專利名稱：一種用高效液相色譜法測(cè)定去甲文拉法辛有關(guān)物質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬涉及一種高效液相色譜分離分析方法，特別是一種用高效液相色譜法分
離分析去甲文拉法辛有關(guān)物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
去甲文拉法辛是文拉法辛的活性代謝物，是一種多巴胺的弱抑制劑，能有效地抑制5-羥色胺和去甲腎上腺素的再攝取，對(duì)多巴胺的再攝取有一定的抑制作用。主要用于治療重性抑郁癥(MDD)。其結(jié)構(gòu)式為
分子式為C16H25N02，分子量263. 4 去甲文拉法辛與其中間體相比極性差別較大，在同一色譜條件下不使用梯度洗脫而實(shí)現(xiàn)它們的分離有一定的困難，因此，實(shí)現(xiàn)去甲文拉法辛與其中間體在同一色譜條件下的分離與分析在去甲文拉法辛的合成和制劑過程的質(zhì)量控制方面具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種在同一色譜條件下分離分析去甲文拉法辛有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜方法，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)去甲文拉法辛的質(zhì)量控制。 申請(qǐng)人:發(fā)現(xiàn)，用氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以含有表面活性劑的緩沖鹽-有機(jī)改性劑為流動(dòng)相，可以實(shí)現(xiàn)去甲文拉法辛與其中間體在同一色譜條件下的分離與分析，從而可以準(zhǔn)確控制去甲文拉法辛及其制劑的質(zhì)量。 本發(fā)明所說的用高效液相色譜法分離分析去甲文拉法辛的方法，選用氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以磷酸二氫鈉緩沖液-乙腈為流動(dòng)相，其中含有少量的表面活性劑。 本發(fā)明采用的色譜柱為氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(250mmX4.6mm，5 ii m)。 本發(fā)明采用的有機(jī)改性劑選自乙腈、甲醇，最優(yōu)選的有機(jī)改性劑為乙腈。 本發(fā)明方法的流動(dòng)相中，磷酸二氫鈉緩沖液-有機(jī)改性劑混合溶液的體積比為80 : 20 95 : 5。 本發(fā)明方法的流動(dòng)相中包含的表面活性劑選自戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉，最優(yōu)選的為庚烷磺酸鈉，表面活性劑的濃度為0. 002mol/L 0. 007mol/L。
(2)設(shè)置流動(dòng)相流速為0. 8 1. 2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為226nm士3nm。 (3)取步驟(1)的樣品溶液5-40iU注入液相色譜儀，完成去甲文拉法辛的分離與分析。
其中 高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A色譜柱氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(250mmX4. 6mm， 5 y m) 流動(dòng)相磷酸二氫鈉緩沖液(含0.005mol/L庚烷磺酸鈉，用稀磷酸調(diào)節(jié)pH值為
2. 6)-乙腈=90 : 10 流速1.0ml/min 檢測(cè)波長(zhǎng)226nm 柱溫室溫 進(jìn)樣體積20ii1 本發(fā)明采用氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(250mmX4.6mm，5iim)，能夠有效的分離分析去甲文拉法辛有關(guān)物質(zhì)；選擇流動(dòng)相溶解樣品，可以消除溶劑對(duì)檢測(cè)的干擾；選擇進(jìn)樣體積20ia，柱溫為室溫，加入表面活性劑提高了色譜峰的對(duì)稱性。本發(fā)明解決了在同一色譜條件下不使用梯度洗脫而能簡(jiǎn)單分離與分析去甲文拉法辛有關(guān)物質(zhì)的問題，從而確保了去甲文拉法辛原料藥和制劑的質(zhì)量可控。


圖1實(shí)施例1 ，磷酸二氫鈉緩沖液
法辛與中間體混合樣品高效液相色譜圖
圖2實(shí)施例2，磷酸二氫鈉緩沖液
法辛高效液相色譜圖 圖3實(shí)施例3，磷酸二氫鈉緩沖液法辛與中間體混合樣品高效液相色譜圖
乙腈(90 : 10)并加入庚烷磺酸鈉的去甲文拉乙腈(90 : 10)并加入庚烷磺酸鈉的去甲文拉乙腈(95 : 5)并加入庚烷磺酸鈉的去甲文拉
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不限于本實(shí)施的范圍。
實(shí)施例1
儀器與條件 高效液相色譜儀日本島津LC-10ATvp， SPD-10Avp色譜柱氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(250mmX4. 6mm， 5 y m) 流動(dòng)相磷酸二氫鈉緩沖液(含0.005mol/L庚烷磺酸鈉，pH值為2.6)-乙腈
(90 : io) 流速1.0ml/min
檢測(cè)波長(zhǎng)226nm
柱溫室溫
進(jìn)樣體積20ii1
實(shí)驗(yàn)步驟 稱取去甲文拉法辛50mg，中間體1、雜質(zhì)1、雜質(zhì)II各10mg，置于50mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖1。 圖1中保留時(shí)間為9. 5分鐘的色譜峰為去甲文拉法辛的色譜峰。保留時(shí)間為17. 0分鐘的色譜峰為中間體I的色譜峰，保留時(shí)間為33. 4分鐘和14. 7分鐘的色譜峰分別為雜質(zhì)1、雜質(zhì)II的色譜峰。色譜圖表明去甲文拉法辛與其中間體及雜質(zhì)可以在同一色譜條件下達(dá)到良好的分離。
實(shí)施例2
儀器與條件 高效液相色譜儀日本島津LC-10TAvp， SPD-10Avp色譜柱氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(250mmX4. 6mm， 5 y m) 流動(dòng)相磷酸二氫鈉緩沖液(含0. 005mol/L庚烷磺酸鈉，pH值為2. 6)- 乙月青(90 : 10) 流速1.0ml/min 檢測(cè)波長(zhǎng)226nm 柱溫室溫 進(jìn)樣體積20iU 實(shí)驗(yàn)步驟 稱取去甲文拉法辛50mg，置于50mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖2。
實(shí)施例3
儀器與條件 高效液相色譜儀日本島津LC-10ATvp， SPD-10Avp色譜柱氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(250mmX4. 6mm， 5 y m) 流動(dòng)相磷酸二氫鈉緩沖液(含0.005mol/L庚烷磺酸鈉，pH值為2.6)-乙腈
(95 : 5) 流速1.0ml/min
檢測(cè)波長(zhǎng)226nm
柱溫室溫
進(jìn)樣體積20iU
實(shí)驗(yàn)步驟 稱取去甲文拉法辛50mg，中間體1、雜質(zhì)1、雜質(zhì)II各10mg，置于50mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖3。
權(quán)利要求
一種高效液相色譜法分離分析去甲文拉法辛有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于采用氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以含有表面活性劑的緩沖鹽-乙腈為流動(dòng)相。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述色譜柱為氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑 的色譜柱(250mm X 4. 6mm， 5 ii m)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述有機(jī)改性劑選自乙腈、甲醇。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述有機(jī)改性劑為乙腈。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于流動(dòng)相中緩沖鹽與有機(jī)改性劑的體積比為90 : io。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述表面活性劑選自戊烷磺酸鈉或庚烷磺 酸鈉。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的表面活性劑為庚烷磺酸鈉。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步驟(1) 稱取去甲文拉法辛樣品適量，用流動(dòng)相溶解樣品，配制成每lml約含去甲文拉法辛 樣品0. 2 2mg的溶液；(2) 設(shè)置流動(dòng)相流速為0. 8 1. 2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為226nm士3nm ;(3) 取步驟(1)的樣品溶液5-40iU注入液相色譜儀，完成去甲文拉法辛及其有關(guān)物質(zhì) 的分離與分析。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種去甲文拉法辛有關(guān)物質(zhì)的分離與分析測(cè)定方法，采用氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，以含有表面活性劑緩沖鹽-有機(jī)改性劑為流動(dòng)相，用于在同一色譜條件下分離分析去甲文拉法辛的有關(guān)物質(zhì)。
文檔編號(hào)G01N30/00GK101718751SQ20081022400
公開日2010年6月2日 申請(qǐng)日期2008年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月9日
發(fā)明者張?jiān)瞥?申請(qǐng)人:北京德眾萬全醫(yī)藥科技有限公司