專利名稱：：蛋白質的測定方法與蛋白質檢測試劑盒的制作方法蛋白質的測定方法與蛋白質檢測試劑盒
技術領域：
：本發(fā)明涉及食品及醫(yī)學檢驗測定
技術領域：
，更具體地，本發(fā)明涉及蛋白質測定方法及其試劑盒。
背景技術：
：蛋白質主要由氨基酸組成。蛋白質平均含氮量約16%,而三聚氰胺的含氮量約66%。目前采用的蛋白質測定方法"凱氏定氮法"是通過測定樣品中的含氮量，而不是通過直接測定蛋白質來反映蛋白質含量。由于現有食品和飼料蛋白質含量測定方法存在的這種沒有專一特異性的缺陷，使用含氮量高的三聚氰胺來提高"虛假"蛋白質含量的成本，是使用實際蛋白原料的1/5,于是一些人故意將三聚氰胺用作食品和飼料添加劑，抬高檢測食品和飼料中的蛋白質含量，欺騙國家質檢部門和消費者。因此，需要一種具備專一特異性的能夠直接測定食品和飼料中的蛋白質含量的方法，本發(fā)明人經過大量試驗研究，終于做出了本發(fā)明。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供一種具備專一特異性的蛋白質的測定方法。本發(fā)明的另一個目的是提供一種蛋白質檢測試劑盒。[技術方案]本發(fā)明涉及一種蛋白質的測定方法，該方法利用酶比色法(EnzymaticColorimetricMethod)及酶(偶)聯法(CoupleReaction)技術，通過測量還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處的吸光度變化測定蛋白質含量。本發(fā)明的蛋白質測定方法的基本原理如下蛋白質蛋白酶>氨基酸氨基酸+水+輔酶氨基酸脫氫酶i含氧酸+氨+還原型輔酶這種方'法應用蛋白酶(protease;proteinase;peptidase;EC3.4家》矣)酶(偶)l關氨基酸脫氫酶(amino-aciddehydrogenase;EC1.4.1.5;EC1.4.99.1)酶促反應比色終點法。蛋白質在蛋白酶的作用下進行酶解反應產生氨基酸，再通過(偶)聯合氨基酸脫氬酶的作用，將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，這樣通過測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升程度就可以測定蛋白質的含量。所述的輔酶是一種或多種選自NADP+、NAD+或thio-NAD+的輔酶。所述的蛋白酶是一種或多種選自菠蘿蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、a,(3，Y，5-糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、膠原酶、彈性蛋白酶、無花果蛋白酶、激肽釋放酶、金屬內肽酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、肽酶、內肽酶、N-外肽酶、C-外肽酶、蛋白酶A、蛋白酶K、胰蛋白酶、氨基酸肽酶的蛋白酶。氨基酸的檢測方法很多，本公司已經就使用酶法測定氨基酸的方法提出了80多項發(fā)明專利申請，因此氨基酸的檢測不僅限于使用氨基酸脫氫酶，也可以是本公司所申請的80多項氨基酸測定方法的發(fā)明專利的任何一種。本發(fā)明是通過下述技術方案實現的。本發(fā)明涉及一種蛋白質的測定方法。該蛋白質測定方法的步驟如下A、樣品準備1)標準樣品的制備將一定量的純蛋白溶于水或緩沖液中，再將蛋白濃度調整到10-100克/升，得到的溶液作為標準樣品；2)待測樣品預處理以重量計按照1/5-1/500比將固體蛋白樣品溶于水或緩沖液中作為待測樣品；含有蛋白的液體樣品作為待測樣品可以直接用于后續(xù)步驟；3)空白樣品所述的水或緩沖液作為空白樣品，其蛋白質濃度為0克/升；B、試劑溶液的制備分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸脫氫酶、蛋白酶、輔酶，然6后將它們混合均勻，使用時用水將它們溶解得到一種溶液，它們的濃度分別是40—500mmol/L、0.01—7mol/L、1000-80000U/L、1000—80000U/L、0.2-5mmol/L;所述的蛋白酶是一種或多種選自菠蘿蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、oc，(3,y,5-糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、膠原酶、彈性蛋白酶、無花果蛋白酶、激肽釋放酶、金屬內肽酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、肽酶、內肽酶、N-外肽酶、C-外肽酶、蛋白酶A、蛋白酶K、胰蛋白酶、氨基酸肽酶的蛋白酶；所述的輔酶是一種或多種選自NADP+、NAD+或thio-NAD+的輔酶。C、待測樣品與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/300進行混合，在溫度36-38。C下反應2-12分鐘，在主波長340nm與副波長405nm下進行測定，測定其吸光度隨時間的變化；D、在與步驟C)同樣的條件下測定步驟A)標準樣品的吸光度隨時間的變化；E、在與步驟C)同樣的條件下測定在步驟A)使用的水或緩沖液作為空白溶液的吸光度隨時間的變化；F、數據處理由步驟C-E)所述測定的主波長340nm的吸光度隨時間的變化，根據下式計算得到蛋白質的含量△A(樣品)-AA(空白)蛋白質含量=-x標準濃度(克/升)△A(標準)-AA(空白)式中△A(樣品)表示步驟C)得到的待測樣品的吸光度變化；△A(標準)表示步驟D)標準樣品的吸光度變化；△A(空白)表示步驟E)得到的空白溶液的吸光度變化。根據本發(fā)明，在所述的蛋白質測定方法中，所述的緩沖液應該理解是能夠使其測定介質的pH基本保持穩(wěn)定(一般是6.5-8.5)的溶液。如果該pH高于8.5或pH低于6.5，則該測定方法使用的酶的活性達不到預期的活性效果，因此需要添加更多的介質與酶，才有可能達到預期的活性效果。根據本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，本發(fā)明使用的所述緩沖液選自三(羧曱基)氨基曱烷一鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液、咪唑/鹽酸緩沖液或2-氨基-2-曱基-1-丙醇緩沖液、2-氨基-2-甲基-l-丙醇緩沖液、雙甘氨肽緩沖液或"PBS"緩沖液。優(yōu)選地，所述的緩沖液例如選自三(羧曱基)氨基曱烷一鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、磷酸鹽緩沖液或"PBS"緩沖液的緩沖液。更優(yōu)選地，所述的緩沖液例如選自三(羧曱基)氨基曱烷一鹽酸(Tris-HCl)緩沖液或磷酸鹽緩沖液的緩沖液。根據本發(fā)明，在所述的蛋白質測定方法中，所述的穩(wěn)定劑應該理解是一種能保護試劑中的介質(底物)與酶不會隨著時間推移而改變其性質，進而失去活性的物質，它會使得試劑具備很長的活性壽命，通常長達數月，甚至一、二年。如果沒有所述的穩(wěn)定劑，則試劑的活性在溶液中只能維持數小時，頂多數天，就會失去活性而不再具備檢測性能。在本發(fā)明中，所述的穩(wěn)定劑使用量是0.01-7mol/L。如果所述的穩(wěn)定劑使用量不夠，則試劑活性的壽命就會縮短；如果所述的穩(wěn)定劑使用量過高，則會增加成本。根據本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，本發(fā)明使用的所述穩(wěn)定劑是一種或多種選自硫S吏銨、氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油的穩(wěn)定劑。優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自硫酸銨、丙二醇、甘油或氯化鈉的穩(wěn)定劑。更優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自硫酸銨或甘油的穩(wěn)定劑。在本發(fā)明中，使用全自動生化分析儀測定時，待測樣品、所述標準樣品與所述空白溶液由該分析儀在設定條件下自動取樣，然后在下述條件下進行測定反應溫度37r,反應時間IO分鐘，測試主波長340nm,測試副波長405nm,待測蛋白質樣品與試劑的體積比例為1/10-1/300,計量方法為兩點終點法，反應方向為正反應，延遲時間0分鐘，4企測時間5分鐘。在本發(fā)明中，所述的純蛋白是酪蛋白、白蛋白、血清蛋白與含有蛋白的其它蛋白物質；所述的固體蛋白樣品是奶粉、奶糖、奶酪或其它含奶樣品；所述的含有蛋白的液體樣品是牛奶、馬奶、羊奶、-格駝奶、人奶、人血清、人血漿或其它含奶液體樣品。所述的其它蛋白物質、其它有奶樣品、其它含奶液體樣品也都在本發(fā)明的保護范圍內。根據本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，本發(fā)明使用的所述緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸脫氫酶、蛋白酶、輔酶可以配制成雙劑試劑或三劑試劑，即將這些試劑分成兩組或三組試劑，其中氨基酸脫氳酶、蛋白酶或輔酶在這些試劑組中的位置是不限定的，即可以相互交換。在本發(fā)明蛋白質測定方法中使用的試劑都是目前在市場上獲得或購買到的試劑。采用本發(fā)明的蛋白質測定方法時，可以使用紫外/可見光分析儀，例如上海精密儀器儀表有限公司銷售的紫外可見分光光度計、天津喀納斯光學分析儀器有限公司銷售的723可見分光光度計；半自動生化分析儀，例如上海偉思醫(yī)用設備有限公司的BTS-330半自動生化分析儀；全自動生化分析儀，例如由邁瑞公司以商品名BS300、奧林帕斯公司以商品名AU400、東芝公司以商品名120、日立公司以商品名7600、雅培公司以商品名CB8000或貝克曼公司以商品名CX20銷售的全自動生化分析儀本發(fā)明還涉及一種蛋白質檢測試劑盒。該蛋白質檢測試劑盒由下述粉狀試劑組成，這些粉狀試劑在使用時用水溶解得到具有下述濃度范圍的可直接使用的液體試劑緩沖液40-500mmol/L穩(wěn)定劑0.01-7mol/L蛋白酶1000-80000U/L氨基酸脫氫酶1000-80000U/L輔酶0.2-5mmol/L所述的蛋白酶是一種或多種選自菠蘿蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、a,(3,Y,S-糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、膠原酶、彈性蛋白酶、無花果蛋白酶、激肽釋放酶、金屬內肽酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、肽酶、內肽酶、N-外肽酶、C-外肽酶、蛋白酶A、蛋白酶K、胰蛋白酶、氨基酸肽酶的蛋白酶；所述的輔酶是一種或多種選自NADP+、NAD+或thio-NAD+的輔酶。根據本發(fā)明蛋白質檢測試劑盒的一種優(yōu)選實施方式，本發(fā)明使用的所述緩沖液選自三(羧曱基)氨基曱烷一鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液、咪唑/鹽酸緩沖液或2-氨基-2-曱基-l-丙醇緩沖液、2-氨基-2-曱基-l-丙醇緩沖液、雙甘氨肽緩沖液或"PBS"緩沖液。根據本發(fā)明蛋白質檢測試劑盒的另一種優(yōu)選實施方式，本發(fā)明使用的所述穩(wěn)定劑是一種或多種選自石克酸銨、氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油的穩(wěn)定劑。在本發(fā)明中，在本發(fā)明測定蛋白質的方法中，無論是單劑試劑、雙劑試劑還是三劑試劑，所述的輔酶是一種或多種選自NADP+、NAD+或thio-NAD+的輔酶。在采用本發(fā)明方法測定蛋白質時，可以根據下式要求進行多次試驗，然后將得到的這些試驗結果按照下式計算出精密度(CV):S=《(X一X卩Vn-l式中X-試驗結果平均值；Xi-各次試驗結果；n-試驗次數.N^10CV=S/X"00%將得到的這些試驗結果按照下式計算出相對極差A_IT-f△=^—=—=-CX+Y+Z)+3X——第一批各次試驗結果平均值Y——第二批各次試驗結果平均值Z——第三批各次試驗結果平均值U——為X,Y,Z中的最大值V——為X,Y，Z中的最小值每批試樣數取n^3經過大量試驗確定，對于蛋白質含量為0.1-2.0克/升的樣品，其分析誤差可以達到^4%;對于蛋白質含量為2-150克/升的樣品，其分析誤差可以一般達到^2%;而現有測定方法，例如"凱氏定氮法"方法分析誤差達到-%，因此與現有技術相比，本發(fā)明方法的誤差小得多。本發(fā)明方法的靈壽文度可以達到0.1克/升。由于本發(fā)明是具有底物專一特性的酶法試劑，因此影響本發(fā)明測定結果的干擾物應該沒有；三聚氰胺不會發(fā)生反應。通過大量試驗確定，本發(fā)明方法測定蛋白質含量范圍是0-150克/升，高于這個值時，樣品需要進行稀釋，再行測試，因此本發(fā)明的測定方法適用范圍寬。采用本發(fā)明方法測定其測定蛋白質時，使用全自動生化分析儀時，一般可以達到每小時測定樣品達到1800個。本發(fā)明的方法也可以應用于人血清、人血漿等醫(yī)學臨床檢驗
技術領域：
。使用紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行蛋白質含量測定，可以達到測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。本發(fā)明具有下述積4l效果本發(fā)明的方法具備蛋白質底物專一特異性，不受其它物資干擾，三聚氰胺不會發(fā)生反應作用，結果準確可靠，不會發(fā)生虛假結果；本發(fā)明的方法測定速度快，每小時可測試120—3600個樣品，每毫升試劑可測試4一8個樣品；靈敏度高，可測到0.1克/升；精確度可達到(誤差￡2%),再現性好，測定成本低，因而具有廣泛應用的前景。具體實施方式將一定量的純酪蛋白溶于水中，再使用該純酪蛋白將濃度調整到20克/升，得到的溶液作為標準樣品；2)待測樣品預處理以鮮牛奶作為待測樣品；3)空白樣品所述的水作為空白樣品，其蛋白質濃度為0克/升；B、試劑溶液的制備分別移取或稱取三(羧甲基)氨基曱烷-鹽酸緩沖液、甘油、氨基酸脫氬酶、菠蘿蛋白酶、NAD+，然后將它們混合均勻，使用時用水將它們溶解得到試劑溶液，它們的濃度分別是10Ommol/L、3mol/L、12000U/L、10000U/L、3mmol/L;C、鮮牛奶與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比3/300進行混合，在溫度37。C下反應5分鐘，在主波長340nm與副波長405nm下進行測定，測定其吸光度隨時間的變化AA(樣品)為0.4754;D、在與步驟C)同樣的條件下測定步驟A)標準樣品的吸光度隨時間的變化AA(標準)為0.3162;E、在與步驟C)同樣的條件下測定在步驟A)使用的水作為空白溶液的吸光度隨時間的變化AA(空白)為0.0009;F、數據處理由步驟C-E)所述測定的主波長340nm的吸光度隨時間的變化AA,根據下式計算得到蛋白質的含量一范圍。實施例1:牛奶樣品中蛋白質含量的測定A、樣品的準備1)標準樣品的制備△A(樣品)-AA(空白)蛋白質含量:標準濃度(克/升)△A(標準)-AA(空白)通過上式計算得到該鮮牛奶樣品的蛋白質含量為30.1克/升，其分析誤差是±0.3。該牛奶的蛋白質含量為3.01%。實施例2:奶粉樣品中蛋白質含量的測定A、樣品的制備1)標準樣品的制備將一定量的純酪蛋白溶于水中，再使用該純酪蛋白將濃度調整到20.0克/升，得到的溶液作為標準樣品；2)待測樣品預處理以重量計按照1/10比將奶粉樣品溶于水中作為待測樣品；3)空白樣品所述的水作為空白樣品，其蛋白質濃度為0.0克/升；B、試劑溶液的制備該蛋白質測定試劑為雙劑試劑，它含有組成如下的試劑1:三(羧曱基)氨基曱烷-鹽酸緩沖液100mmol/LNADP+3mmol/L組成如下的試劑2三(羧曱基)氨基曱烷-鹽酸緩沖液100mmol/L乙二醇5mol/L胃蛋白酶40000U/L內肽酶40000U/L氨基酸脫氫酶48000U/LC、樣品使用日立7080全自動生化分析儀測定該全自動生化分析儀主要操作參數如下計量方法兩點終點法測試計量時間點:16，31主波長:340副波長:405反應溫度:37才羊品體積二3試劑1(Rl)體積:200試劑2(R2)體積:0試劑3(R3)體積:50反應方向:正標準樣品1:0.0標準樣品2:20.0定標得到K值結果為101,換算成靈敏度為0.099AA/克/升。測試結果顯示該奶粉樣品中含有蛋白質17.9克/升，換句話說，該奶粉樣品的蛋白質含量為17.9%，其分析誤差是土0.27%。實施例3:血清蛋白樣品中蛋白質含量的測定該實施例的操作方式與實施例l相同，只是本實施例A、樣品的制備1)標準樣品的制備將一定量的純血清蛋白溶于緩沖液中，再使用該純血清蛋白將濃度調整到90克/升，得到的溶液作為標準樣品；2)待測樣品預處理以人血清作為待測樣品；3)空白樣品所述的水作為空白樣品，其蛋白質濃度為0克/升；B、試劑溶液的制備該蛋白質測定試劑為三劑試劑，它含有組成如下的試劑1:磷酸鹽緩沖液100mmol/LNAD+組成如下的i式劑2磷酸鹽緩沖液硫酸銨氨基酸脫氫酶組成如下的試劑3磷酸鹽緩沖液氯化鈉木瓜凝乳蛋白酶外肽酶胰蛋白酶C、樣品使用日立7080全自動生化分析儀測定該全自動生化分析儀主要操作參數如下2mmol/L100mmol/L1mol/L60000U/L100mmol/L1mol/L36000U/L36000U/L36000U/L計量方法:兩點終點法測試計量時間點:16,31主波長:340副波長:405反應溫度:37才羊品體積:3試劑1(Rl)體積:200試劑2(R2)體積:50試劑3(R3)體積:50反應方向:正標準樣品1:0.00標準樣品2:90.00定標得到K值結果為989,換算成靈敏度為0.101AA/克/升。測試結果顯示該血清樣品中的蛋白質含量為79.99克/升，其誤差是±0.88:15實施例4:穩(wěn)定性試驗該實施例的才喿作方式與實施例2相同，只是在實施例2實施后，實施例2使用的試劑在密閉試劑瓶中在2—8°C下存放了半年與一年。使用同樣的鮮奶，使用與實施例2同樣的新試劑與上述存放半年與一年的試劑分布進行了測定，其它條件都與實施例相同，其測定結果如下:表1<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>上表結果表明，使用本發(fā)明的試劑盒采用本發(fā)明的測定方法可以保證獲得穩(wěn)定的結果，其穩(wěn)定性至少一年以上。實施例5:線性試驗該實施例的操作方式與實施例2相同，只是配制新的標準樣品濃度達到200克/升，將200克/升的純酪蛋白依倍比稀釋，然后進行測試，其測定結果如下表2<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表2結果表明，使用本發(fā)明的試劑盒，采用本發(fā)明的測定方法可以保證線性可以達到150克/升。申請人經過實驗驗證，采用本發(fā)明說明書中記載的其他測定方法均能達到本發(fā)明的目的，鑒于測定步驟等情況與以上實施例類同，不另——例舉?？傊?，實驗證明采用本發(fā)明的測定方法完全可以通過一般生化分析儀器得出所需的測定結果——空白試劑吸光度變化(AA/min)$0.001;吸光度時間反應曲線應呈上升曲線直至終點；試劑可測有效(RS0.99)線形范圍可達150克/升；試劑測試的不準確度，其相對偏差不超過±3%;試劑測試的精密度(重復性)的變異系數(CV)$2%;試劑的靈敏度可達O.l士0.01AA/克/升；試劑在2—8。C下保存，活性可以穩(wěn)定一年以上；本發(fā)明特異性高，非蛋白質不會有反應，靈敏度高、精確度好，線形范圍寬廣，穩(wěn)定期長，足以便于推廣應用。權利要求1、一種蛋白質的測定方法，其特征在于該方法的步驟如下A、樣品準備1)標準樣品的制備將一定量的純蛋白溶于水或緩沖液中，再將蛋白濃度調整到10-100克/升，得到的溶液作為標準樣品；2)待測樣品預處理以重量計按照1/5-1/500比將固體樣品溶于水或緩沖液中作為待測樣品；液體樣品作為待測樣品可以直接用于后續(xù)步驟；3)空白樣品所述的水或緩沖液作為空白樣品，其蛋白質濃度為0克/升；B、試劑溶液的制備分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸脫氫酶、蛋白酶、輔酶，然后將它們混合均勻，使用時用水將它們溶解得到一種溶液，它們的濃度分別是40-500mmol/L、0.01-7mol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、0.2-5mmol/L；其中所述的蛋白酶是一種或多種選自菠蘿蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、α，β，γ，δ-糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、膠原酶、彈性蛋白酶、無花果蛋白酶、激肽釋放酶、金屬內肽酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、肽酶、內肽酶、N-外肽酶、C-外肽酶、蛋白酶A、蛋白酶K、胰蛋白酶、氨基酸肽酶的蛋白酶；所述的輔酶是一種或多種選自NADP+、NAD+或thio-NAD+的輔酶；C、待測樣品與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/300進行混合，在溫度36-38℃下反應2-12分鐘，在主波長340nm與副波長405nm下進行測定，測定其吸光度隨時間的變化；D、在與步驟C)同樣的條件下測定步驟A)標準樣品的吸光度隨時間的變化；E、在與步驟C)同樣的條件下測定在步驟A)使用的水或緩沖液作為空白溶液的吸光度隨時間的變化；F、數據處理由步驟C-E)所述測定的主波長340nm的吸光度隨時間的變化，根據下式計算得到蛋白質的含量式中△A(樣品)表示步驟C)得到的待測樣品的吸光度變化；△A(標準)表示步驟D)標準樣品的吸光度變化；△A(空白)表示步驟E)得到的空白溶液的吸光度變化。2、根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于使用全自動生化分析儀測定時待測樣品、所述標準樣品與所述空白溶液由該分析儀在設定條件下自動取樣，然后在下述條件下進行測定測定方法為二點終點法，溫度37°C,反應時間10分鐘，測試主波長340nm,測試副波長405nm,待測蛋白質樣品與試劑的體積比例為1/10-1/300,反應方向為正反應，延遲時間O分鐘，檢測時間5分鐘。3、根據權利要求1或2所述的測定方法，其特征在于所述的緩沖液選自三(羧曱基)氨基曱烷—鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼〃吵緩沖液、二乙醇胺緩沖液、咪唑/鹽酸緩沖液或2-氨基-2-曱基-l-丙醇緩沖液、2-氨基-2-曱基-l-丙醇緩沖液、雙甘氨肽緩沖液或"PBS"緩沖液。4、根據權利要求1或2所述的測定方法，其特征在于所述的穩(wěn)定劑是一種或多種選自硫酸銨、氯化鈉、乙二醇、丙二醇或甘油的穩(wěn)定劑。5、根據權利要求1或2所述的測定方法，其特征在于所述的純蛋白是酪蛋白、白蛋白或血清蛋白；所述的固體樣品是奶粉、奶糖或奶酪；所述的液體樣品是牛奶、馬奶、羊奶、駱駝奶、人奶、人血清或人血漿。6、根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸脫氫酶、蛋白酶、輔酶配制成雙劑試劑或三劑試劑，其中氨基酸脫氬酶、蛋白酶或輔酶的位置是不限定的。7、一種蛋白質^f企測試劑盒，其特征在于它由下述粉狀試劑組成，這些粉狀試劑在使用時用水溶解得到具有下述濃度范圍的可直接使用的液體試劑緩沖液40_500mmol/L穩(wěn)定劑0.01-7mol/L蛋白酶1000-80000U/L氨基酸脫氫酶1000-80000U/L輔酶0.2-5mmol/L所述的蛋白酶是一種或多種選自菠蘿蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、a，卩，y,S-糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、膠原酶、彈性蛋白酶、無花果蛋白酶、激肽釋放酶、金屬內肽酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、肽酶、內肽酶、N-外肽酶、C-外肽酶、蛋白酶A、蛋白酶K、胰蛋白酶或氨基酸肽酶的蛋白酶；所述的輔酶是一種或多種選自NADP+、NAD+或thio-NAD+的輔酶；所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸脫氫酶、蛋白酶、輔酶配制成雙劑試劑或三劑試劑，其中氨基酸脫氫酶、蛋白酶或輔酶的位置是不限定的；8、根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于所述的緩沖液選自三(羧曱基)氨基曱烷一鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液、咪唑/鹽酸緩沖液或2-氨基-2-甲基-l-丙醇緩沖液、2-氨基-2-曱基-l-丙醇緩沖液、雙甘氨肽緩沖液或"PBS"緩沖液的緩沖液。9、根據權利要求7所述的測定方法，其特征在于所述的穩(wěn)定劑是一種或多種選自硫酸銨、氯化鈉、乙二醇、丙二醇或甘油的穩(wěn)定劑。全文摘要本發(fā)明涉及一種蛋白質測定方法，該方法利用酶比色法及酶聯法技術測定蛋白質含量。本發(fā)明還涉及蛋白質測定試劑盒。本發(fā)明的測定方法具有專一特異性、靈敏度高、誤差小，因此本發(fā)明的測定方法與試劑盒可以廣泛地應用于含有蛋白質的各種產品，尤其是食品的分析。文檔編號G01N33/68GK101477129SQ200810187239公開日2009年7月8日申請日期2008年12月19日優(yōu)先權日2008年12月19日發(fā)明者王爾中申請人:蘇州艾杰生物科技有限公司