專(zhuān)利名稱(chēng)：一種康復(fù)新制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法，特別涉及一種康復(fù)新制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法。

背景技術(shù)：
康復(fù)新液收載于中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中成藥第十九冊(cè)及WS3-B-3674-2000(Z)“康復(fù)新液”，是由美洲大蠊提取物制成的制劑，具有通利血脈，養(yǎng)陰生肌的功效，用于瘀血阻滯，胃痛出血，胃、十二指腸潰瘍以及陰虛肺癆，肺結(jié)核的輔助治療收到良好效果，因其療效好，見(jiàn)效快，而被廣泛應(yīng)用于臨床。
康復(fù)新液中主要成分為丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等氨基酸和尿嘧啶等生物堿。在康復(fù)新液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅進(jìn)行了總氨基酸的含量測(cè)定、氨基酸和尿嘧啶的鑒別，以上方法均不能較好的控制康復(fù)新液質(zhì)量，特別是主要有效成分生物堿的質(zhì)量控制，而對(duì)美洲大蠊蠻蠊藥材及提取物制成康復(fù)新制劑中生物堿的HPLC指紋圖譜方法測(cè)定至今尚無(wú)報(bào)道。因此，通過(guò)研究，建立重復(fù)性高的康復(fù)新制劑中生物堿的HPLC指紋圖譜的測(cè)定方法，可作為測(cè)定康復(fù)新制劑中生物堿的化學(xué)組分方法，也可作為鑒定康復(fù)新制劑質(zhì)量控制方法。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開(kāi)一種康復(fù)新制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法 本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的 本發(fā)明康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法，該方法包括如下步驟 A.供試品溶液的制備將康復(fù)新片劑研細(xì)或膠囊劑傾出內(nèi)容物，精密稱(chēng)定固體制劑粉末或顆粒0.2～10重量份，置25體積份量瓶中，加水5～20體積份，超聲處理10～60分鐘，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，得續(xù)濾液；取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡22～26小時(shí)，傾去水后用2～3倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去酸液，用水洗至近中性，加3～5倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去堿液，用水洗至近中性，加2～4倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密量取續(xù)濾液5～10體積份，加于已處理好的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用5～10體積份水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，轉(zhuǎn)移至25體積份量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用； B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每體積份含尿嘧啶0.2～100重量份的溶液，作為對(duì)照品溶液； C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.01～0.2mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為240～280nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5～50體積份注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；康復(fù)新固體制劑共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.481±0.048，2號(hào)峰0.511±0.051，3號(hào)峰0.558±0.056，4號(hào)峰0.632±0.063，5號(hào)峰0.785±0.079，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.297±0.130，7號(hào)峰1.929±0.193，8號(hào)峰2.107±0.211，9號(hào)峰2.669±0.267，10號(hào)峰3.523±0.352，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝(0.221～0.410)∶(0.186～0.346)∶(0.990～1.485)∶1.000∶(0.373～0.622)。
本發(fā)明康復(fù)新液體制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法，該方法包括如下步驟 A.供試品溶液的制備取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡22～26小時(shí)，傾去水后用2～3倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去酸液，用水洗至近中性，加3～5倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去堿液，用水洗至近中性，加2～4倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密吸取康復(fù)新液體制劑5～20體積份，加于已處理好的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用5～20體積份水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，濃縮，轉(zhuǎn)移至10體積份量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用； B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每體積份含尿嘧啶0.2～100重量份的溶液，作為對(duì)照品溶液； C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.01～0.2mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為240～280nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5～50體積份注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到美洲大蠊提取物的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；美洲大蠊提取物共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.482±0.048，2號(hào)峰0.510±0.051，3號(hào)峰0.557±0.056，4號(hào)峰0.630±0.063，5號(hào)峰0.782±0.078，S號(hào)峰1.000±0.000，6號(hào)峰1.298±0.130，7號(hào)峰1.906±0.191，8號(hào)峰2.114±0.211，9號(hào)峰2.663±0.266，10號(hào)峰3.525±0.353，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝(0.231～0.429)∶(0.188～0.349)∶(0.987～1.481)∶1.000∶(0.372～0.620)。
本發(fā)明的康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法，該方法優(yōu)選如下步驟 A.供試品溶液的制備將康復(fù)新片劑研細(xì)或膠囊劑傾出內(nèi)容物，精密稱(chēng)定固體制劑粉末或顆粒1.0重量份，置25體積份量瓶中，加水20體積份，超聲處理30分鐘，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，得續(xù)濾液；取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡24小時(shí)，傾去水后用3倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，加4倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去堿液，用水洗至近中性，加3倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密量取續(xù)濾液10體積份，加于已處理好的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用10體積份水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，轉(zhuǎn)移至25體積份量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用； B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每體積份含尿嘧啶10重量份的溶液，作為對(duì)照品溶液； C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.05mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為259nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20體積份注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；康復(fù)新固體制劑共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.481±0.048，2號(hào)峰0.511±0.051，3號(hào)峰0.558±0.056，4號(hào)峰0.632±0.063，5號(hào)峰0.785±0.079，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.297±0.130，7號(hào)峰1.929±0.193，8號(hào)峰2.107±0.211，9號(hào)峰2.669±0.267，10號(hào)峰3.523±0.352，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝(0.221～0.410)∶(0.186～0.346)∶(0.990～1.485)∶1.000∶(0.373～0.622)。
本發(fā)明的康復(fù)新液體制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法，該方法優(yōu)選如下步驟 A.供試品溶液的制備取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡24小時(shí)，傾去水后用2倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡3小時(shí)，間隔攪拌5次，除去酸液，用水洗至近中性，加4倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡3小時(shí)，間隔攪拌4次，除去堿液，用水洗至近中性，加3倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡2小時(shí)，間隔攪拌5次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密吸取康復(fù)新液體制劑10體積份，加于已處理好的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用10體積份水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，濃縮，轉(zhuǎn)移至10體積份量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用； B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每體積份含尿嘧啶10重量份的溶液，作為對(duì)照品溶液； C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.05mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為259nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20體積份注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到美洲大蠊提取物的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；美洲大蠊提取物共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.482±0.048，2號(hào)峰0.510±0.051，3號(hào)峰0.557±0.056，4號(hào)峰0.630±0.063，5號(hào)峰0.782±0.078，S號(hào)峰1.000±0.000，6號(hào)峰1.298±0.130，7號(hào)峰1.906±0.191，8號(hào)峰2.114±0.211，9號(hào)峰2.663±0.266，10號(hào)峰3.525±0.353，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝(0.231～0.429)∶(0.188～0.349)∶(0.987～1.481)∶1.000∶(0.372～0.620)。
本發(fā)明使用指紋圖譜技術(shù)有效的控制了康復(fù)新制劑的質(zhì)量，發(fā)明使用指紋圖譜技術(shù)能有效的控制由美洲大蠊蠻蠊提取物制成的康復(fù)新液、康復(fù)新膠囊、康復(fù)新片及康復(fù)新噴霧劑制劑的質(zhì)量，發(fā)明提供的指紋圖譜技術(shù)，可作為評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的關(guān)鍵手段，有利于中藥現(xiàn)代化。
下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)例1康復(fù)新固體制劑指紋圖譜共有峰的確定 1、指紋圖譜 根據(jù)10批康復(fù)新固體制劑HPLC圖譜所給出的相關(guān)參數(shù)，康復(fù)新固體制劑按前述制備方法進(jìn)行測(cè)定所得的主要色譜峰均在30分鐘內(nèi)出現(xiàn)，小時(shí)的供試品溶液色譜圖表明30分鐘以后未出現(xiàn)色譜峰，較各批樣品的色譜圖發(fā)現(xiàn)有11個(gè)峰是各批共有的，由此建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
2.共有指紋峰的標(biāo)定 根據(jù)10批康復(fù)新固體制劑供試品指紋圖譜有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算結(jié)果，共有峰平均相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))依次為1號(hào)峰0.481，2號(hào)峰0.511，3號(hào)峰0.558，4號(hào)峰0.632，5號(hào)峰0.785，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.297，7號(hào)峰1.929，8號(hào)峰2.107，9號(hào)峰2.669，10號(hào)峰3.523，以此作為共有指紋峰標(biāo)定的依據(jù)，允許相對(duì)偏差為±10％。
3.共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間 10批供試品指紋圖譜中共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間表1。
表1康復(fù)新固體制劑共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間(n＝10)
10批康復(fù)新固體制劑共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于2.0％，顯示各批樣品的一致性較好。
4.共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間 10批供試品指紋圖譜中共有指紋峰的峰面積見(jiàn)表2。
表2康復(fù)新固體制劑共有指紋峰峰面積(n＝10)
參照《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》的相關(guān)要求，各共有指紋峰的面積比值必須相對(duì)固定。對(duì)供試品圖譜中各共有峰面積的比值與指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，保留時(shí)間小于或等于30分鐘的共有峰單峰面積占總峰面積大于或等于20％的共有峰，其差值不得大于±20％；單峰面積占總峰面積大于或等于10％，而小于20％的共有峰，其差值不得大于±25％；單峰面積占總峰面積大于或等于5％，而小于10％的共有峰，其差值不得大于±30％；單峰面積占總峰面積小于5％的共有峰，峰面積比值不作要求的規(guī)定。在康復(fù)新固體制劑共有峰中共有峰2、共有峰3等兩個(gè)共有峰峰面積占總峰面積的5％～10％，平均相對(duì)峰面積分別為0.315和0.266，RSD為1.54％和1.96％；共有峰4峰面積占總峰面積大于20％，平均相對(duì)峰面積為1.238，RSD為1.05％；共有峰9峰面積占總峰面積的10％～20％，平均相對(duì)峰面積為0.498，RSD為1.93％。從而確定了以上五個(gè)共有峰的相對(duì)峰面積2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝(0.221～0.410)∶(0.186～0.346)∶(0.990～1.485)∶1.000∶(0.373～0.622)。
5.非共有峰面積 除去不經(jīng)柱保留的峰，計(jì)算了10批樣品的非共有峰總面積占總峰面積的比例，結(jié)果見(jiàn)表3。
表3康復(fù)新固體制劑的非共有峰總面積占總峰面積的百分比(n＝10) 各批康復(fù)新固體制劑非共有峰總面積占總面積的比例均小于5％，符合《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》的規(guī)定。
6、康復(fù)新固體制劑指紋圖譜相似性評(píng)價(jià) 取康復(fù)新固體制劑十批，按上述方法進(jìn)行檢測(cè)，得出十批樣品的指紋圖譜，采用中國(guó)藥典委員會(huì)推薦的計(jì)算機(jī)輔助相似度評(píng)價(jià)軟件(中南大學(xué)中藥現(xiàn)代化研究中心編制)計(jì)算，相似度見(jiàn)表4。
表4康復(fù)新固體制劑指紋圖譜相似度
實(shí)驗(yàn)例2康復(fù)新液體制劑指紋圖譜共有峰的確定 1、指紋圖譜 根據(jù)10批康復(fù)新液體制劑HPLC圖譜所給出的相關(guān)參數(shù)，康復(fù)新液體制劑按前述制備方法進(jìn)行測(cè)定所得的主要色譜峰均在30分鐘內(nèi)出現(xiàn)；1小時(shí)的供試品溶液色譜圖表明30分鐘以后未出現(xiàn)色譜峰。比較各批樣品的色譜圖發(fā)現(xiàn)有11個(gè)峰是各批共有的，由此建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
2.共有指紋峰的標(biāo)定 根據(jù)10批康復(fù)新液體制劑供試品指紋圖譜有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算結(jié)果，共有峰平均相對(duì)保留時(shí)間(峰號(hào))依次為1號(hào)峰0.482，2號(hào)峰0.510，3號(hào)峰0.557，4號(hào)峰0.630，5號(hào)峰0.782，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.298，7號(hào)峰1.906，8號(hào)峰2.114，9號(hào)峰2.663，10號(hào)峰3.525，以此作為共有指紋峰標(biāo)定的依據(jù)，允許相對(duì)偏差為±10％。
3.共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間 10批供試品指紋圖譜中共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間表5。
表5康復(fù)新液體制劑共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間(n＝10)
10批康復(fù)新液體制劑共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于2.0％，顯示各批樣品的一致性較好。
4.共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間 10批供試品指紋圖譜中共有指紋峰的峰面積見(jiàn)表6。
表6康復(fù)新液體制劑共有指紋峰峰面積(n＝10)
參照《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》的相關(guān)要求，各共有指紋峰的面積比值必須相對(duì)固定。對(duì)供試品圖譜中各共有峰面積的比值與指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，保留時(shí)間小于或等于30分鐘的共有峰單峰面積占總峰面積大于或等于20％的共有峰，其差值不得大于±20％；單峰面積占總峰面積大于或等于10％，而小于20％的共有峰，其差值不得大于±25％；單峰面積占總峰面積大于或等于5％，而小于10％的共有峰，其差值不得大于±30％；單峰面積占總峰面積小于5％的共有峰，峰面積比值不作要求的規(guī)定。在康復(fù)新液體制劑共有峰中共有峰2、共有峰3等兩個(gè)共有峰峰面積占總峰面積的5％～10％，平均相對(duì)峰面積分別為0.330和0.269，RSD為1.90％和1.43％；共有峰4峰面積占總峰面積大于20％，平均相對(duì)峰面積為1.234，RSD為1.12％；共有峰9峰面積占總峰面積的10％～20％，平均相對(duì)峰面積為0.496，RSD為1.31％。從而確定了以上五個(gè)共有峰的相對(duì)峰面積2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝(0.231～0.429)∶(0.188～0.349)∶(0.987～1.481)∶1.000∶(0.372～0.620)。
5.非共有峰面積 除去不經(jīng)柱保留的峰，計(jì)算了10批樣品的非共有峰總面積占總峰面積的比例，結(jié)果見(jiàn)表7。
表7康復(fù)新液體制劑的非共有峰總面積占總峰面積的百分比(n＝10) 各批康復(fù)新液體制劑非共有峰總面積占總面積的比例均小于5％，符合《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》的規(guī)定。
6、康復(fù)新液體制劑指紋圖譜相似性評(píng)價(jià) 取康復(fù)新液體制劑十批，按上述方法進(jìn)行檢測(cè)，得出十批樣品的指紋圖譜，采用中國(guó)藥典委員會(huì)推薦的計(jì)算機(jī)輔助相似度評(píng)價(jià)軟件(中南大學(xué)中藥現(xiàn)代化研究中心編制)計(jì)算，相似度見(jiàn)表8。
表8康復(fù)新液體制劑指紋圖譜相似度
實(shí)驗(yàn)例3康復(fù)新固體制劑供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本發(fā)明康復(fù)新固體制劑供試品溶液為測(cè)定對(duì)象，分別在制備當(dāng)日、第二天、第四天依照前述色譜條件測(cè)定(樣品置冰箱中保存)，記錄各共有色譜峰保留時(shí)間和峰面積，以參照物尿嘧啶的保留時(shí)間為參照，換算出各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的比值，結(jié)果表9～10。結(jié)果顯示各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2％，十分穩(wěn)定；主要峰的相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2％。以上結(jié)果表明供試品溶液在4天內(nèi)穩(wěn)定。
表9康復(fù)新固體制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)相對(duì)保留時(shí)間
表10康復(fù)新固體制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)相對(duì)峰面積
實(shí)驗(yàn)例4康復(fù)新固體制劑供試品溶液重現(xiàn)性試驗(yàn) 制備本發(fā)明康復(fù)新固體制劑供試品溶液5份，分別記錄各共有色譜峰保留時(shí)間和峰面積，以參照物尿嘧啶的保留時(shí)間為參照，換算出各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的比值，結(jié)果表11～12。結(jié)果顯示各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2％，十分穩(wěn)定；主要峰的相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2％。以上結(jié)果表明供試品溶液制備重現(xiàn)性良好。
表11康復(fù)新固體制劑重現(xiàn)性試驗(yàn)相對(duì)保留時(shí)間
表12康復(fù)新固體制劑重現(xiàn)性試驗(yàn)相對(duì)峰面積
實(shí)驗(yàn)例5康復(fù)新液體制劑供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本發(fā)明康復(fù)新液體制劑供試品溶液為測(cè)定對(duì)象，分別在制備當(dāng)日、第二天、第四天依照前述色譜條件測(cè)定(樣品置冰箱中保存)，記錄各共有色譜峰保留時(shí)間和峰面積，以參照物尿嘧啶的保留時(shí)間為參照，換算出各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的比值，結(jié)果表13～14。結(jié)果顯示各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2％，十分穩(wěn)定；主要峰的相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2％。以上結(jié)果表明供試品溶液在4天內(nèi)穩(wěn)定。
表13康復(fù)新液體制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)相對(duì)保留時(shí)間
表14康復(fù)新液體制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)相對(duì)峰面積
實(shí)驗(yàn)例6康復(fù)新液體制劑供試品溶液重現(xiàn)性試驗(yàn) 制備本發(fā)明康復(fù)新液體制劑供試品溶液5份，分別記錄各共有色譜峰保留時(shí)間和峰面積，以參照物尿嘧啶的保留時(shí)間為參照，換算出各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的比值，結(jié)果表15～16。結(jié)果顯示各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2％，十分穩(wěn)定；主要峰的相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2％。以上結(jié)果表明供試品溶液制備重現(xiàn)性良好。
表15康復(fù)新液體制劑重現(xiàn)性試驗(yàn)相對(duì)保留時(shí)間
表16康復(fù)新液體制劑重現(xiàn)性試驗(yàn)相對(duì)峰面積
下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1康復(fù)新膠囊的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法 A.供試品溶液的制備取康復(fù)新膠囊，傾出內(nèi)容物，取約1g，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加水10ml，超聲處理30分鐘，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，得續(xù)濾液；取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡24小時(shí)，傾去水后用2倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，加4倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去堿液，用水洗至近中性，加3倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密量取續(xù)濾液10ml，加于已處理好的內(nèi)徑為1.5cm、床高1cm的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用10ml水洗滌，收集洗滌液，與流出液合并，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用； B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每1ml含尿嘧啶10μg的溶液，作為對(duì)照品溶液； C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.05mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為259nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20μl注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜；供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度為0.977；康復(fù)新膠囊共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.482，2號(hào)峰0.507，3號(hào)峰0.559，4號(hào)峰0.633，5號(hào)峰0.789，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.290，7號(hào)峰1.923，8號(hào)峰2.101，9號(hào)峰2.667，10號(hào)峰3.522，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝0.310∶0.276∶1.285∶1.000∶0.482。
實(shí)施例2康復(fù)新片的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法 A.供試品溶液的制備取康復(fù)新片，研細(xì)，取約0.2g，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加水20ml，超聲處理10分鐘，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，得續(xù)濾液；取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡22小時(shí)，傾去水后用3倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡1小時(shí)，間隔攪拌3次，除去酸液，用水洗至近中性，加5倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡1小時(shí)，間隔攪拌5次，除去堿液，用水洗至近中性，加2倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡1小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密量取續(xù)濾液10ml，加于已處理好的內(nèi)徑為1.5cm、床高2cm的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用5ml水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用； B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每1ml含尿嘧啶1μg的溶液，作為對(duì)照品溶液； C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.01mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各50μl注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜；供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度為0.969；康復(fù)新膠囊共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.480，2號(hào)峰0.511，3號(hào)峰0.562，4號(hào)峰0.628，5號(hào)峰0.783，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.296，7號(hào)峰1.925，8號(hào)峰2.104，9號(hào)峰2.661，10號(hào)峰3.517，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝0.318∶0.282∶1.279∶1.000∶0.493。
實(shí)施例3康復(fù)新顆粒的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法 A.供試品溶液的制備取康復(fù)新顆粒約10g，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加水20ml，超聲處理60分鐘，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，得續(xù)濾液；取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡26小時(shí)，傾去水后用2倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡3小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，加3倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡1小時(shí)，間隔攪拌3次，除去堿液，用水洗至近中性，加3倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡1小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密量取續(xù)濾液10ml，加于已處理好的內(nèi)徑為1.5cm、床高3cm的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用10ml水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用； B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每1ml含尿嘧啶100μg的溶液，作為對(duì)照品溶液； C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.2mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5μl注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜；供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度為0.983；康復(fù)新膠囊共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.477，2號(hào)峰0.509，3號(hào)峰0.560，4號(hào)峰0.628，5號(hào)峰0.783，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.299，7號(hào)峰1.921，8號(hào)峰2.111，9號(hào)峰2.661，10號(hào)峰3.528，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝0.309∶0.289∶1.293∶1.000∶0.490。
實(shí)施例4康復(fù)新液的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法 A.供試品溶液的制備取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡24小時(shí)，傾去水后用2～3倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，加4倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去堿液，用水洗至近中性，加3倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密吸取康復(fù)新液10ml，加于已處理好的內(nèi)徑為1.5cm、床高4cm的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用10ml水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，濃縮，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用； B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每1ml含尿嘧啶10μg的溶液，作為對(duì)照品溶液； C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.05mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為259nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20μl注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到美洲大蠊提取物的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.992；美洲大蠊提取物共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.480，2號(hào)峰0.509，3號(hào)峰0.555，4號(hào)峰0.632，5號(hào)峰0.781，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.298，7號(hào)峰1.901，8號(hào)峰2.112，9號(hào)峰2.666，10號(hào)峰3.523，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝0.329∶0.259∶1.241∶1.000∶0.490。
實(shí)施例5康復(fù)新噴霧劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法 A.供試品溶液的制備取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡24小時(shí)，傾去水后用3倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡3小時(shí)，間隔攪拌3次，除去酸液，用水洗至近中性，加3倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡1小時(shí)，間隔攪拌3次，除去堿液，用水洗至近中性，加2倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡3小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密吸取康復(fù)新噴霧劑5ml，加于已處理好的內(nèi)徑為1.5cm、床高2cm的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用5ml水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，濃縮，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用； B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每1ml含尿嘧啶1μg的溶液，作為對(duì)照品溶液； C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.01mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各50μl注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到美洲大蠊提取物的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.988；美洲大蠊提取物共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.478，2號(hào)峰0.514，3號(hào)峰0.559，4號(hào)峰0.628，5號(hào)峰0.778，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.292，7號(hào)峰1.906，8號(hào)峰2.109，9號(hào)峰2.662，10號(hào)峰3.517，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝0.321∶0.265∶1.239∶1.000∶0.472。
實(shí)施例6康復(fù)新液的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法 A.供試品溶液的制備取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡25小時(shí)，傾去水后用3倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡3小時(shí)，間隔攪拌5次，除去酸液，用水洗至近中性，加4倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡3小時(shí)，間隔攪拌5次，除去堿液，用水洗至近中性，加3倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密吸取康復(fù)新液20ml，加于已處理好的內(nèi)徑為1.5cm、床高3cm的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用10ml水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，濃縮，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用； B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每1ml含尿嘧啶5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液； C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.2mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5μl注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到美洲大蠊提取物的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.995；美洲大蠊提取物共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.483，2號(hào)峰0.507，3號(hào)峰0.562，4號(hào)峰0.626，5號(hào)峰0.777，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.302，7號(hào)峰1.912，8號(hào)峰2.109，9號(hào)峰2.661，10號(hào)峰3.517，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝0.332∶0.268∶1.254∶1.000∶0.484。
權(quán)利要求
1.一種康復(fù)新制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法，其特征在于該方法為如下方法中的一種
康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法
A.供試品溶液的制備將康復(fù)新片劑研細(xì)或膠囊劑傾出內(nèi)容物，精密稱(chēng)定固體制劑粉末或顆粒0.2～10重量份，置25體積份量瓶中，加水5～20體積份，超聲處理10～60分鐘，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)；取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡22～26小時(shí)，傾去水后用2～3倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去酸液，用水洗至近中性，加3～5倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去堿液，用水洗至近中性，加2～4倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密量取續(xù)濾液5～10體積份，加于已處理好的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用5～10體積份水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，轉(zhuǎn)移至25體積份量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用；
B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每體積份含尿嘧啶0.2～100重量份的溶液，作為對(duì)照品溶液；
C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.01～0.2mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為240～280nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5～50體積份注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；康復(fù)新固體制劑共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.481±0.048，2號(hào)峰0.511±0.051，3號(hào)峰0.558±0.056，4號(hào)峰0.632±0.063，5號(hào)峰0.785±0.079，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.297±0.130，7號(hào)峰1.929±0.193，8號(hào)峰2.107±0.211，9號(hào)峰2.669±0.267，10號(hào)峰3.523±0.352，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝(0.221～0.410)∶(0.186～0.346)∶(0.990～1.485)∶1.000∶(0.373～0.622)；
或康復(fù)新液體制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法∶
A.供試品溶液的制備取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡22～26小時(shí)，傾去水后用2～3倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去酸液，用水洗至近中性，加3～5倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去堿液，用水洗至近中性，加2～4倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡1～3小時(shí)，間隔攪拌3～5次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密吸取康復(fù)新液體制劑5～20體積份，加于已處理好的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用5～20體積份水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，濃縮，轉(zhuǎn)移至10體積份量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用；
B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每體積份含尿嘧啶0.2～100重量份的溶液，作為對(duì)照品溶液；
C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.01～0.2mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為240～280nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5～50體積份注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到美洲大蠊提取物的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；美洲大蠊提取物共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.482±0.048，2號(hào)峰0.510±0.051，3號(hào)峰0.557±0.056，4號(hào)峰0.630±0.063，5號(hào)峰0.782±0.078，S號(hào)峰1.000±0.000，6號(hào)峰1.298±0.130，7號(hào)峰1.906±0.191，8號(hào)峰2.114±0.211，9號(hào)峰2.663±0.266，10號(hào)峰3.525±0.353，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝(0.231～0.429)∶(0.188～0.349)∶(0.987～1.481)∶1.000∶(0.372～0.620)。
2.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量測(cè)定方法，其特征在于該方法包括如下方法中的一種
康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法
A.供試品溶液的制備將康復(fù)新片劑研細(xì)或膠囊劑傾出內(nèi)容物，精密稱(chēng)定固體制劑粉末或顆粒1.0重量份，置25體積份量瓶中，加水20體積份，超聲處理30分鐘，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)；取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡24小時(shí)，傾去水后用3倍量的2mol/L鹽酸溶液浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，加4倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去堿液，用水洗至近中性，加3倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡2小時(shí)，間隔攪拌4次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密量取續(xù)濾液10體積份，加于已處理好的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用10體積份水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，轉(zhuǎn)移至25體積份量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用；
B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每體積份含尿嘧啶10重量份的溶液，作為對(duì)照品溶液；
C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.05mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為259nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20體積份注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到康復(fù)新固體制劑的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；康復(fù)新固體制劑共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.481±0.048，2號(hào)峰0.511±0.051，3號(hào)峰0.558±0.056，4號(hào)峰0.632±0.063，5號(hào)峰0.785±0.079，S號(hào)峰1.000，6號(hào)峰1.297±0.130，7號(hào)峰1.929±0.193，8號(hào)峰2.107±0.211，9號(hào)峰2.669±0.267，10號(hào)峰3.523±0.352，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝(0.221～0.410)∶(0.186～0.346)∶(0.990～1.485)∶1.000∶(0.373～0.622)；
或康復(fù)新液體制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法
A.供試品溶液的制備取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，研磨，過(guò)50目篩去粗粒，再過(guò)150目篩去細(xì)粒，用水浸泡24小時(shí)，傾去水后用2倍量的2mo1/L鹽酸溶液浸泡3小時(shí)，間隔攪拌5次，除去酸液，用水洗至近中性，加4倍量的1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡3小時(shí)，間隔攪拌4次，除去堿液，用水洗至近中性，加3倍量的2mol/L鹽酸溶液，浸泡2小時(shí)，間隔攪拌5次，除去酸液，用水洗至近中性，水中浸泡放置，備用；精密吸取康復(fù)新液體制劑10體積份，加于已處理好的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，收集流出液，用10體積份水洗滌陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集洗滌液，與流出液合并，濃縮至適量，轉(zhuǎn)移至10體積份量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用；
B.對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取尿嘧啶，加水制成每體積份含尿嘧啶10重量份的溶液，作為對(duì)照品溶液；
C.測(cè)定色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；以0.05mol/L的磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為259nm；精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20體積份注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到美洲大蠊提取物的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度應(yīng)大于0.90；美洲大蠊提取物共有11個(gè)共有指紋峰，參照峰S為尿嘧啶色譜峰，11個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.482±0.048，2號(hào)峰0.510±0.051，3號(hào)峰0.557±0.056，4號(hào)峰0.630±0.063，5號(hào)峰0.782±0.078，S號(hào)峰1.000±0.000，6號(hào)峰1.298±0.130，7號(hào)峰1.906±0.191，8號(hào)峰2.114±0.211，9號(hào)峰2.663±0.266，10號(hào)峰3.525±0.353，其中峰面積的比值分別為2號(hào)峰∶3號(hào)峰∶4號(hào)峰∶S號(hào)峰∶8號(hào)峰＝(0.231～0.429)∶(0.188～0.349)∶(0.987～1.481)∶1.000∶(0.372～0.620)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種康復(fù)新制劑的指紋圖譜質(zhì)量測(cè)定方法?！翱祻?fù)新液”是由美洲大蠊提取物制成的制劑，具有通利血脈，養(yǎng)陰生肌的功效，通過(guò)研究，建立重復(fù)性高的康復(fù)新制劑中生物堿的HPLC指紋圖譜的測(cè)定方法，可作為測(cè)定康復(fù)新制劑中生物堿的化學(xué)組分方法，也可作為鑒定康復(fù)新制劑質(zhì)量控制方法。本發(fā)明使用指紋圖譜技術(shù)有效的控制了康復(fù)新制劑的質(zhì)量，本發(fā)明使用指紋圖譜技術(shù)能有效的控制由美洲大蠊蠻蠊提取物制成的康復(fù)新液、康復(fù)新膠囊、康復(fù)新片及康復(fù)新噴霧劑制劑的質(zhì)量，本發(fā)明提供的指紋圖譜技術(shù)，可作為評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的關(guān)鍵手段，有利于中藥現(xiàn)代化。
文檔編號(hào)G01N30/88GK101315355SQ20081011677
公開(kāi)日2008年12月3日 申請(qǐng)日期2008年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月17日
發(fā)明者王利春, 孔繁貴, 軍 廖, 胄 魏, 隆 梁, 程志鵬 申請(qǐng)人:四川科倫藥業(yè)股份有限公司