專利名稱：一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甘氨酸銅、鋅、鐵等氨基酸微量元素螯合物的螯合率的檢測(cè)領(lǐng) 域，具體為一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
氨基酸微量元素螯合物符合人體微量元素吸收的機(jī)制和特點(diǎn)，把人體必需 的氨基酸和微量元素有機(jī)地結(jié)合起來，成為一種新型高效的微量元素營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化 劑，具有良好的理化性質(zhì)和生物活性。甘氨酸是分子量最小的氨基酸，其與微 量元素反應(yīng)生成的螯合物也是分子量最小的氨基酸微量元素螯合物，能更好的 被肌體吸收、利用。
氨基酸微量元素螯合物是由1個(gè)或多個(gè)氨基酸基團(tuán)與金屬離子發(fā)生配合反 應(yīng)形成的具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的化合物。它具有穩(wěn)定性好、吸收率高、生物效價(jià)高、 毒性小等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)廣泛地用于畜牧生產(chǎn)中。氨基酸微量元素螯合物螯合率 的高低是反映氨基酸微量元素螯合物品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo)，目前對(duì)氨基酸微量 元素螯合物螯合率的測(cè)定方法主要有凝膠過濾色譜法和滴定法。
凝膠過濾色譜法可以按分子大小將不同形態(tài)微量元素分開，為研究氨基酸
微量元素螯合物的存在狀態(tài)提供了一種重要的檢測(cè)手段(Brown和Zeringue, Laboratory evaluations of solubility and structural integrity of complexd and chelated trace miner al supplements,, 1994; Matsui等,Supplementation of zinc as amino acid-chelated zinc for piglets ， 1996)。 Cao (1998， 2000)利用凝膠色譜柱檢測(cè)
緩沖液中游離態(tài)和絡(luò)合態(tài)鋅，結(jié)果表明在pH值為2和5的緩沖液中，有機(jī)鋅 產(chǎn)品的洗脫峰與硫酸鋅中鋅離子的洗脫峰相同，而對(duì)于有機(jī)鋅產(chǎn)品的中性水溶 液，在離子態(tài)鋅的洗脫峰之前還出現(xiàn)一個(gè)較小的洗脫峰，說明此條件下小部分 鋅為絡(luò)合態(tài)。林萍(2004)用Sephadex G-10凝膠色譜對(duì)合成的甘氨酸螯合鐵 的組成進(jìn)行了初步分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)游離的氨基酸用硼酸洗脫液洗脫7min就出 峰，而甘氨酸螯合鐵樣品用硼酸洗脫液洗脫60min仍無吸收峰，由此說明，在 甘氨酸螯合鐵中沒有游離的甘氨酸存在，螯合鐵在溶液中可能是以陰離子的形 式存在，和葡聚糖凝膠之間存在靜電作用。由于甘氨酸螯合鐵和游離的無機(jī)鐵 在凝膠色譜中都不能直接洗出，因此不能用凝膠色譜方法分離。管海躍(2007) 采用凝膠色譜測(cè)定甘氨酸鐵和甘氨酸鋅的螯合率，但過程相當(dāng)麻煩。因此，凝 膠色譜法測(cè)定螯合率過程麻煩，在基層推廣有一定的困難。
根據(jù)氨基酸微量元素螯合物在乙醇等有機(jī)物中的溶解度極小，而微量的游 離金屬離子和氨基酸都能溶于有機(jī)溶劑的特性，利用二者在有機(jī)溶劑中的溶解 度差異，采用有機(jī)溶劑處理的辦法來純化微量元素氨基酸螯合物樣品，然后采用 滴定法可以測(cè)定氨基酸微量元素螯合物的螯合率。易凱等(2007)采用此方法 測(cè)定了蛋氨酸鋅、蛋氨酸銅、蛋氨酸鐵、甘氨酸銅、甘氨酸鐵等的螯合率。但 是，對(duì)于含有難溶于乙醇的陰離子的氨基酸微量元素螯合物樣品，滴定法不能 用于測(cè)定螯合率，故滴定法也存在一定的缺陷。
目前，市場(chǎng)上所銷售的氨基酸微量元素螯合物產(chǎn)品比較多，因?yàn)闄z測(cè)螯合 率的方法不健全，所以大多數(shù)都是測(cè)定氨基酸微量元素螯合物產(chǎn)品中金屬的總 含量，未考慮金屬離子是結(jié)合還是游離狀態(tài)，市場(chǎng)情況比較混亂，許多產(chǎn)品做 為氨基酸微量元素螯合物銷售，但其實(shí)質(zhì)只不過是微量元素和氨基酸的混合物。
為了推動(dòng)氨基酸微量元素螯合物產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)的深入研究，建立氨基酸微量元 素產(chǎn)品的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，用以規(guī)范飼用氨基酸微量元素螯合物產(chǎn)品的生產(chǎn)、銷售和 使用是當(dāng)前非常有必要的。 '

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有氨基酸微量元素螯合物螯合率檢測(cè)方法的不足，提 供一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方法，使檢測(cè)過程不需純化， 操作簡(jiǎn)便、易于基層推廣、節(jié)約了工業(yè)生產(chǎn)成本。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的 一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方法， 測(cè)定歩驟如下取待測(cè)相應(yīng)的氨基酸微量元素螯合物配成溶液，測(cè)其紫外一可 見吸收光譜圖；取氨基酸微量元素螯合物中相應(yīng)的金屬離子的金屬化合物配成 溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖，在紫外一可見吸收光譜圖上找目標(biāo)波長(zhǎng)X; 取上述氨基酸微量元素螯合物溶液稀釋后在目標(biāo)波長(zhǎng)A下測(cè)定該氨基酸微量元 素螯合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線；稱取待測(cè)氨基酸微量元素螯合物樣品配制成溶液，在目 標(biāo)波長(zhǎng)A下測(cè)定吸光度，然后通過計(jì)算出相應(yīng)的濃度從而求出螯合率。所述的目標(biāo)波長(zhǎng)入可以是吸光度相等的兩個(gè)波長(zhǎng)入i和入2。
氨基酸微量元素螯合物(Fe， Mn， Zn)螯合率的檢測(cè)方法的優(yōu)選測(cè)定步驟
如下取待測(cè)相應(yīng)的氨基酸微量元素螯合物配成溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光
譜圖；然后取氨基酸微量元素螯合物中相應(yīng)的金屬離子的金屬化合物配成溶液， 測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖，在紫外一可見吸收光譜圖上找吸光度相等的兩個(gè)
波長(zhǎng)入t和A 2;取上述氨基酸微量元素螯合物溶液稀釋后在A !和A 2兩個(gè)波長(zhǎng)下
測(cè)定該氨基酸微量元素螯合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出相應(yīng)的AE;稱取待測(cè)氨基酸微
量元素螯合物樣品m克配制成100mL，取其中的XmL再配成20rnL溶液，在
、和、下測(cè)定吸光度，求出在、和入2處的吸光度值差值A(chǔ)A，然后計(jì)算出相
應(yīng)的濃度C，按照以下計(jì)算公式求出螯合率；
計(jì)算公式如下
螯合率(％) = ^lxl00% 式中m——稱取的氨基酸微量元素螯合物的質(zhì)量(g); C——代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的濃度(g/mL)。
所述的金屬化合物可以為硫酸鹽和/或氯化鹽等。
所述的X取值范圍可以為1一15。
所述的氨基酸微量元素螯合物中相應(yīng)的金屬離子的金屬化合物可以是占待
測(cè)樣品的20 40%。
所述甘氨酸銅螯合率的檢測(cè)步驟如下稱取0.5g的甘氨酸銅配成100mL
溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖，然后取0.05g、 0.10g和0.15g的氯化銅和硫
酸銅也配成100mL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖；根據(jù)紫外一可見吸收
光譜圖可知，氯化銅和硫酸銅在0.503 9 g/L 1.501g/L范圍內(nèi)對(duì)甘氨酸銅的螯合
率的測(cè)定可以忽列不計(jì)；然后取2 9mL的上述甘氨酸銅溶液配成20mL，在甘
氨酸銅的最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定其標(biāo)準(zhǔn)曲線；稱取待測(cè)樣品m克配成lOOmL,取
XmL再配成20mL溶液后測(cè)其吸光度，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相應(yīng)的濃度C，按
照以下計(jì)算公式算出螯合率；
計(jì)算公式如下
螯合率(％) = ^xl00% Xm
式中m——稱取的甘氨酸銅的質(zhì)量(g);
C——代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得的濃度(g/mL)。
所述的甘氨酸鋅螯合率的檢測(cè)步驟如下稱取O.lg甘氨酸鋅配成lOOmL的 溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖(UV吸收譜圖)；然后取0.02g氯化鋅配成 lOOmL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖(UV吸收譜圖)，在其譜圖上找到 吸光度相等的兩個(gè)波長(zhǎng)A ,和A 2;然后取上述甘氨酸鋅溶液7 10mL配成20mL 溶液，在"和入2這兩個(gè)波長(zhǎng)下測(cè)定甘氨酸鋅的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出相應(yīng)的AE;稱取 待測(cè)的甘氨酸鋅樣品m克配成100mL，取XmL再配成20mL溶液，在A,和入 2下測(cè)定吸光度，求出吸光度值差值A(chǔ)A，然后計(jì)算出相應(yīng)的濃度C;按以下公 式求出螯合率； 計(jì)算公式如下
螯合率％ = ^1x100% X x附
式中m——稱取的甘氨酸鋅的質(zhì)量(g);
C——代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得的濃度(g/mL)。
所述的甘氨酸亞鐵螯合率的測(cè)定方法如下稱取O.lg甘氨酸亞鐵配成
lOOmL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖(UV吸收譜圖)；然后取0.04g氯 化亞鐵配成lOOmL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖(UV吸收譜圖)，在其
譜圖上找到吸光度相等的兩個(gè)波長(zhǎng)A!和入2;然后取上述甘氨酸亞鐵溶液9
12mL配成20mL溶液，在A ,和A 2這兩個(gè)波長(zhǎng)下測(cè)定甘氨酸亞鐵的標(biāo)準(zhǔn)曲線求 出相應(yīng)的AE;稱取待測(cè)的甘氨酸亞鐵樣品m克配成lOOmL,取XmL再配成 20mL溶液，在入t和入2下測(cè)定吸光度，求出吸光度值差值A(chǔ)A，然后計(jì)算出濃 度C;按以下公式求出螯合率，
計(jì)算公式如下
螯合率％ = ^><100% X x附
式中m——稱取的甘氨酸亞鐵的質(zhì)量(g); C——代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得濃度(g/mL)。 本發(fā)明主要原理是基于未發(fā)生螯合反應(yīng)的離子態(tài)金屬離子如(硫酸鹽，氯 化鹽等)與螯合態(tài)的金屬離子在紫外可見光區(qū)的最大吸收峰的波長(zhǎng)不同，可以 區(qū)別開游離態(tài)的金屬離子與螯合態(tài)的金屬離子，在此基礎(chǔ)上再測(cè)定螯合態(tài)金屬 離子的濃度，進(jìn)而計(jì)算出螯合率。本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，適用于甘氨酸微量元 素螯合物(含有可以溶于乙醇或難溶于乙醇的原料)的螯合率的測(cè)定，且不用 進(jìn)行產(chǎn)品的純化，可以為工業(yè)生產(chǎn)節(jié)約成本，便于推廣應(yīng)用。


圖1為甘氨酸銅和氯化銅的UV吸收譜圖(其中，a氯化銅為0.503g/L、 b 氯化銅1.002g/L、 c氯化銅1.501g/L、 d甘氨酸銅5.004g/L);
圖2為甘氨酸銅和硫酸銅的UV吸收譜圖(其中，a硫酸銅0.502g/L、 b硫 酸銅1.001g/L、 c硫酸銅1.500g/L、 d甘氨酸銅5.004g/L);
圖3為甘氨酸鋅、氯化鋅和硫酸鋅的UV吸收譜圖(其中，a硫酸鋅、b 氯化鋅、c甘氨酸鋅)；
圖4為甘氨酸亞鐵、氯化亞鐵和硫酸亞鐵的UV吸收譜圖(其中，a硫酸 亞鐵、b氯化亞鐵、c甘氨酸亞鐵)。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合 率的檢測(cè)方法進(jìn)行詳細(xì)的說明。
對(duì)于甘氨酸銅螯合率的測(cè)定是利用在甘氨酸銅的最大吸收峰下相應(yīng)的金屬 離子的金屬化合物的吸收可以忽列不計(jì)，測(cè)定待測(cè)甘氨酸銅樣品的螯合率時(shí)， 只需配成溶液后測(cè)其吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出濃度后可算出螯合率。對(duì)于甘氨酸微量元素(Fe， Mn， Zn)螯合率的測(cè)定方法是利用等吸收雙波 長(zhǎng)消去法消除干擾吸收的基本原理來測(cè)定由于吸光度具有加和性，在干擾組 分的吸收光譜上吸光系數(shù)相同的兩個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)定混合組分的吸光度，則可消除 干擾吸收若被測(cè)組分的吸光系數(shù)有顯著差異，可使測(cè)定誤差減小，在此情況 下，即可直接測(cè)定混合物在此兩波長(zhǎng)處的吸光度值差值，該差值與待測(cè)物濃度 成正比，而與干擾物濃度無關(guān)。
用數(shù)學(xué)式表達(dá)如下
=ca (EAE/) Xl+cb (EX) XI 因?yàn)?E^E
所以 A八a+b-Ca (E^E/) Xl=AEaXCaXl
此處設(shè)b為氯化亞鐵或氯化鋅等，在所選的波長(zhǎng)入p入2處的吸光度相等，所以
△Ab=0
則AAa+b與待測(cè)物a濃度成正比，與干擾物b (氯化亞鐵或氯化鋅等)的濃度無關(guān)。
因此，甘氨酸鋅和甘氨酸亞鐵的螯合率的測(cè)定方法是取約O.lg的樣品配成 100mL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖(UV吸收譜圖)，然后取占樣品 20% 40%的氯化鋅或氯化亞鐵等配成100mL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光 譜圖(UV吸收譜圖)，在其譜圖上找到吸光度相等的兩個(gè)波長(zhǎng)入t和入2.如圖3 和圖4所示，然后在這兩個(gè)波長(zhǎng)下測(cè)定甘氨酸鋅和甘氨酸亞鐵的E，即可求出 △E。 實(shí)施例l
甘氨酸銅螯合率的測(cè)定方法稱取0.5g的甘氨酸銅配成100mL溶液，測(cè)定 其紫外一可見吸收光譜圖。然后取0.05g、 O.lOg和0.15g的氯化銅和硫酸銅也配 成100mL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖，如圖1和圖2所示。根據(jù)圖1 和圖2可知，氯化銅和硫酸銅在0.503g/L 1.501g/L范圍內(nèi)對(duì)甘氨酸銅的螯合率 的測(cè)定可以忽列不計(jì)，那么測(cè)甘氨酸銅的螯合率只需在甘氨酸銅的最大吸收波 長(zhǎng)下測(cè)定其標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測(cè)樣品只要稱取一定量溶解后測(cè)其吸光度，參照標(biāo)準(zhǔn) 曲線計(jì)算出濃度后就可測(cè)定螯合率。取2 9mL的上述甘氨酸銅溶液配成20mL， 在甘氨酸銅的最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定其標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=-0.00148+0.20242C (R=0.99977)，稱取待測(cè)樣品0.5g配成100mL，取其中的5mL再配成20mL 溶液后測(cè)其吸光度，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度后，代入以下公式
計(jì)算公式如下
螯合率(％) = ^"00% 5m
式中m——稱取的甘氨酸銅的質(zhì)量(g);
C——代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得的濃度(g/mL)。 實(shí)施例2
氨酸鋅螯合率的測(cè)定方法稱取0.1g甘氨酸鋅配成100mL的溶液，測(cè)其紫 外一可見吸收光譜圖(UV吸收譜圖)，然后取0.02g氯化鋅配成lOOmL的溶液， 測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖(UV吸收譜圖)，在其譜圖上找到吸光度相等的兩 個(gè)波長(zhǎng)入產(chǎn)190.35nm和Xfl93.70nm，如圖3所示；然后在這兩個(gè)波長(zhǎng)下取上 述甘氨酸鋅溶液7 10mL配成20mL溶液,測(cè)定甘氨酸鋅的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出相應(yīng)的 E，即可求出AE。稱取待測(cè)的甘氨酸鋅樣品O.lg配成100mL，取8mL再配成 20mL溶液，在入產(chǎn)190.35nm和人2-193.70nm下測(cè)定吸光度，求出AA，然后計(jì) 算出濃度C，代入螯合率計(jì)算公式就可以求出螯合率。
螯合率的測(cè)定方法如下所述-
193.70nm下甘氨酸鋅的標(biāo)準(zhǔn)曲線A=0.3715+1.37425C (R2=0.99818) 190.35nm下甘氨酸鋅的標(biāo)準(zhǔn)曲線A-0.64429+0.21976C (R2=0.99697)
△E=l .37425-0.21976=1.15449
△A=AExC=1.15449C (1)
古女可f導(dǎo)螯合率％ = ^><100%
式中m——稱取的甘氨酸鋅的質(zhì)量(g);
C——由公式(1)算出的濃度(g/mL)。 實(shí)施例3
甘氨酸亞鐵的螯合率測(cè)定方法稱取O.lg甘氨酸亞鐵配成100mL的溶液， 測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖(UV吸收譜圖)，然后取0.04g氯化亞鐵配成100mL 的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖(UV吸收譜圖)，在其譜圖上找到吸光度 相等的兩個(gè)波長(zhǎng)入產(chǎn)190.40nm和X^195.10nm，如圖4所示；然后在這兩個(gè)波 長(zhǎng)下取上述甘氨酸亞鐵溶液9 12mL配成20mL溶液，測(cè)定甘氨酸亞鐵的標(biāo)準(zhǔn) 曲線求出相應(yīng)的E，即可求出AE。稱取待測(cè)的甘氨酸亞鐵樣品0.13g配成 100mL，取10mL再配成20mL溶液，在X產(chǎn)190.40nm和入2=195.10nm下測(cè)定 吸光度，求出AA，然后計(jì)算出濃度C，代入螯合率計(jì)算公式就可以求出螯合率。 螯合率的測(cè)定方法如下所述
195.1nm下甘氨酸亞鐵的標(biāo)準(zhǔn)曲線A=0.94883+1.40944C (R2=0.99922) 190.35nm下甘氨酸鋅的標(biāo)準(zhǔn)曲線A=0.831+0.7239C (R2=0.99848) △E=l .40944-0.7239=0.68554
△A=AExO0.68554C (2)
故可得螯合率％ = x 100%
10x m
式中m——稱取的甘氨酸亞鐵的質(zhì)量(g);
C——由公式(2)算出的濃度Cg/mL)。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方法，其特征在于，測(cè)定步驟如下取待測(cè)相應(yīng)的氨基酸微量元素螯合物配成溶液，測(cè)其紫外—可見吸收光譜圖；取氨基酸微量元素螯合物中相應(yīng)的金屬離子的金屬化合物配成溶液，測(cè)其紫外—可見吸收光譜圖，在紫外—可見吸收光譜圖上找目標(biāo)波長(zhǎng)λ；取上述氨基酸微量元素螯合物溶液稀釋后在目標(biāo)波長(zhǎng)λ下測(cè)定該氨基酸微量元素螯合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線；稱取待測(cè)氨基酸微量元素螯合物樣品配制成溶液，在目標(biāo)波長(zhǎng)λ下測(cè)定吸光度，然后通過計(jì)算出相應(yīng)的濃度從而求出螯合率。
2、 如權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方法， 其特征在于所述的目標(biāo)波長(zhǎng)入是吸光度相等的兩個(gè)波長(zhǎng)A i和入2。
3、 如權(quán)利要求2所述的一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方法， 其特征在于，測(cè)定步驟如下取待測(cè)相應(yīng)的氨基酸微量元素螯合物配成溶液， 測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖；然后取氨基酸微量元素螯合物中相應(yīng)的金屬離子 的金屬化合物配成溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖，在紫外一可見吸收光譜 圖上找吸光度相等的兩個(gè)波長(zhǎng)入i和入2;取上述氨基酸微量元素螯合物溶液稀釋 后在A ,和A 2兩個(gè)波長(zhǎng)下測(cè)定該氨基酸微量元素螯合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出相應(yīng) 的AE;稱取待測(cè)氨基酸微量元素螯合物樣品m克配制成100mL,取其中的XmL 再配成20rnL溶液，在A ,和A 2下測(cè)定吸光度，求出在A i和入2處的吸光度值差 值A(chǔ)A，然后計(jì)算出相應(yīng)的濃度C，按照以下計(jì)算公式求出螯合率；計(jì)算公式如下螯合率(％) = ￡^xl00O/0式中m——稱取的氨基酸微量元素螯合物的質(zhì)量(g); C——代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的濃度(g/mL)。
4、 如權(quán)利要求1或3所述的一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢 測(cè)方法，其特征在于所述的金屬化合物為硫酸鹽和/或氯化鹽。
5、 如權(quán)利要求3所述的一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方 法，其特征在于所述的X取值范圍為1一15。
6、 如權(quán)利要求4所述的一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方 法，其特征在于所述的氨基酸微量元素螯合物中相應(yīng)的金屬離子的金屬化合 物占待測(cè)樣品的20 40%。
7、 如權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方 法，其特征在于，所述甘氨酸銅螯合率的檢測(cè)步驟如下稱取0.5g的甘氨酸銅 配成100mL溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖，然后取0.05g、 0.10g和0.15g 的氯化銅和硫酸銅也配成100mL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖；根據(jù)紫 外一可見吸收光譜圖-可知，氯化銅和硫酸銅在0.503 9 g/L 1.501g/L范圍內(nèi)對(duì)甘 氨酸銅的螯合率的測(cè)定可以忽列不計(jì)；然后取2 9mL的上述甘氨酸銅溶液配 成20mL，在甘氨酸銅的最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定其標(biāo)準(zhǔn)曲線；稱取待測(cè)樣品mg配 成100mL，取XmL再配成20mL溶液后測(cè)其吸光度，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相應(yīng) 的濃度C，按照以下計(jì)算公式算出螯合率；計(jì)算公式如下螯合率(°/。) = ^1x100%式中m——稱取的甘氨酸銅的質(zhì)量(g);C——代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得的濃度(g/mL)。
8、 如權(quán)利要求3所述的一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方 法，其特征在于，所述的甘氨酸鋅螯合率的檢測(cè)步驟如下稱取0.1g甘氨酸鋅 配成100mL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖；然后取0.02g氯化鋅配成 100mL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖，在其譜圖上找到吸光度相等的兩 個(gè)波長(zhǎng)入！和人2;然后取上述甘氨酸鋅溶液7 10mL配成20mL溶液，在、和 入2這兩個(gè)波長(zhǎng)下測(cè)定甘氨酸鋅的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出相應(yīng)的AE;稱取待測(cè)的甘氨酸 鋅樣品mg配成100mL，取XmL再配成20mL溶液，在入！和入2下測(cè)定吸光度， 求出吸光度值差值A(chǔ)A，然后計(jì)算出相應(yīng)的濃度C;按以下公式求出螯合率； 計(jì)算公式如下螯合率％= ￡^1x100% X x附式中m——稱取的甘氨酸鋅的質(zhì)量(g);C——代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得的濃度(g/mL)。
9、 如權(quán)利要求3所述的一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的甘氨酸亞鐵螯合率的測(cè)定方法如下稱取0.1g甘氨酸亞鐵配 成100mL的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖；然后取0.04g氯化亞鐵配成100mL 的溶液，測(cè)其紫外一可見吸收光譜圖，在其譜圖上找到吸光度相等的兩個(gè)波長(zhǎng)入i 和入2;然后取上述甘氨酸亞鐵溶液9 12mL配成20mL溶液，在入i和入2這兩個(gè) 波長(zhǎng)下測(cè)定甘氨酸亞鐵的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出相應(yīng)的AE;稱取待測(cè)的甘氨酸亞鐵樣品 mg配成100mL，取XmL再配成20mL溶液，在入J卩A 2下測(cè)定吸光度，求出吸 光度值差值A(chǔ)A，然后計(jì)算出濃度C;按以下公式求出螯合率，計(jì)算公式如下-<formula>formula see original document page 5</formula>式中m——稱取的甘氨酸亞鐵的質(zhì)量(g);C——代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得濃度(g/mL)。
全文摘要
一種測(cè)定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測(cè)方法，主要原理是基于未發(fā)生螯合反應(yīng)的離子態(tài)金屬離子如(硫酸鹽，氯化鹽等)與螯合態(tài)的金屬離子在紫外可見光區(qū)的最大吸收峰的波長(zhǎng)不同，可以區(qū)別開游離態(tài)的金屬離子與螯合態(tài)的金屬離子，在此基礎(chǔ)上再測(cè)定螯合態(tài)金屬離子的濃度，進(jìn)而計(jì)算出螯合率。本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，適用于在不同的pH值下和不同溶劑介質(zhì)的環(huán)境下測(cè)定甘氨酸微量元素螯合物的螯合率的測(cè)定，考察在不同條件下螯合物產(chǎn)品的螯合率，為產(chǎn)品質(zhì)量的鑒定提供了依據(jù)，為在各種不同環(huán)境下使用螯合物產(chǎn)品提供了參考依據(jù)。
文檔編號(hào)G01N33/483GK101368903SQ200810198628
公開日2009年2月18日 申請(qǐng)日期2008年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月19日
發(fā)明者李大光, 林娜妹, 冰 滕, 舒緒剛, 祥 許, 黃慧民 申請(qǐng)人:廣州天科生物科技有限公司;廣東工業(yè)大學(xué)