專利名稱：：卷煙主流煙氣中有害酚的分離檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及巻煙主流煙氣中有害酚的檢測(cè)方法，特別是涉及巻煙主流煙氣中7種有害酚的分離檢測(cè)方法。技術(shù)背景巻煙主流煙氣中的有害酚類化合物主要包括鄰、間、對(duì)-苯二酚，苯酚，鄰、間、對(duì)-甲酚，是巻煙主流煙氣的重要組分之一，對(duì)煙氣香味產(chǎn)生直接影響，同時(shí)也是一類重要的有害成分。分離檢測(cè)酚類化合物的方法已有許多文獻(xiàn)報(bào)道，氣相色譜和高效液相色譜法是巻煙煙氣酚類物質(zhì)分析中兩種應(yīng)用最為廣泛的方法，并成功地對(duì)巻煙主流和側(cè)流煙氣中的7種主要有害酚類成分一一鄰、間、對(duì)-苯二酚，苯酚，鄰、間、對(duì)-甲酚進(jìn)行了檢測(cè)。但是，由于異構(gòu)體間一甲酚和對(duì)一甲酚的結(jié)構(gòu)以及物理化學(xué)性質(zhì)極為相近，通常的氣相色譜和液相色譜技術(shù)難以將其分離，目前都是合并在一起進(jìn)行測(cè)定。近十年來(lái)，高效液相色譜(HPLC)法因不需要樣品預(yù)分離和衍生化，具有操作簡(jiǎn)單、可直接進(jìn)行樣品測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)，在酚類化合物的分析中得到了廣泛的應(yīng)用。但是，在用這一方法進(jìn)行酚類化合物的分析時(shí)，間甲酚和對(duì)甲酚還是不能分離，只能獲得間甲酚和對(duì)甲酚混合物的測(cè)定結(jié)果，現(xiàn)有技術(shù)中用高效液相色譜法對(duì)巻煙主流煙氣中有害酚的檢測(cè)方法為1、主流煙氣的捕集將樣品巻煙在22士rC、相對(duì)濕度60士2X條件下平衡48h，在溫度22士2。C、相對(duì)濕度60±5%條件下，用FiltronaSM400型直線型吸煙機(jī)按照YC/T29-1996規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)條件抽吸巻煙，每個(gè)孔道抽吸4支煙，用劍橋?yàn)V片捕集巻煙主流煙氣。2、煙氣樣品的制備將l張捕集有粒相物的劍橋?yàn)V片折疊放入200mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入50mL1%醋酸，室溫下超聲萃取20min，靜置5min。取2mL萃取液，用O.45ym微孔濾膜過(guò)濾，得樣品，處理好的樣品必須在3天內(nèi)進(jìn)行分析，外標(biāo)法定量。3色譜條件色譜柱Luna-(]18柱；流動(dòng)相(a)冰醋酸水=1:99，(b)冰醋酸乙腈水=1:30:69;梯度洗脫流動(dòng)相設(shè)置開(kāi)始時(shí)含b流動(dòng)相20X(體積)，16min時(shí)含b流動(dòng)相60%(體積)，23min時(shí)含b流動(dòng)相75X，34min時(shí)含b流動(dòng)相100X(體積);柱流速lml/min;3柱溫3CTC;進(jìn)樣量20ul;熒光檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置如下表。時(shí)間(min)激發(fā)波長(zhǎng)(nm)發(fā)射波長(zhǎng)(nm)0284333527531582773191227231025273312使用上述方法不能分別檢測(cè)間一甲酚和對(duì)一甲酚的含量。然而，間一甲酚、對(duì)一甲酚又有各自不同的生物活性間-甲酚含量與巻煙煙氣的吸味(澀味)、刺激性高度相關(guān)，而對(duì)甲酚有記錄可少量用于實(shí)用、煙用和化裝品香精中，NI0SH(美國(guó)國(guó)家職業(yè)安全與健康協(xié)會(huì))頒布了甲酚的推薦暴露限為2.3ppm。2006年美國(guó)EPA參照NI0SH將甲酚列為有害的空氣及水污染物，并分類為GroupC，即可能的致癌物質(zhì)，并根據(jù)NOAELs(中毒劑量和未觀察到不良反應(yīng)的劑量)，規(guī)定了口服參考劑量間-甲酚為0.05mg/kg/天，對(duì)-甲酚為0.005mg/kg/天。探索可準(zhǔn)確測(cè)定巻煙煙氣中七種有害酚各自含量的方法，將為控制巻煙產(chǎn)品有害成分的釋放量提供更科學(xué)的數(shù)據(jù)。環(huán)糊精(CDs)是一種腔內(nèi)疏水、腔外親水的"錐筒狀"大環(huán)分子化合物，該分子可與許多有機(jī)分子、無(wú)機(jī)分子或離子等客體分子形成敏感的主客復(fù)合體，并表現(xiàn)出良好的分子識(shí)別及選擇性。近年來(lái)，用環(huán)糊精作為高效液相色譜流動(dòng)相手性添加劑或固定相對(duì)手性、異構(gòu)體進(jìn)行分離已引起廣大分析工作者的關(guān)注。e-環(huán)糊精是常用的食品添加劑，無(wú)毒、價(jià)廉，在分離異構(gòu)體和手性化合物方面效果顯著。但將e-環(huán)糊精(e—cd)作為液相色譜流動(dòng)相添加劑，對(duì)巻煙主流煙氣中間、對(duì)-甲酚進(jìn)行分離尚未見(jiàn)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)中采用高效液相色譜法進(jìn)行巻煙主流煙氣中有害酚的檢測(cè)時(shí)，只能測(cè)定間一甲酚和對(duì)一甲酚的混合含量的缺陷，提供一種巻煙主流煙氣中7種有害酚的分離檢測(cè)方法。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案巻煙主流煙氣中有害酚的分離檢測(cè)方法，包括主流煙氣的捕集、煙氣樣品的制備和高效液相色譜檢測(cè)，其中，在高效液相色譜檢測(cè)的流動(dòng)相中添加e-環(huán)糊精。間一甲酚和對(duì)一甲酚的分離度隨著e-環(huán)糊精濃度的增加而增大，但e-環(huán)糊精濃度太高時(shí)，由于受溶解度的限制，在流動(dòng)相中不能完全溶解，使流動(dòng)相變渾濁，且易堵塞色譜柱，高效液相色譜流動(dòng)相中的濃度為588/1。當(dāng)e-環(huán)糊精在高效液相色譜流動(dòng)相中的濃度為68/1時(shí)效果最佳，此時(shí)間一甲酚和對(duì)一甲酚的分離度為1.64。前述高效液相色譜檢測(cè)的檢測(cè)條件為色譜柱L皿a-d8柱；流動(dòng)相(a)冰醋酸水=1:99，(b)冰醋酸乙腈水=1:30:69，含P-環(huán)糊精；梯度洗脫流動(dòng)相設(shè)置開(kāi)始時(shí)含b流動(dòng)相20X(體積)，32min時(shí)含b流動(dòng)相84X(體積)，33min時(shí)含b流動(dòng)相100X(體積)；柱流速lml/min;柱溫3CTC;進(jìn)樣量20yl。其它條件同現(xiàn)有技術(shù)測(cè)定巻煙主流煙氣中有害酚的方法。發(fā)明人為了探索巻煙主流煙氣中間一甲酚和對(duì)一甲酚的分離檢測(cè)方法，進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)，具體如下1、儀器和試劑儀器HP1100高效液相色譜儀；HP1100熒光檢測(cè)器；Luna-(]18柱(5ym，4.6讓X150mm);英國(guó)菲爾創(chuàng)納SM400型全自動(dòng)吸煙機(jī)；瑞士METTLER公司TOLEDOAG104型電子天平(感量:0.lmg);德國(guó)TRANSSONIC公司T660/H型超聲波振蕩器；美國(guó)MILLIPOREDirectQ5型超純水系統(tǒng)。試劑醋酸(液相色譜純，美國(guó)Fluka公司)，乙腈(液相色譜純，美國(guó)迪馬化學(xué)試劑公司)，鄰、間、對(duì)-甲酚(美國(guó)Fluka公司)，鄰-苯二酚、e-環(huán)糊精(天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心)，苯酚(重慶茂業(yè)化學(xué)試劑有限公司)，間、對(duì)-苯二酚(成都市科龍化工試劑廠)，去離子水(>5m，使用前經(jīng)0.45ym濾膜過(guò)濾)，6種市售巻煙。(沒(méi)特殊注明的皆為分析純)2、方法2.l主流煙氣的捕集將樣品巻煙在22士rC、相對(duì)濕度60士2X條件下平衡48h，然后根據(jù)重量及吸阻選出合適煙支。在溫度22士2i:、相對(duì)濕度60±5%條件下，用英國(guó)菲爾創(chuàng)納SM400型全自動(dòng)吸煙機(jī)按照YC/T29-1996規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)條件抽吸巻煙，每個(gè)孔道抽吸10支煙，用劍橋?yàn)V片捕集巻煙主流煙氣。2.2煙氣樣品的制備將l張捕集有粒相物的劍橋?yàn)V片折疊放入200mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入l^醋酸50ml，室溫下超聲萃取20min，靜置5min。取2mL萃取液，用O.45ym微孔濾膜過(guò)濾，得樣品，處理好的樣品必須在3天內(nèi)進(jìn)行分析。進(jìn)行HPLC分析，外標(biāo)法定量。2.3液相色譜條件為了考察e-環(huán)糊精的添加是否可以分離檢測(cè)甲酚以及是否會(huì)對(duì)其它酚類化合物的分離產(chǎn)生影響，分別采用不添加e-環(huán)糊精的流動(dòng)相A與添加e-環(huán)糊精的流動(dòng)相B對(duì)巻煙主流煙氣中的酚類化合物進(jìn)行了測(cè)定。同時(shí)以標(biāo)準(zhǔn)樣品做對(duì)照。流動(dòng)相A:(a)冰醋酸水=1:99，(b)冰醋酸乙腈水=1:30:69;梯度洗脫:開(kāi)始時(shí)含b流動(dòng)相20X(體積)；16min時(shí)含b流動(dòng)相60X(體積)；23min時(shí)含b流動(dòng)相75%(體積)；34min時(shí)含b流動(dòng)相100X(體積)。流動(dòng)相B:(a)冰醋酸水=1:99，(b)冰醋酸乙腈水=1:30:69，{3-環(huán)糊精的濃度為6g/1(另有注明的除外)；梯度洗脫開(kāi)始時(shí)含b流動(dòng)相20X(體積)，32min時(shí)含b流動(dòng)相84X(體積)，33min時(shí)含b流動(dòng)相100X(體積)。色譜柱Luna—Ci8(5ym，4.6mmX150mm);保護(hù)柱AglientSB-C18(5ym，12.5X4.6mm);柱流速lmL/min;柱溫30°C;進(jìn)樣量20uL。熒光檢測(cè)器分析條件由于不同的酚類化合物有其各自不同的最佳激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng)，所以按下表設(shè)置的熒光檢測(cè)器程序波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，可使各酚類化合物獲得各自的最佳響應(yīng)值。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3、結(jié)果與討論3.ie—環(huán)糊精對(duì)間一甲酚和對(duì)一甲酚的分離檢測(cè)從附圖i和附圖2可以看出，當(dāng)流動(dòng)相中不添加e—環(huán)糊精時(shí)，無(wú)論是對(duì)混標(biāo)樣品還是巻煙樣品，經(jīng)反相c^柱分離，間一甲酚和對(duì)一甲酚這對(duì)異構(gòu)體只能得到單一的色譜峰(見(jiàn)圖l的a5、a6和圖2的a5、a6)，而在流動(dòng)相中添加P-環(huán)糊精后，即可實(shí)現(xiàn)混標(biāo)樣品和巻煙樣品中對(duì)一甲酚和間-甲酚的分離，得到了兩個(gè)分離度較大的色譜峰(見(jiàn)圖l的b5、b6和圖2的b5、b6)，采用單標(biāo)進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間可確定峰5為對(duì)-甲酚，峰6為間-甲酚。由此可見(jiàn)，以e—環(huán)糊精作為流動(dòng)相添加劑的反相高效液相色譜可分離甲酚異構(gòu)體，這種分離是基于e—環(huán)糊精對(duì)于對(duì)一甲酚、間一甲酚和鄰一甲酚異構(gòu)體的選擇性包接作用。e一環(huán)糊精的空腔結(jié)構(gòu)外部有親水的羥基，內(nèi)部是親脂的碳?xì)浣Y(jié)構(gòu)，甲酚結(jié)構(gòu)中的甲基取代的苯環(huán)由于親脂性將嵌入e—環(huán)糊精的空腔中，而酚羥基將與e—環(huán)糊精腔外的羥基發(fā)生氫鍵作用，由于對(duì)一甲酚、間一甲酚和鄰一甲酚的甲基處于不同的位置，其空間結(jié)構(gòu)的差異導(dǎo)致它們與e—環(huán)糊精的契合程度不同，所形成的包接物穩(wěn)定性不同，從而得到不同的保留時(shí)間，因此可將甲酚異構(gòu)體拆分。根據(jù)甲酚異構(gòu)體在反相柱上的洗脫順序，可以推測(cè)甲酚異構(gòu)體進(jìn)入e—環(huán)糊精空腔而形成的主客體復(fù)合物穩(wěn)定性順序?yàn)閷?duì)一甲酚〉間一甲酚〉鄰一甲酚，這一結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的e—環(huán)糊精與甲酚異構(gòu)體包結(jié)物的穩(wěn)定常數(shù)是相符的。3.2e—環(huán)糊精濃度對(duì)間-甲酚和對(duì)-甲酚拆分的影響用混合標(biāo)樣為樣品，添加不同濃度的e-環(huán)糊精進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。由圖3可見(jiàn)，在流動(dòng)相水相中分別添加2、4、6、8g/l的e-環(huán)糊精時(shí)，對(duì)-甲酚和間-甲酚分離度分別為0.62、1.06、1.64、1.73，說(shuō)明甲酚異構(gòu)體的分離度隨著e-環(huán)糊精濃度的增加而增大。這可能是因?yàn)閑-環(huán)糊精濃度的增加有利于增強(qiáng)它與同分異構(gòu)體之間的相互作用，使得同分異構(gòu)體之間的色譜行為差異擴(kuò)大，得到不同的保留時(shí)間，從而達(dá)到分離的目的。但e-環(huán)糊精濃度太高時(shí)，由于受溶解度的限制，在流動(dòng)相中不能完全溶解，使流動(dòng)相變渾濁，且易堵塞色譜柱，因此經(jīng)過(guò)比較，選擇58g/i的e—環(huán)糊精溶液作為流動(dòng)相添加劑，當(dāng)e—環(huán)糊精的濃度為6g/1時(shí)，其分離度為i.64，且此時(shí)e-環(huán)糊精在溶液中完全溶解，總體效果最好。3.3工作曲線與檢測(cè)限精密稱取對(duì)-甲酚、鄰-甲酚、苯酚、對(duì)-苯二酚、間-苯二酚、鄰-苯二酚對(duì)照品各25mg，間-甲酚對(duì)照品5mg，用l^冰醋酸溶液定容至25ml，然后用l%冰醋酸溶液進(jìn)行倍比稀釋，配成質(zhì)量濃度依次為0.2、0.4、1.0、2.0和4.0mg/mL的對(duì)照品溶液。以峰面積(Y)對(duì)質(zhì)量濃度(X，mg/mL)進(jìn)行線性回歸，酚類化合物的回歸方程見(jiàn)表l。表ie—環(huán)糊精加入前后酚的回歸方程及檢測(cè)限<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)果表明，e-環(huán)糊精加入前相關(guān)系數(shù)在O.99975到0.99990之間，{3-環(huán)糊精加入后相關(guān)系數(shù)在O.99979到0.99998之間，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。以信噪比為3確定檢測(cè)限，e-環(huán)糊精加入前后酚類成分的檢測(cè)限均在ng級(jí)的水平，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于巻煙主流煙氣中這幾個(gè)有害酚的含量。3.4回收率抽吸相同巻煙10份，分成2組，每組5份，其中l(wèi)組加入已知量(100yg)的酚類混合標(biāo)樣，另一組不加，進(jìn)行萃取和HPLC分析?；厥章?(加混合標(biāo)樣的樣品測(cè)出量一未加混合標(biāo)樣的樣品測(cè)出量)/標(biāo)樣加入量X100X，根據(jù)5次平行測(cè)定的結(jié)果，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(見(jiàn)表2)。表2e-環(huán)糊精加入前后酚類化合物的回收率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>e—環(huán)糊精加入后<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)果表明，e-環(huán)賴月精加入前6利^酚的平均回4夂率為92.8%106.5%，加入后7種酚的平均回收率為92.9%102.4%，說(shuō)明在流動(dòng)相中加入e-環(huán)糊精并沒(méi)有降低方法的準(zhǔn)確性。3.5重復(fù)性將同一牌號(hào)，同批取樣的巻煙樣品分別進(jìn)行5次抽吸，萃取和反相高效液相測(cè)定，同一巻煙樣品進(jìn)行5次平行測(cè)定，根據(jù)5次平行測(cè)定的結(jié)果計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(見(jiàn)表3)。表3e-環(huán)糊精加入前后主流煙氣酚類成分測(cè)定的重復(fù)性(yg/支)e-環(huán)糊精加入前<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>RSD2.18%1.78%4.33%2.47%2.71%3.72%3.86%結(jié)，艮表明:卩糊精加入前主流煙氣中6種有害酚類成分的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.03%4.00%，{3-環(huán)糊精加入后主流煙氣中7種有害酚類成分的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.78%4.33%，說(shuō)明e-環(huán)糊精添加劑法用于測(cè)定巻煙主流煙氣中7種有害酚類成分的含量是可靠的。將e-環(huán)糊精加入前后各酚類化合物的測(cè)定值進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)e-環(huán)糊精加入后幾種酚類物質(zhì)的測(cè)定值略小于e-環(huán)糊精加入前對(duì)應(yīng)的酚類物質(zhì)的測(cè)定值，只有間-苯二酚的測(cè)定值在e-環(huán)糊精加入前后相差幾乎一倍，但是通過(guò)對(duì)比圖2中的a圖譜和b圖譜發(fā)現(xiàn)加入e-環(huán)糊精后，間-苯二酚(圖2b中的2號(hào)峰)的后面出現(xiàn)了一個(gè)明顯的雜峰8，所以我們認(rèn)為e-環(huán)糊精加入前后間-苯二酚含量的巨大差異是由雜峰的引入造成的，e-環(huán)糊精的加入起到了分離雜峰的作用此外，如表4所示，將e-環(huán)糊精加入后測(cè)得的對(duì)-甲酚和間-甲酚各自含量的加和值與e-環(huán)糊精加入前間-甲酚和對(duì)-甲酚混合物測(cè)定值進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)e-環(huán)糊精加入前后間-甲酚和對(duì)-甲酚的含量比值是o.98，說(shuō)明e-環(huán)糊精添加劑法對(duì)對(duì)-甲酚與間-甲酚異構(gòu)體的拆分準(zhǔn)確可靠。表4e-環(huán)糊精加入前后對(duì)-甲酚、間-甲酚含量(yg/支)比較<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3.6樣品分析發(fā)明人以e-環(huán)糊精為流動(dòng)相添加劑的反相高效液相色譜法對(duì)5種國(guó)產(chǎn)市售烤煙型巻煙主流煙氣中酚類化合物的含量進(jìn)行了分析，如表5所示。表5部分巻煙中酚類成分含量(yg/支)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>354.541.8295.7729.7211.423.784.82463.512.62109.0941.3915.536.007.57549.032.10104.7251.2318.107.349.42結(jié)果顯示，在所分析的5種巻煙主流煙氣中二元酚類成分的總含量約為一元酚成分總量的4倍，二元酚類成分中鄰-苯二酚的含量最高，其次是對(duì)-苯二酚，間-苯二酚的含量較少。我們首次用高效液相色譜法測(cè)定了巻煙主流煙氣中對(duì)-甲酚和間-甲酚各自的含量，結(jié)果表明:巻煙主流煙氣中對(duì)-甲酚的含量最高，約是間-甲酚或鄰-甲酚的23倍，其次是鄰-甲酚，而間-甲酚含量最低。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種以e-環(huán)糊精為流動(dòng)相添加劑的高效液相色譜測(cè)定巻煙主流煙氣中有害酚的方法，該方法采用了程序熒光波長(zhǎng)檢測(cè)，這樣可以讓每種酚在其最佳的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)，保證檢測(cè)靈敏度，并用含e-環(huán)糊精的流動(dòng)相梯度洗脫，使各種酚在色譜柱上獲得最佳的分離效果，并且，在甲酚異構(gòu)體的分離檢測(cè)效果隨著e-環(huán)糊精濃度的增加而增加的前提下限定了e-環(huán)糊精的最高濃度，避免了因?yàn)樯V柱被e-環(huán)糊精阻塞而使昂貴的色譜柱報(bào)廢。本發(fā)明方法不但不會(huì)影響鄰苯二酚、間苯二酚、對(duì)苯二酚、苯酚和鄰甲酚的分離測(cè)定，還成功地解決了以往高效液相色譜測(cè)定方法中間一甲酚和對(duì)一甲酚異構(gòu)體不能分離檢測(cè)的問(wèn)題，可以同時(shí)測(cè)定巻煙主流煙氣中七種有害酚的含量，這種方法可望應(yīng)用于巻煙產(chǎn)品有害酚類物質(zhì)的日常檢測(cè)中。圖l:混合標(biāo)樣中7種酚成分的液相色譜圖，a:流動(dòng)相中未加入e-環(huán)糊精，b:流動(dòng)相中含有6g/L的e-環(huán)糊精；圖2:巻煙樣品主流煙氣中7種酚成分的液相色譜圖，a:流動(dòng)相中未加入e-環(huán)糊精，b:流動(dòng)相中含有6g/L的e-環(huán)糊精；圖3:混合標(biāo)樣中7種酚成分的液相色譜圖，a:沒(méi)有添加e—環(huán)糊精，b:添加2g/l的f3-環(huán)糊精，c:添加4g/i的e-環(huán)糊精，d:添加6g/i的e-環(huán)糊精，e.添加8g/i的e-環(huán)糊精；各附圖中的數(shù)字所代表的峰1:對(duì)-苯二酚、2:間-苯二酚、3:鄰-苯二酚、4;苯酚、5:對(duì)-甲酚、6:間-甲酚、7:鄰-甲酚。各附圖中的橫坐標(biāo)為保留時(shí)間，縱坐標(biāo)為熒光強(qiáng)度(LU)。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式巻煙主流煙氣的捕集將巻煙在22士rC、相對(duì)濕度60士2X條件下平衡48h，在溫度2211±2°C、相對(duì)濕度60±5%條件下，用英國(guó)菲爾創(chuàng)納SM400型全自動(dòng)吸煙機(jī)按照YC/T29-1996規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)條件抽吸巻煙，每個(gè)孔道抽吸10支煙，用劍橋?yàn)V片捕集巻煙主流煙氣。主流煙氣樣品的制備將l張捕集有粒相物的劍橋?yàn)V片折疊放入200mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入l^醋酸50ml，采用德國(guó)TRANSS0NIC公司T660/H型超聲波振蕩器在室溫下超聲萃取20min，靜置5min。取2mL萃取液，用O.45ym微孔濾膜過(guò)濾，得主流煙氣樣品，處理好的樣品必須在3天內(nèi)進(jìn)行分析。用外標(biāo)法定量。液相色譜分析采用Luna-ds柱(5ym，4.6mmX150mm)和HP1100高效液相色譜儀進(jìn)行液相色譜分析，采用HP1100熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)；流動(dòng)相(a)冰醋酸水=1:99，P-環(huán)糊精的含量為6g/1;(b)冰醋酸乙腈水=1:30:69，e-環(huán)糊精的含量為6g/1。梯度洗脫開(kāi)始時(shí)含b流動(dòng)相20X(體積)，32min時(shí)含b流動(dòng)相84X(體積)，33min時(shí)含b流動(dòng)相100X(體積)。所有試劑均為分析純。色譜柱LUNAC18(5ym，4.6mmX150mm);保護(hù)柱AglientSB-C18(5ym，12.5X4.6mm);柱流速lmL/min;柱溫30°C;進(jìn)樣量20yL。熒光檢測(cè)器分析條件由于不同的酚類化合物有其各自不同的最佳激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng)，所以按下表設(shè)置的熒光檢測(cè)器程序波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，可使各酚類化合物獲得各自的最佳響應(yīng)值。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>采用上述色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，即可對(duì)巻煙主流煙氣中間一甲酚和對(duì)一甲酚異構(gòu)體的含量進(jìn)行分離測(cè)定，同時(shí)還不會(huì)影響鄰苯二酚、間苯二酚、對(duì)苯二酚，苯酚和鄰甲酚的分離測(cè)定權(quán)利要求1.卷煙主流煙氣中有害酚的分離檢測(cè)方法，包括主流煙氣的捕集、煙氣樣品的制備和高效液相色譜檢測(cè)，其特征在于在高效液相色譜檢測(cè)的流動(dòng)相中添加β-環(huán)糊精。2.按照權(quán)利要求l所述巻煙主流煙氣中有害酚的分離檢測(cè)方法，其特征在于13-環(huán)糊精在高效液相色譜流動(dòng)相中的濃度為58g/1。3.按照權(quán)利要求2所述巻煙主流煙氣中有害酚的分離檢測(cè)方法，其特征在于13-環(huán)糊精在高效液相色譜流動(dòng)相中的濃度為6g/1。4.按照權(quán)利要求1一3任一所述巻煙主流煙氣中有害酚的分離檢測(cè)方法，其特征在于高效液相色譜檢測(cè)的檢測(cè)條件為色譜柱L皿a-C18柱；流動(dòng)相(a)冰醋酸水=1:99，添加{3-環(huán)糊精，(b)冰醋酸乙腈水=1:30:69，添加{3-環(huán)糊精；梯度洗脫流動(dòng)相設(shè)置開(kāi)始時(shí)含b流動(dòng)相20X(體積)，32min時(shí)含b流動(dòng)相84X(體積)，33min時(shí)含b流動(dòng)相100X(體積)；柱流速lml/min;柱溫3Q。C;進(jìn)樣量20yl。全文摘要本發(fā)明提供了一種卷煙主流煙氣中有害酚的分離檢測(cè)方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)中采用高效液相色譜法進(jìn)行卷煙主流煙氣中有害酚的檢測(cè)時(shí)，只能測(cè)定間-甲酚和對(duì)-甲酚的混合含量的缺陷，在高效液相色譜的流動(dòng)相中添加一定量的β-環(huán)糊精即可解決此問(wèn)題，在成功的對(duì)間-甲酚和對(duì)-甲酚異構(gòu)體進(jìn)行分離檢測(cè)的同時(shí)，還不會(huì)影響鄰苯二酚、間苯二酚、對(duì)苯二酚，苯酚和鄰甲酚含量的分離測(cè)定，這種方法可望應(yīng)用于卷煙產(chǎn)品有害酚類物質(zhì)的日常檢測(cè)中。文檔編號(hào)G01N1/22GK101592638SQ20081030186公開(kāi)日2009年12月2日申請(qǐng)日期2008年5月30日優(yōu)先權(quán)日2008年5月30日發(fā)明者劉鐘祥,靜周,婕張,彭黔榮,敏楊,蔡元青,謝建玲,賴東輝申請(qǐng)人:貴州中煙工業(yè)公司;貴州大學(xué)