專利名稱：一種d-型和/或l-型苯乳酸快速檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種D-型和/或L-型苯乳酸快速檢測方法，特別涉及D-型苯乳酸和/或L-型 苯乳酸的定性檢測和含量測定的方法，屬于生物防腐劑的檢測方法技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
苯乳酸是乳酸菌產(chǎn)生的一種新型抑菌物質(zhì)。研究表明苯乳酸抑菌譜廣，它 對多種食源性致病菌如致病性大腸桿菌、單核細(xì)胞增李斯特菌和金黃色葡萄球 菌；腐敗菌包括產(chǎn)毒素的絲狀真菌如赭曲霉、疣孢青霉和桔青霉，有很強(qiáng)的抑 菌作用。
苯乳酸是一種天然防腐劑。它存在于天然蜂蜜中，對人和動(dòng)物細(xì)胞無毒。 乳酸菌是公認(rèn)為安全(Generally recognized as safety, GRAS)的微生物，千百年來 用于食品保藏。因此，苯乳酸被認(rèn)為是繼乳酸菌產(chǎn)生的第一代抑菌物質(zhì)如乳酸、 醋酸，第二代抑菌物質(zhì)如Nisin(乳酸鏈球菌素)等細(xì)菌素以外，可用于食品體系的 新型抑菌物質(zhì)。與Nisin相比，苯乳酸抑菌譜寬、穩(wěn)定性高、親水性強(qiáng)。
目前對苯乳酸的檢測方法主要有薄層層析和高效液相色譜等方法。其中薄 層層析的方法只能定性檢測和半定量檢測苯乳酸。而已有的高效液相色譜檢測 方法是利用反相柱層析對樣品中的苯乳酸進(jìn)行檢測，根據(jù)保留時(shí)間與峰面積來 定性和定量檢測苯乳酸；然而，利用反相柱層析不能將D-型苯乳酸和L-苯乳酸 分離開，檢測的是總苯乳酸含量，其弊端是1)不能鑒定出樣品中苯乳酸的構(gòu) 型，2)不能分別對D-型和/或L-型苯乳酸進(jìn)行定性和定量分析。然而，D-型和/ 或L-型苯乳酸的同時(shí)定性定量分析，對于不同構(gòu)型苯乳酸作為新型生物防腐劑 的效價(jià)分析及苯乳酸發(fā)酵生產(chǎn)的構(gòu)型形式分析，具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種D-型和/或L-型苯乳酸的快速檢測方法。本發(fā)明檢 測快速，定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好；可檢測的樣品范圍廣；可用于苯乳酸發(fā)酵生產(chǎn) 研究中的定性定量檢測，及苯乳酸作為生物防腐劑在食品工業(yè)中的劑量檢測。
本發(fā)明的技術(shù)方案 一種D-型和/或L-型苯乳酸快速檢測方法，通過高效液 相色譜方法，利用手性柱將待測樣品中的D-型和/或L-型苯乳酸與雜質(zhì)分離，通 過紫外光吸收在線檢測，分別通過高效液相色譜的保留時(shí)間和峰面積來定性和 定量檢測D-型和/或L-型苯乳酸。
高效液相色譜條件為高效液相色譜儀型號(hào)為AgilentllOO;手性層析柱型 號(hào)為Chiral-cel OJ-R;流動(dòng)相為pH2.0、 0.2 M H3P04-KH2P04緩沖液-甲醇-乙氰體積比為85 : 1 : 14的混合液；流速為0.4 mL/min;柱溫為20。C;上樣量為50 |iL; 檢測條件為210nm。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明檢測快速，定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好；可檢測的樣 品范圍廣；可用于苯乳酸發(fā)酵生產(chǎn)研究中的定性定量檢測，及苯乳酸作為生物 防腐劑在食品工業(yè)中的劑量檢測。


圖l D-型苯乳酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測結(jié)果圖。 圖2 L-型苯乳酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測結(jié)果圖。 圖3 D-型和L-型苯乳酸混合物的檢測結(jié)果圖。 圖4微生物發(fā)酵產(chǎn)物中的D-型和L-型苯乳酸的檢測結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l D-型苯乳酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的快速檢測
以Sigma公司產(chǎn)品D-苯乳酸配制成1 mg/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，取一定體積 的該溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測分析。高效液相色譜條件為高效液相色譜儀 型號(hào)為Agilent 1100;手性層析柱型號(hào)為Chiral-cel OJ-R;流動(dòng)相為0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)緩沖液-甲醇-乙氰(體積比為85 : 1 : 14);流速為0.4 mL/min;柱溫為20。C;上樣量為50 jiL;檢測條件為210nm。
圖1給出了 D-型苯乳酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測結(jié)果圖。D-型苯乳酸在該層析條件 下的出峰保留時(shí)間約為18.3 min，可通過積分軟件進(jìn)行D-型苯乳酸的峰面積計(jì) 算，并進(jìn)行樣品中D-型苯乳酸的定量分析。
實(shí)施例2 L-型苯乳酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的快速檢測
以Sigma公司產(chǎn)品L-苯乳酸配制成1 mg/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，取一定體積 的該溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測分析。高效液相色譜條件為高效液相色譜儀 型號(hào)為Agilent 1100;手性層析柱型號(hào)為Chiml-cel OJ-R;流動(dòng)相為0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)緩沖液-甲醇-乙氰(體積比為85 : 1 : 14);流速為0.4 mL/min;柱溫為20。C;上樣量為50 pL;檢測條件為210nm。
圖2給出了 L-型苯乳酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測結(jié)果圖。L-型苯乳酸在該層析條件 下的出峰保留時(shí)間約為17.2 min，可通過積分軟件進(jìn)行L-型苯乳酸的峰面積計(jì) 算，并進(jìn)行樣品中L-型苯乳酸的定量分析。
實(shí)施例3 D-型和L-型苯乳酸混合物的快速檢測
以Sigma公司產(chǎn)品D-型苯乳酸和L-型苯乳酸配制成0.5 mg/mL D-型苯乳酸 和0.5 mg/mL L-苯乳酸混合液，取一定體積的該混合液進(jìn)行高效液相色譜檢測分 析。高效液相色譜條件為高效液相色譜儀型號(hào)為Agilent 1100;手性層析柱型 號(hào)為Chiral-cel OJ-R;流動(dòng)相為0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)緩沖液-甲醇-乙氰 (體積比為85 : 1 : 14);流速為0.4 mL/min;柱溫為20。C;上樣量為50 pL;檢測條件為210 nm。
圖3給出了 D-型和L-型苯乳酸混合物的快速檢測圖。D-型和L-型苯乳酸在 該層析條件下的出峰保留時(shí)間分別約為18.6和17.3 min，可通過積分軟件分別 進(jìn)行D-型和L-型苯乳酸的峰面積計(jì)算，并進(jìn)行樣品中D-型和L-型苯乳酸的定
量分析。
實(shí)施例4待測樣品中的D-型和L-型苯乳酸的快速檢測
以植物乳桿菌發(fā)酵液為待測樣品，通過高效液相色譜檢測分析D-型和L-型 苯乳酸的含量。高效液相色譜條件為高效液相色譜儀型號(hào)為Agilent 1100;手 性層析柱型號(hào)為Chiral-cel OJ-R;流動(dòng)相為0.2 M H3P04-KH2P04 (pH 2.0)緩沖 液-甲醇-乙氰(體積比為85 : 1 : 14);流速為0.4 mL/min;柱溫為20。C;上樣 量為50jiL;檢測條件為210nm。
圖4給出了植物乳桿菌發(fā)酵液中的D-型和L-型苯乳酸的檢測結(jié)果圖。D-型 和L-型苯乳酸在該層析條件下的出峰保留時(shí)間分別約為18.9和17.6 min，可通 過積分軟件分別進(jìn)行D-型和L-型苯乳酸的峰面積計(jì)算，并進(jìn)行樣品中D-型和 L-型苯乳酸的定量分析，分別為0.408 mg/mL和0.397 mg/mL。
權(quán)利要求
1、一種D-型和/或L-型苯乳酸快速檢測方法，其特征是通過高效液相色譜方法，利用手性柱將待測樣品中的D-型和/或L-型苯乳酸與雜質(zhì)分離，通過紫外光吸收在線檢測，分別通過高效液相色譜的保留時(shí)間和峰面積來定性和定量檢測D-型和/或L-型苯乳酸；高效液相色譜條件為高效液相色譜儀型號(hào)為Agilent 1100；手性層析柱型號(hào)為Chiral-cel OJ-R；流動(dòng)相為pH 2.0、0.2M H3PO4-KH2PO4緩沖液-甲醇-乙氰體積比為85∶1∶14的混合液；流速為0.4mL/min；柱溫為20℃；上樣量為50μL；檢測條件為210nm。
全文摘要
一種D-型和/或L-型苯乳酸快速檢測方法，屬于生物防腐劑的檢測方法技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過高效液相色譜方法，利用手性柱將待測樣品中的D-型和/或L-型苯乳酸與雜質(zhì)分離，通過紫外光吸收在線檢測，分別通過高效液相色譜的保留時(shí)間和峰面積來定性和定量檢測D-型和/或L-型苯乳酸。本發(fā)明檢測快速，定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好；可檢測的樣品范圍廣；可用于苯乳酸發(fā)酵生產(chǎn)研究中的定性定量檢測，及苯乳酸作為生物防腐劑在食品工業(yè)中的劑量檢測。
文檔編號(hào)G01N30/02GK101308124SQ200810123519
公開日2008年11月19日 申請日期2008年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月17日
發(fā)明者周宏敏, 波 江, 沐萬孟, 羅昭鋒 申請人:江南大學(xué)