專利名稱：一種同時檢測黃曲霉毒素b1和桔霉素的檢測卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及檢測黃曲霉毒素B1和桔霉素的檢測器具，特別是一種同時 檢測黃曲霉毒素Bl和桔霉素的檢測卡。
技術(shù)背景
黃曲霉毒素(anatoxins)是由生長在食物及飼料中的黃曲霉菌、曲霉菌 等代謝產(chǎn)生的一組化學結(jié)構(gòu)類似的真菌毒素。在天然污染的食品中以B1最多見， 毒性最強。許多國家在玉米、花生及花生油、花生餅、花生醬、棉籽餅、山核 桃、無花果、榛子、可可豆、杏仁、奶粉、牛奶、水牛奶、酸奶、奶酪、大米 等都曾查出黃曲霉毒素。
黃曲霉毒素已被證明對動物的肝臟組織和器官具有很大的危害，急性中毒 表現(xiàn)為發(fā)熱、嘔吐、食欲不振、黃疸，嚴重者出現(xiàn)腹水、下肢浮腫、肝大、脾 大，常發(fā)生突然死亡。黃曲霉毒素對許多動物有強烈的致癌性，以肝癌為主。 1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機構(gòu)劃定為1類致癌物，是 一種毒性極強的劇毒物質(zhì)。我國各種主要食品中黃曲霉毒素B1允許含量如下 玉米、花生、花生油、堅果和干果(核桃、杏仁)、玉米及花生仁制品不得超過 20ppb。大米、其它食用油(香油、菜子油、大豆油、葵花油、胡麻油、茶油、 麻油、米糠油、棉籽油)不得超過10ppb。其它糧食(麥類、面粉、薯干)、發(fā) 酵食品(醬油、食用醋、豆豉、腐乳制品)不得超過5ppb。
桔霉素(citrinin)是由一種青霉、曲霉、紅曲霉等代謝產(chǎn)生的毒素。桔霉 素是首先被分離和鑒別的真菌毒素之一，因表現(xiàn)出一定的抗菌活性而被認為是 一種抗生素，但后來發(fā)現(xiàn)其對畜禽有毒性，具有腎毒性，還可致畸、致癌和誘 發(fā)基因突變，桔霉素的存在己成為我國功能性紅曲應(yīng)用和出口的瓶頸。當動物和人食入含有桔霉素的食物后，可引起腎臟腫大、尿量增多、腎小管擴張和上
皮細胞變性壞死等癥狀，小鼠口服半數(shù)致死量(LD50)為110 mg/kg。發(fā)霉的 詞料、谷物、紅曲及其相關(guān)產(chǎn)品是我國被桔霉素污染的主要食物。由于被桔霉 素污染后，食物外觀上沒有明顯特征，其在食物中的含量也比較低，因此， 選擇準確、靈敏、快速的桔霉素檢測方法是國內(nèi)外很多研究人員努力的方向。 桔霉素是溫暖地區(qū)最重要的倉貯毒素，主要污染谷物、豆類、麥類及玉米。
目前，現(xiàn)有技術(shù)對于黃曲霉毒素B1和桔霉素的檢測主要依賴色譜和質(zhì)譜技 術(shù)，以及酶免疫檢測試劑盒，也有單獨檢測黃曲霉毒素B1的檢測卡，但到目前 為止，沒有同時檢測這兩種物質(zhì)的檢測器具。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型的目的在于提供一種能同時檢測黃曲霉毒素Bl和桔 霉素的檢測器具，克服現(xiàn)有技術(shù)只能逐一單獨檢查的缺陷。
本實用新型的技術(shù)方案是一種同時檢測黃曲霉毒素Bl和桔霉素的檢測卡。 黃曲霉毒素B1和桔霉素檢測卡，它是在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼內(nèi)設(shè)置測 試條，檢測卡外殼表面有檢測窗孔和加樣孔，其特征在于測試條是由支承背板 上粘貼四種元件組成支承背板中部粘貼硝酸纖維素膜，支承背板一端部上粘 貼吸水膜，另一端部上粘貼樣品墊，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸 纖維素膜一端搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一 段膠體金膜，膠體金膜是含抗黃曲霉毒素B1和抗桔霉素單克隆抗體或多克隆抗 體膠體金標記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上橫向有三條間隔開的顯示印跡 帶， 一條是含黃曲霉毒素B1蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶，另一條是含桔霉素蛋白質(zhì) 偶聯(lián)物的檢測帶，第三條是質(zhì)孔帶，含抗兔抗體或抗鼠抗體；測試條置入檢測 卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。
采用上述黃曲霉毒素B1和桔霉素檢測卡，檢測樣品可以是大米、玉米、小麥、大豆、花生等糧食作物和加工的食品、食用油、以及發(fā)酵食品、嬰兒代乳 食品、飼料原料、配合伺料、中藥原料和中成藥等樣品。
樣品的處理方法是取1克粉碎的固態(tài)樣品或液態(tài)樣品，加入含有3毫升
樣品抽提液的試管中，震蕩混合反應(yīng)10分鐘。靜置5分鐘后，輕輕吸取上清液 350ul,加入樣品稀釋液，混合后用于測定。
本實用新型的優(yōu)點是能同時檢測出大米、玉米、小麥、大豆、花生等糧食 作物和加工的食品、食用油、以及發(fā)酵食品、嬰兒代乳食品、飼料原料、配合 詞料、中藥原料和中成藥等樣品中含有的黃曲霉毒素B1和桔霉素，且節(jié)省檢測 費用，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結(jié)果準確。


圖1是黃曲霉毒素Bl和桔霉素檢測卡外殼及測試條在外殼內(nèi)的安置圖。
圖2是黃曲霉毒素Bl和桔霉素檢測卡的檢測試條結(jié)構(gòu)示意圖。
圖3是檢測試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡帶示意圖。
本實用新型結(jié)合具體實施例參見附圖進一步說明如下
一種黃曲霉毒素Bl和桔霉素檢測卡，它是在檢測卡外殼1中設(shè)置測試條2， 檢測卡外殼1的結(jié)構(gòu)及測試條2的設(shè)置參見附圖1，檢測卡外殼1為長條扁平薄 殼狀外殼，長7cm，寬2cm，厚0. 5cm，薄殼壁厚0. lcm，由工程塑料制成。檢 測卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測卡外殼1殼蓋上有檢測窗孔3 和加樣孔4。測試條2放置在檢測卡外殼1的殼座內(nèi)。
測試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長約6.0cm，片寬約0.4cm，厚度小于 2.5mm。測試條2是多層結(jié)構(gòu)底層是支承背板5,為聚氯乙烯塑料薄片，厚約 0.5mm，長6.0cm，寬0. 4cm;支承背板5中部粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素 膜厚0.5咖，長2—2.5cm，寬0. 4cm。硝酸纖維素膜6上有三條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見附圖3，三條顯示印跡中， 一條是檢測帶IO，含黃曲霉毒素B1 偶聯(lián)物，另一條是檢測帶ll，含桔霉素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，第三條是質(zhì)孔帶12，含 抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背板5 —端部上粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部 上粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端 搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金 膜7，膠體金膜7是含抗黃曲霉毒素Bl和抗桔霉素單克隆抗體或多克隆抗體膠 體金標記物的玻璃纖維膜。膠體金膜7厚0. 5—0. 8mm，長0. 5—0. 6cm,寬0. 4cm。 樣品墊8厚0. 5—0. 8腿，長2cm，寬0. 4cm。吸水膜9厚0. 5—0. 8咖，長1. 6 一2cm，寬0. 4cm。膠體金膜7、樣品墊8及吸水膜9與硝酸纖維素膜6搭接長 度為0. l—O. 2cm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。
本實用新型黃曲霉毒素B1和桔霉素檢測卡用于檢測大米、玉米、小麥、大 豆、花生等糧食作物和加工的食品、食用油、以及發(fā)酵食品、嬰兒代乳食品、 飼料原料、配合飼料、中藥原料和中成藥等樣品中的黃曲霉毒素B1和桔霉素。
樣品的處理方法是取1克粉碎的固態(tài)樣品或液態(tài)樣品，加入含有3毫升 樣品抽提液的試管中，震蕩混合反應(yīng)10分鐘。靜置5分鐘后，輕輕吸取上清液 350ul，加入樣品稀釋液，混合后用于測定。
使用黃曲霉毒素B1和桔霉素檢測卡進行檢測時，先將待檢測的樣品液從加 樣孔4中滴注入黃曲霉毒素Bl和桔霉素的測試條2的樣品墊8，由于虹吸作用 原理，帶動待檢測的樣品液及膠體金膜7所含的抗黃曲霉毒素Bl和桔霉素單克 隆或多克隆抗體膠體金標記物一起向硝酸纖維素膜6擴散，5—10分鐘內(nèi)觀察結(jié) 果。
檢測卡的主要反應(yīng)是免疫學的抗原和抗體反應(yīng)，在硝酸纖維素膜上遷移的 膠體金標記的抗體，在測試帶上分別與含黃曲霉毒素B1蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、桔霉素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，以及質(zhì)孔帶抗兔抗體或抗鼠抗體反應(yīng)，形成棕紅色條帶。若樣
品中有相應(yīng)的待檢黃曲霉毒素Bl和桔霉素都高于允許值，當樣品加入后即與相 應(yīng)的抗體發(fā)生反應(yīng)，而不會與相應(yīng)的檢測帶所含的黃曲霉毒素B1蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、 桔霉素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物反應(yīng)，從而不顯色。主要反應(yīng)的結(jié)果有以下5種情況
1、 如果顯示檢測帶IO、 11和質(zhì)孔帶12同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測 結(jié)果為陰性，說明被檢測樣品中黃曲霉毒素Bl和桔霉素低于允許值。
2、 反之，檢測帶10、 11不顯示顏色，只有質(zhì)孔帶12同時顯現(xiàn)棕紅色印跡， 檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中黃曲霉毒素B1和桔霉素都高于允許值。
3、 如果檢測帶10不顯示顏色，檢測帶11和質(zhì)孔帶12同時顯現(xiàn)棕紅色印 跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中黃曲霉毒素B1高于允許值，而桔霉素 低于允許值。
4、 如果檢測帶11不顯示顏色，檢測帶10和質(zhì)孔帶12同時顯現(xiàn)棕紅色印 跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中桔霉素高于允許值，而黃曲霉毒素Bl 低于允許值。
5、 如果檢測帶IO、 11和質(zhì)孔帶12均不顯色，則表明檢測試條失效。
權(quán)利要求1、一種同時檢測黃曲霉毒素B1和桔霉素的檢測卡，它是在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼內(nèi)設(shè)置測試條，檢測卡外殼表面有檢測窗孔和加樣孔，其特征在于測試條是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，在支承背板上粘貼四種元件組成支承背板中部粘貼硝酸纖維素膜，支承背板一端部上粘貼吸水膜，另一端部上粘貼樣品墊，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜一端搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜，膠體金膜是含抗黃曲霉毒素B1和抗桔霉素單克隆抗體或多克隆抗體膠體金標記物的玻璃纖維膜；硝酸纖維素膜上橫向有三條間隔開的顯示印跡帶一條是含黃曲霉毒素B1蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶，另一條是含桔霉素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶，第三條是質(zhì)孔帶，含抗兔抗體或抗鼠抗體；測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。
專利摘要一種同時檢測黃曲霉毒素B1和桔霉素的檢測卡，外殼內(nèi)有測試條，測試條由支承背板中部粘貼硝酸纖維素膜，兩端部上分別粘貼吸水膜和樣品墊，其內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜一端搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，之間夾置粘貼一段膠體金膜，它是含抗黃曲霉毒素B1和抗桔霉素單克隆抗體或多克隆抗體膠體金標記物的玻璃纖維膜；硝酸纖維素膜上橫向有一條含黃曲霉毒素B1蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶，一條含桔霉素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶，一條含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)孔帶，樣品墊與硝酸纖維素膜分別正對外殼上的加樣孔與檢測窗孔。本實用新型的優(yōu)點是能同時檢測出黃曲霉毒素B1和桔霉素，檢測快速、方便、靈敏、準確，且節(jié)省費用。
文檔編號G01N33/577GK201289485SQ20082015924
公開日2009年8月12日 申請日期2008年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月17日
發(fā)明者堅 周 申請人:堅 周