專利名稱：：涉及細(xì)胞表面糖基化作用的方法涉及細(xì)胞表面糖基化作用的方法相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求2007年4月16日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)60/923,655的優(yōu)先權(quán)，其全部?jī)?nèi)容通過引用結(jié)合在此。背景糖蛋白的糖基化作用模式經(jīng)常在該糖蛋白的功能中發(fā)揮重要的作用。僅給出一些實(shí)例，糖蛋白的糖基化作用模式會(huì)影響其正確地折疊的能力、其穩(wěn)定性(例如，對(duì)蛋白質(zhì)水解和/或其他的降解的耐受性)、催化活性、藥效學(xué)和/或藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性、和/或糖蛋白與其他分子適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行相互作用的能力。可替代地或額外地，糖蛋白的糖基化作用模式可以影響這種糖蛋白的傳送和靶向。例如，糖蛋白的糖基化作用模式會(huì)影響該糖蛋白是否仍然在細(xì)胞內(nèi)(包括，例如該糖蛋白正確地靶向適當(dāng)?shù)膩喖?xì)胞區(qū)室或多個(gè)區(qū)室)，該糖蛋白是否會(huì)是膜結(jié)合的和/或該糖蛋白是否會(huì)從細(xì)胞中分泌出來。為此，重要的是能夠?qū)μ堑鞍滋腔饔媚Ｊ竭M(jìn)行鑒定和/或表征。概述本披露部分地基于細(xì)胞表面聚糖可以提供有關(guān)該細(xì)胞的狀態(tài)的信息的認(rèn)識(shí)，例如在由該細(xì)胞所產(chǎn)生的蛋白的糖基化作用中所反映。具體而言，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表面聚糖可以提供有關(guān)由該細(xì)胞所產(chǎn)生(并且可任選的是分泌)的一種糖蛋白的糖基化作用狀況的信息。因此，不必將一種靶蛋白從一種細(xì)胞分離出來以便獲得有關(guān)其糖基化作用狀況的信息。相反，可對(duì)在該細(xì)胞表面上的一種或多種蛋白或脂類的糖基化作用進(jìn)行評(píng)價(jià)以間接地揭示一種靶蛋白的糖基化作用的一個(gè)或多個(gè)方面。這可以簡(jiǎn)化并且促進(jìn)靶蛋白糖基化作用的分析。除其他事項(xiàng)之外，本披露提供了一些方法，其中在產(chǎn)生至少一種靶糖蛋白的細(xì)胞上對(duì)這些細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行分析。細(xì)胞表面聚糖的檢測(cè)用來作為針對(duì)在耙糖蛋白上的糖基化作用的檢測(cè)的一種代用品(proxy)(即，這些檢測(cè)的聚糖不在靶糖蛋白上或來自靶糖蛋白)。在多個(gè)實(shí)施方案中，這種靶糖蛋白是一種非細(xì)胞表面糖蛋白。例如，這種靶糖蛋白是可溶的或從細(xì)胞中分泌的。在此類實(shí)施方案中，細(xì)胞表面聚糖的檢測(cè)作為對(duì)于在已產(chǎn)生的非細(xì)胞表面糖蛋白上的特定的聚糖結(jié)構(gòu)的測(cè)定的一種代用品(proxy)。在某些實(shí)施方案中，本披露提供了多種方法，其中產(chǎn)生一種所感興趣的糖蛋白(例如，一種非細(xì)胞表面糖蛋白或正在直接對(duì)與它相關(guān)聯(lián)的聚糖進(jìn)行分析的糖蛋白之外的任何其他的糖蛋白)的細(xì)胞是在允許所感興趣的糖蛋白進(jìn)行表達(dá)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)的，并接著與一個(gè)或多個(gè)試劑相接觸，這些試劑檢測(cè)了一種細(xì)胞表面聚糖(它不是所感興趣的糖蛋白的一部分)的糖基化作用。典型地，此類方法將不包括一個(gè)分離所感興趣的糖蛋白的步驟。此外，在多個(gè)實(shí)施方案中，這些步驟不包括所感興趣的糖蛋白的任何一種直接的分析。因此，在此類實(shí)施方案中，這種細(xì)胞表面聚糖的分析作為一種代用品而使用以便于對(duì)該靶糖蛋白的糖基化作用進(jìn)行評(píng)定。在本披露的一些實(shí)施方案中，這種有關(guān)的細(xì)胞是一種哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如CHO細(xì)胞。在本披露的一些實(shí)施方案中，這種靶糖蛋白是一種治療性糖蛋白；在一些實(shí)施方案中，這種靶糖蛋白包括一種抗體或抗體片段。在一些方面，本披露提供了一些方法，這些方法通過對(duì)一種細(xì)胞的一種細(xì)胞表面聚糖(例如，在該細(xì)胞的表面的一種糖蛋白或糖脂上的一種細(xì)胞表面聚糖)的一種特性進(jìn)行評(píng)價(jià)來對(duì)由該細(xì)胞所產(chǎn)生的一種糖蛋白的糖基化作用性質(zhì)進(jìn)行鑒定。在其他方面，細(xì)胞表面聚糖的特性能更普遍地與該細(xì)胞的狀況相關(guān)，例如與該細(xì)胞的生存力、形態(tài)學(xué)、密度、或其他可能受到不同的方法的條件(例如在用于培養(yǎng)該細(xì)胞的方法中、例如在從一種細(xì)胞中產(chǎn)生一種糖蛋白產(chǎn)物的方法中)所影響的特性相關(guān)。因此，本披露的實(shí)施方案可在多種不同的情況下進(jìn)行使用，例如除其他事項(xiàng)之外，可以對(duì)細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行評(píng)價(jià)以便(a)評(píng)定或預(yù)測(cè)一種糖蛋白產(chǎn)物(例如，一種治療性糖蛋白產(chǎn)物)的糖基化作用的特征，(b)在用于產(chǎn)生這種糖蛋白產(chǎn)物的一種方法的一個(gè)或多個(gè)步驟的過程中對(duì)糖蛋白產(chǎn)品的質(zhì)量(例如聚糖結(jié)構(gòu))進(jìn)行監(jiān)測(cè)，(C)檢測(cè)在用于產(chǎn)生一種糖蛋白產(chǎn)物的一種方法中在多個(gè)方法條件方面的變化，(d)提供有關(guān)(例如比較)一種糖蛋白制品的不同批次的信息，(e)在用于產(chǎn)生這種糖蛋白產(chǎn)物的一種方法的不同步驟的過程中提供有關(guān)(例如比較)細(xì)胞狀況或糖蛋白產(chǎn)物狀況的信息，(f)在用于產(chǎn)生這種糖蛋白產(chǎn)物的多種方法的相同步驟的過程中提供有關(guān)(例如比較)細(xì)胞狀況或糖蛋白產(chǎn)物狀況的信息；和/或(g)提供有關(guān)(例如比較)由在相似或相同的條件下生長(zhǎng)的兩種或更多細(xì)胞或細(xì)胞群體(例如，源自從一種原始細(xì)胞群體中選擇出來的單一細(xì)胞的克隆群體)所產(chǎn)生的一種糖蛋白產(chǎn)物的糖基化作用的特征的信息。附圖簡(jiǎn)要說明圖1示出了在具有或者沒有升高的葡糖胺補(bǔ)充物的細(xì)胞培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的已表達(dá)的、非細(xì)胞表面抗體糖蛋白上的核心巖藻糖基化作用的水平。圖2示出了在具有或者沒有升高的葡糖胺補(bǔ)充物的細(xì)胞培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的細(xì)胞表面糖蛋白上的核心巖藻糖基化作用的水平。圖3A至圖3B示出了在對(duì)照培養(yǎng)基中(圖3A)或在包含一種升高的葡糖胺濃度的培養(yǎng)基中(圖3B)生長(zhǎng)的細(xì)胞表面糖蛋白的聚糖結(jié)構(gòu)。圖4示出了已表達(dá)的(非細(xì)胞表面)重組抗體以及細(xì)胞表面糖蛋白的唾液酸水平的液相色譜法分析。圖5示出了在具有或者沒有一種升高的N-乙酰甘露糖胺濃度的細(xì)胞培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的已表達(dá)的抗體糖蛋白上的唾液酸水平，如通過DMB進(jìn)行標(biāo)記以及HPLC所測(cè)量。圖6示出了在具有或者沒有一種升高的N-乙酰甘露糖胺濃度的細(xì)胞培養(yǎng)基中的細(xì)胞表面糖蛋白上的唾液酸水平，如通過DMB進(jìn)行標(biāo)記以及HPLC所測(cè)量。圖7示出了在具有或者沒有一種升高的N-乙酰甘露糖胺濃度的細(xì)胞培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的細(xì)胞表面糖蛋白上的唾液酸水平，如通過唾液酸特異的凝集素結(jié)合以及流式細(xì)胞術(shù)所測(cè)量。圖8示出了通過細(xì)胞表面聚糖的陰離子交換色譜法所測(cè)定的細(xì)胞表面唾液酸的含量。中性的(NA2F)、單唾液酸化的(Al)、雙唾液酸化的(A2)、或三唾液酸化的(A3)標(biāo)準(zhǔn)物的遷移顯示在色譜圖的上部。下部的色譜圖展示了來自CHO細(xì)胞的細(xì)胞表面聚糖的代表性數(shù)據(jù)、以及相關(guān)的百分?jǐn)?shù)。定義大約、約、約略如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"大約"、"約"或"約略"當(dāng)施用至一個(gè)或多個(gè)所感興趣的值時(shí)，是指與一個(gè)所指出的參考值相類似的一個(gè)值。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)"大約"、"約"或"約略"是指落在所指出的參考值的以下比例之內(nèi)的數(shù)值的范圍25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、或更小。生物樣本如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"生物樣品"是指由任何活細(xì)胞或生物體排泄或分泌而獲得的任何固體或液體的樣品，包括但不限于組織培養(yǎng)物、生物反應(yīng)器樣品、人或動(dòng)物的組織、植物、水果、蔬菜、單細(xì)胞的微生物(如，細(xì)菌以及酵母)以及多細(xì)胞的生物體。例如，生物樣本可以是一種生物液體，這種生物液體獲自例如，血液、血漿、血清、尿液、膽汁、精液、腦脊液、房水或玻璃體液、或任何一種身體的分泌物、一種滲出液、一種溢泌物(例如，獲自膿腫或任何其他的感染或炎癥點(diǎn)的液體)、或者獲自關(guān)節(jié)的液體(例如，正常的關(guān)節(jié)或受疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)或膿毒性關(guān)節(jié)炎)影響的關(guān)節(jié))。生物樣品還可以是例如，獲自任何器官或組織(包括活組織檢查或尸體解剖樣本)的一種樣品，可以包括細(xì)胞(不論是原代細(xì)胞或是培養(yǎng)的細(xì)胞)，受任何細(xì)胞、組織或器官、組織培養(yǎng)物限制的培養(yǎng)基。細(xì)胞表面糖蛋白如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"細(xì)胞表面糖蛋白"是指一種糖蛋白，它的至少一部分存在于細(xì)胞的外表面上。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞表面糖蛋白是一種位于細(xì)胞表面上的蛋白質(zhì)，這樣這些聚糖結(jié)構(gòu)中至少一個(gè)結(jié)構(gòu)存在于該細(xì)胞的外表面上。細(xì)胞表面聚糖"細(xì)胞表面聚糖"是存在于一個(gè)細(xì)胞的外表面上的一種聚糖。在本披露的多個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞表面聚糖被共價(jià)地連接到作為一種細(xì)胞表面糖蛋白的部分的一個(gè)多肽上。細(xì)胞表面聚糖還可以被連接到細(xì)胞膜的脂類上。相關(guān)如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"相關(guān)"是指兩個(gè)事物之間的一種可預(yù)測(cè)的關(guān)系的建立。在此所說明的實(shí)施方案中，細(xì)胞的表面上的糖基化作用模式(或它的一種特征)與由該細(xì)胞所產(chǎn)生的一種靶結(jié)合糖(例如，糖蛋白)的一種糖基化作用模式(或它的一種特征)相關(guān)。這些相關(guān)的模式(或特征)不必彼此完全相同，只要從一個(gè)可以預(yù)測(cè)出另一個(gè)即可。一旦建立了相關(guān)性，即可以對(duì)其進(jìn)行記錄，例如進(jìn)行書面記錄或能夠以其他方式被附著在一種介質(zhì)或記憶源中(例如，一種電腦可讀的介質(zhì)或計(jì)算機(jī)記憶庫(kù)或磁盤)。然后，相關(guān)的糖基化作用模式(或其特征)的檢測(cè)可涉及參考書面的或附著的記錄、或參考一種證實(shí)相關(guān)性的比較器實(shí)驗(yàn)(comparatorexperiments等等。這種比較器實(shí)驗(yàn)可以與一種糖基化作用模式(或其特征)的評(píng)定同時(shí)進(jìn)行，或可以是一種歷史的或?qū)淼膶?shí)驗(yàn)。聚糖如本領(lǐng)域內(nèi)已知并且在此所使用，"聚糖"是多種糖。聚糖可以是糖殘基的單體或聚合物，但典型地包含至少三個(gè)糖，并且可以是直鏈的或分支的。聚糖可以包括天然的糖殘基(例如，葡萄糖、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰神經(jīng)氨酸、半乳糖、甘露糖、巖藻糖、己糖、阿拉伯糖、核糖、木糖、等等)和/或經(jīng)修飾的糖(例如，2，-氟代核糖、2，-脫氧核糖、磷酸甘露糖、6'磺基N-乙酰葡糖胺、等等)。術(shù)語(yǔ)"聚糖"包括糖殘基的均聚物和雜聚物。術(shù)語(yǔ)"聚糖"還涵蓋了結(jié)合糖的一個(gè)聚糖組分(例如，一種糖蛋白、糖脂、蛋白聚糖、等等的一個(gè)聚糖組分)。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋游離的聚糖，包括從一種結(jié)合糖中已經(jīng)被切割的或由其他方式所釋放的聚糖。聚糖制品如在此所使用的術(shù)語(yǔ)"聚糖制品"是指根據(jù)一個(gè)具體的產(chǎn)生方法而獲得的一組聚糖。在一些實(shí)施方案中，聚糖制品是指從一種糖蛋白制品(見以下糖蛋白制品的定義)中獲得的一組聚糖。結(jié)合糖如在此所使用的術(shù)語(yǔ)"結(jié)合糖"涵蓋了以下所有分子，其中至少一個(gè)糖部分被共價(jià)地連接到至少一個(gè)其他部分上。該術(shù)語(yǔ)準(zhǔn)確地涵蓋了所有具有共價(jià)附連的糖部分的生物分子，包括例如N-連接的糖蛋白、O-連接的糖蛋白、糖脂、蛋白聚糖、等等。糖形在此所使用的術(shù)語(yǔ)"糖形"是指結(jié)合糖的一種具體形式。即，當(dāng)相同的主鏈部分(它作為一種結(jié)合糖的部分)(例如多肽、脂類、等等)具有被連接到不同的聚糖或聚糖的不同組上的潛在性時(shí)，于是結(jié)合糖(即，其中該主鏈被連接到具體的一組聚糖上)的每一種不同形式即被稱為一種"糖形"。糖脂如在此所使用的術(shù)語(yǔ)"糖脂"是指包含一個(gè)或多個(gè)共價(jià)連接的糖部分(即，聚糖)的一種脂類。這個(gè)或這些糖部分可以是處于單糖、二糖、寡糖、和/或多糖的形式。這種或這些糖部分可以包括糖殘基的一個(gè)單一的無(wú)分支的鏈或者可以由一個(gè)或多個(gè)分支的鏈所組成。在某些實(shí)施方案中，這些糖部分可以包括硫酸根和/或磷酸根基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，這些糖蛋白包含O-連接的糖部分；在一些實(shí)施方案中，這些糖蛋白包含N-連接的糖部分。糖蛋白如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"糖蛋白"是指一種蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)包含了共價(jià)連接至一個(gè)或多個(gè)糖部分(即，聚糖)上的一個(gè)肽主鏈。如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所理解，這種肽主鏈典型地包括具有多種氨基酸殘基的一個(gè)直鏈。在某些實(shí)施方案中，這種肽主鏈跨越了細(xì)胞膜，這樣它包括一個(gè)跨膜部分以及一個(gè)細(xì)胞外部分。在某些實(shí)施方案中，跨過了細(xì)胞膜的糖蛋白的肽主鏈包括了細(xì)胞內(nèi)部分，跨膜部分、以及細(xì)胞外部分。在某些實(shí)施方案中，本披露的方法包括使用一種蛋白酶來切割一種細(xì)胞表面糖蛋白以釋解出(liberate)該糖蛋白的細(xì)胞外部分，或它的一部分，其中這種暴露基本上不會(huì)使細(xì)胞膜破裂。這個(gè)或這些糖部分(moiety)可以是處于單糖、二糖、寡糖、和/或多糖的形式。這個(gè)或這些糖部分可以包括糖殘基的一個(gè)單一的無(wú)分支的鏈或者可以包括一個(gè)或多個(gè)分支的鏈。在某些實(shí)施方案中，這些糖部分可以包括硫酸根和/或磷酸根基團(tuán)?？商娲鼗蝾~外地，這些糖部分可以包括乙?；?、羥乙酰基、丙基或其他垸基的修飾。在某些實(shí)施方案中，這些糖蛋白包含O-連接的糖部分；在一些實(shí)施方案中，這些糖蛋白包含N-連接的糖部分。在某些實(shí)施方案中，在此所披露的方法包括對(duì)以下項(xiàng)中任何一項(xiàng)或全部進(jìn)行分析的一個(gè)步驟細(xì)胞表面糖蛋白、己釋解出的細(xì)胞表面糖蛋白的碎片(例如，糖肽)、附連到細(xì)胞表面糖蛋白上的細(xì)胞表面聚糖、細(xì)胞表面糖蛋白的肽主鏈；此類糖蛋白、聚糖和/或肽主鏈的碎片，以及它們的組合。糖蛋白制品如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"糖蛋白制品"是指一組單個(gè)的糖蛋白分子，該組中的每一個(gè)包括具有一個(gè)特定的氨基酸序列(這種氨基酸序列包括至少一個(gè)糖基化位點(diǎn))的一個(gè)多肽以及被共價(jià)地附連到該至少一個(gè)糖基化位點(diǎn)上的至少一種聚糖。在糖蛋白制品中的一種特定的糖蛋白的單個(gè)的分子典型地具有相同的氨基酸序列，但是可能在該至少一個(gè)糖基化位點(diǎn)的占用方面有所不同和/或在被連接到該至少一個(gè)糖基化位點(diǎn)上的聚糖的身份方面所有不同。即，一種糖蛋白制品可以僅包括一種特定的糖蛋白的一種單一的糖形，但是更典型地包括多種糖形。相同的糖蛋白的不同制品可以在所存在的糖形的身份方面(例如，在一種制品中存在的糖形可能是另一種制品所缺少的)和/或在不同糖形的相對(duì)量值方面有所不同。糖苷酶如在此所使用的術(shù)語(yǔ)"糖苷酶"是指一種試劑，該試劑切割了位于聚糖中的多種順序的糖之間或糖與主鏈部分之間(例如，在糖蛋白的糖與肽主鏈之間)的一個(gè)共價(jià)鍵。在一些實(shí)施方案中，糖苷酶是一種酶。在某些實(shí)施方案中，糖苷酶是含有一個(gè)或多個(gè)多肽鏈的一種蛋白質(zhì)(例如，一種蛋白質(zhì)酶(proteinenzyme))。在某些實(shí)施方案中，糖苷酶是一種化學(xué)切割試劑。糖基化作用模式如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"糖基化作用模式"是指在一個(gè)具體的樣品中存在的一組聚糖結(jié)構(gòu)。例如，一個(gè)特定的結(jié)合糖(例如，糖蛋白)或一組結(jié)合糖(例如，糖蛋白的組合)將具有一種糖基化作用模式。在一些實(shí)施方案中，提及的是細(xì)胞表面聚糖的糖基化作用模式，或者一種"表面糖基化作用模式如在此使用，"表面糖基化作用模式"可以指存在于一個(gè)單一的所感興趣的細(xì)胞表面糖蛋白和/或糖脂的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的聚糖的模式(或"糖基化作用模式")。額外地或者可替代地，"表面糖基化作用模式"可以指存在于多種細(xì)胞表面糖蛋白和/或糖脂的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的聚糖的模式(或"糖基化作用模式")。在某些實(shí)施方案中，"表面糖基化作用模式"說明了存在于細(xì)胞表面糖蛋白和/或糖脂的全部補(bǔ)體(complement)的聚糖的模式(或"糖基化作用模式")?；谏舷挛?，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)容易地理解"表面糖基化作用模式"是否是指一種單一的細(xì)胞表面糖蛋白和/或糖脂的糖基化作用模式或是指多種細(xì)胞表面糖蛋白和/或糖脂的糖基化作用模式。糖基化作用模式的特征可以是，例如聚糖的身份、單個(gè)的聚糖或特定類型的聚糖的量(絕對(duì)的或相對(duì)的)、糖基化位點(diǎn)的占用度、等等，或此類參數(shù)的組合。N-聚糖如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"N-聚糖"是指多種糖的一個(gè)聚合物，該聚合物己經(jīng)從一種結(jié)合糖中釋放，但是之前通過一個(gè)氮連接(參見以下N-連接的聚糖的定義)被連接到該結(jié)合糖上。N-連接的聚糖N-連接的聚糖是通過一個(gè)氮連接而連接到一種結(jié)合糖上的聚糖。存在著不同分類的N-連接的聚糖，但是它典型地基于共同的核心戊糖(Man)3(GlcNAc)(GlcNAc)。O-聚糖如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"O-聚糖"是指多種糖的一個(gè)聚合物，該聚合物已經(jīng)從一種結(jié)合糖中釋放，但是之前通過一個(gè)氧連接(參見以下O-連接的聚糖的定義)被連接到該結(jié)合糖上。O-連接的聚糖O-連接的聚糖是通過一個(gè)氧連接而連接到一種結(jié)合糖上的聚糖。O-連接的聚糖典型地通過N-乙?；?l^半乳糖胺(GalNAc)而被附連至糖蛋白上或者通過N-乙酰基-D-葡糖胺(GlcNAc)而被附連至L-絲氨酸(Ser)或L-蘇氨酸(Thr)的羥基基團(tuán)上。一些O-連接的聚糖還具有多種修飾作用，如乙?；饔煤土蛩峄饔?。在一些例子中，O-連接的聚糖附連到糖蛋白，通過巖藻糖或甘露糖到L-絲氨酸(Ser)或L-蘇氨酸(Thr)的羥基基團(tuán)上。磷酸化作用如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"磷酸化作用"是指將一個(gè)或多個(gè)磷酸根基團(tuán)共價(jià)地加至一個(gè)分子(例如，一種聚糖)中的過程。蛋白酶如在此所使用的術(shù)語(yǔ)"蛋白酶"是指一種試劑，該試劑切割了位于一個(gè)多肽鏈中的多個(gè)順序的氨基酸之間的一個(gè)肽鍵。在一些實(shí)施方案中，蛋白酶是一種酶(即，一種蛋白水解酶)。在某些實(shí)施方案中，蛋白酶是一種蛋白質(zhì)(例如，一種蛋白質(zhì)酶)，該蛋白質(zhì)包括一個(gè)或多個(gè)多肽鏈。在某些實(shí)施方案中，蛋白酶是一種化學(xué)切割試劑。蛋白質(zhì)總體而言，"蛋白質(zhì)"是一種多肽(即，通過肽鍵彼此相連的一串至少兩個(gè)的氨基酸)。蛋白質(zhì)可以包括除氨基酸之外的部分(例如，可以是糖蛋白)和/或還可以另行進(jìn)行處理或修飾。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，"蛋白質(zhì)"可以是由一個(gè)細(xì)胞(具有或沒有一種信號(hào)序列)所產(chǎn)生的一種完整的多肽鏈，或者可以是它的一個(gè)功能性部分。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步地理解，有時(shí)蛋白質(zhì)可包括多于一種的多肽鏈，例如通過一個(gè)或多個(gè)二硫鍵相連接或通過其他方式相締合。唾液酸在此所使用，術(shù)語(yǔ)"唾液酸"是針對(duì)神經(jīng)氨酸的N-或O-取代的衍生物的一個(gè)統(tǒng)稱，是一種九碳單糖。神經(jīng)氨酸的氨基基團(tuán)典型地帶有唾液酸中的乙?；蛄u乙?；幕鶊F(tuán)。唾液酸中存在的羥基取代基可以通過乙酰化作用、甲基化作用、硫酸化作用、以及磷酸化作用進(jìn)行修飾。主導(dǎo)性唾液酸是N-乙酰神經(jīng)氨酸(Neu5Ac)。唾液酸向聚糖傳遞一個(gè)負(fù)電荷，這是因?yàn)轸驶鶊F(tuán)在生理pH下易于解離出一個(gè)質(zhì)子。示例性的去質(zhì)子的唾液酸顯示如下基本上如在此所使用，術(shù)語(yǔ)"基本上"是指展示出一個(gè)所感興趣的特征或特性的總體的或接近總體的范圍或程度的定性的狀態(tài)。生物領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，生物以及化學(xué)現(xiàn)象很少(如果存有的話)會(huì)達(dá)到完全和/或進(jìn)行到完全或?qū)崿F(xiàn)或避免一個(gè)絕對(duì)N-乙酰神經(jīng)氨酸(Neu5Ac)神經(jīng)氨酸(Neu)的結(jié)果。因此，術(shù)語(yǔ)"基本上"在此進(jìn)行使用以涵蓋在許多生物以及化學(xué)現(xiàn)象中固有的潛在的完全性的缺失。僅給出一個(gè)具體的實(shí)例，當(dāng)一種處理被說成"基本上"不會(huì)使細(xì)胞膜破裂時(shí)，它意指在處理的過程中以及在處理之后所有的或大部分細(xì)胞膜仍然是完整的，例如這樣細(xì)胞內(nèi)的糖蛋白或糖肽因此不會(huì)從細(xì)胞中釋放。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)"基本上"當(dāng)被施用至未破裂的細(xì)胞膜中時(shí)是指一種狀態(tài)，其中經(jīng)受了一種特定的處理的細(xì)胞的15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、或更少展示出了可測(cè)量的已破裂的細(xì)胞膜。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)"基本上"當(dāng)被施用于未破裂的細(xì)胞膜中是指一種狀態(tài)，其中經(jīng)受了一種特定的處理的多個(gè)細(xì)胞都沒有展示出可測(cè)量的已破裂的細(xì)胞膜。某些優(yōu)選的實(shí)施方案的詳細(xì)說明如在此所說明的，本披露涉及存在于細(xì)胞表面上的聚糖結(jié)構(gòu)的檢測(cè)，其存在、身份、和/或分布(例如，相對(duì)量值)揭示了有關(guān)該細(xì)胞的狀況的信息，例如有關(guān)由這些細(xì)胞產(chǎn)生的一個(gè)或多個(gè)非細(xì)胞表面糖蛋白的糖基化作用狀況和/或特征的信息。S卩，在本披露的一方面，細(xì)胞表面聚糖作為對(duì)于在非細(xì)胞表面糖蛋白上所發(fā)現(xiàn)的聚糖結(jié)構(gòu)和/或糖基化作用模式的測(cè)定的一種代用品。在本披露的一些實(shí)施方案中，這種非細(xì)胞表面糖蛋白是一種治療性糖蛋白。在一些此類的實(shí)施方案中，已經(jīng)對(duì)該細(xì)胞進(jìn)行工程化處理以表達(dá)這種治療性糖蛋白，和/或以預(yù)先確定的水平或在預(yù)先確定的情況下表達(dá)這種治療性蛋白。細(xì)胞表面聚糖許多不同類型的細(xì)胞將它們產(chǎn)生的蛋白質(zhì)和/或脂類中至少一些進(jìn)行糖基化，并且針對(duì)這種糖基化作用存在著幾種不同的機(jī)制。然而，總體而言，寡糖鏈?zhǔn)墙?jīng)由N-連接或者O-連接而被連接至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及高爾基體中的一種多肽鏈(即，一種蛋白)和/或一種脂類上。N-連接的糖基化作用典型地，N-連接的寡糖鏈被加到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的內(nèi)腔中的糖蛋白上(見Alberts等人的MolecularBiologyoftheCell,1994，通過引用結(jié)合在此)。確切地，將一種初始寡糖(典型地是14-糖)加到包含于Asn-X-Ser/Thr的靶共有序列內(nèi)的天冬酰胺殘基的側(cè)鏈的氨基基團(tuán)上，其中X可以是除脯氨酸之外的任何氨基酸。這種初始寡糖的結(jié)構(gòu)為大多數(shù)真核生物所共有，并且包含3個(gè)葡萄糖、9個(gè)甘露糖、以及2個(gè)N-乙酰葡糖胺的殘基。這種初始寡糖鏈通常通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的特異性糖苷酶的酶類進(jìn)行修剪，產(chǎn)生由兩個(gè)N-乙酰葡糖胺以及三個(gè)甘露糖的殘基所組成的一個(gè)短的、分支的核心寡糖。N-聚糖可以再分成三個(gè)獨(dú)特的組，稱為"高甘露糖類型"、"雜合類型"、以及"復(fù)合類型"，其中在所有三個(gè)組中均存在一個(gè)常見的戊糖核心(Man(ocl,6HMan(od,3))-Man((31,4)-GlcpNAc(pi,4)-GlcpNAc(pl，N)-Asn)。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中進(jìn)行最初的處理之后，糖蛋白接著被傳送至高爾基體，在高爾基體中可發(fā)生進(jìn)一步的處理。如果該聚糖在完全地被剪切成核心戊糖結(jié)構(gòu)之前被轉(zhuǎn)入到高爾基體，則它導(dǎo)致了一種"高甘露糖聚糖"。額外地或可替代地，一個(gè)或多個(gè)N-乙酰葡糖胺的單糖單元可以被加到核心甘露糖的亞單元中以便形成一個(gè)"復(fù)合聚糖"。半乳糖可以被加到N-乙酰葡糖胺的亞單元中，并且唾液酸的亞單元可以被加到半乳糖的亞單元中，產(chǎn)生用唾液酸、半乳糖、或N-乙酰葡糖胺的殘基中的任何一個(gè)進(jìn)行終止的鏈。額外地，一種巖藻糖殘基可以被加到核心寡糖的一個(gè)N-乙酰葡糖胺殘基中。這些加入物各自通過特異性的糖基轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行催化。'雜合聚糖'包含高甘露糖以及復(fù)合聚糖的特征。例如，雜合聚糖的一個(gè)支鏈可以主要地或?qū)ｉT地包括甘露糖殘基，而另一個(gè)支鏈可以包括N-乙酰葡糖胺、唾液酸、半乳糖、和/或巖藻糖的糖類。O-連接的糖基化作用O-連接的寡糖鏈被加至多肽鏈中的特異的絲氨酸或蘇氨酸的殘基上。第一糖殘基的轉(zhuǎn)運(yùn)(在許多情況下是一種N-乙酰半乳糖胺)典型地在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中開始并且在高爾基體中完成。這些O-連接的低聚糖的殘基是一次添加一個(gè)的并且每個(gè)殘基的加入是由一種特異的酶進(jìn)行催化的。與N-連接的糖基化作用相反，針對(duì)O-連接的糖基化作用的氨基酸序列共有區(qū)定義欠佳。靶糖蛋白本披露的技術(shù)可以應(yīng)用于評(píng)定所感興趣的任何非細(xì)胞表面糖蛋白或任何其他的糖蛋白(除了正在直接對(duì)與它相關(guān)聯(lián)的聚糖進(jìn)行分析或由一個(gè)特定的細(xì)胞或多個(gè)細(xì)胞的群體所產(chǎn)生的糖蛋白之外)的糖基化作用的狀態(tài)。所感興趣的非細(xì)胞表面糖蛋白的身份不旨在限定本披露。然而，在大多數(shù)的實(shí)施方案中，已知這種細(xì)胞或這些細(xì)胞能產(chǎn)生一種特定的所感興趣的糖蛋白("靶"糖蛋白)，將對(duì)其糖基化作用狀況進(jìn)行評(píng)定。在多個(gè)實(shí)施方案中，這種所感興趣的靶糖蛋白不是一種由該細(xì)胞自然地產(chǎn)生的糖蛋白；相反，已對(duì)該細(xì)胞進(jìn)行工程化處理來產(chǎn)生它。在一些實(shí)施方案中，這種靶糖蛋白是一種由該細(xì)胞自然地產(chǎn)生的糖蛋白，但是以對(duì)該細(xì)胞進(jìn)行工程化處理以一種升高的水平和/或在預(yù)先確定的情況下(例如，在一種誘導(dǎo)劑、等等的存在下)來產(chǎn)生它。在多個(gè)實(shí)施方案中，靶糖蛋白當(dāng)給予至動(dòng)物(例如，哺乳動(dòng)物(如，人類))時(shí)具有治療性活性。僅給出一些實(shí)例，促紅細(xì)胞生成素、干擾素、血液凝血因子、集落刺激因子、多種抗體，并且某些酶類全部是糖蛋白，這些糖蛋白是目前作為生物藥劑學(xué)試劑在已工程化處理的細(xì)胞系中產(chǎn)生的。在本披露的一些實(shí)施方案中，如在此所說明對(duì)產(chǎn)生這些試劑中的一個(gè)或多個(gè)試劑的細(xì)胞的表面上的聚糖進(jìn)行測(cè)定，以便評(píng)定或監(jiān)測(cè)試劑的糖基化作用。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道出于治療以及其他目的可以進(jìn)行工業(yè)化表達(dá)(例如，在生物反應(yīng)器中生產(chǎn))的其他商業(yè)上相關(guān)的糖蛋白。本披露提供了一些方法用于對(duì)此類商業(yè)上相關(guān)的糖蛋白的糖基化作用模式進(jìn)行監(jiān)測(cè)。代表性的、可商購(gòu)的糖蛋白產(chǎn)物包括，例如<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，此類治療性糖蛋白試劑的糖基化作用模式可以潛在地影響它們的治療特性。本披露提供了一些技術(shù)，這些技術(shù)允許研究者在這些蛋白當(dāng)在細(xì)胞中產(chǎn)生時(shí)對(duì)這些蛋白的糖基化作用進(jìn)行評(píng)定，而不要求將這些蛋白它們自身分離。如以下進(jìn)一步所討論，因此本披露提供了(除其他事項(xiàng)之外)在這些糖蛋白正在被產(chǎn)生時(shí)針對(duì)治療性糖蛋白產(chǎn)物的產(chǎn)品質(zhì)量的實(shí)時(shí)評(píng)定。本領(lǐng)域的普通的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解本披露不局限于在以上所列的糖蛋白上、或確實(shí)在治療性糖蛋白上、或在一種細(xì)胞中已經(jīng)對(duì)這些糖蛋白的表達(dá)進(jìn)行工程化處理(和/或表達(dá)的程度或計(jì)時(shí))的糖蛋白上的糖基化作用的評(píng)定。這些表現(xiàn)僅僅是本披露的某些具體的實(shí)施方案；然而，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解本披露的原則適合于任何一種靶糖蛋白。在細(xì)胞中產(chǎn)生靶糖蛋白本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)容易地理解的是，可以在多種細(xì)胞和/或細(xì)胞系中的任何一種中產(chǎn)生多種糖蛋白，這些糖蛋白的糖基化作用將如在此所說明而被監(jiān)測(cè)。的確，可以利用將它的多種蛋白質(zhì)中的至少一些進(jìn)行糖基化的任何一種細(xì)胞并且使其在允許這種糖基化作用發(fā)生的任何一種情況下進(jìn)行生長(zhǎng)。適宜的細(xì)胞包括但是不局限于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、禽類細(xì)胞、魚細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、植物細(xì)胞、真菌細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞、以及雜交的細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，己經(jīng)對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行(例如，遺傳學(xué)上的和/或化學(xué)的)工程化處理以具有更類似于人類細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)糖基化作用特征。根據(jù)本披露可使用的示例性的哺乳動(dòng)物細(xì)胞包括但是不局限于中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、Madin-Darby犬腎(MDCK)細(xì)胞、幼倉(cāng)鼠腎(babyhamsterkidney)(BHK細(xì)胞)、NS0細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞、MDA-MB-438細(xì)胞、U87細(xì)胞、A172細(xì)胞、HL60細(xì)胞、A549細(xì)胞、SP10細(xì)胞、DOX細(xì)胞、DG44細(xì)胞、HEK293細(xì)胞、SHSY5Y、Jurkat細(xì)胞、BCP-1細(xì)胞、COS細(xì)胞、Vero細(xì)胞、GH3細(xì)胞、9L細(xì)胞、3T3細(xì)胞、MC3T3細(xì)胞、C3H-10T1/2細(xì)胞、NIH-3T3細(xì)胞、以及C6/36細(xì)胞。根據(jù)本披露可使用的示例性的魚細(xì)胞系包括但是不局限于ZF4細(xì)胞、AB9細(xì)胞、GAKS細(xì)胞、OLF-136細(xì)胞、CAEP細(xì)胞、CAF細(xì)胞、OLHE-131細(xì)胞、OLME-104細(xì)胞、ULF-23細(xì)胞、BRF41細(xì)胞、Hepa-El細(xì)胞、Hepa-Tl細(xì)胞、GEM-81細(xì)胞、GEM-199細(xì)胞、GEM-218細(xì)胞、GAKS細(xì)胞、D-ll細(xì)胞、Rl細(xì)胞、RTG-2細(xì)胞、RTO細(xì)胞、以及TPS細(xì)胞。更多的完整覽表可以在FryerandLannan，2005,"Threedecadesoffishcellculture:acurrentlistingofcelllinesderivedfromfishes,"J.TissueCultureMethods,16:87-94中發(fā)現(xiàn)。根據(jù)本披露可使用的示例性的昆蟲細(xì)胞系包括但是不局限于SFM細(xì)胞、SGI細(xì)胞、Sf9細(xì)胞、Schneider細(xì)胞、S2細(xì)胞、T.ni細(xì)胞、SES-MaBr-1細(xì)胞、SES-MaBr-3細(xì)胞、NIAS-MB-25細(xì)胞、NIAS-MaBr-92細(xì)胞、FRI-SpIm-1229細(xì)胞、SES-MaBr-4細(xì)胞、NIAS-LeSe-11細(xì)胞、TUAT-SpLi-221細(xì)胞、NIAS-PX-64細(xì)胞、NIAS-MB-32細(xì)胞、NIAS-MaBr-93細(xì)胞、SES-MaBr-5細(xì)胞、BM-N細(xì)胞、NIAS-PX-58細(xì)胞、MBHL-2細(xì)胞、以及MBHL-3細(xì)胞。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到這是一種示例性的、不是根據(jù)本披露可使用的不同細(xì)胞的綜合性列表?？蓪?duì)其他細(xì)胞進(jìn)行有利地利用來產(chǎn)生一種靶糖蛋白。此類細(xì)胞可以處于培養(yǎng)之中或在組織、器官、或生物體的環(huán)境中。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解的是，可以使用多種表達(dá)系統(tǒng)和載體以便在根據(jù)本披露所使用的細(xì)胞或細(xì)胞系中表達(dá)所感興趣的一種蛋白(例如見Molecularcloning:ALaboratoryManual,Ed.bySambrook，CSHLPress,2002)。此外，可以根據(jù)本披露使用多種細(xì)胞培養(yǎng)基中的任何一種(包括能夠支持一種或多種細(xì)胞類型或細(xì)胞系的生長(zhǎng)的復(fù)合培養(yǎng)基和/或無(wú)血清的培養(yǎng)基)。典型地，細(xì)胞培養(yǎng)基包含一種緩沖劑、鹽類、能量來源、多種氨基酸(例如，天然的氨基酸、非天然的氨基酸、等等)、多種維生素、和/或多種痕量元素。細(xì)胞培養(yǎng)基可以可任選地包含多種其他的成分，包括但不限于碳源(例如、天然的糖類、非天然的糖類、等等)、輔因子、脂類、糖類、核苷類、由動(dòng)物衍生的組分、水解產(chǎn)物、激素/生長(zhǎng)因子、表面活性劑、指示劑、礦物質(zhì)、特異性酶類的激動(dòng)劑/抑制劑、以及多種有機(jī)物(例如，丁酸鹽/酯，它誘導(dǎo)凋亡，它釋放糖基化酶并經(jīng)常使細(xì)胞的生長(zhǎng)速率變緩，它改變糖基轉(zhuǎn)移酶的水平，它可以導(dǎo)致更成熟的糖基化作用，并且它導(dǎo)致細(xì)胞的能量方面的變化；氯喹，它影響細(xì)胞內(nèi)的pH;甜菜堿，它是一種滲透壓保護(hù)劑(osmoprotectant);氨，它改變了細(xì)胞內(nèi)的pH水平并且它可以改變糖基轉(zhuǎn)移酶的效率；等等)、和/或小分子代謝產(chǎn)物(例如，CMP-唾液酸、葡糖胺、非天然的糖衍生物、等等)。適宜于根據(jù)本披露所使用的細(xì)胞培養(yǎng)基可以從多個(gè)來源(例如ATCC(Manassas,Va))進(jìn)行商購(gòu)。在某些實(shí)施方案中，可使用以下培養(yǎng)基中的一種或多種使生長(zhǎng)細(xì)胞RPMI-1640Medium、Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium、MinimumEssentialMediumEagle、F-12KMedium、Iscove'sModifiedDulbecco'sMedium。如本領(lǐng)域的普通的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)使用無(wú)血清和/或無(wú)蛋白胨的限定性培養(yǎng)基時(shí)，這種培養(yǎng)基是典型地高度富集多種氨基酸以及痕量元素的(見例如授予Mather等人的美國(guó)專利號(hào)5,122,469以及授予Keen等人的美國(guó)專利號(hào)5,633,162)。不同的細(xì)胞培養(yǎng)基可以影響在該培養(yǎng)基中所表達(dá)的糖蛋白的糖基化作用模式。例如，一種給定的細(xì)胞培養(yǎng)基可以導(dǎo)致以下糖蛋白的產(chǎn)生，這種糖蛋白具有一種增高的糖基化作用模式、一種降低的糖基化作用模式、或一種經(jīng)改變的糖基化作用模式(例如，表示成在某些聚糖方面增加而在其他聚糖方面減少)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道并且將能夠選擇出一個(gè)或多個(gè)適宜的細(xì)胞培養(yǎng)基用于生長(zhǎng)細(xì)胞(使用本披露的某些方法將對(duì)這些細(xì)胞的細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行分析)。在一些實(shí)施方案中，將這些細(xì)胞按照以下方式進(jìn)行培養(yǎng)分批培養(yǎng)、補(bǔ)料分批培養(yǎng)(fedbatchculture)、灌注培養(yǎng)、靜止懸浮(例如，轉(zhuǎn)瓶、T型燒瓶、微載體、T150、等等)、和/或在搖床上。根據(jù)本披露產(chǎn)生至少一種非細(xì)胞表面糖蛋白(即靶糖蛋白)的細(xì)胞可以在多種細(xì)胞培養(yǎng)條件的任何一種條件下進(jìn)行生長(zhǎng)。在一些實(shí)施方案中，將這些細(xì)胞在以下的細(xì)胞培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)，這樣使得預(yù)期這種靶糖蛋白展示出一種所希望的糖基化作用模式。在一些實(shí)施方案中，對(duì)一種或多種細(xì)胞培養(yǎng)條件進(jìn)行控制和/或改進(jìn)以便產(chǎn)生具有更多令人希望的糖基化作用模式的靶糖蛋白。此類可以得到控制或改進(jìn)的細(xì)胞培養(yǎng)條件包括但不局限于pH、C02水平、氧氣水平、培養(yǎng)物的攪拌速率、氧化還原的條件、培養(yǎng)溫度、細(xì)胞密度、種子培養(yǎng)的密度、培養(yǎng)的持續(xù)時(shí)間、反應(yīng)器的設(shè)計(jì)、噴霧率、和/或摩爾滲透壓濃度。如果希望的話，可以使用多種方法中的任何一種將這些細(xì)胞從這種細(xì)胞培養(yǎng)基中分離出來。在某些實(shí)施方案中，這些細(xì)胞在一種懸浮的培養(yǎng)系(suspensionculture)中進(jìn)行生長(zhǎng)。在此類實(shí)施方案中，可以通過離心作用和清洗的一個(gè)或多個(gè)循環(huán)(如，使用一種生理學(xué)上適宜的洗滌液，如磷酸鹽緩沖鹽水)將這些細(xì)胞從這種細(xì)胞培養(yǎng)基中純化出來。在某些實(shí)施方案中，這些細(xì)胞在一種粘附的培養(yǎng)系(adhesionculture)中進(jìn)行生長(zhǎng)。在此類實(shí)施方案中，通過首先從培養(yǎng)系表面釋放這些細(xì)胞而使它們可以從細(xì)胞培養(yǎng)基中純化出來。例如，通過使這些細(xì)胞經(jīng)受EDTA將它們從這種培養(yǎng)系表面中釋放。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道其他適宜的可用于將粘附的細(xì)胞從這種培養(yǎng)系表面釋放的試劑。在釋放之后，這些細(xì)胞可以通過離心作用和洗滌的一個(gè)或多個(gè)循環(huán)(例如，使用一種生理學(xué)適宜的洗滌液，如磷酸鹽緩沖鹽水)而被純化。當(dāng)使用在懸浮培養(yǎng)中生長(zhǎng)的細(xì)胞時(shí)，應(yīng)該注意不用過高的力將這些細(xì)胞離心以避免不必要的細(xì)胞破碎。細(xì)胞表面聚糖的分析可利用任何適宜的技術(shù)來檢測(cè)根據(jù)本披露的一種細(xì)胞表面上的聚糖?？梢栽谶@些細(xì)胞上對(duì)這些聚糖進(jìn)行檢測(cè)和/或分析，例如當(dāng)它仍然是由一種細(xì)胞產(chǎn)生的一種糖蛋白的部分時(shí)。例如，根據(jù)某些實(shí)施方案，在不存在蛋白酶或糖苷酶處理時(shí)對(duì)這些聚糖進(jìn)行檢測(cè)和/或分析?？商娲鼗蝾~外地，這些聚糖可以是從這些細(xì)胞中釋放并接著對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)和/或分析。這些聚糖可以通過使這些細(xì)胞經(jīng)受一種或多種蛋白酶、糖苷酶、或兩者皆有而從細(xì)胞中釋放。例如，通過使一種細(xì)胞經(jīng)受一種或多種蛋白酶(諸如但不限于在此所說明的蛋白酶，將這種巳釋解出的糖肽經(jīng)受一種或多種糖苷酶，諸如但不限于在此所說明的糖苷酶)，可將一種糖肽從一個(gè)細(xì)胞中釋解出。作為另一個(gè)非限制性的實(shí)例，通過使該細(xì)胞直接經(jīng)受糖苷酶處理，不使該細(xì)胞經(jīng)受蛋白酶處理，可將這些聚糖從該細(xì)胞中釋放。以下更詳細(xì)地提出了某些代表性的分析技術(shù)，但是這些分析技術(shù)不旨在限制本披露的范圍。糖肽的釋放在本披露的某些實(shí)施方案中，涉及對(duì)細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行分析的一個(gè)步驟是從該細(xì)胞的表面釋解出此類聚糖。在由此類實(shí)施方案提供的幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)中的是可以獲得一種高度的純的細(xì)胞表面聚糖的群體而沒有被這些聚糖(主要發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞內(nèi)部)顯著污染這一事實(shí)。例如，使用本披露的某些方法，當(dāng)將這些細(xì)胞表面聚糖從該細(xì)胞中釋解出時(shí)基本上避免了細(xì)胞的溶解。額外地或者可替代地，與目前可以獲得的方法相比，在此所披露的某些方法在操作步驟的數(shù)目和/或難度方面提供了顯著的降低。在某些實(shí)施方案中，這些細(xì)胞表面糖蛋白通過使該細(xì)胞經(jīng)受一種或多種蛋白酶而從該細(xì)胞表面釋解出。這些蛋白酶在一種多肽鏈內(nèi)切割了多個(gè)酰胺鍵。存在幾種類別的蛋白酶，包括化學(xué)試劑以及酶試劑。這些蛋白水解酶包括例如，絲氨酸蛋白酶類、蘇氨酸蛋白酶類、半胱氨酸蛋白酶類、天冬氨酸蛋白酶類、金屬蛋白酶類、以及谷氨酸蛋白酶類。根據(jù)本披露可使用的特異性蛋白水解酶的非限制性的實(shí)例包括胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶、無(wú)花果蛋白酶、菠蘿蛋白酶、瘧原蟲胃蛋白酶(plasmepsin)、腎素、凝乳酶、木瓜蛋白酶、一種組織蛋白酶(例如組織蛋白酶K)、一種半胱天冬蛋白酶(例如CASP3、CASP6、CASP7、CASP14)、鈣蛋白酶l、鈣蛋白酶2、嗜熱菌蛋白酶(thermolysin)、羧肽酶A或B、基質(zhì)金屬蛋白酶、一種谷氨酸蛋白酶、和/或它們的組合。本領(lǐng)域的普通的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道多種其他的蛋白酶，這些蛋白酶可根據(jù)本披露用于從細(xì)胞表面釋放一種糖蛋白。目前分析細(xì)胞的糖蛋白的方法(即使明確地指出將耙向至細(xì)胞表面聚糖上)典型地是對(duì)于細(xì)胞表面聚糖而言不是特異地選擇性的。例如，目前的這些方法典型地采用了一種或多種粗糙的洗滌劑來提取膜蛋白，在這之后在用從蛋白質(zhì)或多肽中去除聚糖結(jié)構(gòu)的試劑進(jìn)行處理之前對(duì)游離的糖類進(jìn)行透析。在此類條件下，這些聚糖制品被細(xì)胞內(nèi)聚糖(例如，來自內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和/或高爾基體)污染。此類細(xì)胞內(nèi)的聚糖典型地是未成熟的、高甘露糖聚糖。因此，它們的夾雜物可以使與細(xì)胞表面糖蛋白相關(guān)聯(lián)的聚糖結(jié)構(gòu)的分析發(fā)生偏移。在本披露的一些實(shí)施方案中，細(xì)胞表面聚糖的分析涉及洗滌劑的使用以便將細(xì)胞表面糖蛋白從膜中釋放。然而，在本披露的一些實(shí)施方案中，洗滌劑處理被最小化或被完全避免有利于將細(xì)胞膜的破裂最小化的策略。例如，在一些實(shí)施方案中，這些細(xì)胞膜的至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或更多仍然是完整的(例如，如通過臺(tái)盼藍(lán)排除法所監(jiān)測(cè))。除其他事項(xiàng)之外，此類方法是有利的，因?yàn)樗鼈兛梢詼p少或消除存在于該細(xì)胞內(nèi)部的未成熟的、高甘露糖糖蛋白的污染。在本披露的某些實(shí)施方案中，通過使該細(xì)胞經(jīng)受一種或多種蛋白酶將這些聚糖(處于糖肽的形式)從一種細(xì)胞表面釋解出。在某些實(shí)施方案中，在將該細(xì)胞膜的破裂最小化的情況下，將這些細(xì)胞經(jīng)受一種或多種蛋白酶。在本披露的一些實(shí)施方案中，通過將該細(xì)胞經(jīng)受一種或多種蛋白酶達(dá)到一段限定的時(shí)間以避免該細(xì)胞膜的實(shí)質(zhì)性溶解，將這些聚糖從一個(gè)細(xì)胞表面釋解出。在某些實(shí)施方案中，將一種細(xì)胞經(jīng)受一種或多種蛋白酶達(dá)到一個(gè)足夠的限定的時(shí)間，這樣不發(fā)生該細(xì)胞膜的實(shí)質(zhì)性溶解。例如，可以將一種細(xì)胞經(jīng)受一種或多種蛋白酶達(dá)到一段時(shí)間，該段時(shí)間小于約15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1分鐘。在某些實(shí)施方案中，將一種細(xì)胞經(jīng)受一種或多種蛋白酶達(dá)到一段時(shí)間(該段時(shí)間大于15分鐘，只要該細(xì)胞膜不發(fā)生實(shí)質(zhì)性溶解)。例如，可以采用一種足夠低的濃度的一種或多種蛋白酶、一個(gè)足夠低的溫度和/或多種其他因素或條件的任何一種，這樣蛋白酶的整體活性被降低至一個(gè)點(diǎn)，在該點(diǎn)細(xì)胞膜不發(fā)生實(shí)質(zhì)性溶解。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道并且將能夠采用確保不發(fā)生細(xì)胞膜的實(shí)質(zhì)性溶解的多個(gè)因素或條件。在本披露的某些實(shí)施方案中，例如通過用蛋白酶進(jìn)行處理，從這些細(xì)胞中釋放至少約50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多的細(xì)胞表面聚糖。僅給出一個(gè)特定的實(shí)例，本披露證實(shí)了(例如)用胰蛋白酶在37°C切割持續(xù)15分鐘導(dǎo)致了超過50%的細(xì)胞表面聚糖的釋放。在某些實(shí)施方案中，通過將一個(gè)細(xì)胞經(jīng)受至少約0.1mg/mL的濃度的一種或多種蛋白酶(例如，蛋白水解酶)而將這些細(xì)胞表面聚糖釋解出。在某些實(shí)施方案中，通過使一個(gè)細(xì)胞經(jīng)受低于約2.0mg/mL的濃度的一種或多種蛋白酶(例如，蛋白水解酶)而將這些細(xì)胞表面聚糖釋解出。在某些實(shí)施方案中，通過使一個(gè)細(xì)胞經(jīng)受約0.1、0,2、0,3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1,6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0mg/mL或更高的濃度的一種或多種蛋白酶(例如，蛋白水解酶)而將這些細(xì)胞表面聚糖釋解出。在某些實(shí)施方案中，這些細(xì)胞表面聚糖是通過使一種細(xì)胞經(jīng)受多種蛋白酶而被釋解出的。例如，可以使一種細(xì)胞經(jīng)受2、3、4、5、6、7、8、9、10、或更多的蛋白酶以便將這些細(xì)胞表面聚糖釋解出?？蓪⒋祟惖亩喾N蛋白酶同時(shí)和/或順序地給予該細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，通過使一種細(xì)胞同時(shí)經(jīng)受多種蛋白酶而將這些細(xì)胞表面聚糖釋解出，在這之后將己釋解出的聚糖(處于糖肽類的形式)從該細(xì)胞中純化出來。在某些實(shí)施方案中，通過使一種細(xì)胞經(jīng)受一種第一蛋白酶(或多個(gè)第一蛋白酶)達(dá)到一個(gè)第一時(shí)間段，之后使該細(xì)胞經(jīng)受一種第二蛋白酶(或多個(gè)第二蛋白酶)達(dá)到一個(gè)第二時(shí)間段而將這些細(xì)胞表面聚糖釋解出。在使用該第二蛋白酶處理之前，可以可任選地將該第一蛋白酶移出和/或使其失活。作為舉例，在一個(gè)溫度下孵育該蛋白酶達(dá)足以將其滅活的時(shí)間，可以使該第一蛋白酶失活。額外地或可替代地，通過用對(duì)該蛋白酶特異的一種抑制劑(例如，一種抗體或其他分子，它特異性地連接至該第一蛋白酶上并抑制其催化活性)對(duì)該第一蛋白酶進(jìn)行孵育使該第一蛋白酶失活。其他的使該第一蛋白酶失活的方法對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言應(yīng)當(dāng)是已知的。當(dāng)通過用一種特異性的抑制劑對(duì)該第一蛋白酶進(jìn)行孵育而使該第一蛋白酶失活時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解的是該抑制劑的存在不應(yīng)該基本上抑制該第二蛋白酶的活性。在某些實(shí)施方案中，在聚糖的釋放之前將這種或這些蛋白酶移除和/或使其失活。作為舉例，在一個(gè)溫度下將一種蛋白酶孵育達(dá)足以使其失活的時(shí)間可以使該蛋白酶失活。可替代地或額外地，通過用特異性結(jié)合一種蛋白酶并且抑制其活性的一種抑制劑或抗體或其他分子對(duì)該蛋白酶進(jìn)行孵育可以使該蛋白酶失活。聚糖的釋放在本披露的某些實(shí)施方案中，在對(duì)這些細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行分析之前對(duì)這些細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行切割。例如，在某些實(shí)施方案中，在已將這些細(xì)胞表面糖肽從該細(xì)胞中釋解出之后(例如，通過用多種蛋白酶進(jìn)行處理，如以上更詳細(xì)地說明)，將一種或多種聚糖結(jié)構(gòu)從這些細(xì)胞表面糖肽上切割下來。在某些實(shí)施方案中，將一種或多種聚糖結(jié)構(gòu)從還未從該細(xì)胞中釋解出的這些細(xì)胞表面糖肽上切割下來。在某些實(shí)施方案中，通過使用一種酶或多種酶(識(shí)別并剪切這些聚糖結(jié)構(gòu))來釋放一種或多種聚糖結(jié)構(gòu)。可以根據(jù)本披露使用中將這些聚糖結(jié)構(gòu)從細(xì)胞表面糖蛋白上切割下來的多種糖苷酶以及其他酶類中的任何一種。此類酶的幾個(gè)實(shí)例綜述于R.A.O'Neill,Enzymaticreleaseofoligosaccharidesfromglycoproteinsforchromatographicandelectrophoreticanalysis,J.Chromatogr.A720,201-215.1996;andS.Prime,etal.，Oligosaccharidesequencingbasedonexo陽(yáng)andendo-glycosidasedigestionandliquidchromatographicanalysisoftheproducts,J.Chromatogr.A720,263-274，1996中，其中每一篇的全文均通過引用結(jié)合在此。在某些實(shí)施方案中，使用酶PNGaseF(肽N-糖苷酶F)將這些聚糖從一種糖肽或糖蛋白上移出。PNGase-F是一種酰胺酶，它在最里面的GlcNAc與來自N-連接的糖蛋白的高甘露糖、雜合、以及復(fù)合寡糖的天冬酰胺殘基之間對(duì)酰胺鍵進(jìn)行切割。額外地或可替代地，在某些實(shí)施方案中，使用酶PNGaseA、O-聚糖酶、禾口/或Endo-H將這些聚糖移出。為了改進(jìn)糖基化位點(diǎn)對(duì)于一種剪切酶的可接近性，大多數(shù)糖蛋白要求一個(gè)蛋白質(zhì)變性的步驟。典型地，這是通過使用洗滌劑(例如SDS)和/或二硫化物還原劑(例如P-巰基乙醇)而完成的，盡管為了根據(jù)本披露來使用的使一種糖蛋白變性的方法不限于使用此類試劑。例如，暴露于高溫下能夠足以使一種糖蛋白變性，這樣用于對(duì)這些聚糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行切割的一種適宜的酶能夠達(dá)到該切割位點(diǎn)。在某些實(shí)施方案中，通過將一種糖蛋白在以下溫度孵育達(dá)足以使該糖蛋白變性的一段時(shí)間來使該糖蛋白變性80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、卯、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100攝氏度、或更高。在某些實(shí)施方案中，采用洗滌劑、二硫化物還原劑、高溫、和/或其他試劑或反應(yīng)條件的一個(gè)組合使一種糖蛋白變性。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道足以使一種糖蛋白變性的多個(gè)適宜的條件、孵育時(shí)間、等等。應(yīng)當(dāng)注意的是位于免疫球蛋白G(IgG)中保守的Fc位點(diǎn)上的這些寡糖容易被PNGaseF切割。因此，在使用這種酶時(shí)，一個(gè)蛋白質(zhì)變性的步驟典型地是不要求IgG分子。PNGaseF在稀氨水溶液中也能將這些寡糖夠移去，在2.5M尿素中在37。C持續(xù)24小時(shí)是穩(wěn)定的，并且在5M尿素中仍然擁有其40。/。的活性。因此，PNGaseF具有以下優(yōu)點(diǎn)，在某些變性條件下它能夠?qū)⑦@些聚糖從這些糖蛋白中切割下來。根據(jù)本披露可以使用以便將這些聚糖結(jié)構(gòu)從這些糖蛋白中切割下來的其他適宜的酶類包括但是不局限于PNGaseA、O-聚糖酶、和/或Endo-H。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道用于將這些聚糖從這些糖蛋白中切割下來的其他適宜的酶類。在某些實(shí)施方案中，使用多種酶將這些聚糖結(jié)構(gòu)從一種糖蛋白上切割下來。在某些實(shí)施方案中，同時(shí)給予此類多種剪切酶。在某些實(shí)施方案中，順序地給予此類多種剪切酶。在某些實(shí)施方案中，通過使用一種試劑(除了一種酶)將一種或多種聚糖結(jié)構(gòu)從這些細(xì)胞表面糖蛋白上切割下來。在某些實(shí)施方案中，可使用一種化學(xué)試劑或多種化學(xué)試劑(例如，暴露于一種試劑如肼、硼氫化鈉、內(nèi)切糖苷酶、三氟甲磺酸(trifluoromethasenulfonicadd)(TFMS)、和域p-消除齊IJ、等等)從這些糖蛋白上剪切聚糖結(jié)構(gòu)。例如這種化學(xué)性肼的使用已經(jīng)成功地被采用以便對(duì)這些聚糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行切割。作為另一個(gè)非限定性的實(shí)例，已經(jīng)提示可將氨-碳酸銨的一種混合物用于N-連接以及O-連接的寡糖(處于其天然的形式)的堿性釋放(見Y.Huang，etal.,MicroscalenonreductivereleaseofO-linkedglycansforsubsequentanalysisthroughMALDImassspectrometryandcapillaryelectrophoresis,Anal.Chem.73，6063-60,2001，其全文通過引用結(jié)合在此)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道根據(jù)本披露可以使用的其他適宜的化學(xué)試劑。在一些情況下，使用一種化學(xué)試劑將這些聚糖結(jié)構(gòu)從一種糖蛋白上切割下來導(dǎo)致了蛋白質(zhì)的降解連同切割。然而，在切割之后，在分析和/或表征之前經(jīng)常將這種聚糖結(jié)構(gòu)從這種糖蛋白的蛋白組分中純化出來。在此類情況下，在用一種化學(xué)試劑處理之后這種蛋白組分的降解對(duì)本披露的實(shí)施不是有害的。在一些情況下，這種蛋白組分的降解甚至可以有助于對(duì)這種或這些經(jīng)切割的聚糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行純化的方法。在一些實(shí)施方案中，可以用一種或多種外切糖苷酶對(duì)已經(jīng)從一種糖蛋白釋放和/或從一種細(xì)胞表面釋放的聚糖進(jìn)行消化，并且對(duì)這些消化產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和/或構(gòu)成進(jìn)行分析。外切糖苷酶是從聚糖的非還原性末端對(duì)末端的糖苷鍵進(jìn)行切割的酶類。它們對(duì)于特定的單糖連接以及異頭性(anomericity)((X/(3)典型地是高度特異性的。在一些實(shí)施方案中，相鄰的分枝模式可以影響外切糖苷酶的特異性。外切糖苷酶處理通常導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)的觸角連接的聚糖被切割成戊糖核心(M3N2)(包含3個(gè)甘露糖以及2個(gè)glcNAc殘基)。然而，不常見的修飾的種類(例如，觸角的巖藻糖化種類、高甘露糖以及雜合聚糖、乳糖胺擴(kuò)展的聚糖、硫酸化的或磷酸化的聚糖，等等)對(duì)外切糖苷酶處理具有耐受性，并且可以用色譜方法分辨出并且相對(duì)于M3N2戊糖進(jìn)行定量。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本披露所使用的外切糖苷酶僅識(shí)別并且切割一種特定類型的糖苷連接。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本披露所使用的外切糖苷酶識(shí)別并且切割多于一種特定類型的糖苷連接。根據(jù)本披露可以使用的示例性的外切糖苷酶，包括但不限于唾液酸酶、半乳糖苷酶、己糖胺酶、巖藻糖苷酶、以及甘露糖苷酶。外切糖苷酶可以獲自任何一種來源，包括商業(yè)來源(例如，來自QA-Bio、ProZyme、Roche、Sigma、NEB、EMD、Glyko、等等)?？商娲鼗蝾~外地，外切糖苷酶可以從一種細(xì)胞的來源(例如細(xì)菌、酵母、植物、等等)中被分離和/或純化。在一些實(shí)施方案中，外切糖苷酶(例如，唾液酸酶、半乳糖苷酶、己糖胺酶、巖藻糖苷酶、以及甘露糖苷酶)可以被分成多個(gè)分類或"亞組"。在一些實(shí)施方案中，不同的亞組顯示出對(duì)切割不同類型的連接不同的能力。表1呈現(xiàn)出了一些示例性的外切糖苷酶，它們的連接特異性、以及從中衍生出每一種的生物體。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解這僅是一個(gè)示例性的，而非綜合性的外切糖苷酶列表，并且具有任何連接特異性的外切糖苷酶都可以根據(jù)本披露進(jìn)行使用。<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>*"EC#"是指酶學(xué)委員會(huì)登記號(hào)根據(jù)本披露，已經(jīng)從一種糖蛋白和/或一種細(xì)胞表面釋放的聚糖可以用任何一種外切糖苷酶進(jìn)行消化。在某些實(shí)施方案中，通過將多種聚糖的一個(gè)群體經(jīng)受多種外切糖苷酶的處理而對(duì)這些聚糖進(jìn)行消化。例如，可以使多種聚糖的一個(gè)群體經(jīng)受2、3、4、5、6、7、8、9、10、或更多種外切糖苷酶。在一些實(shí)施方案中，同時(shí)給予多種外切糖苷酶。在一些實(shí)施方案中，順序地給予多種外切糖苷酶。在一些實(shí)施方案中，改變所給予的外切糖苷酶的身份揭示了有關(guān)聚糖的結(jié)構(gòu)和/或組成的信息。在一些實(shí)施方案中，改變給予多種外切糖苷酶的順序揭示了有關(guān)聚糖的結(jié)構(gòu)和/或組成的信息。在一些實(shí)施方案中，使用多種外切糖苷酶進(jìn)行順序消化揭示了有關(guān)聚糖的結(jié)構(gòu)和/或組成的信息，該信息不同于用同一組外切糖苷酶同時(shí)消化所揭示的信息。在一些實(shí)施方案中，使用多種外切糖苷酶進(jìn)行順序消化揭示了有關(guān)聚糖的結(jié)構(gòu)和/或組成的信息，該信息與用同一組外切糖苷酶同時(shí)消化所揭示的信息相同。對(duì)于在聚糖結(jié)構(gòu)的分析中外切糖苷酶消化的效用的更全面的討論，見共同待定的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)U.S.S.N.60/923,688，由Parsons等人于2007年4月16日提交的名為"使用外切糖苷酶的N-聚糖的表征"，通過引用將其結(jié)合在此。聚糖分析可通過以下任何一種技術(shù)對(duì)這些聚糖進(jìn)行分析，這些技術(shù)包括例如配體結(jié)合、質(zhì)譜法、核磁共振、和/或其他的方法。用于分析聚糖的多種方法在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的。例如見Anumula,Anal.Biochem，350(1):1-23,2006;Kleinetal.Anal.Biochem.,179:162-66,1989;以及Townsend，R.R.,CarbohydrateAnalysis:HighPerformanceLiquidChromatographyandCapillaryElectrophoresis,ed.Z.ElRassi,pp.181-209,1995，Yuanetal.，J.ChromatographyA(2005)1067:145-152，其中每一篇的全文均通過引用結(jié)合在此。在某些實(shí)施方案中，在對(duì)這些細(xì)胞表面聚糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析之前，將這些細(xì)胞表面聚糖從該細(xì)胞中釋解出(例如，經(jīng)由用諸如以上所述的蛋白酶和/或糖苷酶進(jìn)行處理)。通過多種不同方法中的一種或多種對(duì)己釋解出的細(xì)胞表面糖蛋白的糖基化作用模式進(jìn)行分析。作為非限定性的實(shí)例，己釋解出的細(xì)胞表面聚糖的糖基化作用模式可以通過以下方法進(jìn)行表征，例如NMR、質(zhì)譜法、液相色譜法、2維色譜法、SDS-PAGE、抗體染色、凝集素染色、單糖定量、毛細(xì)管電泳法、熒光團(tuán)輔助糖電泳(FACE)、膠束的電動(dòng)色譜法(MEKC)、外切糖苷酶或內(nèi)切糖苷酶處理、以及它們的組合方法。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道可用于對(duì)已釋解出的這些細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征的其他方法。在某些實(shí)施方案中，在對(duì)這些細(xì)胞表面聚糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析之前這些細(xì)胞表面聚糖未從該細(xì)胞中釋解出。通過多種不同方法中的一種或多種可以對(duì)附連至該細(xì)胞表面的細(xì)胞表面聚糖的模式進(jìn)行分析。作為非限定性的實(shí)例，這些細(xì)胞表面聚糖可以通過以下方法進(jìn)行表征，例如抗體結(jié)合、凝集素結(jié)合、以及它們的組合?？赏ㄟ^以下多種技術(shù)中的任何一種對(duì)識(shí)別一種或多種特異性聚糖結(jié)構(gòu)的一種抗體、凝集素或其他試劑的結(jié)合進(jìn)行監(jiān)測(cè)，這些技術(shù)包括例如免疫熒光、化學(xué)發(fā)光法、ELISA測(cè)定、流式細(xì)胞術(shù)、等等。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道可用于對(duì)在這些細(xì)胞的表面上的細(xì)胞表面聚糖的糖基化作用模式進(jìn)行表征的其他方法。在某些實(shí)施方案中，通過從細(xì)胞中釋放這些細(xì)胞表面聚糖、對(duì)這些細(xì)胞表面聚糖純化、并且然后進(jìn)行分析而對(duì)這些細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行分析。例如，在一些實(shí)施方案中，通過以下方法來對(duì)此類聚糖進(jìn)行表征色譜法、質(zhì)譜法、電泳法、核磁共振(NMR)法，以及它們的結(jié)合。例如，在一些實(shí)施方案中，通過以下一種或多種方法對(duì)這些聚糖進(jìn)行表征NMR、質(zhì)譜法、液相色譜法、2-維色譜法、SDS-PAGE、抗體染色、凝集素染色、單糖定量、毛細(xì)管電泳法、熒光團(tuán)輔助糖電泳(FACE)、膠束電動(dòng)色譜法(MEKC)、外切糖苷酶或內(nèi)切糖苷酶處理、以及它們的組合。在一些實(shí)施方案中，N-聚糖的結(jié)構(gòu)和組成可以通過色譜方法進(jìn)行分析，包括但不限于液相色譜法(LC)、高效液相色譜法(HPLC)、超高效液相色譜法(UPLC)、薄層色譜法(TLC)、酰胺柱色譜法、以及它們的組合。在一些實(shí)施方案中，N-聚糖的結(jié)構(gòu)和組成可以通過質(zhì)譜法(MS)以及相關(guān)的方法進(jìn)行分析，包括但不限于串聯(lián)MS、LC-MS、LC-MS/MS、基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜法(MALDI-MS)、傅里葉變換質(zhì)譜法(FTMS)、離子遷移率分離質(zhì)譜法(IMS-MS)、電子轉(zhuǎn)移解離(ETD-MS)、以及它們的組合。在一些實(shí)施方案中，N-聚糖結(jié)構(gòu)和組成可以通過電泳法進(jìn)行分析，包括但不限于毛細(xì)管電泳法(CE)、CE-MS、凝膠電泳法、瓊脂糖凝膠電泳法、丙烯酰胺凝膠電泳法、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE)跟隨有使用識(shí)別特定的聚糖結(jié)構(gòu)的抗體的蛋白質(zhì)印跡法、以及它們的組合。在一些實(shí)施方案中，N-聚糖結(jié)構(gòu)和組成可以通過核磁共振(NMR)以及相關(guān)方法進(jìn)行分析，包括但不限于一維NMR(1D-NMR)、二維NMR(2D-NMR)、相關(guān)譜磁性角自旋NMR(COSY-NMR)、全相關(guān)光譜NMR(TOCSY-NMR)、異核單量子相干NMR(HSQC-NMR)、異核多級(jí)量子相干(HMQC-NMR)、旋轉(zhuǎn)核歐沃豪斯效應(yīng)譜NMR(ROESY-NMR)、核歐沃豪斯效應(yīng)譜(NOESY-NMR)、以及它們的組合。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道可用于對(duì)已釋解出的細(xì)胞表面糖蛋白的糖基化作用模式進(jìn)行表征的其他方法。在某些實(shí)施方案中，在表征之前對(duì)這些細(xì)胞表面糖蛋白和/或聚糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行標(biāo)記。如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所已知，在表征過程中這種標(biāo)記可能提高信號(hào)和/或降低背景噪音。根據(jù)本披露可以使用多種標(biāo)記中的任何一種，包括但不限于熒光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、禾口/或化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。在某些實(shí)施方案中，用熒光性2-氨基苯甲酰胺("2-AB")對(duì)這些聚糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行標(biāo)記。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道根據(jù)本披露可以使用的其他適宜的標(biāo)記物。應(yīng)用應(yīng)當(dāng)理解的是可以在多種應(yīng)用中任何一種中利用在此說明的這些技術(shù)。總體而言，這些技術(shù)在涉及這些聚糖的結(jié)構(gòu)表征的任何一種應(yīng)用中是有用的，并且在希望對(duì)與一種靶結(jié)合糖(例如糖蛋白)相關(guān)聯(lián)的聚糖進(jìn)行表征時(shí)是特別有用的，但是這種結(jié)合糖的分離是時(shí)間或勞動(dòng)密集性的或形成其他的挑戰(zhàn)(例如，與該結(jié)合糖的不穩(wěn)定性相關(guān)聯(lián)、等等)?？蓪⒈九兜姆椒ㄊ┯弥翉亩喾N來源中獲得的聚糖上，這些來源包括但不限于治療性配制品以及生物樣品(例如，包含細(xì)胞)。在根據(jù)本披露對(duì)這種生物樣品進(jìn)行分析之前或之后這種生物樣本可以經(jīng)歷一個(gè)或多個(gè)分析和/或純化的步驟。僅給出一些實(shí)例，在一些實(shí)施方案中，使用一種或多種蛋白酶和/或外切糖苷酶對(duì)一個(gè)生物樣本進(jìn)行處理(例如，這樣使這些聚糖釋放)；在一些實(shí)施方案中，用一個(gè)或多個(gè)可檢測(cè)的標(biāo)記物或其他試劑對(duì)生物樣本中的細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行標(biāo)記，這可促進(jìn)通過例如質(zhì)譜或NMR進(jìn)行分析?？蓪⒍喾N分離和/或分離步驟中的任何一個(gè)施用至根據(jù)本披露的一種生物樣本中?？衫帽九秮矸治鎏幱诙喾N狀態(tài)下的任何一種的細(xì)胞表面聚糖，例如游離的聚糖、結(jié)合糖(例如，糖肽、糖脂、蛋白多糖、等等)、或細(xì)胞或細(xì)胞組分、等等。本披露的方法可以用于針對(duì)所一種感興趣的治療性或其他商業(yè)上相關(guān)的糖蛋白的生產(chǎn)的過程進(jìn)展的一個(gè)或多個(gè)階段中?？梢圆捎帽九兜姆椒ǖ拇祟愡^程進(jìn)展階段的非限制性的實(shí)例包括細(xì)胞選擇、克隆選擇、培養(yǎng)基最佳化、培養(yǎng)條件、處理?xiàng)l件、和/或純化操作。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道其他的過程進(jìn)展階段。還可以利用本披露來監(jiān)測(cè)在一個(gè)特定的細(xì)胞培養(yǎng)系中所發(fā)生的糖基化作用的程度和/或類型，由此允許調(diào)節(jié)或可能終止這種培養(yǎng)，以便(例如)實(shí)現(xiàn)一種特別希望的糖基化作用模式或避免發(fā)展一種特別不希望的糖基化作用模式。還可以利于本披露來評(píng)定細(xì)胞或細(xì)胞系的糖基化作用特征，這些細(xì)胞或細(xì)胞系被認(rèn)為用于產(chǎn)生一種特別希望的糖蛋白(例如，甚至是在對(duì)這些細(xì)胞或細(xì)胞系進(jìn)行工程處理以產(chǎn)生該糖蛋白、或產(chǎn)生一種處于商業(yè)上相關(guān)水平的糖蛋白之前)。在本披露的一些實(shí)施方案中，針對(duì)一種特定的靶糖蛋白的一種希望的糖基化作用模式是已知的，并且在此所說明的技術(shù)允許對(duì)這些培養(yǎng)系樣品(culturesample)進(jìn)行監(jiān)測(cè)以評(píng)定沿一條已知的產(chǎn)生該希望的糖基化作用模式的路線的生產(chǎn)進(jìn)程。例如，其中這種靶糖蛋白是一種治療性糖蛋白，例如在一個(gè)或多個(gè)國(guó)家中已經(jīng)歷了規(guī)章審查，經(jīng)常會(huì)希望的是對(duì)這些培養(yǎng)系進(jìn)行監(jiān)測(cè)以便評(píng)定它們會(huì)產(chǎn)生具有一種糖基化作用模式(盡可能接近于已確立的藥物產(chǎn)品的糖基化作用模式)的產(chǎn)物的可能性，無(wú)論它是否正在通過確實(shí)相同的路徑進(jìn)行產(chǎn)生。如在此所使用，"接近"是指一種糖基化作用模式，該模式與所確立的藥物產(chǎn)品的糖基化作用模式具有至少約75%、80%、85%、90%、95%、98%、或99%的相關(guān)性。在此類實(shí)施方案中，典型地在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)獲取這些生產(chǎn)培養(yǎng)系的樣品并將它們與一個(gè)已確立的標(biāo)準(zhǔn)或與一個(gè)對(duì)照培養(yǎng)系進(jìn)行比較以便評(píng)定相對(duì)的糖基化作用。在一些實(shí)施方案中，可使用根據(jù)本披露的方法來監(jiān)測(cè)在產(chǎn)生一種糖蛋白的細(xì)胞的培養(yǎng)過程中的細(xì)胞表面糖基化作用模式。例如，糖蛋白的生產(chǎn)(例如，商業(yè)性生產(chǎn))可能涉及以下步驟(1)培養(yǎng)產(chǎn)生這種糖蛋白的細(xì)胞，(2)在整個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞的過程中以規(guī)則或不規(guī)則的間隔獲得樣品，并且(3)分析所獲得的樣品上的細(xì)胞表面糖基化作用模式。在一些實(shí)施方案中，此類方法可進(jìn)一步包括將不同的樣品的細(xì)胞表面糖基化作用模式彼此進(jìn)行比較和/或與由相關(guān)的一種或多種細(xì)胞所產(chǎn)生的一種或多種非細(xì)胞表面糖蛋白的糖基化作用模式進(jìn)行比較的一個(gè)步驟。在一些實(shí)施方案中，此類方法可進(jìn)一步包括將針對(duì)一種或多種所獲得的樣品的細(xì)胞表面糖基化作用模式與一種參比樣品的糖基化作用模式進(jìn)行比較的一個(gè)步驟。在本披露的一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式(例如，用一種己產(chǎn)生的非細(xì)胞表面糖蛋白所觀察到的一種細(xì)胞表面糖基化作用模式和/或一種糖基化作用模式)將是更廣泛的。例如，在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式顯示出高度的糖基化位點(diǎn)占用(例如，高于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更高)；在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式顯示出一個(gè)高分支度(例如，高于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85°/。、約90%、約95%、約98%、約99%或更高具有三或四觸角結(jié)構(gòu))。在本披露的一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式將會(huì)不太廣泛。例如，在一些實(shí)施方案中，一種所希望的細(xì)胞表面糖基化作用模式顯示出低的糖基化位點(diǎn)占有(例如，小于約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約15%、約5%、約1%、或更小)；和/或一種低分支度(例如，小于約20%、約15%、約10%、約5%、約1%或更少具有三或四觸角結(jié)構(gòu))。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式在一些方面將會(huì)更加廣泛，而在其他方面將會(huì)不太廣泛。例如，采用易于產(chǎn)生具有長(zhǎng)的，未分枝的寡糖鏈的糖蛋白的一種細(xì)胞系，這可能是所希望的?？商娲兀捎靡子诋a(chǎn)生具有短的，高度分支的寡糖鏈的糖蛋白的一種細(xì)胞系，這可能是所希望的。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式將會(huì)針對(duì)一種具體類型的聚糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行富集。例如，在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式將會(huì)具有低水平的(例如，小于約20%、約15%、約10%、約5%、約1%、或更小)高甘露糖或雜合結(jié)構(gòu)，高水平的(例如，大于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更高)高甘露糖結(jié)構(gòu)，高水平的(例如，大于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更高；例如，每個(gè)糖蛋白至少一個(gè))磷酸化的高甘露糖，或低水平的(例如，小于約20%、約15%、約10%、約5%、約1%、或更小)磷酸化的高甘露糖。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式將包括至少約一種唾液酸。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式將包括一個(gè)高水平的(例如，大于約60%、約65%、約70%、約75°/0、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更高)唾液酸化的末端。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的的糖基化作用模式(包括唾液酸化作用)將顯示出至少約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更高的N-乙酰神經(jīng)氨酸和/或小于約20。/。、約15%、約10%、約5%、約1%、或更少的N-羥乙酰神經(jīng)氨酸。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式顯示出分支延長(zhǎng)的特異性(例如，高于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更多的延長(zhǎng)是在al,6甘露糖分枝上；或大于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更多的延長(zhǎng)是在al,3甘露糖分枝上)。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式將包括低水平(例如，小于約20%、約15%、約10%、約5%、約1%、或更小)或高水平(例如，大于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更大)的核心巖藻糖基化作用。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式將包括低水平(例如，小于約20%、約15%、約10%、約5%、約1%、或更小)或高水平(例如，大于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更大)的一種硫酸化的聚糖。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式將包括低水平(例如，小于約20%、約15%、約10%、約5%、約1%、或更小)或高水平(例如，大于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更大)的一種磷酸化的聚糖。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式將包括低水平(例如，小于約20%、約15%、約10%、約5%、約1%、或更小)或高水平(例如，大于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更大)的連接到N-乙酰葡糖胺上的一種唾液酸。在一些實(shí)施方案中，一種所希望的糖基化作用模式將包括低水平(例如，小于約20%、約15%、約10%、約5%、約1%、或更小)或高水平(例如，大于約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%、或更大)的一種乙?；木厶?。無(wú)論是否出于質(zhì)量控制的目的而監(jiān)測(cè)一種具體的靶蛋白的生產(chǎn)，可以利用本披露來(例如)監(jiān)測(cè)處于具體的發(fā)展階段的，或在具體的生長(zhǎng)條件下的細(xì)胞表面糖基化作用。在本披露的一些具體的實(shí)施方案中，在此所說明的方法可以用來表征和/或控制或比較這些治療性產(chǎn)品的質(zhì)量。僅給出一個(gè)實(shí)例，本發(fā)明的方法學(xué)可以用于評(píng)定在產(chǎn)生一種治療性蛋白產(chǎn)品的細(xì)胞中的細(xì)胞表面糖基化作用。具體而言，假定糖基化作用可經(jīng)常影響一種治療性蛋白產(chǎn)品的活性、生物利用度、或其他特征，則用于評(píng)定在這種治療性蛋白產(chǎn)品的產(chǎn)生過程中的細(xì)胞的糖基化作用的方法是特別希望的。除其他事項(xiàng)之外，本披露可以促進(jìn)在用于治療性蛋白的生產(chǎn)體系中的糖基化作用的實(shí)時(shí)分析。無(wú)論是否出于質(zhì)量控制的目的而監(jiān)測(cè)一種具體的靶蛋白的生產(chǎn)，可以利用本披露來(例如)監(jiān)測(cè)處于具體的發(fā)展階段的、或在具體的生長(zhǎng)條件下的糖基化作用。在一些實(shí)施方案中，在此所說明的方法可以用來表征和/或控制或比較這些治療性產(chǎn)品的質(zhì)量。僅給出一個(gè)實(shí)例，本發(fā)明的方法學(xué)可以用于評(píng)定在產(chǎn)生一種治療性蛋白產(chǎn)品的細(xì)胞中的糖基化作用。具體而言，假定糖基化作用可經(jīng)常影響一種治療性蛋白產(chǎn)品的活性、生物利用度、或其他特征，則用于評(píng)定在這種治療性蛋白產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中的細(xì)胞的糖基化作用的方法是特別希望的。除其他事項(xiàng)之外，本披露可以促進(jìn)在用于治療性蛋白的生產(chǎn)體系中的糖基化作用的實(shí)時(shí)分析。例如，代表性的治療性糖蛋白(其生產(chǎn)和/或質(zhì)量可以根據(jù)本披露進(jìn)行監(jiān)測(cè))包括多種血液學(xué)試劑中的任何一種(包括例如，促紅細(xì)胞生成素、血液凝固因子，等等)、干擾素、集落刺激因子、抗體、酶、以及激素，特別是在細(xì)胞表面表達(dá)的那些。在一些實(shí)施方案中，本披露提供了多種方法，在這些方法中將來自不同來源或樣品的細(xì)胞表面聚糖彼此進(jìn)行比較。在一些此類的實(shí)例中，隨著時(shí)間獲得了來自相同來源的多個(gè)樣品，這樣這些糖基化作用模式中的變化(并且特別是細(xì)胞表面的糖基化作用模式)就得到了監(jiān)測(cè)。在一些實(shí)施方案中，含聚糖的樣品以規(guī)則的間隔被移出。在一些實(shí)施方案中，含聚糖的樣品按照以下間隔被移出約30秒、約l分鐘、約2分鐘、約5分鐘、約10分鐘、約30分鐘、約1小時(shí)、約2小時(shí)、約3小時(shí)、約4小時(shí)、約5小時(shí)、約10小時(shí)、約12小時(shí)、或約18小時(shí)的間隔、或以甚至更長(zhǎng)的間隔被移出。在一些實(shí)施方案中，含聚糖的樣品以不規(guī)則的間隔被移出。在一些實(shí)施方案中，含聚糖的樣品以5小時(shí)的間隔被移出。在一些實(shí)施方案中，樣品之一是一種歷史樣品或歷史樣品的一個(gè)記錄。在一些實(shí)施方案中，樣品之一是一個(gè)參比樣品。如在此所說明，在某些實(shí)施方案中，本披露的方法在確定由一種細(xì)胞所產(chǎn)生的一種糖蛋白的糖基化作用模式的一種或多種特征方面是有用的。在某些實(shí)施方案中，此類方法可以包括以下步驟對(duì)在第一組條件下在產(chǎn)生一種所感興趣的糖蛋白的一種細(xì)胞的表面上存在的一種第一表面糖基化作用模式與在第二組條件下在該細(xì)胞的表面上存在的一種第二表面糖基化作用模式之間的一種差異進(jìn)行測(cè)定，并且基于所測(cè)定的差異建立由該細(xì)胞產(chǎn)生的所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式的一種或多種特征。例如，通過確定在一種細(xì)胞培養(yǎng)系的不同的時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞的表面上存在的糖基化作用模式來確定隨著時(shí)間的所感興趣的一種糖蛋白的糖基化作用模式。額外地或者可替代地，可以檢測(cè)在一種或多種不同的生長(zhǎng)參數(shù)下生長(zhǎng)的所感興趣的一種糖蛋白的糖基化作用模式的變化來確定針對(duì)糖蛋白生產(chǎn)的一種或多種所希望的生長(zhǎng)參數(shù)、或多種參數(shù)的組合。在某些實(shí)施方案中，糖基化作用模式中的差異是通過對(duì)一種糖基化作用模式的特征進(jìn)行觀察和/或測(cè)量來測(cè)定的，這些特征例諸如但不限于糖基化位點(diǎn)的占用、所連接的聚糖的身份、所連接的聚糖的相對(duì)量值、所連接的聚糖的完整的或部分的構(gòu)成、和/或所連接的聚糖的相對(duì)量值。本披露的方法涵蓋了對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員己知的其他糖基化作用模式的特征進(jìn)行觀察和/或測(cè)量。在一些具體的實(shí)施方案中，在此說明的方法可用于表征和/或控制或比較這些治療性產(chǎn)物的質(zhì)量而不要求將這些產(chǎn)物其本身分離。僅給出一個(gè)實(shí)例，根據(jù)在此所說明的本發(fā)明的方法學(xué)可以用于評(píng)定在產(chǎn)生一種治療性蛋白產(chǎn)品的細(xì)胞中的糖基化作用。具體而言，假定糖基化作用可經(jīng)常影響一種治療性蛋白產(chǎn)品的活性、生物利用度、或其他特征，則用于在這種治療性蛋白產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中對(duì)細(xì)胞的糖基化作用進(jìn)行評(píng)定的方法是特別希望的。除其他事項(xiàng)之外，本披露可以促進(jìn)在用于治療性蛋白的生產(chǎn)體系中的糖基化作用的實(shí)時(shí)分析。在一些實(shí)施方案中，在此提供的這些方法被用來監(jiān)測(cè)發(fā)生在不同的樣品中(例如在不同的細(xì)胞培養(yǎng)系中)的糖基化作用的程度和/或類型。在一些實(shí)施方案中，對(duì)來自不同的細(xì)胞培養(yǎng)系樣品的聚糖進(jìn)行比較，這些聚糖在以下條件下得到制備，這些條件在一個(gè)或多個(gè)所選擇的參數(shù)方面有所不同(例如，細(xì)胞類型，培養(yǎng)類型[例如，連續(xù)進(jìn)料對(duì)比分批進(jìn)料，等等]、培養(yǎng)條件[例如，培養(yǎng)基的類型、一種或多種特定的培養(yǎng)基中特定成分的存在或濃度、滲透性、pH、溫度、一種或多種因素(如滲透性、pH、溫度，等等)變換的時(shí)間或程度]、培養(yǎng)時(shí)間，分離步驟，等等)，但在其他方面相同，從而確定所選擇的一個(gè)或一些參數(shù)對(duì)N-糖基化作用模式的影響。在某些實(shí)施方案中，對(duì)來自不同的細(xì)胞培養(yǎng)系樣品(這些樣品在一定的條件下得到制備，這些條件在一個(gè)單一選擇的參數(shù)方面有所不同)的聚糖進(jìn)行比較，從而確定該單一選擇的參數(shù)對(duì)糖基化作用模式的影響。因此，在其他應(yīng)用中，本技術(shù)可以促進(jìn)多個(gè)特定的參數(shù)對(duì)細(xì)胞中的糖基化作用模式的作用的確定。在一些實(shí)施方案中，對(duì)來自不同批次的產(chǎn)生一種所感興趣的糖蛋白的細(xì)胞的細(xì)胞表面聚糖(例如，一種治療性糖蛋白)(無(wú)論是通過相同的方法還是通過不同的方法進(jìn)行制備，以及無(wú)論是同時(shí)制備還是分開制備)進(jìn)行了比較。在此類實(shí)施方案中，本披露促進(jìn)了糖蛋白制品的質(zhì)量控制(即，一種靶糖蛋白制品的制備)?？商娲鼗蝾~外地，一些此類的實(shí)施方案促進(jìn)了監(jiān)測(cè)一種特定的培養(yǎng)系(產(chǎn)生一種所感興趣的糖蛋白)的進(jìn)程(例如，當(dāng)樣品在不同的時(shí)間點(diǎn)從該培養(yǎng)系中被移出，并對(duì)樣品進(jìn)行分析并將這些樣品彼此進(jìn)行比較時(shí))。在這些實(shí)施方案的任何一個(gè)中，這些聚糖分析的特征可以得到記錄，例如在一個(gè)質(zhì)量控制記錄中。如以上所指明，在一些實(shí)施方案中，與糖蛋白的一個(gè)先前的歷史記錄、或標(biāo)準(zhǔn)批次、和/或與一個(gè)參比樣品進(jìn)行了比較。在某些實(shí)施方案中，可在多項(xiàng)研究中利用本披露來修飾一種細(xì)胞的糖基化作用特征，(例如)以便確立具有一個(gè)或多個(gè)所希望的糖基化作用特征的一種細(xì)胞系和/或培養(yǎng)條件。然后，可以利用這種細(xì)胞系和/或此類培養(yǎng)條件(如果希望的話)用于產(chǎn)生一種特定的靶結(jié)合糖(例如，糖蛋白)，預(yù)期這種或此類糖基化作用特征對(duì)該靶結(jié)合糖是有益的。根據(jù)本披露，在此說明的技術(shù)可以用于檢測(cè)所希望的或不希望的聚糖，例如用于檢測(cè)在一個(gè)產(chǎn)品中一種或多種污染物的存在或?qū)ζ溥M(jìn)行定量，或用于檢測(cè)一種或多種活性或所希望的種類的存在或?qū)ζ溥M(jìn)行定量。在不同的實(shí)施方案中，通過檢測(cè)一種或多種特異性聚糖(其存在或水平(不論是絕對(duì)或相對(duì))可能與一種特定的疾病狀態(tài)(包括對(duì)一種特定疾病的易感性)和/或隨著時(shí)間在此類聚糖的濃度上的變化相關(guān))，這些方法可以用于評(píng)定一種或多種生物標(biāo)記物，這些生物標(biāo)記物在癥狀出現(xiàn)之前和/或疾病狀態(tài)發(fā)展到一種不可處理或處理可能性較小的狀態(tài)之前指明(例如)一種疾病狀態(tài)。例如，在本披露的一些實(shí)施方案中，這種靶結(jié)合糖是一種生物標(biāo)記物。在某些實(shí)施方案中，在此說明的方法促進(jìn)了聚糖(例如，細(xì)胞表面聚糖)的檢測(cè)，這些聚糖以非常低的水平存在于一種來源中(例如，一種生物的樣品)。在此類實(shí)施方案中，有可能對(duì)細(xì)胞表面聚糖的水平進(jìn)行檢測(cè)和/或可任選地進(jìn)行定量，這些聚糖在多種聚糖的一個(gè)群體中按照以下水平存在小于約10%、5%、4%、3%、2%、1.5%、1%、0.75%、0.5%、0.25%、0.1%、0.075%、0.05%、0.025%、或0.01%。在一些實(shí)施方案中，有可能對(duì)聚糖的水平進(jìn)行檢測(cè)和/或可任選地進(jìn)行定量，這些聚糖的水平包括在一種細(xì)胞表面聚糖制品的0.1%與5%之間，例如在0.1%與2°/。之間，例如在0.1%與1%之間。在某些實(shí)施方案中，有可能對(duì)聚糖的水平進(jìn)行檢測(cè)和/或可任選地進(jìn)行定量，這種聚糖的水平在約0.1fmol至約1mmol之間。在一些實(shí)施方案中，在此說明的技術(shù)可以與一種或多種其他技術(shù)相結(jié)合，用于聚糖或結(jié)合糖的檢測(cè)、分析、和或分離。試劑盒可用于本披露的一種或多種方法的實(shí)施的試劑可以希望的是裝在一種試劑盒一起提供。在某些實(shí)施方案中，本披露的試劑盒包括可用于將這些糖蛋白從該細(xì)胞表面釋解出的一種或多種試劑(例如，一種或多種蛋白酶、糖苷酶、和/或其他試劑)、和/或多種補(bǔ)充性成分(如緩沖物、輔因子、等等)。在某些實(shí)施方案中，本披露的試劑盒包括可用于對(duì)從這些細(xì)胞(細(xì)胞表面糖蛋白己經(jīng)從中被釋解出)中釋解出的細(xì)胞表面糖蛋白進(jìn)行純化和/或分析的一種或多種試劑。在某些實(shí)施方案中，本披露的試劑盒包括可用于將這些聚糖結(jié)構(gòu)從一種糖蛋白或糖肽上剪切下來的一種或多種試劑(例如，酶類如PNGaseF、PNGaseA、O-聚糖酶、禾口/或Endo-H)。在某些實(shí)施方案中，本披露的試劑盒包括可用于將這些經(jīng)切割的聚糖結(jié)構(gòu)從這些糖蛋白或糖肽(例如，一種或多種糖苷酶)的蛋白組分中純化出來的一種或多種試劑。在某些實(shí)施方案中，本披露的試劑盒包括用于對(duì)這些聚糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行標(biāo)記的一種或多種試劑。例如，本披露的試劑盒可包括熒光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、和/或化學(xué)發(fā)光標(biāo)記。在一些實(shí)施方案中，本披露的試劑盒包括熒光性2-氨基苯甲酰胺("2-AB")。在某些實(shí)施方案中，本披露的試劑盒包括用于對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)(例如，細(xì)胞培養(yǎng)基、緩沖物、培養(yǎng)基組分、等等)和/或在己對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)之后對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行純化的一種或多種試劑。以上說明應(yīng)理解為僅僅是代表性的而并非旨在進(jìn)行限定。用于實(shí)施本披露的多種替代性方法和材料以及本披露可施用的額外應(yīng)用對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說應(yīng)當(dāng)是清楚的，并且旨在將它們包含在所附的權(quán)利要求之中。例證實(shí)例1:通過外切糖苷酶處理釋放的細(xì)胞表面聚糖的檢測(cè)揭示了在細(xì)胞表面與非細(xì)胞表面糖基化作用方面的平行變化將產(chǎn)生所感興趣的一種細(xì)胞表面糖蛋白(在這種情況下是一種非細(xì)胞表面抗體)的CHO細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)條件下在兩種不同的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)一種第一培養(yǎng)基(包含一個(gè)第一量的葡糖胺)以及一種第二培養(yǎng)基(包含一種第二量的葡糖胺)，其中第二量的葡糖胺比第一量的葡糖胺更高。在處于培養(yǎng)之中生長(zhǎng)了一段給定的時(shí)間之后，從相同的培養(yǎng)瓶中收集了細(xì)胞以及培養(yǎng)系的上清液。將細(xì)胞粒化并用PBS進(jìn)行洗滌以便去除培養(yǎng)基組分，并且在對(duì)產(chǎn)物抗體進(jìn)行分離之前將培養(yǎng)系的上清液變清。為了產(chǎn)物的分離，用蛋白A瓊脂糖珠將培養(yǎng)系的上清液孵育過夜。然后將珠子粒化并用PBS洗滌。用低pH0.1M甘氨酸溶液對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行洗脫。用蛋白酶對(duì)已洗滌的細(xì)胞的一個(gè)等分部分進(jìn)行處理以便于將細(xì)胞表面糖肽釋放出。通過離心作用使完整細(xì)胞與已釋放出的細(xì)胞表面糖肽分離。用PNGaseF將這些聚糖從已分離的產(chǎn)物抗體或從已釋放的細(xì)胞表面糖肽中酶性釋放。對(duì)這些已分離的聚糖進(jìn)行熒光標(biāo)記并且用外切糖苷酶(唾液酸酶、半乳糖苷酶、以及己糖胺酶)對(duì)其進(jìn)行處理以便使N-連接的聚糖塌陷成核心M3N2;通過LC和/或MS對(duì)經(jīng)這種處理所釋放的聚糖進(jìn)行分析，這樣巖藻糖化的以及非巖藻糖化的聚糖的相對(duì)量值就得到確定。圖1示出了在第一(對(duì)照物)以及第二(升高的葡糖胺)培養(yǎng)基中針對(duì)非細(xì)胞表面糖蛋白(抗體產(chǎn)物)所觀察到的非巖藻糖化的聚糖的百分?jǐn)?shù)；圖3A至圖3B示出了在相同的培養(yǎng)基中針對(duì)細(xì)胞表面聚糖所觀察到的相同的百分?jǐn)?shù)。圖2示出了針對(duì)細(xì)胞表面聚糖的代表性的LC譜，如在圖3A至圖3B的概述資料中所包括。如在圖1和圖3中清楚看到的，針對(duì)非細(xì)胞表面以及細(xì)胞表面聚糖群體觀察到了在非巖藻糖化的結(jié)構(gòu)方面的一種相似的增加(即，核心al-6巖藻糖基化作用的損失)。這些資料證實(shí)根據(jù)本披露所利用的方法允許對(duì)細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行簡(jiǎn)便的檢測(cè)、分離、和或分析，并且進(jìn)一步證實(shí)在非細(xì)胞表面糖基化作用模式方面的變化可以反映在細(xì)胞表面糖基化作用模式方面類似的變化之中，這樣細(xì)胞表面聚糖的檢測(cè)可以作為對(duì)于非細(xì)胞表面聚糖的檢測(cè)的一種代用品。實(shí)例2:在完整細(xì)胞上或在已釋放出的細(xì)胞表面聚糖上的細(xì)胞表面聚糖的檢測(cè)揭示了在細(xì)胞表面以及非細(xì)胞表面糖基化作用方面的平行變化將產(chǎn)生所感興趣的一種細(xì)胞表面糖蛋白(在這種情況下是一種非細(xì)胞表面抗體)的CHO細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)條件下在兩種不同的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)一種第一培養(yǎng)基(包含一種第一量的N-乙酰甘露糖胺)以及一種第二培養(yǎng)基(包含一種第二量的N-乙酰甘露糖胺)，其中第二量的N-乙酰甘露糖胺比第一量的N-乙酰甘露糖胺更高。在處于培養(yǎng)之中生長(zhǎng)了一段給定的時(shí)間之后，從相同的培養(yǎng)瓶中收集了細(xì)胞以及培養(yǎng)系的上清液。將這些細(xì)胞?；⒂肞BS進(jìn)行洗滌以便去除培養(yǎng)基組分。將培養(yǎng)系的上清液變清。通過用蛋白A瓊脂糖珠將非細(xì)胞表面抗體產(chǎn)物孵育過夜使非細(xì)胞表面抗體產(chǎn)物從培養(yǎng)系的上清液中分離出來。然后，將珠子粒化并用PBS洗滌。用低pH0.1M甘氨酸溶液對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行洗脫。通過暴露于低滲溶液使已洗滌的細(xì)胞的一個(gè)等分部分裂解，并且對(duì)得到的膜進(jìn)行?；Ｍㄟ^酸處理使唾液酸從所分離的抗體產(chǎn)物以及這些膜中釋放出，并且通過離子交換色譜法而被分離。隨后，得到的唾液酸被DMB(1，2-二氨基-4，5-亞甲基二氧基苯-2HCl)標(biāo)記，并且用HPLC進(jìn)行分析。同時(shí)，將已洗滌的細(xì)胞的一個(gè)第二等分部分經(jīng)受凝集素染色并且用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。針對(duì)細(xì)胞表面以及該非細(xì)胞表面聚糖樣品在各自的培養(yǎng)條件下對(duì)唾液酸的水平進(jìn)行測(cè)定。圖4示出了來自細(xì)胞表面的唾液酸水平的代表性LC分析。圖5至圖7示出了在不同的培養(yǎng)條件下在細(xì)胞表面以及非細(xì)胞表面聚糖中唾液酸的相對(duì)量值。如能所見，當(dāng)細(xì)胞在升高水平的N-乙酰甘露糖胺中生長(zhǎng)時(shí)，在非細(xì)胞表面以及細(xì)胞表面聚糖群體中觀察到了唾液酸水平的相似的增加。這些數(shù)據(jù)證實(shí)在此所說明的方法允許對(duì)細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行簡(jiǎn)便的檢測(cè)、分離、和或分析，并且進(jìn)一步證實(shí)在非細(xì)胞表面糖基化作用模式方面的變化可以反映在細(xì)胞表面糖基化作用模式方面的類似變化中，這樣細(xì)胞表面聚糖的檢測(cè)可以作為對(duì)于非細(xì)胞表面聚糖的檢測(cè)的一種代用品。重要的是，這些數(shù)據(jù)證實(shí)了對(duì)一種所感興趣的產(chǎn)物的糖基化作用進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)(不要求將產(chǎn)物其自身分離)的能力。實(shí)例3:葡糖胺補(bǔ)充物對(duì)細(xì)胞表面以及產(chǎn)物唾液酸化作用的效應(yīng)在葡糖胺補(bǔ)充物存在或不存在時(shí)對(duì)產(chǎn)生一種糖蛋白產(chǎn)物的CHO細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。5天之后，收集這些細(xì)胞和產(chǎn)物并且針對(duì)唾液酸含量分開進(jìn)行分析。通過陰離子交換色譜法對(duì)細(xì)胞表面的唾液酸含量進(jìn)行測(cè)定，如圖8所展示。相對(duì)于沒有葡糖胺補(bǔ)充物而言，針對(duì)細(xì)胞表面和產(chǎn)物的唾液酸的百分?jǐn)?shù)變化顯示在以下表2中。表2中的數(shù)據(jù)表示為重復(fù)實(shí)驗(yàn)(replicates)的平均值(S.D.)。表2,唾液酸化作用下降的百分?jǐn)?shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>這些數(shù)據(jù)證實(shí)與葡糖按補(bǔ)充物相關(guān)聯(lián)的唾液酸化作用方面的下降與產(chǎn)物唾液酸化作用的下降有關(guān)。等效物本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到、或通過使用不超出常規(guī)實(shí)驗(yàn)即能夠確定與在此說明的本披露的特定的實(shí)施方案一致的很多等效物。本披露的范圍并非旨在限制以上的說明，而是如所附的權(quán)利要求書中所給出。在權(quán)利要求中，冠詞如"一個(gè)(種)"以及"該"可以表示一個(gè)或多于一個(gè)，除非指明與此相反或另外從上下文中是明確的。包括一組的一個(gè)或多個(gè)成員"或"在其之間的權(quán)利要求書或說明書被認(rèn)為是滿足以下條件該組成員中的一個(gè)、多于一個(gè)或所有是否存在于，被用于、或者另外涉及了一個(gè)給定的產(chǎn)物或方法，除非指明與此相反或另外從上下文中是明確的。本披露包括多個(gè)實(shí)施方案，其中該組的一個(gè)成員準(zhǔn)確地存在于，被用于、或者另外涉及了一種給定的產(chǎn)物或方法。本披露包括多個(gè)實(shí)施方案，其中該組成員的多于一個(gè)、或所有成員準(zhǔn)確地存在于，被用于、或者另外涉及了一種給定的產(chǎn)物或方法。此外，應(yīng)該理解的是本披露涵蓋了全部變體、組合、以及排列，其中一個(gè)或多個(gè)限制、要素、條款、描述性術(shù)語(yǔ)、等等，從一個(gè)或多個(gè)所列出的權(quán)利要求中被引入到另一個(gè)權(quán)利要求。例如，可以對(duì)從屬于另一個(gè)權(quán)利要求的任何一項(xiàng)權(quán)利要求進(jìn)行修改以便包括在從屬于同一基礎(chǔ)權(quán)利要求的任何一項(xiàng)其他的權(quán)利要求中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)或多個(gè)限制。此外，在權(quán)利要求提及一種組合時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解的是包括針對(duì)在此所披露的目的中任何一種目的的組合的方法，并且包括根據(jù)形成在此所披露的多種方法中的任何一種而形成組合的方法或在本領(lǐng)域已知的其他方法，除非另有說明或者除非對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言明顯會(huì)產(chǎn)生一種矛盾或不一致性。當(dāng)多種要素作為列表(例如以Markush組的格式)存在時(shí)，應(yīng)理解的是這些要素中的每個(gè)亞組也已被披露并且任何一個(gè)或多個(gè)要素可以從該組中被移出。應(yīng)當(dāng)理解的是，總體而言，當(dāng)提及本披露或根據(jù)本披露的多個(gè)方面，是指包括具體的要素、特征、等等時(shí)，根據(jù)本披露的某些實(shí)施方案或根據(jù)本披露的多個(gè)方面包括，或基本上包括此類要素、特征，等等。出于簡(jiǎn)單的目的，那些實(shí)施方案沒有在此處的這些詞語(yǔ)中確切地給出。注意到了術(shù)語(yǔ)"包括"旨在是開放性的并且允許附加的要素或步驟的包含物。當(dāng)給出這些范圍時(shí)，包括端點(diǎn)。此外，應(yīng)該理解的是，除非另有指明或另外從上下文中以及本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的理解中是明確的，表達(dá)成范圍的這些值可以假定為在本披露的不同實(shí)施方案中所指出的范圍內(nèi)的任何一種特定的值或亞范圍，到該范圍的下限單位的十分之一(除非上下文中另有清楚地指出)。此外，應(yīng)當(dāng)理解的是，落入現(xiàn)有技術(shù)的本披露的任何一個(gè)具體實(shí)施方案可以明確地從這些權(quán)利要求中的任何一項(xiàng)或多項(xiàng)中排除。因?yàn)榇祟悓?shí)施方案被認(rèn)為是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所已知的，即使沒有在此明確地提出這種排除，它們也可以被排除。本披露的這些組合中的任何一個(gè)具體的實(shí)施方案(例如，任何外切糖苷酶、任何糖苷連接、任何反應(yīng)條件、任何提純的方法、產(chǎn)物分析的任何方法、等等)可以從任何一項(xiàng)或更多項(xiàng)權(quán)利要求中以任何原因而被排除，不論是否涉及現(xiàn)有技術(shù)的存在。以上以及貫穿本文討論的這些公開文件僅僅是因?yàn)樗鼈兊呐对缬诒旧暾?qǐng)的提交日而將它們提供在此。在此的任何內(nèi)容都不得被解釋為承認(rèn)諸位發(fā)明人由于在先披露而沒有資格超前于這種披露。權(quán)利要求1.測(cè)定由一個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的糖蛋白的糖基化作用模式的一種或多種特征的一種方法，該方法包括以下步驟a)測(cè)定在糖基化作用模式的以下各項(xiàng)之間的一種差異(i)在一個(gè)第一組條件下于一個(gè)細(xì)胞的表面上存在的一種第一表面糖基化作用模式，該細(xì)胞產(chǎn)生一種所感興趣的糖蛋白；并且(ii)在一個(gè)第二組條件下于一個(gè)細(xì)胞的表面上存在的一種第二表面糖基化作用模式；并且b)基于該測(cè)定的差異，建立由該細(xì)胞產(chǎn)生的所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式的一種或多種特征。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該一種或多種特征包括在所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式中的一種變化。3.如權(quán)利要求1所述的方法，該測(cè)定一種差異的步驟包括測(cè)定在該第一與第二表面糖基化作用模式之間唾液酸化作用的一種差異。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中該建立一種或多種特征的步驟包括建立在所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式中存在的唾液酸化作用的一種程度。5.如權(quán)利要求l所述的方法，其中該產(chǎn)生一種所感興趣的糖蛋白的細(xì)胞是產(chǎn)生該所感興趣的糖蛋白的多個(gè)細(xì)胞的一個(gè)培養(yǎng)系；該第一組條件代表時(shí)間上的一個(gè)第一點(diǎn)，這樣該第一表面糖基化作用模式是在該時(shí)間上的第一點(diǎn)在處于培養(yǎng)之中的這些細(xì)胞的表面上存在的一種模式；并且該第二組條件代表時(shí)間上的一個(gè)第二點(diǎn)，這樣該第二表面糖基化作用模式是在該時(shí)間上的第二點(diǎn)在處于培養(yǎng)之中的這些細(xì)胞的表面上存在的一種模式，這樣該建立所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式的一種或多種特征的步驟涉及在所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式中建立隨著時(shí)間的一種變化，并且由此允許生產(chǎn)狀況或質(zhì)量的評(píng)定。6.如權(quán)利要求l所述的方法，其中該產(chǎn)生一種所感興趣的糖蛋白的細(xì)胞是產(chǎn)生該所感興趣的糖蛋白的一種多個(gè)細(xì)胞的培養(yǎng)系；該第一以及第二組條件代表應(yīng)用到產(chǎn)生所感興趣的糖蛋白的多個(gè)細(xì)胞的培養(yǎng)系上的多種生長(zhǎng)參數(shù)的不同的收集，這樣就建立起對(duì)于產(chǎn)生所感興趣的糖蛋白的希望的生長(zhǎng)參數(shù)。7.—種方法，包括以下步驟a)測(cè)定在糖基化作用模式的以下各項(xiàng)之間的一種差異-(i)一種第一表面糖基化作用模式存在于多個(gè)細(xì)胞的一個(gè)第一培養(yǎng)系中的細(xì)胞的表面上；并且(ii)一種第二表面糖基化作用模式存在于處于培養(yǎng)之中的細(xì)胞表面上，其中該第一培養(yǎng)系以及第二培養(yǎng)系相對(duì)于至少一個(gè)參數(shù)彼此不同；并且b)基于該測(cè)定的差異，建立該至少一個(gè)參數(shù)對(duì)由處于培養(yǎng)之中的細(xì)胞所產(chǎn)生的糖蛋白的糖基化作用的效應(yīng)。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中該至少一個(gè)參數(shù)是一個(gè)單一的參數(shù)。9.如權(quán)利要求7或8所述的方法，其中該至少一個(gè)參數(shù)包括細(xì)胞的身份。10.如權(quán)利要求9所述的方法，進(jìn)一步包括以下的一個(gè)步驟基于該建立的效應(yīng)，選擇針對(duì)糖蛋白的生產(chǎn)所希望的細(xì)胞。11.如權(quán)利要求7或8所述的方法，其中該至少一個(gè)參數(shù)包括至少一種生長(zhǎng)情況。12.如權(quán)利要求11所述的方法，進(jìn)一步包括以下的一個(gè)步驟基于該建立的效應(yīng)，選擇針對(duì)糖蛋白類的生產(chǎn)所希望的一些生長(zhǎng)條件。13.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求7所述的方法，其中該測(cè)定一種差異的步驟包括測(cè)定選自下組的一個(gè)特征的一種差異，該組的構(gòu)成為糖基化作用位點(diǎn)占用的程度、所連接的聚糖的身份、所連接的聚糖的相對(duì)量值、所連接的聚糖的完整的或部分的構(gòu)成、所連接的聚糖的相對(duì)量值、以及它們的組合。14.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該測(cè)定步驟包括從該細(xì)胞中釋解出(liberate)至少一種細(xì)胞表面聚糖，并且對(duì)該已釋解出的聚糖進(jìn)行分析。15.如權(quán)利要求7所述的方法，其中該測(cè)定步驟包括從處于該第一培養(yǎng)系中的細(xì)胞中釋解出至少一種第一細(xì)胞表面聚糖；從處于該第二培養(yǎng)系中的細(xì)胞中釋解出至少一種第二細(xì)胞表面聚糖；并且分析該第一以及第二己釋解出的細(xì)胞表面聚糖。16.如權(quán)利要求14所述的方法，其中該釋解步驟包括將該細(xì)胞暴露于一種蛋白酶。17.如權(quán)利要求15所述的方法，其中每一個(gè)釋解步驟包括將細(xì)胞暴露于一種蛋白酶。18.如權(quán)利要求16或17所述的方法，其中該暴露步驟包括經(jīng)受蛋白酶處理，這樣使得至少一種糖蛋白得以釋解出，其中該蛋白酶處理基本上不使細(xì)胞膜破裂。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中該蛋白酶是選自下組，其構(gòu)成為蛋白酶K、胰蛋白酶、以及它們的組合。20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中該經(jīng)受步驟包括經(jīng)受大約0.1至2.0mg/mL的濃度的一種或多種蛋白酶。21.如權(quán)利要求19所述的方法，其中該經(jīng)受步驟包括在大約37°C的溫度下經(jīng)受蛋白酶處理達(dá)大約15分鐘。22.如權(quán)利要求14或15所述的方法，其中該分析步驟利用了選自下組的一種表征方法，該組的構(gòu)成為NMR、質(zhì)譜法、液相色譜法、2-維色譜法、SDS-PAGE、抗體染色、凝集素染色、單糖定量、熒光團(tuán)輔助糖電泳(FACE)、膠束電動(dòng)色譜法(MEKC)、外切糖苷酶或內(nèi)切糖苷酶處理、以及它們的組合。23.如權(quán)利要求1或7所述的方法，其中該測(cè)定步驟不涉及從一些細(xì)胞中釋解出聚糖類。24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中該測(cè)定步驟包括使該至少一種細(xì)胞表面的結(jié)合糖經(jīng)受選自下組的一種表征方法，該組的構(gòu)成為抗體染色、凝集素染色、單糖定量、外切糖苷酶處理、以及它們的組合。25.如權(quán)利要求14或15所述的方法，其中該釋解步驟包括a)從一些細(xì)胞表面糖蛋白上切割一種或多種蛋白連接的一些細(xì)胞表面聚糖；并且b)對(duì)該一種或多種已切割的蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征。26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中一種或多種已切割的蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是通過選自下組的一種方法進(jìn)行表征的，該組的構(gòu)成為NMR、質(zhì)譜法、液相色譜法、2-維色譜法、SDS-PAGE、抗體染色、凝集素染色、單糖定量、熒光團(tuán)輔助糖電泳(FACE)、膠束電動(dòng)色譜法(MEKC)、外切糖苷酶或內(nèi)切糖苷酶處理、以及它們的組合。27.如權(quán)利要求25所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是一種N-連接的聚糖28.如權(quán)利要求25所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是一種O-連接的聚糖29.如權(quán)利要求25所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種復(fù)合聚糖。30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括至少一個(gè)唾液酸殘基。31.如權(quán)利要求25所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種高甘露糖聚糖。32.如權(quán)利要求25所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種雜合聚糖。33.如權(quán)利要求1或7所述的方法，進(jìn)一步包括對(duì)關(guān)于所測(cè)定的差異或關(guān)于在一種固定的培養(yǎng)基中至少一種糖基化作用模式的信息進(jìn)行記錄的一個(gè)步驟。34.如權(quán)利要求33所述的方法，進(jìn)一步包括將該所記錄的信息與一個(gè)歷史記錄或參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較的一個(gè)步驟。35.如權(quán)利要求33或34所述的方法，其中這些記錄或比較的步驟是一種質(zhì)量控制操作的部分。36.測(cè)定由一種細(xì)胞產(chǎn)生的感興趣的一種糖蛋白的糖基化作用模式的一種或多種特征的一種方法，該方法包括a)提供產(chǎn)生所感興趣的一種糖蛋白的一種細(xì)胞，這種細(xì)胞具有至少一個(gè)附連至該細(xì)胞的表面上的細(xì)胞表面聚糖，這樣使得該細(xì)胞具有一種細(xì)胞表面糖基化作用模式；并且b)測(cè)定該細(xì)胞表面糖基化作用模式的至少一種特征；并且c)基于該測(cè)定的特征，建立所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式的一種或多種特征，其中該測(cè)定的特征與所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式的一種或多種特征相關(guān)。37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中至少一種細(xì)胞表面聚糖是一種細(xì)胞表面結(jié)合糖的部分。38.如權(quán)利要求37所述的方法，其中該至少一種細(xì)胞表面聚糖是一種細(xì)胞表面糖蛋白的部分。39.如權(quán)利要求38所述的方法，其中該建立步驟包括對(duì)多種聚糖進(jìn)行表征，這些聚糖是細(xì)胞表面糖蛋白的一部分。40.如權(quán)利要求39所述的方法，其中該測(cè)定的特征是選自下組，包括糖基化作用位點(diǎn)占用的程度、所連接的聚糖的身份、所連接的聚糖的相對(duì)量值、所連接的聚糖的完整的或部分的構(gòu)成、所連接的聚糖的相對(duì)量值、以及它們的組合，以及該建立步驟包括測(cè)定共享該測(cè)定的特征的所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式。41.如權(quán)利要求38所述的方法，其中該細(xì)胞表面糖蛋白在該測(cè)定步驟之前從該細(xì)胞中釋解出。42.如權(quán)利要求41所述的方法，其中該細(xì)胞表面糖蛋白通過使該細(xì)胞經(jīng)受蛋白酶處理而從該細(xì)胞中釋解出，這樣使該糖蛋白從該細(xì)胞中釋解出，其中該蛋白酶處理基本上不使該細(xì)胞膜破裂。43.如權(quán)利要求41所述的方法，其中該細(xì)胞表面糖蛋白通過使該細(xì)胞經(jīng)受選自下組的一種或多種蛋白水解酶處理而從該細(xì)胞中釋解出，該組的構(gòu)成為蛋白酶K、胰蛋白酶、以及它們的組合。44.如權(quán)利要求43所述的方法，其中該經(jīng)受步驟包括使該細(xì)胞經(jīng)受大約0.1至2.0mg/mL的濃度的一種或多種蛋白水解酶。45.如權(quán)利要求43所述的方法，其中該經(jīng)受步驟包括使該細(xì)胞在大約37°C的溫度下經(jīng)受蛋白酶處理達(dá)大約15分鐘。46.如權(quán)利要求41所述的方法，其中該測(cè)定步驟包括使該細(xì)胞表面糖蛋白經(jīng)受選自下組的一種表征的方法，該組的構(gòu)成為NMR、質(zhì)譜法、液相色譜法、2-維色譜法、SDS-PAGE、抗體染色、凝集素染色、單糖定量、熒光團(tuán)輔助糖電泳(FACE)、膠束電動(dòng)色譜法(MEKC)、外切糖苷酶或內(nèi)切糖苷酶處理、以及它們的組合。47.如權(quán)利要求37所述的方法，其中該細(xì)胞表面結(jié)合糖在該測(cè)定步驟之前未從該細(xì)胞中釋解出。48.如權(quán)利要求47所述的方法，其中該測(cè)定步驟包括使該至少一種細(xì)胞表面的結(jié)合糖經(jīng)受選自下組的一種表征方法，該組的構(gòu)成為抗體染色、凝集素染色、單糖定量、熒光輔助糖電泳(FACE)、膠束電動(dòng)色譜法(MEKC)、外切糖苷酶或內(nèi)切糖苷酶處理、以及它們的組合。49.如權(quán)利要求38所述的方法，其中該細(xì)胞表面糖蛋白包括一種或多種蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖，并且其中該測(cè)定步驟包括a)從該細(xì)胞表面糖蛋白上切割該一種或多種蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖；并且b)對(duì)該一種或多種經(jīng)切割的蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征。50.如權(quán)利要求49所述的方法，其中一種或多種經(jīng)切割的蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是通過選自下組的一種方法進(jìn)行表征的，該組的構(gòu)成為NMR、質(zhì)譜法、液相色譜法、2-維色譜法、SDS-PAGE、抗體染色、凝集素染色、單糖定量、熒光團(tuán)輔助糖電泳(FACE)、膠束電動(dòng)色譜法(MEKC)、外切糖苷酶或內(nèi)切糖苷酶處理，以及它們的組合。51.如權(quán)利要求49所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是一種N-連接的聚糖。52.如權(quán)利要求49所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是一種O-連接的聚糖。53.如權(quán)利要求49所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種復(fù)合聚糖。54.如權(quán)利要求53所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括至少一個(gè)唾液酸殘基。55.如權(quán)利要求49所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種高甘露糖聚糖。56.如權(quán)利要求49所述的方法，其中該蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種雜合聚糖。57.如權(quán)利要求36至56中任何一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括對(duì)關(guān)于在一種固定的培養(yǎng)基中表征至少一種細(xì)胞表面聚糖的信息進(jìn)行記錄的一個(gè)步驟。58.如權(quán)利要求57所述的方法，進(jìn)一步包括將該已記錄的信息與一個(gè)歷史記錄進(jìn)行比較的一個(gè)步驟。59.如權(quán)利要求57或權(quán)利要求58所述的方法，其中這些記錄或比較步驟是一種質(zhì)量控制操作的部分。60.測(cè)定在感興趣的一種糖蛋白的糖基化作用模式中的一種或多種差異的一種方法，包括a)提供一種第一細(xì)胞，該細(xì)胞包括至少一個(gè)附連至該第一細(xì)胞的表面上的一種細(xì)胞表面聚糖，這種第一細(xì)胞產(chǎn)生所感興趣的糖蛋白；b)對(duì)該至少一種第一細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征；c)提供一種第二細(xì)胞，該細(xì)胞包括至少一個(gè)附連至該第二細(xì)胞的表面上的一種第二細(xì)胞表面聚糖，這種第二細(xì)胞產(chǎn)生所感興趣的糖蛋白；d)對(duì)該至少一種第二細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征；e)測(cè)定在該第一細(xì)胞表面聚糖與第二細(xì)胞表面聚糖之間的一種或多種差異；并且f)建立在所感興趣的糖蛋白的糖基化模式中的一種或多種差異，其中該所測(cè)定的差異或在該第一細(xì)胞表面聚糖與該第二細(xì)胞表面聚糖之間的差異與所感興趣的糖蛋白的糖基化模式中的一種或多種差異相關(guān)。61.如權(quán)利要求60所述的方法，其中這些第一以及第二細(xì)胞是選自一些細(xì)胞的一種原始種群。62.如權(quán)利要求60或61所述的方法，其中這些第一以及第二細(xì)胞在不同的細(xì)胞培養(yǎng)條件下進(jìn)行生長(zhǎng)。63.如權(quán)利要求62所述的方法，其中這些細(xì)胞培養(yǎng)條件在選自下組的參數(shù)方面有所不同，該組的構(gòu)成為細(xì)胞類型、培養(yǎng)類型、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)基類型、滲透性、pH、溫度、分離的步驟、以及它們的組合。64.如權(quán)利要求60或61所述的方法，其中這些第一以及第二細(xì)胞在相同的細(xì)胞培養(yǎng)條件下進(jìn)行生長(zhǎng)。65.如權(quán)利要求64所述的方法，其中這些第一以及第二細(xì)胞是在不同的時(shí)間點(diǎn)從一種細(xì)胞培養(yǎng)基中得到分離的，該培養(yǎng)基包括產(chǎn)生感興趣的糖蛋白的一些細(xì)胞，并且其中該測(cè)定的在該第一細(xì)胞表面聚糖與該第二細(xì)胞表面聚糖之間的一種或多種差異代表所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式隨著時(shí)間的一種變化。66.如權(quán)利要求60至65中任何一項(xiàng)所述的方法，其中這些第一以及第二細(xì)胞是選自下組，其構(gòu)成為中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、Madin-Darby犬腎(MDCK)細(xì)胞、幼倉(cāng)鼠腎(BHK細(xì)胞)、NSO細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞、MDA-MB-438細(xì)胞、U87細(xì)胞、A172細(xì)胞、HL60細(xì)胞、A549細(xì)胞、SP10細(xì)胞、DOX細(xì)胞、DG44細(xì)胞、HEK293細(xì)胞、SHSY5Y、Jurkat細(xì)胞、BCP-1細(xì)胞、COS細(xì)胞、Vero細(xì)胞、GH3細(xì)胞、9L細(xì)胞、3T3細(xì)胞、MC3T3細(xì)胞、C3H-10T1/2細(xì)胞、NIH-3T3細(xì)胞、C6/36細(xì)胞、以及它們的組合。67.如權(quán)利要求60所述的方法，其中該至少一種第一細(xì)胞表面聚糖是一種第一細(xì)胞表面結(jié)合糖的部分，并且第二細(xì)胞表面聚糖是一種第二細(xì)胞表面結(jié)合糖的部分。68.如權(quán)利要求67所述的方法，其中該至少一種第一細(xì)胞表面聚糖是一種第一細(xì)胞表面糖蛋白的部分，并且第二細(xì)胞表面聚糖是一種第二細(xì)胞表面糖蛋白的部分。69.如權(quán)利要求68所述的方法，其中對(duì)該至少一種第一細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征的步驟包括對(duì)多種第一聚糖進(jìn)行表征，這些第一聚糖是細(xì)胞表面糖蛋白的一部分；并且其中對(duì)該至少一種第二細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征的步驟包括對(duì)多種第二聚糖進(jìn)行表征，這些第二聚糖是細(xì)胞表面糖蛋白的一部分。70.如權(quán)利要求69所述的方法，其中對(duì)該至少一種第一以及第二細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征的步驟包括對(duì)選自下組的一個(gè)特征進(jìn)行評(píng)定，該組的構(gòu)成為糖基化作用位點(diǎn)占用的程度、所連接的聚糖的身份、所連接的聚糖的相對(duì)量值、這些聚糖的完整的或部分的構(gòu)成以及它們對(duì)于細(xì)胞表面聚糖的組合、以及它們的組合；并且在所感興趣的糖蛋白的糖基化模式中建立一種或多種差異的步驟包括確定所感興趣的糖蛋白共享該評(píng)定的特征。71.如權(quán)利要求69所述的方法，其中該第一以及第二細(xì)胞表面糖蛋白在對(duì)這些第一以及第二細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征的步驟之前從這些第一以及第二細(xì)胞中釋解出。72.如權(quán)利要求71所述的方法，其中這些第一以及第二細(xì)胞表面糖蛋白通過使這些細(xì)胞經(jīng)受蛋白酶處理而從這些第一以及第二細(xì)胞中釋解出，這樣使這些糖蛋白從這些細(xì)胞中釋解出，其中該蛋白酶處理基本上不使這些細(xì)胞膜破裂。73.如權(quán)利要求72所述的方法，其中這些第一以及第二細(xì)胞表面糖蛋白通過使這些細(xì)胞經(jīng)受選自下組的一種或多種蛋白水解酶而從這些第一以及第二細(xì)胞中被移出，該組的構(gòu)成為蛋白酶K、胰蛋白酶、以及它們的組合。74.如權(quán)利要求73所述的方法，其中該經(jīng)受步驟包括使這些細(xì)胞經(jīng)受大約0.1至2.0mg/mL的濃度的一種或多種蛋白水解酶。75.如權(quán)利要求73所述的方法，其中該經(jīng)受步驟包括使這些細(xì)胞在大約37°C的溫度下經(jīng)受蛋白酶處理達(dá)大約15分鐘。76.如權(quán)利要求71所述的方法，其中對(duì)該至少一種第一以及第二細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征的這些步驟包括使該至少一種第一以及第二細(xì)胞表面糖蛋白經(jīng)受選自下組的一種表征方法，該組的構(gòu)成為NMR、質(zhì)譜法、液相色譜法、2-維色譜法、SDS-PAGE、抗體染色、凝集素染色、單糖定量、熒光團(tuán)輔助糖電泳(FACE)、膠束電動(dòng)色譜法(MEKC)、外切糖苷酶或內(nèi)切糖苷酶處理、以及它們的組77.如權(quán)利要求67所述的方法，其中這些第一以及第二細(xì)胞表面結(jié)合糖在對(duì)這些至少一種第一以及第二細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征的這些步驟之前未從這些第一以及第二細(xì)胞中釋解出。78.如權(quán)利要求77所述的方法，其中對(duì)這些至少一種第一以及第二細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征的這些步驟包括使這些第一以及第二細(xì)胞表面結(jié)合糖經(jīng)受選自下組的一種表征方法，該組的構(gòu)成為抗體染色、凝集素染色、單糖定量、外切糖苷酶處理、以及它們的組合。79.如權(quán)利要求68所述的方法，其中該第一細(xì)胞表面糖蛋白包括一種或多種第一蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖，并且其中該第二細(xì)胞表面糖蛋白包括一種或多種第二蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖，并且其中對(duì)這些至少一種第一以及第二細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征的步驟包括a)從這些第一以及第二細(xì)胞表面糖蛋白上切割這些一種或多種第一以及第二蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖；并且b)對(duì)這些一種或多種第一以及第二經(jīng)切割的蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征。80.如權(quán)利要求79所述的方法，其中一種或多種第一以及第二經(jīng)切割的蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是通過選自下組的一種方法進(jìn)行表征的，該組的構(gòu)成為NMR、質(zhì)譜法、液相色譜法、2-維色譜法、SDS-PAGE、抗體染色、凝集素染色、單糖定量、熒光團(tuán)輔助糖電泳(FACE)、膠束電動(dòng)色譜法(MEKC)、外切糖苷酶或內(nèi)切糖苷酶處理，以及它們的組合。81.如權(quán)利要求79所述的方法，其中該第一蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是一種N-連接的聚糖，該第二蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是一種N-連接的聚糖，或二者皆有。82.如權(quán)利要求79所述的方法，其中該第一蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是一種O-連接的聚糖，該第二蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖是一種0-連接的聚糖，或二者皆有。83.如權(quán)利要求79所述的方法，其中該第一蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種復(fù)合聚糖，該第二蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種復(fù)合聚糖，或二者皆有。84.如權(quán)利要求83所述的方法，其中該第一蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括至少一種唾液酸殘基，該第二蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括至少一種唾液酸殘基，或二者皆有。85.如權(quán)利要求79所述的方法，其中該第一蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種高甘露糖聚糖，該第二蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種高甘露糖聚糖，或二者皆有。86.如權(quán)利要求79所述的方法，其中該第一蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種雜合聚糖，該第二蛋白連接的細(xì)胞表面聚糖包括一種雜合聚糖，或二者皆有。87.如權(quán)利要求60至86中任何一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括對(duì)關(guān)于在一種固定的培養(yǎng)基中表征至少一種第一以及第二細(xì)胞表面聚糖的信息進(jìn)行記錄的一個(gè)步驟。88.如權(quán)利要求87所述的方法，進(jìn)一步包括將該記錄的信息與一個(gè)歷史記錄進(jìn)行比較的一個(gè)步驟。89.如權(quán)利要求87或權(quán)利要求88所述的方法，其中這些記錄或比較的步驟是一種質(zhì)量控制操作的部分。90.對(duì)所感興趣的一種糖蛋白的糖基化作用模式的一種或多種特征進(jìn)行測(cè)定的一種方法，包括以下步驟a)提供一種細(xì)胞，該細(xì)胞包括至少一個(gè)附連至該細(xì)胞的表面上的一種細(xì)胞表面聚糖，這種細(xì)胞產(chǎn)生所感興趣的糖蛋白；并且b)對(duì)該室少一種細(xì)胞表面聚糖進(jìn)行表征；并且c)測(cè)定所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式的一種或多種特征，其中所表征的至少一種聚糖與所感興趣的糖蛋白的糖基化作用模式的這些一種或多種特征相關(guān)。91.如權(quán)利要求90所述的方法，其中該細(xì)胞表面糖蛋白通過使該細(xì)胞經(jīng)受蛋白酶處理而從該細(xì)胞中釋解出，這樣使該糖蛋白從該細(xì)胞中釋解出，其中該蛋白酶處理基本上不使該細(xì)胞膜破裂。92.如權(quán)利要求90所述的方法，其中該細(xì)胞表面糖蛋白通過將該細(xì)胞經(jīng)受選自下組的一種或多種蛋白水解酶而從該細(xì)胞中釋解出，該組的構(gòu)成為蛋白酶K、胰蛋白酶、以及它們的組合。93.如權(quán)利要求92所述的方法，其中該經(jīng)受步驟包括使該細(xì)胞經(jīng)受大約0.1至2.0mg/mL的濃度的一種或多種蛋白水解酶。94.如權(quán)利要求92所述的方法，其中該經(jīng)受步驟包括使該細(xì)胞在大約37°C的溫度下經(jīng)受蛋白酶處理達(dá)大約15分鐘。95.如權(quán)利要求90所述的方法，其中該測(cè)定步驟包括使該細(xì)胞表面糖蛋白經(jīng)受選自下組的一種表征方法，該組的構(gòu)成為NMR、質(zhì)譜法、液相色譜法、2-維色譜法、SDS-PAGE、抗體染色、凝集素染色、單糖定量、熒光團(tuán)輔助糖電泳(FACE)、膠束電動(dòng)色譜法(MEKC)、外切糖苷酶或內(nèi)切糖苷酶處理，以及它們的組合。全文摘要本發(fā)明披露提供了多種方法用于通過在一個(gè)細(xì)胞上的細(xì)胞表面聚糖類的分析來評(píng)定由該細(xì)胞產(chǎn)生的一種靶糖蛋白的糖基化作用。因此，本發(fā)明披露傳授了細(xì)胞表面蛋白類的糖基化作用能夠用來作為對(duì)于其他蛋白的糖基化作用的一種代用品。文檔編號(hào)G01N33/53GK101675339SQ200880014602公開日2010年3月17日申請(qǐng)日期2008年4月15日優(yōu)先權(quán)日2007年4月16日發(fā)明者B·E·柯林斯,C·J·鮑斯克斯,D·A·布里克,G·文卡塔讓曼,I·C·帕森斯,L·蒂魯尼拉坎塔皮拉伊,R·奇拉庫(kù)如,X·朱,Z·施里弗申請(qǐng)人:動(dòng)量制藥公司