9g/L、0.1％Proclin300生物防腐劑。
10.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述抗體包被板的水解明膠封閉液，1.0％水解明膠、NaH2PO4·2H2O 0.2g/L、Na2HPO4·12H2O2.9g/L、0.1％Proclin300生物防腐劑1ml/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體地提供了一種胃泌素釋放肽前體(31-98)的化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒及其制備方法。本發(fā)明采用生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)包被抗體，提高了抗體包被的效率，同時也能提高靈敏度。本發(fā)明為小細(xì)胞肺癌的診斷提供了操作簡便、檢測結(jié)果靈敏、準(zhǔn)確的化學(xué)發(fā)光試劑盒，可滿足臨床診斷的需要。
文檔編號G01N21/76GK101368966SQ200810105418
公開日2009年2月18日 申請日期2008年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月29日
發(fā)明者張倩云, 應(yīng)希堂, 宋勝利, 胡國茂, 鄭金來, 于尚永 申請人:北京科美東雅生物技術(shù)有限公司