專利名稱：分泌者、Lewis和唾液酸化抗原水平作為疾病預(yù)測(cè)指標(biāo)的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，更具體而言，本發(fā)明涉及用于評(píng)估和治療嬰兒炎性和 感染性疾病的材料和方法。
背景技術(shù)：
嬰兒的炎性和感染性疾病可與嚴(yán)重的發(fā)病率和死亡率相關(guān)。圍產(chǎn)期出現(xiàn)的炎性和 感染性疾病(例如壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)、膿毒癥和絨毛膜羊膜炎)為新生兒死亡率的 主要原因。NEC為新生兒中最常見(jiàn)的胃腸道醫(yī)學(xué)和/或手術(shù)急癥，在7-13%的出生體重極 輕的嬰兒中發(fā)生，其特征為腸損傷和腸壞死。NEC的總死亡率范圍為20-40%，據(jù)報(bào)道早產(chǎn) 兒的死亡率已超過(guò)50%。大約30%的病例需要手術(shù)干預(yù)，而據(jù)報(bào)道手術(shù)相關(guān)的死亡率高達(dá) 50%嬰兒炎性和感染性疾病的幸存者可能具有明顯的短期和長(zhǎng)期病狀，包括代謝并 發(fā)癥、復(fù)發(fā)性感染、神經(jīng)發(fā)育結(jié)果不良和生長(zhǎng)結(jié)果不良，在有些情況下，可能需要反復(fù)的手 術(shù)干預(yù)和延長(zhǎng)的住院治療。

發(fā)明內(nèi)容
此處描述的方法部分是基于我們對(duì)用于評(píng)估嬰兒是否存在死亡的高風(fēng)險(xiǎn)或可能 發(fā)展成某種炎性或感染性疾病(例如壞死性小腸結(jié)腸炎、膿毒癥、胃腸道感染、呼吸道感染 和尿道感染)的方法的發(fā)現(xiàn)。本文公開了確定存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，該方法包括(a)測(cè)定個(gè)體生物樣品中至少一種分泌者抗原(secretor antigen)的水平，和(b)將測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù) 值范圍進(jìn)行比較，其中，如果測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平不同于預(yù)先確定的數(shù)值或在預(yù) 先確定的數(shù)值范圍之外，則所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。在不同的實(shí)施方案中個(gè)體為嬰兒(例如，嬰兒為新生兒、低出生體重兒、極低出 生體重兒或早產(chǎn)兒)；所述至少一種分泌者抗原包括a 1，2_連接的巖藻糖抗原和/或a 2， 3唾液酸化的抗原；所述至少一種分泌者抗原選自H-l、H-2、LewiSb和LewiSy抗原及其衍生 物；衍生物為L(zhǎng)ewis a、Lewis x、Lewis b或Lewis y的唾液酸化形式；衍生物為H_1、H_2、 Lewis a、Lewis x、Lewis b或Lewis y的硫酸化形式；生物樣品為體液或組織；體液包括 唾液、血液、血漿、血清、尿液、大便、羊水、粘液、眼淚或淋巴液；體液包括唾液；測(cè)定步驟包 括免疫測(cè)定；所述至少一種分泌者抗原選自H-l、H-2、LewiSb和LewiSy及其衍生物，其中如
5果所述測(cè)定水平低于預(yù)先確定的數(shù)值或低于預(yù)先確定的數(shù)值范圍，則所述個(gè)體被確定為存 在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)；預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù)值范圍代表被確定為分泌 者(secretors)的個(gè)體群體中所述至少一種分泌者抗原的平均水平；當(dāng)測(cè)定的至少一種分 泌者抗原的水平比分泌者對(duì)照群體中的平均水平低至少10%時(shí)，該個(gè)體被確定為存在患?jí)?死性小腸結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)；所述至少一種分泌者抗原為H-2抗原。在一些實(shí)施方案中，至少一種抗原為唾液酸化Lewis a或其衍生物，如果測(cè)定的 水平高于預(yù)先確定的數(shù)值或高于預(yù)先確定的數(shù)值范圍，則所述個(gè)體被確定為存在患?jí)乃佬?小腸結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。在該方法的一些實(shí)施方案中嬰兒為新生兒、低出生體重兒、極低出生 體重兒或早產(chǎn)兒；生物樣品為體液或組織；體液包括唾液、血液、血漿、血清、尿液、大便、羊 水、粘液、眼淚或淋巴液；體液包括唾液；測(cè)定步驟包括免疫測(cè)定；預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先 確定的數(shù)值范圍代表被確定為分泌者的個(gè)體群體中所述至少一種分泌者抗原的平均水平。本發(fā)明還公開了確定存在患胃腸道疾病的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，該方法包括(a)測(cè)定個(gè)體生物樣品中至少一種分泌者抗原的水平，和(b)將測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù) 值范圍進(jìn)行比較，其中，如果測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平不同于預(yù)先確定的數(shù)值或在預(yù) 先確定的數(shù)值范圍之外，則所述個(gè)體存在患胃腸道疾病的風(fēng)險(xiǎn)。在該方法的不同實(shí)施方案中個(gè)體為嬰兒(例如新生兒、低出生體重兒、極低出生 體重兒或早產(chǎn)兒)；測(cè)定的抗原包括a 1，2_連接的巖藻糖抗原和/或a 2，3唾液酸化抗原； 分泌者抗原選自H-l、H-2、LewiSb和LewiSy抗原及其衍生物；衍生物為L(zhǎng)ewis a.Lewis x、 Lewisb或Lewis y的唾液酸化形式；衍生物為L(zhǎng)ewis a、Lewis x、Lewis b或Lewis y的 硫酸化形式；生物樣品為體液或組織；體液包括唾液、血液、血漿、血清、尿液、大便、羊水、 粘液、眼淚或淋巴液；測(cè)定步驟包括免疫測(cè)定；至少一種分泌者抗原選自H-l、H-2、Lewisb 和Lewif及其衍生物，其中如果所述測(cè)定水平低于預(yù)先確定的數(shù)值或低于預(yù)先確定的數(shù) 值范圍，則所述個(gè)體被確定為存在患胃腸道疾病的風(fēng)險(xiǎn)；預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù) 值范圍代表被確定為分泌者的個(gè)體群體中所述至少一種分泌者抗原的平均水平；當(dāng)測(cè)定的 至少一種分泌者抗原的水平比分泌者對(duì)照群體中的平均水平低至少10 %時(shí)，所述個(gè)體被確 定為存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)；所述至少一種分泌者抗原為H-2抗原；胃腸道疾病 為胃腸道炎癥；胃腸道疾病為胃腸道感染；疾病為遲發(fā)型膿毒癥；胃腸道感染包括葡萄球 菌屬的禾中(Staphylococcus spp.)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸桿菌 (Escherichia coli)、鏈球菌屬的禾中(Streptococcusspp.)、腸桿菌屬的禾中(Enterobacter spp.)、克雷伯氏菌屬的種(Klebsiellaspp.)、芽孢桿菌屬的種(Bacillus spp.)、沙雷氏菌 屬的種(Serratiaspp.)、念珠菌屬的種(Candida spp,)、諾瓦克(Norwalk)和其它諾瓦克 __ (Norovirus)、胃 ffiff 胃M 白勺禾中(Campylobacter spp)、 舌Li (Vibrio cholerae) > 擬桿菌屬的種(Bacteriodes spp.)、梭菌科(Clostridiae)、賈第蟲屬(Giardia)中的一種 或多種的感染。本文還公開了一種方法，其包括(a)測(cè)定個(gè)體生物樣品中至少一種分泌者抗原的水平，和(b)將測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù)值范圍進(jìn)行比較，(c)如果測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平不同于預(yù)先確定的數(shù)值或在預(yù)先 確定的數(shù)值范圍之外，則可以確定所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)；和(d)如果個(gè)體被確定為存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)，則采取步驟來(lái)治療壞死 性小腸結(jié)腸炎或降低患該病的風(fēng)險(xiǎn)。在該方法中，(d)可包括向個(gè)體施用a 1，2巖藻糖基聚糖、益生生物體(probiotic organisms)或益生素(prebiotics)中的一種或多種。本文還公開了確定存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，該方法包括(a)測(cè)定患者生物樣品中FUT2蛋白質(zhì)或編碼FUT2的mRNA的水平；(b)將測(cè)定的FUT2蛋白質(zhì)或編碼FUT2的mRNA的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確 定的數(shù)值范圍進(jìn)行比較，其中，如果所述測(cè)定的FUT2蛋白質(zhì)或編碼FUT2的mRNA的水平低于預(yù)先確定的數(shù) 值或預(yù)先確定的數(shù)值范圍，則所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。本文還公開了確定存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，所述方法包 括(a)提供來(lái)自個(gè)體的生物樣品；(b)確定所述個(gè)體是否攜帶具有降低FUT2的表達(dá)或活性的遺傳改變的FUT2基因，其中，如果所述個(gè)體攜帶具有降低FUT2的表達(dá)或活性的遺傳改變的FUT2基因，則 所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。本文還公開了確定存在死亡風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體(例如嬰兒)的方法，該方法包括(a)測(cè)定個(gè)體生物樣品中至少一種分泌者抗原的水平，和(b)將測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù) 值范圍進(jìn)行比較，其中，如果測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平不同于預(yù)先確定的數(shù)值或在預(yù) 先確定的數(shù)值范圍之外，則所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。除非特別定義，此處使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù) 人員通常理解的含義相同。盡管與此處所述的相似或等同的方法和材料也可用于實(shí)施本發(fā) 明，但是下面描述了合適的方法和材料。所有在此提及的出版物、專利申請(qǐng)、專利和其它文 獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容均通過(guò)引用的方式結(jié)合入本文中。當(dāng)不一致時(shí)，以包括定義的本說(shuō)明書為準(zhǔn)。 此外，材料、方法和實(shí)施例僅為示例性的，并非限制性的。本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案的細(xì)節(jié)通過(guò)下面的附圖和描述進(jìn)行闡述。本發(fā)明的 其它特征、目的和優(yōu)勢(shì)也將會(huì)通過(guò)說(shuō)明書、附圖和權(quán)利要求書而清楚得知。


圖1 小鼠結(jié)腸中巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶和Fut2 mRNA的表達(dá)。(A)在普通[C0NV]、無(wú)菌 (GF)和前無(wú)菌(ex-germ-free) (XGF)小鼠中的a 1，2/3-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶；C0NV、細(xì)菌耗 盡(bacteria-depleted) (BD)和細(xì)菌充足(bacteria-repleted) (XBD)小鼠中的(B) a 1, 2/3-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶的活性和(C)Fut2 mRNA ； (D)通過(guò)UEA-1凝集素和相應(yīng)的Nomarski圖 像檢測(cè)的a 1，2-巖藻糖基化聚糖的表達(dá)。
圖2 (A)TLR4的表達(dá)對(duì)于腸內(nèi)巖藻糖基化的細(xì)菌激活是必需的。(B)TLR4配體足 以激活細(xì)菌耗盡小鼠中的粘膜巖藻糖基化。圖3 脆弱擬桿菌(B. fragilis)的單定植(Monocolonization)誘導(dǎo)了腸內(nèi)的巖
藻糖基化。圖4 柱狀圖表明唾液中測(cè)定的H-2、Le y和sLe a抗原按照光密度(0. D.)值的 分布，比較了 24例NEC或死亡病例(頂行)和168例對(duì)照(底行)。在第8-14天(第二 周)采集樣品。表格顯示了 NEC或死亡的發(fā)生率、比較通過(guò)CART分析確認(rèn)的風(fēng)險(xiǎn)組的相對(duì) 風(fēng)險(xiǎn)和P值。三角符號(hào)表示通過(guò)CART分析確認(rèn)的各抗原的連續(xù)值的截點(diǎn)，以最優(yōu)地區(qū)分高 風(fēng)險(xiǎn)組和低風(fēng)險(xiǎn)組(節(jié)點(diǎn))。該截點(diǎn)被應(yīng)用于表格中的各抗原。對(duì)于僅H-2而言，NEC和死 亡病例與對(duì)照的0. D.值分布顯著不同(P = 0. 004，ffilcoxon Mann Whitney檢驗(yàn))。圖5 :CART分析的示意性描述。圖6 對(duì)在第二周(第8-14天)從辛辛那提NI⑶的192名ELBW( < 1000克)嬰 兒中采集的唾液樣品進(jìn)行EIA檢測(cè)，獲得的H-2和sLe A抗原的光密度(0. D.)值的散點(diǎn) 圖；24名(12. 5% )發(fā)展為NEC或死亡。通過(guò)CART分析來(lái)系統(tǒng)地確認(rèn)高和低風(fēng)險(xiǎn)組，以使 病例和非病例的誤分類減至最小。高風(fēng)險(xiǎn)的H-2截點(diǎn)被確定為O.D. < 0.627(值的最低 38%，包括非分泌者嬰兒)。在H-2高風(fēng)險(xiǎn)組中，73名嬰兒中出現(xiàn)了 18個(gè)病例(發(fā)病率= 24.7% )，與之相比，在119名嬰兒中出現(xiàn)了 6個(gè)病例(發(fā)病率為5.0%，相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)[RR]= 4. 9，95%置信區(qū)間[CI] = 2. 0-11.8，P < 0.0001)。高風(fēng)險(xiǎn)的sLea截點(diǎn)被確定為0. D. > 0. 318 (值的最高76%)。兩個(gè)高風(fēng)險(xiǎn)組(根據(jù)低H-2和高sLea0.D.值確定)中的嬰兒建 立了如圖中所示的高風(fēng)險(xiǎn)組，在54名嬰兒中包括17個(gè)病例(發(fā)病率=31.5%),而其它所 有的嬰兒合在一起確定了低風(fēng)險(xiǎn)組，其在138名嬰兒中包括7個(gè)病例(發(fā)病率=5. )。 該組合分類導(dǎo)致了高風(fēng)險(xiǎn)和低風(fēng)險(xiǎn)的高度顯著性的分離(RR = 6. 2,95% CI 2. 7至14. 1， P < 0. 0001)。圖7 人“分泌者” FUT2mRNA的序列。圖8 人“分泌者” FUT2多肽的序列。
具體實(shí)施例方式ABH和Lewis組織血型抗原為代表聚糖鏈末端結(jié)構(gòu)的碳水化合物。H型組織血型抗 原(例如H型1和2、Lewisb和LewiSy抗原)以a 1，2鍵連接的巖藻糖末端為特征。在哺 乳動(dòng)物中，H型組織血型抗原存在于廣泛的組織類型中，包括與外環(huán)境直接接觸的器官(例 如上呼吸道、鼻上皮和氣管)以及泌尿生殖道、輸尿管和陰道的上皮細(xì)胞、以及紅細(xì)胞、周 圍神經(jīng)系統(tǒng)的一些神經(jīng)元、胸腺上皮和皮膚。在一些人群中，大約80%的個(gè)體還在生物流體 (例如唾液、母乳、血清、眼淚、汗液和精液)中表達(dá)可溶形式的H型組織血型抗原。在這些 人群的其余大約20%的個(gè)體中，可溶性H型組織血型抗原在生物流體中不存在或以極低水 平存在。這兩種表型已被分別命名為“分泌者(secretor) ”和“非分泌者(non-secretor)，，， 可溶性H型組織血型抗原通常被稱為分泌者抗原。在其他的人群中，作為非分泌者的個(gè)體 的百分比低于20%。分泌者和非分泌者亞群之間的表型差異的基礎(chǔ)來(lái)源于編碼巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶2的 FUT2基因中的遺傳多態(tài)性，巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶2在本領(lǐng)域中也被稱為a (1,2)巖藻糖基轉(zhuǎn)移
8酶2、EC 2. 4. 1. 69、SE 2、SEC2、巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶-2 (分泌者)、GDP-L-巖藻糖3 -D-半乳 糖苷2- a -L-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶2、半乳糖苷2- a _L_巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶2、分泌者血型a _2_巖 藻糖基轉(zhuǎn)移酶、分泌者因子和跨膜蛋白2。FUT2基因在本領(lǐng)域中還被稱為分泌者基因(Se)。FUT2基因的產(chǎn)物FUT2催化由⑶P-3-L-巖藻糖和3-D-半乳糖基-R形成 a -L-巖藻糖基-1，2- 0 -D-半乳糖基-R結(jié)構(gòu)，其中R可為糖蛋白或糖脂。FUT2在許多通 常為內(nèi)胚層來(lái)源的器官(包括腸、咽、肝、呼吸道、膀胱、尿道和內(nèi)分泌腺)中表達(dá)，盡管這些 器官的FUT2表達(dá)也隨組織的分化模式(例如角質(zhì)化與非角質(zhì)化鱗狀上皮、腺組織的管與腺 泡)和特定的細(xì)胞類型(例如子宮內(nèi)膜的分泌細(xì)胞與纖毛細(xì)胞和唾液腺中的粘液細(xì)胞與漿 液細(xì)胞)而不同。分泌者表達(dá)功能性FUT2;非分泌者不能表達(dá)功能性FUT2。因此，可溶性 H型組織血型抗原不能合成，因此不能分泌到非分泌者的生物流體中。實(shí)施例中描述的實(shí)驗(yàn)表明嬰兒的唾液酸聚糖表位的分泌者狀態(tài)和表達(dá)與NEC和 死亡的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。更具體地說(shuō)，與其唾液中表達(dá)中等或高水平H-抗原的嬰兒或表達(dá)很少或 不表達(dá)唾液酸化Lewis a抗原的嬰兒相比，其唾液中僅表達(dá)很少或不表達(dá)H_2抗原的極低 出生體重兒(ELBW)或早產(chǎn)兒以及其唾液中表達(dá)的唾液酸化Lewis a抗原水平升高的嬰兒 顯著地更可能發(fā)生不利的臨床結(jié)果，例如NEC、遲發(fā)型膿毒癥和死亡。本文公開了與確定存在患炎性或感染性疾病(例如NEC、胃腸道感染或遲發(fā)型膿 毒癥)風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體有關(guān)的材料和方法。更具體地說(shuō)，可通過(guò)評(píng)估嬰兒的分泌者狀態(tài)來(lái)確定 嬰兒存在患炎性或感染性疾病(例如NEC、胃腸道感染或遲發(fā)型膿毒癥)的風(fēng)險(xiǎn)。在一些實(shí) 施方案中，不表達(dá)或相對(duì)于對(duì)照樣品低水平表達(dá)分泌者抗原的嬰兒可被分類為存在患NEC、 胃腸道感染或遲發(fā)型膿毒癥的風(fēng)險(xiǎn)。在其它的實(shí)施方案中，相對(duì)于對(duì)照樣品表達(dá)升高水平 的唾液酸化Lewis a(sLea)抗原的嬰兒可被分類為存在患NEC、胃腸道感染或遲發(fā)型膿毒癥 的風(fēng)險(xiǎn)。本文還提供了治療和控制存在患炎性或感染性疾病(例如NEC、胃腸道感染或遲 發(fā)型膿毒癥)的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)分泌者狀態(tài)被確定為存在患 NEC、胃腸道感染或遲發(fā)型膿毒癥的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體可采用特定的療法進(jìn)行治療，該療法包括保 護(hù)劑，例如益生生物體或益生素制劑，包括al，2巖藻糖基聚糖。在一些實(shí)施方案中，根據(jù) 分泌者狀態(tài)被確定為存在患NEC、胃腸道感染或遲發(fā)型膿毒癥的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的療程可通過(guò) 評(píng)估正向其嬰兒提供的母乳中分泌者抗原的水平以及基于食品來(lái)源中相對(duì)于對(duì)照樣品中 分泌者抗原的水平向嬰兒施用包括保護(hù)劑(例如a 1，2巖藻糖基聚糖、益生生物體或益生 素)的特定療法來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。分泌者抗原分泌者抗原，即H型1和2、Lewisb和LewiSy抗原，為包含以a 1，2連接的巖藻糖 末端的聚糖。此處使用的術(shù)語(yǔ)聚糖是指不考慮其它的修飾(例如與其它另外的單糖單元、 多肽、脂質(zhì)或其它生物或非生物分子的連接)，兩個(gè)或更多個(gè)亞單元單糖單元通過(guò)糖苷鍵連 接在一起形成的化合物，該糖苷鍵即為一個(gè)單糖的a或3構(gòu)型的異頭羥基和第二個(gè)單糖 的任何合適的羥基之間的共價(jià)鍵。我們可以將包含少數(shù)、通常3至35個(gè)或更多組分糖的糖 聚合物稱為寡糖。此處描述的所有寡糖均表示為非還原糖的名稱或縮寫(即Gal)，然后 是糖苷鍵的構(gòu)型(a或0)，環(huán)鍵(1或2)，然后是朝向該分子還原末端的下一個(gè)糖的名稱 或縮寫(即GlcNAc)。標(biāo)準(zhǔn)糖生物學(xué)命名的總結(jié)參見(jiàn)Essentials of GlycobioloRY, Varki等人，eds. , 1999, ColdSpring Harbor Laboratory Press。分泌者抗原的特定形式可以改變，并部分取決于最小二糖前體的結(jié)構(gòu)或由其裝 配成特定抗原的核心序列。核心序列可為乳糖I型結(jié)構(gòu)_半乳糖(0 1-3)N-乙酰葡萄糖 胺-R(在此縮寫為{Gal(f3 l-3)GlcNAc}-R)或乳糖II型結(jié)構(gòu)-半乳糖(M_4)N_乙酰葡 萄糖胺-R(在此縮寫為{Gal(0 1-4)G1CNAC}-R)。在最小的非偶聯(lián)的核心序列中，R可為H 或其它小分子殘基。二糖前體還可與較長(zhǎng)的聚糖偶聯(lián)，作為寡糖或作為糖脂、肽、蛋白質(zhì)、粘 蛋白或其它大分子的聚糖部分。因此，例如，H-1抗原是由I型前體如下產(chǎn)生的通過(guò)FUT2(或FUT1)催化將巖藻糖 殘基以a 1，2連接添加到I型前體的半乳糖部分來(lái)產(chǎn)生{巖藻糖(a 1-2)半乳糖(0 1_3) N-乙酰葡萄糖胺結(jié)構(gòu)，其縮寫為{FUC(al-2)Gal(0 1-3)GlCNAC}。H_1抗原為另一分泌者 抗原Lewisb的結(jié)構(gòu)性前體。Lewisb分泌者抗原包括H-1結(jié)構(gòu)加上與GlcNAc部分非末端a 1， 4連接的第二個(gè)巖藻糖殘基，構(gòu)型為{巖藻糖(a 1-2)半乳糖(0 1-3)[巖藻糖(a 1-4)] N-乙酰葡萄糖胺}，縮寫為{Fuc ( a 1-2) Gal ( 3 1-3) [Fuc ( a l-4)]GlcNAc}。相應(yīng)地，H-2抗原是由II型前體如下產(chǎn)生的通過(guò)FUT2 (或FUT1)催化將巖藻糖 殘基以a 1，2連接添加到II型前體的半乳糖部分來(lái)產(chǎn)生{巖藻糖(a 1-2)半乳糖(0 1_4) N-乙酰葡萄糖胺}結(jié)構(gòu)，其縮寫為{FUC(al-2)Gal(0 1-4)GlCNAC}。H-2抗原為另一分 泌者抗原LewiSy的結(jié)構(gòu)性前體。LewiSy分泌者抗原包括H_2結(jié)構(gòu)加上與GlcNAc部分非 末端a 1，3連接的第二個(gè)巖藻糖殘基，構(gòu)型為{巖藻糖(a 1-2)半乳糖(0 1-4)[巖藻糖 (a 1-3)]N_ 乙酰葡萄糖胺}，縮寫為{Fuc (a 1-2) Gal 1-4) [Fuc ( a 1-3) ] GlcNAc} 0分泌者抗原可包括單a 1，2巖藻糖取代的核心序列，其中R為H或其它小基團(tuán)?？?選地，分泌者抗原可包括一系列重復(fù)的取代的核心序列，其中R為另一核心序列。單核心序 列或重復(fù)核心序列可存在于較大的糖中。因此，含分泌者抗原的寡糖可為例如三糖、四糖、 五糖等。分泌者抗原還可與另一大分子(例如多肽或脂質(zhì))共價(jià)連接。單取代的核心序列 還可直接與多肽或脂質(zhì)連接，例如R可為蛋白質(zhì)或脂質(zhì)，或可存在于結(jié)合到多肽或脂質(zhì)上 的多糖中。分泌者抗原可通過(guò)N聯(lián)糖基化(即通過(guò)天冬酰胺殘基)或通過(guò)0聯(lián)糖基化(例 如通過(guò)絲氨酸、蘇氨酸、羥基脯氨酸、酪氨酸或其它含羥基殘基)共價(jià)連接到多肽上。包括 分泌者抗原的糖蛋白包括例如但不限于粘蛋白、膽汁鹽刺激的脂肪酶(BSSL)和乳粘著蛋 白。攜帶分泌者抗原的脂質(zhì)的例子包括但不限于H-1糖脂、H-2糖脂、Lex糖脂和Ley糖脂。Lewis 抗原Lewis抗原可作為含Lewis表位即含H_l、H_2、Le\ Le\ Lex和/或Ley表位的任 何聚糖存在，這些表位為a 1，3或a 1，4_連接的巖藻糖基化的寡糖部分。這包括游離的寡 糖、糖脂、糖蛋白、粘蛋白、糖胺聚糖和糖肽。個(gè)體可表達(dá)表達(dá)??！-“！^一丄一丄^和/或 Ley表位的聚糖。唾液酸化抗原唾液酸化抗原可作為含唾液酸化的抗原的任何聚糖存在，包括游離的寡糖、糖脂 (例如神經(jīng)節(jié)苷脂)、糖蛋白、粘蛋白、糖胺聚糖和糖肽。個(gè)體可表達(dá)唾液酸化表位，包括神 經(jīng)節(jié)苷脂和表達(dá)唾液酸化Lewis a(sLea)、sLe\ sLex和/或sLey表位的其它聚糖。測(cè)定分泌者抗原一種或多種分泌者抗原的水平可在任何本領(lǐng)域已知包含分泌者抗原的生物流體
10中測(cè)定。生物流體的例子包括但不限于唾液、血清、血漿、母乳、羊水、汗液、尿液、眼淚、粘 液、淋巴液和大便。生物流體樣品可使用本領(lǐng)域已知的保持分泌者抗原結(jié)構(gòu)的任何標(biāo)準(zhǔn)方 法從個(gè)體中采集。唾液樣品可使用棉簽、擦拭、抽吸、刮擦或通過(guò)潤(rùn)洗個(gè)體的嘴和吐到試管 或收集器中進(jìn)行收集。血液樣品可通過(guò)靜脈穿刺技術(shù)獲得。血清樣品可通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)方法 (例如離心已凝固的血液樣品)從全血制備。血漿樣品可通過(guò)離心已使用抗凝劑(例如肝 素)處理的血液樣品獲得。母乳可通過(guò)手工或機(jī)械擠壓收集?？稍谑占罅⒓礈y(cè)定生物 流體樣品的分泌者抗原?？蛇x地或另外地，可使用本領(lǐng)域已知的保持分泌者抗原結(jié)構(gòu)的方 法(例如冷凍、干燥或凍干)儲(chǔ)存生物流體樣品用于后續(xù)分析。在確定生物樣品中特定的分泌者抗原的水平之后，該水平可與那些標(biāo)準(zhǔn)參照水平 相比較。標(biāo)準(zhǔn)參照水平通常代表來(lái)自較大個(gè)體群體的平均分泌者抗原水平。參照群體可包 括與研究個(gè)體具有相似的年齡、身體大小、種族背景或一般健康狀況的個(gè)體。參照群體的 FUT2基因型可以是已知的，也可以是未知的。因此，患者樣品中的分泌者抗原水平可與來(lái) 自下述個(gè)體的數(shù)值進(jìn)行比較1)表達(dá)野生型FUT2且其體液包含分泌者抗原的個(gè)體；2)表 達(dá)FUT2的變異形式且具有中等至低FUT2活性且其體液包含低水平的分泌者抗原的個(gè)體； 或3)具有很低或不具有FUT2活性且其體液不含分泌者抗原的個(gè)體。通常，升高的分泌者抗原水平可以是高于對(duì)照樣品中的分泌者抗原水平或高于來(lái) 自作為分泌者的正常健康個(gè)體群體的樣品中的分泌者抗原平均水平的任何分泌者抗原水 平。降低的分泌者抗原水平可以是低于對(duì)照樣品中的分泌者抗原水平或低于來(lái)自作為分泌 者的正常健康個(gè)體群體的樣品中的分泌者抗原平均水平的任何分泌者抗原水平。任何群體 大小可用于確定來(lái)自作為分泌者的正常健康個(gè)體群體的樣品中的分泌者抗原平均水平。例 如，包含 2 至 250 個(gè)例如 2、3、4、5、10、15、20、25、30、40、50、100、150、200、250 個(gè)或更多個(gè)體 的群體可用于確定來(lái)自正常健康個(gè)體群體的樣品中分泌者抗原的平均水平，來(lái)自較大樣品 群體的檢測(cè)具有更好的精確性。降低的分泌者抗原水平可比對(duì)照樣品中的水平或比來(lái)自正常健康個(gè)體群體的樣 品中的分泌者抗原平均水平低10、20、30、50、60、70、80、90、100 %。在一些情況下，降低的分 泌者抗原水平可比對(duì)照樣品中的水平或比來(lái)自正常健康個(gè)體群體的樣品中的分泌者抗原 平均水平低2、3、4、5、10、20、50或更多倍。在一些情況下，參照表可用于確定樣品中特定分泌者抗原的特定水平是否比對(duì)照 樣品或較大群體低或正常。例如，參照表可包含與研究個(gè)體具有相同的年齡、胎齡、種族背 景或一般健康狀況的健康嬰兒中發(fā)現(xiàn)的分泌者抗原水平的正常范圍。通過(guò)使用這一參照 表，樣品中測(cè)定的分泌者抗原的任何水平可被分類為比對(duì)照樣品或比來(lái)自較大群體的平均 值低、正?；蚋??？蛇x地或另外地，生物樣品中的分泌者抗原的水平可相對(duì)于一種或多種另外的生 物標(biāo)記(例如另一組織血型抗原，例如P或唾液酸化抗原)的水平“標(biāo)準(zhǔn)化”，該另外的生物 標(biāo)記的表達(dá)獨(dú)立于個(gè)體的分泌者狀態(tài)。也就是說(shuō)，另外的標(biāo)記的水平可與分泌者抗原的水 平同時(shí)或不同時(shí)地平行進(jìn)行評(píng)估。另外的標(biāo)記可作為樣品制備、處理和儲(chǔ)存以及天與天之 間測(cè)定變異性的內(nèi)對(duì)照。分泌者抗原和另外的標(biāo)記的水平值可表示為比例，該比例可與來(lái) 自對(duì)照樣品或群體的相似的比例進(jìn)行比較。有用的第二標(biāo)記的例子包括但不限于其表達(dá)獨(dú) 立于分泌者(FUT2)表達(dá)的Lewis抗原，即Lewis a和Lewis x。Lewis抗原通常包括具有
11被一個(gè)或多個(gè)巖藻糖基殘基取代的乳糖I型結(jié)構(gòu)或乳糖II型結(jié)構(gòu)作為核心序列的碳水化 合物。因此，例如，有用的第二標(biāo)記可為L(zhǎng)ewis a{半乳糖(0 1-3)[巖藻糖(a 1-4) ]N_乙 酰葡萄糖胺}，其縮寫為{Gal(M-3)FuC(a l-4)GlCNaC}，或Lewis x {半乳糖(3 1-4)[巖 藻糖(a 1-3)]N_乙酰葡萄糖胺，其縮寫為{Gal (日1-4) [Fuc ( a 1-3) ]GlcNAc}，或這些表位 的唾液酸化、硫酸化或硫酸_唾液酸化形式。還可以使用其它通常表達(dá)的非Lewis血型抗 原，例如Lua (Lutheran a)、P1和P2 (P血型系統(tǒng)的主要抗原)、M和N、Fya和Fy b (Duffy系 統(tǒng)的抗原)等。此外，由于個(gè)體基因表達(dá)水平的隨機(jī)變異在生物系統(tǒng)中是常見(jiàn)的，理想的是將分 泌者抗原的水平相對(duì)于已知其表達(dá)獨(dú)立于個(gè)體的分泌者狀態(tài)的一組兩個(gè)或多個(gè)其它生物 標(biāo)記進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。這一策略可使在確定分泌者抗原的水平時(shí)更加精確?！┯?jì)算了個(gè)體中相對(duì)于對(duì)照樣品中的分泌者抗原的相對(duì)水平，就可以評(píng)估個(gè)體 患胃腸炎、壞死性小腸結(jié)腸炎、遲發(fā)型膿毒癥或死亡的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的 用于評(píng)估相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的任何統(tǒng)計(jì)方法。一種合適的方法為分類與回歸樹(Classification andRegression Tree, CART)特征曲線分析。CART分析屬于非參數(shù)回歸方法家族，該分析是 基于遞歸分配來(lái)建立決策樹，用于優(yōu)化地將個(gè)體分類為高和低風(fēng)險(xiǎn)組。它可用于基于測(cè)試 的靈敏性(即檢測(cè)到的真實(shí)病例數(shù))和特異性(即精確性)之間的平衡來(lái)系統(tǒng)地確定使預(yù) 測(cè)值最大化并且使病例和非病例誤分類最小化的連續(xù)變量中的截點(diǎn)。這兩種變量還可被認(rèn) 為是陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值，并與診斷的精確性相關(guān)。由CART分析產(chǎn)生的決策樹可經(jīng)接 受者操作曲線(Receiver Operating Curve, ROC)分析驗(yàn)證，以確定曲線下面積(AUC)，其 表明了決策樹關(guān)系區(qū)分病例和非病例的有效性。在一個(gè)例子中，CART分析表明被分類為低或非分泌者(即處于H-2唾液表達(dá)的第 38百分位數(shù)或更低(由O.D.值確定))的個(gè)體患NEC和死亡的風(fēng)險(xiǎn)加大。因此，其分泌者 抗原的水平處于第38、33、30、25、20、15、10、5或更低百分位數(shù)的個(gè)體患NEC或死亡的幾率 比其分泌者抗原水平高于第38百分位數(shù)的個(gè)體高4至5倍。在表達(dá)很少或不表達(dá)分泌者 抗原的那些個(gè)體中，最高風(fēng)險(xiǎn)組由那些也高度表達(dá)唾液酸化Lewis a抗原的個(gè)體組成。表 達(dá)很少或不表達(dá)分泌者抗原和表達(dá)高水平的唾液酸化Lewis a抗原的嬰兒患NEC或死亡的 風(fēng)險(xiǎn)比其它所有嬰兒高6倍多。因此，高風(fēng)險(xiǎn)組可僅由很少或無(wú)H-2抗原來(lái)定義，或者由很 少或無(wú)H-2抗原和中等至高水平唾液酸化Lewis a抗原的組合來(lái)定義。基于該對(duì)比和其它 臨床指標(biāo)，臨床醫(yī)生可以預(yù)測(cè)出患者患NEC的風(fēng)險(xiǎn)的幾率，并相應(yīng)調(diào)整治療方案。個(gè)體的分泌者狀態(tài)可通過(guò)多種方式進(jìn)行確定。分泌者抗原的水平可直接在生物流 體中進(jìn)行測(cè)定。例如，分泌者抗原水平的測(cè)定可以使用基于免疫的測(cè)定，例如ELISA測(cè)定、 放射性免疫測(cè)定、與免疫檢測(cè)聯(lián)合的一維或二維凝膠電泳、或使用基于表面等離子體共振 的生物傳感器、或使用色譜技術(shù)(例如高效液相色譜(HPLC)或氣相色譜(GC))或使用光譜 法(例如質(zhì)譜法)?？蛇x地或另外地，F(xiàn)UT2的活性可通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)酶學(xué)方法在生物樣品中測(cè) 定。此外，F(xiàn)UT2 mRNA的水平可使用本領(lǐng)域已知的多種方法進(jìn)行定量(作為生物樣品中FUT2 活性水平的替代)，例如RT-PCR或定量RT-PCR(例如Kroupis C, Stathopoulou A,Zygalaki E, Ferekidou L, Talieri M, Lianidou ES.Clin Biochem. 2005 Jan ；38 (1) :50-7, Dyer J, ChisenhallDM,Mores CN. J Virol Methods. 2007 Oct ；145(1) :9_13)或例如cDNA或寡核苷 酸微陣列的基于雜交的定量技術(shù)(例如Duggan D.J.，BittnerM.，Chen Y.，Meltzer P.和Trent J.M.Nat Genet 21(1 Suppl) 10-4 (1999) ； Cheung V. G.，Morley M.，Aguilar F.， Massimi A.，KucherlapatiR.和 Childs G.Nat Genet 21(lSuppl) 15-9(1999)) 人分泌者FUT2 mRNA序列示于圖7 (GenBank 登錄號(hào)NM_000511. 4)中，人分泌者 FUT2蛋白質(zhì)序列示于圖8(GenBank 登錄號(hào)NP 000502. 4)中。最后，個(gè)體的FUT2基因型可通過(guò)單核苷酸多態(tài)性分析(SNP)或基于RT-PCR的技 術(shù)確定。免疫測(cè)定免疫測(cè)定方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。用于檢測(cè)特定分泌者Lewis抗原(例如 H-l、H_2、Lewisb和Lewisy)和其它Lewis抗原(例如Lewisa和Lewisx)的抗體試劑可通過(guò) 使用標(biāo)準(zhǔn)抗體制備方法來(lái)產(chǎn)生或從商業(yè)渠道購(gòu)買。抗體可為單克隆的或多克隆的或其任意 組合。有用的抗體可包括對(duì)分泌者或聚糖表位特異性的單克隆和多克隆抗體、單鏈抗體、嵌 合抗體、雙功能/雙特異性抗體、人源化抗體、人抗體和互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)-嫁接的抗體，還 包括抗體片段，包括Fab、Fab'、F(ab' )2、scFv、Fv、camelbodies或微抗體。此外，能夠 特異性地結(jié)合和檢測(cè)特定分泌者抗原的核酸或肽適體試劑可使用公開的標(biāo)準(zhǔn)方法(例如 The use of aptamers in large arrays for moleculardiagnostics,Brody E. N. ,Will is M.C.，Smith J. D.，Jayasena S.，Zichi D.和 Gold L. Mol Diagn 4(4) :381_8 (1999))產(chǎn) 生。因此，在一些實(shí)施方案中，特定的抗H-1、抗H-2、抗Lewisb或抗LewiSy單克隆抗體 或適體可對(duì)H-1和H-2、Lewisb、和LewiSy以外的抗原分別具有小于約lxl05Ka的結(jié)合親和 力。在一些實(shí)施方案中，抗H-1、抗H-2、抗Lewisb或抗LewiSy抗體為以至少lxl08Ka的親和 力結(jié)合H-1、H-2、Lewisb和Lewisy的單克隆抗體。H-1和H_2、Lewisb和Lewisy的任何形式可用于分別產(chǎn)生抗H_l、抗H_2、抗Lewisb 或抗Lewif抗體或適體，其包括最小的三糖或二糖結(jié)構(gòu)或其攜帶表位的片段，以及含有這 些表位的任何聚糖。非常合適的抗H-1、抗H-2、抗Lewisb或抗LewiSy抗體或適體為具有足 以在體內(nèi)識(shí)別和結(jié)合它們各自靶標(biāo)的親和力和特異性的那些抗體或適體。此處使用的術(shù)語(yǔ) 表位是指聚糖的抗原決定簇。特定的結(jié)合碳水化合物的抗體或適體可為1)顯示結(jié)合活性的閾值水平和/或 2)與已知的相關(guān)聚糖分子無(wú)顯著交叉反應(yīng)的分子。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地確定 抗體或適體的結(jié)合親和力，例如通過(guò)Scatchard分析(Scatchard, Ann. NY Acad. Sci. 51 660-672,1949)。在一些實(shí)施方案中，抗體或適體可結(jié)合到它們的目標(biāo)表位或模擬誘餌上， 其對(duì)目標(biāo)聚糖的親和力比其對(duì)與目標(biāo)聚糖有一定同源性的其它聚糖的親和力至少高1.5 倍、2倍、5倍、10倍、100倍、103倍、104倍、105倍、106倍或更多。在一些實(shí)施方案中，抗體或適體以10_4M或更低、10_7M或更低、10_9M或更低的高 親和力或以亞納摩爾親和力(0. 9,0. 8,0. 7,0. 6,0. 5,0. 4,0. 3,0. 2,0. InM或更低)與H-1 或H-2、Lewisb或LewiSy相結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，抗體或適體對(duì)H_1或H_2、Lewisb或 Lewisy的結(jié)合親和力為至少lxl06Ka。在一些實(shí)施方案中，抗體或適體對(duì)H-1或H-2、LewiSb 或Lewisy的結(jié)合親和力為至少5xl06Ka、至少lxl07Ka、至少2xl07Ka、至少1乂1081^或更大。對(duì) 于抗體或適體還可在它們對(duì)H-1和/或H-2、Lewis\ Lewis\ Lewisx和/或Lewisy的結(jié)合 親和力方面進(jìn)行描述或說(shuō)明。在一些實(shí)施方案中，結(jié)合親和力包括Kd小于5x10_2M、5X10_5M
13至 5xl(T7M、5xl(T8M 至 SxlO^KSxKr12]^ 至 5xl(T14M 或更低的結(jié)合親和力?？贵w或適體可通過(guò)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的色譜方法進(jìn)行純化，包括離子交 換和凝膠過(guò)濾色譜法(例如 Caine 等人，Protein Expr. Purif. (1996)8(2) :159_166)。 可選地或另外地，抗體或適體可從商業(yè)渠道購(gòu)買，例如Abeam、Biovendor Laboratory, Calbiochem> SignetLaboratories> Accurate Chemical and Scientific Corporation 禾口 EMD。分泌者抗原的水平可通過(guò)使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任何免疫測(cè)定方法在 生物樣品中測(cè)定。例如，在非競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定中，分泌者抗原“夾心”在兩個(gè)抗體即捕獲抗體 和檢測(cè)抗體之間。典型地，捕獲抗體共價(jià)或非共價(jià)地結(jié)合在例如管或孔的固相上，而檢測(cè)抗 體在ELISA測(cè)定中偶聯(lián)到酶上或者在RIA測(cè)定中被放射性同位素標(biāo)記。在ELISA分析中， 檢測(cè)抗體可以共價(jià)連接到酶上，或者其自身可被通過(guò)生物偶聯(lián)連接到酶上的第二抗體檢測(cè) 到。通過(guò)添加在切割后產(chǎn)生可檢測(cè)的可量化信號(hào)的酶底物(例如發(fā)色或發(fā)熒光的分子)來(lái) 分析特異性抗體結(jié)合。在RIA測(cè)定中，通過(guò)測(cè)定結(jié)合在支持物上的放射性水平確定特異性 抗體結(jié)合。在競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定中，樣品中的抗原(分析物)與標(biāo)記抗原(示蹤物)競(jìng)爭(zhēng)有限 數(shù)量的抗體結(jié)合位點(diǎn)。將結(jié)合的抗原從過(guò)量的不結(jié)合抗體的分析物中分離出來(lái)。經(jīng)Y計(jì) 數(shù)器和分光光度計(jì)測(cè)定，未知樣品中分析物的量與標(biāo)記抗原的量成反比。競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定 的例子包括雙抗體放射性免疫測(cè)定(RIA)、包被管RIA和包被孔酶免疫測(cè)定(EIA)?？梢允?用的固相支持物的一些例子包括板、管、聚苯乙烯珠、尼龍、硝化纖維素、醋酸纖維素、玻璃 纖維和其它類型的多孔聚合物。合適的標(biāo)記包括放射性核素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物 發(fā)光標(biāo)記、酶(例如ELISA系統(tǒng)中使用的酶)、染料或顆粒(例如膠體金或量子點(diǎn))。設(shè)計(jì)用于同時(shí)檢測(cè)一種或多種特定的分泌者和Lewis抗原的測(cè)定系統(tǒng)和試劑盒 也包括在本方法的范圍內(nèi)。試劑盒可以設(shè)計(jì)為浸棒式(dip-stick)、流通式或遷移式以及本 領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其它形式。如果希望的話，該測(cè)定可自動(dòng)化，以確保標(biāo)準(zhǔn)化和獲得 更高的通量。FUT2活性測(cè)定可以使用本領(lǐng)域已知的FUT2特定的任何標(biāo)準(zhǔn)方法來(lái)測(cè)定生物樣品中FUT2的活 性。例如，巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定可在含3iiMGDP-[14C]巖藻糖、5mM ATP、25mM磷酸鈉pH 6.0、 40 u g來(lái)自細(xì)胞提取物的總蛋白質(zhì)和作為受體底物的苯基0 -D-半乳糖苷或脫唾液酸胎球 蛋白(asialofetuin)的20 yl反應(yīng)體積中進(jìn)行。反應(yīng)混合物在37°C下溫育2小時(shí)，并通過(guò) 添加1ml的水來(lái)中止反應(yīng)。通過(guò)將反應(yīng)產(chǎn)物通過(guò)C18反相柱來(lái)純化疏水的巖藻糖基化苯基 3 -D-半乳糖苷產(chǎn)物。通過(guò)微纖維膜(GF/C ；Whatman)過(guò)濾來(lái)純化放射性標(biāo)記的脫唾液酸胎 球蛋白產(chǎn)物，并通過(guò)使用液體閃爍計(jì)數(shù)器來(lái)測(cè)定其放射性。Nanthakumar NN,Dai D,Newburg DS, Walker WA. The role ofindigenous microflora in the development of murine intestinal fucosyl-and sialyltransferases. FASEB J (2002 年 11 月 15 日)10. 1096/ fj. 02-003If je (summary FASEB J 2003 ；17 :44_6)。FUT2基因分型分析可以使用本領(lǐng)域已知的任何標(biāo)準(zhǔn)方法(例如SNP分析或RT-PCR技術(shù))進(jìn) 行FUT2基因分型。確定導(dǎo)致低水平FUT2活性的SNP包括TRP143TER(428G_A)和ILE129PHE(385A-T)。在一些非分泌者中還發(fā)現(xiàn)FUT2基因完全缺失。用于確定單核苷酸多 態(tài)性(SNP)的方法是本領(lǐng)域公知的，例如 Ahmadian A.，Gharizadeh B.，Gustafsson A. C.， Sterky F. , Nyren P. , Uhlen M.和 Lundeberg J. Anal Biochem280(1) 103-10(2000)； Griffin T. J.，Hall J. G. , Prudent J. R.和 Smith L. M. Proc Natl Acad Sci U S A 96(11) 6301-6(1999) ；Nickerson D. A. ，Kaiser R. ，Lapp in S. ，Stewart J. ，Hood L.和 Landegren U. Proc NatlAcad Sci U S A 87(22) :8923_7 (1990)。其它測(cè)定荊豆凝集素(Ulex europaeus)-—種特異性地與a-1-巖藻糖反應(yīng)的植物凝集 素-可用作檢測(cè)分泌者抗原特別是H-2的基礎(chǔ)。當(dāng)與膠體金偶聯(lián)的荊豆凝集素在合適的條 件下接觸含分泌者抗原的樣品時(shí)，荊豆凝集素-膠體金會(huì)發(fā)生聚集，從而產(chǎn)生可檢測(cè)的顏 色改變。簡(jiǎn)而言之，在確定穩(wěn)定膠體金所需的最小量的UEA1和最優(yōu)的pH條件之后，荊豆凝 集素(UEA1) (Sigma-Aldrich ；St Louis,M0)與膠體金偶聯(lián)。將2 y L未處理的測(cè)試唾液添加 到硝化纖維素條上，放置干燥5分鐘；添加200PL 1.0%酪蛋白的TBS溶液，在室溫下溫育 3分鐘。除去酪蛋白溶液；以最優(yōu)的稀釋度添加包含于0. 05%酪蛋白TBS溶液中的150 u L 的UEA1-膠體金偶聯(lián)物，并溫育10分鐘。可檢測(cè)的顏色變化表明樣品中存在分泌者抗原。 對(duì)照樣品為已知為H-2陽(yáng)性或陰性的唾液樣品。治療方法此處公開的方法還可用于治療存在患感染性和炎性疾病的風(fēng)險(xiǎn)的嬰兒。該治療方 法可以完全或部分消除感染性或炎性疾病的一些或全部指征和癥狀、降低癥狀的嚴(yán)重性、 延緩它們的發(fā)作或減輕后續(xù)發(fā)展的癥狀的進(jìn)展或嚴(yán)重性。該治療方法對(duì)感染性和炎性疾病是有用的。該方法可用于足月兒、早產(chǎn)兒或極低 出生體重兒。足月兒包括在37至42周胎齡期間出生的嬰兒；早產(chǎn)兒通常為在小于37周胎 齡出生的嬰兒。極低出生體重兒(ELBW)通常被定義為出生體重低于1000g(21b，3oz)的嬰 兒。大多數(shù)的ELBW嬰兒也是最年輕的早產(chǎn)兒，通常在27周胎齡或更小時(shí)出生。出生體重 低(< 2500g)的10個(gè)嬰兒中有接近1個(gè)嬰兒為ELBW嬰兒?？墒褂么颂幟枋龅姆椒z測(cè)的感染性和炎性疾病包括壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)、 胃腸道感染、胃腸道炎癥和膿毒癥。這些疾病可由病患、損傷或未知原因?qū)е?，它們也可?個(gè)體的基因組成的影響。在NEC中，部分的腸發(fā)生壞死，即組織死亡。盡管NEC能夠影響胃腸道，但是在很 嚴(yán)重的情況下它才可能具有嚴(yán)重的系統(tǒng)性影響。最初的癥狀可能是輕微的，可包括以下一 種或多種癥狀喂養(yǎng)不耐受、胃排空延遲、腹部膨脹和/或敏感、腸梗阻/腸鳴音降低，以及 在晚期出現(xiàn)的腹壁紅斑和便血。系統(tǒng)性指征是非特異性的，并可包括呼吸暫停、昏睡、外周灌注降低、休克(在晚 期)、心血管性虛脫和出血素質(zhì)(消耗性凝血病)的任意組合。非特異性的實(shí)驗(yàn)室異常可包 括下述癥狀低鈉血、代謝性酸中毒、血小板減少、伴有左移的白細(xì)胞減少或白細(xì)胞增多、中 性白細(xì)胞減少、凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)、激活部分促凝血酶原激酶時(shí)間延長(zhǎng)、纖維蛋白原減少和 血纖蛋白分裂產(chǎn)物升高(在消耗性凝血病的情況中)。盡管確切的病因?qū)W是未知的，但是病 因?qū)W可能是多因素的并且涉及異常細(xì)菌菌群、腸局部缺血和/或再灌注損傷以及腸粘膜不成熟中的任何或所有原因。嬰兒的胃腸道感染包括下述癥狀腹瀉；大便帶粘液或血；嘔吐；脫水；口渴；情 緒低落；粘膜干燥；因門凹陷；皮膚充盈降低；毛細(xì)管填充時(shí)間減少；心動(dòng)過(guò)速；脈搏微弱、 血壓降低；或皮膚充盈隆起或破損。感染物可以是細(xì)菌、真菌、病毒或寄生蟲。細(xì)菌病原 體的例子包括但不限于葡萄球菌屬的種、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、鏈球菌屬的種、腸 桿菌屬的種、克雷伯氏菌屬的種、芽孢桿菌屬的種、沙雷氏菌屬的種、沙門氏菌屬的種、志 賀氏菌屬的種、彎曲桿菌屬的種(Campylobacter spp.)、耶爾森氏菌屬的種和艱難梭菌 (Clostridium difficile)。真菌病原體的例子包括但不限于念珠菌屬的種。寄生蟲生物 的例子包括但不限于隱孢子蟲屬的種(Cryptosporidium spp.)、賈第蟲屬的種、溶組織內(nèi) 阿米巴(Entamoebahistolytica)、環(huán)孢子蟲屬的種(Cyclospora spp)。病毒生物的例子包 括但不限于輪狀病毒、巨細(xì)胞病毒、腸腺病毒、星狀病毒、腺病毒型40或41、諾瓦克和其它 諾瓦克病毒和札如病毒(saporovirus)。新生兒膿毒癥的臨床指征為非特異性的，并與病 原微生物的特征和身體對(duì)侵襲的響應(yīng)相關(guān)。新生兒膿毒癥可分為早發(fā)型或遲發(fā)型。85%的 具有早發(fā)型感染的新生兒在24小時(shí)內(nèi)發(fā)病，5%在24-48小時(shí)內(nèi)發(fā)病，較少百分比的患者在 48小時(shí)和6天之間發(fā)病。在早產(chǎn)兒中發(fā)作最迅速。嬰兒會(huì)出現(xiàn)明顯休克伴有面白、毛細(xì)管 灌注差和水腫。休克的這些指征指示嚴(yán)重的損害，并與死亡率密切相關(guān)。膿毒癥的指征包 括任何或所有的心臟指征，例如早期肺動(dòng)脈高壓、心輸出量減少、血氧不足、伴有心博徐緩 和系統(tǒng)性低血壓的心輸出量進(jìn)行性減少；代謝指征，例如低血糖、高血糖、代謝性酸中毒和 黃疸；神經(jīng)性指征，例如腦膜炎、室炎、蛛網(wǎng)膜炎、脈管炎、靜脈炎、血栓形成、腦水腫、梗塞、 麻木和應(yīng)激性、意識(shí)損害(即伴有或不伴有應(yīng)激性的麻木)、昏迷、癲癇發(fā)作、前因門膨出、 伸肌僵硬、灶性腦指征、顱神經(jīng)指征、頸背僵硬、腦脊髓液(CSF)中的改變，例如白細(xì)胞計(jì)數(shù) 升高、蛋白質(zhì)水平升高、CSF葡萄糖濃度降低和陽(yáng)性培養(yǎng)結(jié)果。在患有新生兒膿毒癥和腦膜 炎的個(gè)體中觀察到體溫的不穩(wěn)定性，這是由于對(duì)細(xì)菌性微生物分泌的熱原的響應(yīng)或由于交 感神經(jīng)系統(tǒng)的不穩(wěn)定性。新生兒最有可能出現(xiàn)體溫過(guò)低。嬰兒還有可能出現(xiàn)音調(diào)降低、昏 睡和喂養(yǎng)效果差。當(dāng)出現(xiàn)遲發(fā)型腦膜炎時(shí)，最有可能出現(xiàn)神經(jīng)性過(guò)興奮的指征。新生兒膿 毒癥的其它指征還包括血液學(xué)指征，例如血小板減少、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)異常、嗜中性粒細(xì) 胞計(jì)數(shù)(PMN和未成熟形式)異常、未成熟嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)與總嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的比例 異常、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、凝血酶原時(shí)間(PT)異常、部分促凝血酶原激酶時(shí)間(PTT) 異常和纖維蛋白原和D 二聚物水平異常；和胃腸道指征，例如壞死性小腸結(jié)腸炎。導(dǎo)致遲發(fā)型膿毒癥的生物包括凝固酶陰性葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、 克雷伯氏菌屬的種、假單胞菌屬的種、腸桿菌屬的種、B族鏈球菌、沙雷氏菌屬的種、不動(dòng)桿 菌屬的種(Acinetobacterspp.)和念珠菌屬的種。嬰兒的皮膚、呼吸道、結(jié)膜、胃腸道和臍 可能被來(lái)自環(huán)境的生物定植(colonized)，從而可能由侵襲性微生物導(dǎo)致遲發(fā)型膿毒癥。用 于該定植的載體包括脈管或尿管、其它留置管路或照顧者與細(xì)菌定植的接觸?；谒鼈兊木厶潜硇?分泌者、Lewis或唾液酸化抗原表達(dá))被確定為存在患感 染性和炎性疾病(例如NEC、胃腸道感染和膿毒癥)的風(fēng)險(xiǎn)的嬰兒可使用包括一種或多種 保護(hù)劑的療法進(jìn)行治療。除非特別說(shuō)明，本文使用的術(shù)語(yǔ)“劑”廣泛地指以臨床有益的方式 (例如抑制病原體與宿主細(xì)胞表面聚糖的結(jié)合)影響胃腸道系統(tǒng)的目標(biāo)分子或目標(biāo)區(qū)域的 任何物質(zhì)。有用的保護(hù)劑包括例如人母乳喂養(yǎng)、益生生物體、益生素或al，2巖藻糖基聚
a 1，2巖藻糖基聚糖為包含以a 1，2連接的巖藻糖末端的糖，因此是分泌者抗 原的同系物，即它們包括以a 1，2構(gòu)型共價(jià)連接到巖藻糖殘基的最小的二糖前體或核心 序列。核心序列可為乳糖I型結(jié)構(gòu)_半乳糖(0 1-3)N_乙酰葡萄糖胺-R，在此縮寫為 {Gal (日l(shuí)-3)GlcNAc}-R，或乳糖II型結(jié)構(gòu)-半乳糖(M_4)N_乙酰葡萄糖胺_R，在此縮 寫為{Gal⑶l-4)GlcNAc-R}，其中R為H、小的基團(tuán)或另一單糖、二糖或多糖或糖蛋白或糖 脂。這些糖可為游離的寡糖或偶聯(lián)為及表達(dá)為糖蛋白、糖脂或其它結(jié)構(gòu)。偶聯(lián)和非偶聯(lián)形 式的寡糖一起被劃分為聚糖。因此，a 1，2巖藻糖基聚糖可包括2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、 14、16、18、20、24、28、32、36或更多個(gè)糖；一個(gè)或多個(gè)糖以a 1，2構(gòu)型與巖藻糖殘基共價(jià)連 接，因此聚糖可以包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、18或更多個(gè)巖藻糖殘 基。合適的a 1，2巖藻糖基聚糖的例子包括但不限于可溶形式或作為益生生物的部分的 2' _巖藻糖基乳糖(2' -FL)；乳糖-N-巖藻戊糖-I(LNF-I)；乳糖-N-二巖藻己糖-I(UFH I)；乳糖二巖藻四糖(LDFT)或連接到糖脂、糖肽、糖蛋白、粘蛋白或其它骨架上的這樣的巖 藻糖基聚糖表位。a 1，2巖藻糖基聚糖可使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法從天然來(lái)源 例如奶、奶制品或植物產(chǎn)物中純化得到?？蛇x地或另外地，聚糖可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法從 天然存在的前體或合成的模板經(jīng)化學(xué)合成得到。此外，可通過(guò)使用本領(lǐng)域公知的生物合成 酶，在體外或者使用特定的工程化微生物(例如細(xì)菌或酵母)在體內(nèi)經(jīng)酶催化合成聚糖。保護(hù)劑還可以是益生生物體，即那些被宿主攝取后可以以有益于宿主的方式改 造腸內(nèi)微生物群體的活微生物。益生生物體可給細(xì)菌和細(xì)菌產(chǎn)物穿過(guò)粘膜的轉(zhuǎn)移提供增 強(qiáng)的屏障，可競(jìng)爭(zhēng)性地排除潛在的病原體，改造宿主對(duì)微生物產(chǎn)物的響應(yīng)并通過(guò)抑制病原 體(例如肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、大腸桿菌和白色念珠菌(Candida albicans))生長(zhǎng)的方式來(lái)提高腸的營(yíng)養(yǎng)。益生生物體通常包括細(xì)菌和酵母。益生生物體的種類可以變化，但是對(duì) 嬰兒合適的種類包括乳桿菌(Lactobacilli)，例如鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)GG、嗜酸性乳桿菌(L. acidophilus)、干酪乳桿菌(L. casei)、植物乳桿 菌(L. plantarum)、路氏乳桿菌(L. reuteri)；和雙歧桿菌(Bifidobacteria)，例如 嬰兒雙岐桿菌(Bifidobacterium infantis)、雙岐雙岐桿菌(B. bifidum)、短雙歧 桿菌(B. breve)、動(dòng)物雙歧桿菌乳酸亞種(B. animal is subsp. lactis)、長(zhǎng)雙岐桿菌 (B. longum),以及嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus) 有用的酵母種類包括鮑 氏酵母(Saccharomycesboulardii)和乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)。益生 生物體可為天然存在的，或者它們可以是工程化的，即生物體可具有能夠使其獲得理想的 性質(zhì)(例如但不限于表達(dá)分泌者抗原的能力)的基因。益生生物體可以單獨(dú)或組合施 用。市售的益生制劑包括例如包含嗜酸乳桿菌/嬰兒雙岐桿菌的Infloran (Istituto Sieroterapico Berna,科摩，意大利)、包含嬰兒雙岐桿菌、雙岐雙岐桿菌和嗜熱鏈球菌的 ABC Dophilus(Solgar,以色列)和包含鼠李糖乳桿菌的Dicoflor (VitisPharma，華沙，波 蘭)。保護(hù)劑也可以是益生素，即通過(guò)選擇性地刺激結(jié)腸中一種或有限數(shù)量的細(xì)菌的生長(zhǎng) 和/或活性能夠有利地影響宿主的不可消化的食物成分。與將外源性細(xì)菌引入結(jié)腸微生物 群的益生物質(zhì)相反，益生素能夠刺激一種或有限量的潛在促進(jìn)健康的原有微生物(例如雙 歧桿菌或乳桿菌)的生長(zhǎng)。益生素的例子包括果糖-寡糖，例如菊粉、木寡糖和半乳糖-寡糖。益生素可從天然來(lái)源分離出來(lái)，例如菊苣根、大豆、洋姜、菜豆、洋蔥、大蒜、燕麥、小麥和 大麥。一種有用的益生素為菊粉，一種類型的果聚糖(果糖的聚合物)。菊粉類型的果 聚糖由通過(guò)0_2，1鍵連接的3-D-呋喃果糖組成。該鏈的第一個(gè)單體為3-D-吡喃葡萄 糖基或3-D-吡喃果糖基殘基。不同形式的菊粉和菊粉片段可從商業(yè)渠道獲得，例如聚合 度(DP)為2-60的菊粉可從菊苣根(Raftiline ；Orafti, Tienen,比利時(shí))中提取而成；通 過(guò)菊粉的部分酶促水解生成的寡果糖的DP小于10(RaftiloSe ；Orafti)，且其中小分子量 的低聚物已被去除的菊粉被稱為高效菊粉(Raftiline HP ；Orafti) 0通過(guò)在果糖基轉(zhuǎn)移酶 催化的反應(yīng)中使用作為底物的蔗糖和1，2-0果聚糖，可以產(chǎn)生DP小于4的合成低分子量 果聚糖(Neosugar 或 Actilight ；Beghin-Meji Industries,巴黎)。保護(hù)劑可以單獨(dú)或組合地直接施用于患者。通常，保護(hù)劑可懸浮在藥物可接受的 載體(例如生理鹽水或緩沖鹽水溶液)中以利于它們的遞送。將保護(hù)劑包封于合適的遞送 載體(例如聚合物微?；蚩芍踩胄匝b置)中可增加遞送效率。可以通過(guò)將此處提供的任意 保護(hù)劑與藥學(xué)上可接受的載體相組合來(lái)制備組合物。這樣的載體可包括但不限于無(wú)菌水溶 液或非水溶液、懸浮液和乳液。非水溶劑的例子包括但不限于礦物油、丙二醇、聚乙二醇、植 物油和可注射用有機(jī)酯。水性載體包括但不限于水、醇、鹽水和緩沖溶液。還可以存在防腐 劑、調(diào)味劑和其它添加劑，例如如抗微生物劑、抗氧化劑(例如沒(méi)食子酸丙酯)、螯合劑、惰 性氣體等。應(yīng)當(dāng)理解，將要向哺乳動(dòng)物施用的在此描述的任何材料都可以包含一種或多種 藥學(xué)上可接受的載體?？蛇x地或此外，保護(hù)劑可與嬰兒食物源(例如擠出的母乳或市售的嬰兒配方食 品)組合使用。此處描述的任何組合物可對(duì)宿主身體的任何部分施用，然后再遞送到胃腸 道中。組合物可被遞送到例如哺乳動(dòng)物的口腔、鼻粘膜、血液、肺、腸、肌肉組織、皮膚或腹膜 腔。關(guān)于遞送途徑，組合物可經(jīng)靜脈內(nèi)、顱內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、直腸內(nèi)、陰道 內(nèi)、氣管內(nèi)、皮內(nèi)或經(jīng)皮注射施用、口服或經(jīng)鼻施用，或隨時(shí)間逐漸灌注。在另一例子中，組 合物的氣溶膠制劑可通過(guò)吸入給予宿主。保護(hù)劑的所需劑量取決于藥劑的性質(zhì)、施用途徑、制劑的性質(zhì)、患者疾病的性質(zhì)、 患者的體積、體重、表面積、年齡和性別、正在施用的其它藥物和主治醫(yī)師的判斷?？紤]到保 護(hù)劑的不同以及各種施用途徑的效率不同，可以預(yù)期所需的劑量也會(huì)有很大變化。這些劑 量水平的變化可通過(guò)使用本領(lǐng)域公知的用于優(yōu)化的標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)驗(yàn)程序來(lái)進(jìn)行調(diào)節(jié)。施用可為單 次或多次(例如2或3、4、6、8、10次或更多次)。將保護(hù)劑包封在合適的遞送載體(例如聚 合微粒)中可增加遞送的效率。使用此處提供的任何組合物的治療期可以是從短至1天至，只要可能在臨床上懷 疑有增加的風(fēng)險(xiǎn)，例如新生兒特護(hù)病房停留期或嬰兒期的整個(gè)時(shí)間。例如，保護(hù)劑可每日幾 次、每日一次或每周一次(例如持續(xù)4周至幾個(gè)月)施用。還應(yīng)當(dāng)注意，治療頻率也可以變 化。例如，保護(hù)劑可每日、每周或每月施用一次(或兩次、三次等)。有效量的在此提供的任何組合物均可向存在疾病風(fēng)險(xiǎn)或需要治療的個(gè)體施用。此 處使用的術(shù)語(yǔ)“有效的”是指在患者中能夠誘導(dǎo)理想的響應(yīng)但不會(huì)誘導(dǎo)顯著的毒性的任何 量。這樣的量可通過(guò)評(píng)估患者在施用已知量的特定組合物后的響應(yīng)來(lái)確定。此外，如果存 在的話，毒性水平可通過(guò)評(píng)估患者在施用已知量的特定組合物之前和之后的臨床癥狀來(lái)確
18定。應(yīng)當(dāng)注意，向患者施用的特定組合物的有效量可根據(jù)理想的結(jié)果和患者的響應(yīng)和毒性 水平來(lái)調(diào)節(jié)。每個(gè)特定患者的顯著的毒性可能不同，并且取決于多種因素，包括但不限于患 者的疾病狀態(tài)、年齡和對(duì)副作用的耐受。此處提供的保護(hù)劑可與其它預(yù)防或治療形式聯(lián)合向存在患感染性或炎性疾病 (例如NEC、胃腸道感染或膿毒癥)的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體施用。保護(hù)劑可在使用其它藥物或治療處 理之前、同時(shí)或之后施用。其它的治療可包括施用抗生素，例如萬(wàn)古霉素、卡那霉素、慶大霉 素、頭孢噻肟、克林霉素或甲硝唑，經(jīng)腸一起施用IgG和IgA、氨基酸補(bǔ)充、使用血小板激活 因子(PAF)拮抗劑或施用PAF-乙酰水解酶、施用多不飽和的脂肪酸、施用表皮生長(zhǎng)因子和 出生前皮質(zhì)類固醇。保護(hù)劑還可與其它喂養(yǎng)方案一起施用或除其它喂養(yǎng)方案以外施用，其 它喂養(yǎng)方案包括合理地施用人母乳喂養(yǎng)、嬰兒配方食品、非腸道流體、延遲或緩慢的喂養(yǎng)。本文還提供了對(duì)基于分泌者狀態(tài)被確定為存在患NEC或胃腸道感染的風(fēng)險(xiǎn)的嬰 兒確定療程的方法。嬰兒食品源中分泌者抗原(例如《1，2巖藻糖基聚糖)的水平可與對(duì) 照樣品中相同分泌者抗原的水平相比較；食品源中分泌者抗原的水平相對(duì)于對(duì)照樣品中的 那些分泌者抗原的水平可分為降低或升高。其分泌者狀態(tài)表明存在患NEC和胃腸道感染的 風(fēng)險(xiǎn)且其食物源也包含降低水平的分泌者抗原的那些嬰兒可使用a 1，2巖藻糖基聚糖、益 生生物體或益生素中的一種或多種進(jìn)行治療。嬰兒的食品來(lái)源可為來(lái)自嬰兒母親或供體源的母乳，或市售的嬰兒配方食品。人 乳或配方食品中的一種或多種分泌者抗原的水平可通過(guò)使用例如ELISA、色譜法或其它方 法測(cè)定，并與上述的對(duì)照樣品中的水平進(jìn)行比較。人乳寡糖通常在還原末端包含乳糖部分，在非還原末端包含巖藻糖。以al，2連 接將巖藻糖添加到寡糖上主要是通過(guò)由分泌者基因Se(FUT2)產(chǎn)生的巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶催化 的；以a 1，3或a 1，4連接的方式添加巖藻糖是通過(guò)由Lewis基因、Le (FUT3)或該家族的 其它a 1，3轉(zhuǎn)移酶基因(FUT4、5、6、7和9)產(chǎn)生的巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶催化的。2-和3/4-巖藻 糖基轉(zhuǎn)移酶的活性的變化可能是由于無(wú)活性的或部分活性的遺傳多態(tài)性。這樣的變化可產(chǎn) 生特定巖藻糖基寡糖的相對(duì)量不同的母乳表型。為非分泌者的女性在其母乳或其它體液中 不表達(dá)可測(cè)定到的2-連接的巖藻糖基寡糖。但是，母乳巖藻糖基寡糖的表達(dá)甚至在分泌者 之間也可能是不同的，1，2_連接的巖藻糖基寡糖與僅含1，3_和1，4_連接的巖藻糖的那些 巖藻糖基寡糖的比例在哺乳期的第一年中成指數(shù)下降。合適的a 1，2巖藻糖基聚糖的例子包括但不限于與H-2同源的2'-巖藻糖基乳 糖(2' -FL)、與H-1同源的乳糖-N-巖藻戊糖I(LNF-I)、與Lewisb同源的乳糖-N-二巖藻己 糖I0JFH I)、與LewiSy同源的乳糖-二巖藻四糖(LDFT)以及與Lewisa同源的乳糖-N-二 巖藻己糖II (LNF-II)和與Lewisx同源的乳糖_N_二巖藻己糖III (LNF-III)。核心類型1結(jié) 構(gòu)，即乳糖-N-四糖(LNT)，為乳糖上的末端GalM，3GlcNAc。乳糖為母乳中最豐富的2型 結(jié)構(gòu)(2' -FL、3-FL和LDFT)的核心，而乳糖末端上的乳糖_N_新四糖，即Gal 0 1，4GlcNAc， 為L(zhǎng)NF-III的核心。在其它組織中，Lewis結(jié)構(gòu)部分是基于乳糖胺骨架(Gal-GlcNAc)；但是 人乳中最普遍的2型巖藻糖基寡糖是由乳糖(Gal-Glc)合成的，因此被定義為2型Lewis 結(jié)構(gòu)的葡萄糖類似物。也可發(fā)現(xiàn)這些結(jié)構(gòu)的表位在母乳的各種糖偶聯(lián)物中表達(dá)，這些糖偶 聯(lián)物可用于預(yù)防和/或治療目的。其食品供應(yīng)包含水平降低的分泌者抗原的嬰兒可通過(guò)喂養(yǎng)上述的a 1，2巖藻糖基聚糖、益生生物體或益生素經(jīng)腸補(bǔ)充。實(shí)施例實(shí)施例1 細(xì)菌定植誘導(dǎo)腸糖基化的改變。腸中巖藻糖基化和唾液酸化聚糖的表達(dá)在發(fā)育中發(fā)生改變，使人聯(lián)想到在整個(gè)哺 乳期在母乳中見(jiàn)到的改變。在小鼠的小腸中，F(xiàn)ut2mRNA和a 1，2/3-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性 在斷奶時(shí)急劇增加，而唾液酸轉(zhuǎn)移酶活性的表達(dá)降低。這兩種酶活性的反轉(zhuǎn)與斷奶時(shí)粘膜 聚糖表達(dá)的急劇改變和腸微生物群的組成的改變相一致。如下所述檢測(cè)這些改變的誘導(dǎo)是 經(jīng)過(guò)內(nèi)在的遺傳程序還是通過(guò)飲食或成人微生物群的外部控制。在斷奶時(shí)正常發(fā)生的巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶的向上調(diào)節(jié)不會(huì)在無(wú)菌的小鼠中發(fā)生。但 是，只要斷奶后的無(wú)菌小鼠被定植，巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶和巖藻糖基化就會(huì)被誘導(dǎo)。這表明細(xì)菌 定植誘導(dǎo)了粘膜表面的巖藻糖基化。這在通過(guò)飲用抗生素混合物消耗細(xì)菌(BD)的成熟小 鼠中得到了證實(shí)。兩周后，F(xiàn)ut2mRNA和巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶的活性下降到無(wú)菌小鼠的水平，且 巖藻糖基聚糖(荊豆凝集素1[UEA-1]染色)在結(jié)腸中不再表達(dá)。停止抗生素治療和正常 微生物群充足(XBD)使得Fut2mRNA和巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性恢復(fù)到正常定植的成熟腸的水 平，并使得在粘膜表面上完全表達(dá)巖藻糖基聚糖。這證實(shí)了腸的巖藻糖基化受其定植的控 制。假定細(xì)胞外定植造成細(xì)胞內(nèi)ERK和JNK途徑激活的機(jī)理涉及未確定的跨膜受體。 已知一個(gè)跨膜受體家族toll樣受體(TLR)能夠感知在細(xì)胞外存在微生物獨(dú)特的模式識(shí)別 分子并通過(guò)跨細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑將信號(hào)傳送給核。因此，我們測(cè)試了一個(gè)TLR家族成員是 否有可能對(duì)細(xì)菌與腸粘膜之間導(dǎo)致結(jié)腸粘膜中細(xì)菌誘導(dǎo)的Fut2mRNA和巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶 活性的通訊負(fù)責(zé)。如野生型小鼠那樣，攜帶TLR2突變的小鼠能夠表達(dá)正常的巖藻糖基化， 而該巖藻糖基化隨著定植的喪失而喪失(圖12，下頁(yè))。相反，TLR4突變體或其下游介體 MyD88不表達(dá)完全水平的巖藻糖基化，且該巖藻糖基化不受定植喪失的影響。這與細(xì)菌誘導(dǎo) 的粘膜巖藻糖基化所必需的TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是一致的。為了測(cè)試細(xì)菌耗盡小鼠中TLR4 自身的激活是否足以激活刺激Fut2表達(dá)的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，將TLR4的特異性配體LPS添加到飲 用水中，施用給細(xì)菌耗盡小鼠。當(dāng)使用超純的LPS處理時(shí)，BD小鼠結(jié)腸的巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶 活性和Fut2mRNA恢復(fù)到正常成年小鼠的水平。相反，在使用TLR2的配體肽聚糖(PG)處理 的BD小鼠中，巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性和Fut2mRNA的水平保持在BD小鼠的較低水平上。這些 數(shù)據(jù)強(qiáng)烈提示細(xì)菌耗盡小鼠中TLR4的結(jié)合和刺激是關(guān)鍵的信號(hào)，該信號(hào)對(duì)成年腸微生物 群發(fā)出導(dǎo)致腸巖藻糖基化的上皮核事件的信號(hào)是必要的且足夠的。如果與巖藻糖基化TLR4的結(jié)合是定植誘導(dǎo)的粘膜巖藻糖基化的關(guān)鍵信號(hào)，那么 預(yù)期與巖藻糖結(jié)合的微生物群的亞組能夠重現(xiàn)這一現(xiàn)象。使用混合微生物群中利用巖藻糖 的種類來(lái)驗(yàn)證該假說(shuō)。脆弱擬桿菌是在典型成熟哺乳動(dòng)物微生物群中發(fā)現(xiàn)的利用巖藻糖的 特定細(xì)菌。細(xì)菌耗盡小鼠中脆弱擬桿菌的單定植誘導(dǎo)的巖藻糖基化與混合微生物群的再定 植誘導(dǎo)的程度相同，其由誘導(dǎo)的Fut2mRNA介導(dǎo)，并與負(fù)責(zé)誘導(dǎo)巖藻糖表達(dá)的混合微生物群 中利用巖藻糖的細(xì)菌一致。如果是這樣，可以預(yù)期不能利用巖藻糖的突變脆弱擬桿菌將失 去發(fā)出誘導(dǎo)粘膜中巖藻糖基化的信號(hào)的能力，如右圖所示。因此，在細(xì)菌耗盡小鼠中利用巖 藻糖的細(xì)菌與一組巖藻糖基化表位(似乎是巖藻糖基化TLR4)結(jié)合似乎足以誘導(dǎo)腸粘膜上 的巖藻糖基化的表型。
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實(shí)施例2 住院嬰兒唾液中的組織血型抗原(聚糖)在辛辛那提地區(qū)新生兒重癥監(jiān)護(hù)室(Newborn Intensive CareUnits)住院的胎 齡(GA)為24-42周之間的36名嬰兒在2005年5月-12月之間入組。根據(jù)胎齡分成三組 在出生時(shí)胎齡為24-28周、29-32周和大于或等于33周，每組12位受試者。排除被診斷 為嚴(yán)重天生異常的嬰兒。辛辛那提兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)中心(CincirmatiChildren，s Hospital Medical Center)、優(yōu)秀撒馬利亞醫(yī)院(GoodSamaritan Hospital)和大學(xué)醫(yī)院(University Hospital)的研究倫理委員會(huì)(Institutional Review Boards)批準(zhǔn)了該項(xiàng)研究。并獲得 了來(lái)自父母的書面知情同意。采集的母親的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)信息包括母親的年齡、種族、產(chǎn)科 史、母親懷孕期間遇到的并發(fā)癥和母親在懷孕期間的用藥。受試者入組時(shí)記錄的臨床和人 口統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)包括種族、性別、胎齡、出生體重、體長(zhǎng)和頭圍。在嬰兒住院期間記錄的研究嬰 兒的臨床數(shù)據(jù)包括呼吸支持的需求和持續(xù)時(shí)間、腸營(yíng)養(yǎng)的開始和類型(人乳或配方食品)、 培養(yǎng)證明的膿毒癥的事件、壞死性小腸結(jié)腸炎的發(fā)生(Bell 2期或更高)和抗生素使用史。標(biāo)本的采集.在入組時(shí)和受試者住院期間每?jī)芍塬@得唾液標(biāo)本。每位受試者最多 收集5個(gè)標(biāo)本。喂養(yǎng)后1-2個(gè)小時(shí)采集唾液標(biāo)本，先使用軟紗布清洗口腔中殘余的奶水或 配方食品，再插入無(wú)菌棉簽。一旦觀察到棉簽沾滿唾液，就將棉簽轉(zhuǎn)移到標(biāo)本容器中。標(biāo)本 短暫地保持在4°C下，然后轉(zhuǎn)移到-80°C?？偣膊杉?07個(gè)唾液標(biāo)本。讓沾滿唾液的棉簽 在1ml磷酸緩沖鹽水(PBS)中解凍5分鐘。然后在10，000X g下離心標(biāo)本10分鐘，并收集 上清液。各標(biāo)本在100°C下煮沸10分鐘，并置于4°C下過(guò)夜。然后再次在10，000gX下離心 標(biāo)本10分鐘，收集上清液，分為100ml的等份，并置于-80°C。對(duì)各抗原檢測(cè)分析分別確定唾液樣品的最佳稀釋度。1 50稀釋的唾液標(biāo)本被用 于檢測(cè)1^3、1^!￡、11-1、11-2、唾液酸化1^3和唾液酸化1^!￡抗原。1 125稀釋的唾液標(biāo)本被 用于Ley的抗原檢測(cè)，而1 250稀釋的唾液標(biāo)本被用于Leb的抗原檢測(cè)。對(duì)于來(lái)自受試者 個(gè)體的唾液樣品的定量分析，1 50的稀釋度被用于所有的抗原。將樣品包被在微量滴定 板(Dynex Immunlon)上，在4°C下過(guò)夜。使用5%的Blotto封閉后，以1 100的稀釋度使 用Lewis和ABH抗原特異性單克隆抗體(MAb)。下面的人組織血型抗原類型特異性MAb被 用于確定組織血型表型。MAbs BG-4抗-HI型、BG-5抗-Lea、BG-6抗-Leb、BG-7抗_Lex和 BG-8 抗-Ley 從 Signet Laboratories 購(gòu)買。MAbBCR9031 抗-H 2 型、BCR9010 抗-A 和 BCRM 11007 抗-B 從 AccurateChemical 和 Scientific Corporation 購(gòu)買。唾液酸化 Lea 和 Lex 的MAb為EMD的產(chǎn)品，目錄號(hào)分別為565942和565953。在37°C下溫育1小時(shí)以后，添加辣 根過(guò)氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的山羊抗小鼠IgG、IgG3或IgM抗體。每步之后，使用PBS/Tween 溶液洗板五次。使用TMB試劑盒(Kirkegard & Perry Laboratories)來(lái)檢測(cè)比色反應(yīng)，并 使用EIA光譜讀數(shù)器(Tecan)在450nm的波長(zhǎng)下讀數(shù)。表1示出了在第一周和出院之前的研究中通過(guò)ELISA獲得的平均光密度值(士標(biāo) 準(zhǔn)誤差)，其對(duì)象為在唾液樣品中具有可檢測(cè)水平的抗原的所有嬰兒。單獨(dú)考慮各種抗原。 該分析表明大多數(shù)分泌者抗原(LeWiSb、LewiSy和H-2)在出生后的早產(chǎn)兒中存在，且分泌 者抗原的表達(dá)在產(chǎn)后增加。如表1所示，在隨后的時(shí)間點(diǎn)采集的樣品中，即在嬰兒出院之前 采集的那些樣品中，分泌者抗原(以黑體字示出)的水平較高。LeWiSb、LeWiSy和Lewisb和 Lewis"的水平隨著時(shí)間的推移統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地增加；其它分泌者抗原H-1和H-2的水平也增 加，但是它們?cè)黾拥乃俾什⑽催_(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。
表1 早產(chǎn)兒唾液中的聚糖表達(dá) *值表示為平均光密度；括號(hào)中為標(biāo)準(zhǔn)誤差。、-值是通過(guò)使用Student’s t_檢驗(yàn)確定的。實(shí)施例3 抗生素的使用和聚糖表達(dá)表型通過(guò)使用廣義估計(jì)方程(Generalized Estimating Equation，GEE)來(lái)分析分泌者 抗原表達(dá)、產(chǎn)后年齡、胎齡和抗生素使用之間的關(guān)系。在產(chǎn)后第一周和“出院之前”從24名 嬰兒中采集唾液樣品。根據(jù)實(shí)施例1中描述的方法，通過(guò)使用ELISA來(lái)測(cè)定組織血型抗原 1^￥土83、1^界土8；￡、1^￥土81\1^￥土85\11-1、11-2、唾液酸化-1^￥土83(51^3)和唾液酸化-LewiSx(SLex) 的水平。根據(jù)出生時(shí)的胎齡，將嬰兒分為22-28周、29-34周和35-40周的組。對(duì)于GEE分 析，使用組織血型抗原0. D.值作為因變量(在表2的第1欄中被稱為“模型”)，產(chǎn)后的周 數(shù)、胎齡組和使用抗生素的天數(shù)作為自變量。GEE分析得到的0系數(shù)示于表2中。GEE分 析表明該過(guò)程(被定義為1-5天的嬰兒的抗生素治療)與產(chǎn)后顯著降低的分泌者抗原的 表達(dá)相關(guān)。表2 廣義估計(jì)方程(GEE)分析獲得的0系數(shù)(SE)對(duì)24名嬰兒的樣品測(cè)定的組 織血型抗原的0. D.值(因變量)，在第一周和出院(出生后3-7周)之前采集兩個(gè)唾液樣 品。產(chǎn)后的周數(shù)、胎齡組和使用抗生素的天數(shù)作為自變量。 *胎齡組1 =出生時(shí)24-28周，2 =出生時(shí)29-32周；3 =出生時(shí)33-40周，K 0.001實(shí)施例4 極低出生體重兒(ELBW)的結(jié)果的研究辛辛那提兒新生兒重癥監(jiān)護(hù)室的一組192名極低出生體重(< 1000克)兒，在出 生后第一周(第1-7天)和第二周(第8-14天)收集唾液樣品，分析其分泌者抗原的表達(dá)、 臨床結(jié)果和壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)之間的關(guān)系。這是在辛辛那提地區(qū)具有III級(jí)新生兒 重癥監(jiān)護(hù)水平的三家醫(yī)院中進(jìn)行的前瞻性研究，其中嬰兒分別在2002-2004期間加入。排 除標(biāo)準(zhǔn)包括存在嚴(yán)重的染色體或先天性異常、診斷為囊性纖維化或由主治新生兒醫(yī)生判斷 無(wú)法生存超過(guò)一周的醫(yī)學(xué)癥狀。加入后，同時(shí)獲得唾液樣品和人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和臨床數(shù)據(jù)。隨 后對(duì)嬰兒進(jìn)行每周一次的唾液樣品采集。在喂養(yǎng)之前在5:00am和10:00am之間，由護(hù)理或 研究人員將無(wú)菌棉簽置于嬰兒口中并浸滿唾液來(lái)收集唾液樣品。樣品冷凍在-80°C。通過(guò) 取下棉簽的棉花部分，置于lmL的注射器中，并使用250mL生理鹽水洗脫所含物，來(lái)提取唾 液。圖6為結(jié)果的散點(diǎn)圖。研究群體中的NEC的比率為7. 8% (n = 15)；遲發(fā)型膿毒癥的比率為34. 9% (n = 67)；死亡的比率為9.3% (n=18)。15個(gè)NEC病例中，病例死亡率為60%，在192名研究 的嬰兒中，NEC引起的死亡率為4. 7% (n = 9)。根據(jù)實(shí)施例1中描述的方法，通過(guò)使用ELISA在采自各嬰兒的單個(gè)存放(single banked)唾液樣品中測(cè)定組織血型抗原Lewisa、Lewis51、Lewis\ Lewis\ H_l、H_2、唾液酸 化-LeWiSa(SLea)和唾液酸化-LewiSx (SLex)的水平。表達(dá)含a 1，2_連接的巖藻糖的一種 或多種抗原的個(gè)體被稱為分泌者。20%的(即39名)嬰兒被分類為非分泌者(無(wú)檢測(cè)到 的分泌者抗原)；153名嬰兒(80% )被分類為分泌者。通過(guò)使用各個(gè)體的聚糖(分泌者抗原、Lewis抗原和唾液酸化抗原)值，利用分類 與回歸樹(CART)分析確定NEC或死亡的高風(fēng)險(xiǎn)亞組。CART分析為使用基于樹的分配在臨 床研究(例如該臨床研究)中確定用于風(fēng)險(xiǎn)的診斷或預(yù)測(cè)標(biāo)記的算法而建立的統(tǒng)計(jì)學(xué)方 法。基于遞歸分配分析的經(jīng)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)技術(shù)不需要參數(shù)假定，并涉及通過(guò)由進(jìn)行性二元裂分 組成的決策樹分離連續(xù)或分類數(shù)據(jù)的不同值。各預(yù)測(cè)變量的每個(gè)值被認(rèn)為是潛在的裂分， 基于使用“雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)”使病例和非病例的誤分類最小化來(lái)選擇最佳裂分，“雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)”是與 該節(jié)點(diǎn)的數(shù)據(jù)的二元裂分一起出現(xiàn)的殘差平方和的減少。使用CART分析了所有7個(gè)抗原， 每次分析一個(gè)抗原，產(chǎn)生各變量的最佳截點(diǎn)。然后再將由該步驟中創(chuàng)建的分類變量(圖1 中部分顯示)輸入第二個(gè)CART模型。在該步驟中，H-2作為第一裂分(參見(jiàn)圖2)出現(xiàn)，確 定了 73名嬰兒分入高風(fēng)險(xiǎn)組的最低38%的值和以下(0. D.值< 0. 627)。該組包括18個(gè) NEC或死亡病例(發(fā)生率24. 7% )，而在分入H-2低風(fēng)險(xiǎn)組的119名嬰兒中僅有6個(gè)NEC或 死亡病例(發(fā)生率5. 0%，P < 0. 0001)。在根據(jù)他們的唾液H-2被分入高風(fēng)險(xiǎn)組的73名嬰兒(“低分泌者”和非分泌者)中，在CART模型中出現(xiàn)第二分裂19名被確定為低風(fēng)險(xiǎn) (一個(gè)NEC或死亡病例，發(fā)生率5. 2% )，54名被確定為高風(fēng)險(xiǎn)(17個(gè)NEC或死亡病例，發(fā)生 率31.5%)。該模型確定了 1個(gè)高風(fēng)險(xiǎn)組(低和非分泌者，31. 5%的風(fēng)險(xiǎn))和2個(gè)低風(fēng)險(xiǎn) 組(119名為高分泌者，19名為非和低分泌者但是同時(shí)為低sLea)，這兩組具有幾乎相同的 風(fēng)險(xiǎn)，接近5%。最后，將這3個(gè)節(jié)點(diǎn)重新輸入到最終的CART模型中結(jié)果為確定高風(fēng)險(xiǎn)組 和所有其它組的二元分裂(圖2和3)。接受者操作曲線下面積分析發(fā)現(xiàn)，組合H-2和sLea 預(yù)測(cè)性高風(fēng)險(xiǎn)截點(diǎn)的該單分裂的總體預(yù)測(cè)值為77。CART分析總結(jié)在圖5和6中。
已經(jīng)描述了本發(fā)明的一些實(shí)施方案。但是，應(yīng)當(dāng)理解，還可以做出許多改變，而不 會(huì)偏離本發(fā)明的精神和范圍。
權(quán)利要求
一種確定存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，所述方法包括(a)測(cè)定個(gè)體生物樣品中至少一種分泌者抗原的水平，和(b)將測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù)值范圍進(jìn)行比較，其中，如果測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平不同于預(yù)先確定的數(shù)值或在預(yù)先確定的數(shù)值范圍之外，則所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述個(gè)體為嬰兒。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述嬰兒為新生兒、低出生體重兒、極低出生體重 兒或早產(chǎn)兒。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述至少一種分泌者抗原包括α1，2-連接的巖藻 糖抗原和/或α 2，3唾液酸化的抗原。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述至少一種分泌者抗原選自H-l、H-2、LewiSb和 Lewisy抗原及其衍生物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述衍生物為L(zhǎng)ewisa.Lewis x.Lewis b或Lewis y的唾液酸化形式。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述衍生物為H-l、H-2、LewiSa.Lewis x.Lewis b或Lewis y的硫酸化形式。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物樣品為體液或組織。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述體液包括唾液、血液、血漿、血清、尿液、大便、 羊水、粘液、眼淚或淋巴液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述體液包括唾液。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述測(cè)定步驟包括免疫測(cè)定。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述至少一種分泌者抗原選自H-l、H-2、Lewisb 和Lewisy及其衍生物，其中如果所述測(cè)定的水平低于預(yù)先確定的數(shù)值或低于預(yù)先確定的數(shù) 值范圍，則該個(gè)體被確定為存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù)值范圍代 表被確定為分泌者的個(gè)體群體中所述至少一種分泌者抗原的平均水平。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中當(dāng)測(cè)定的至少一種分泌者抗原的水平比分泌者 對(duì)照群體中的平均水平低至少10%時(shí)，該個(gè)體被確定為存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種分泌者抗原為H-2抗原。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述至少一種抗原為唾液酸化Lewisa或其衍生 物，其中如果測(cè)定的水平高于預(yù)先確定的數(shù)值或高于預(yù)先確定的數(shù)值范圍，則個(gè)體被確定 為存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述嬰兒為新生兒、低出生體重兒、極低出生體重兒或早產(chǎn)兒。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述生物樣品為體液或組織。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述體液包括唾液、血液、血漿、血清、尿液、大 便、羊水、粘液、眼淚或淋巴液。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述體液包括唾液。
21.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述測(cè)定步驟包括免疫測(cè)定。
22.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù)值范圍代 表被確定為分泌者的個(gè)體群體中所述至少一種分泌者抗原的平均水平。
23.一種確定存在患胃腸道疾病的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，所述方法包括(a)測(cè)定個(gè)體生物樣品中至少一種分泌者抗原的水平，和(b)將測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù)值范 圍進(jìn)行比較，其中，如果測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平不同于預(yù)先確定的數(shù)值或在預(yù)先確 定的數(shù)值范圍之外，則所述個(gè)體存在患胃腸道疾病的風(fēng)險(xiǎn)。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述個(gè)體為嬰兒。
25.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述嬰兒為新生兒、低出生體重兒、極低出生體重兒或早產(chǎn)兒。
26.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述測(cè)定的抗原包括a1，2_連接的巖藻糖抗原 和/或a 2，3唾液酸化的抗原。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述分泌者抗原選自H-l、H-2、LewiSb和LewiSy 抗原及其衍生物。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述衍生物為L(zhǎng)ewisa, Lewis x, Lewis b或 Lewis y的唾液酸化形式。
29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述衍生物為L(zhǎng)ewisa, Lewis x, Lewis b或 Lewis y的硫酸化形式。
30.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述生物樣品為體液或組織。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述體液包括唾液、血液、血漿、血清、尿液、大 便、羊水、粘液、眼淚或淋巴液。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述體液包括唾液。
33.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述測(cè)定步驟包括免疫測(cè)定。
34.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述至少一種分泌者抗原選自H-l、H-2、LewiSb 和Lewif及其衍生物，其中如果所述測(cè)定的水平低于預(yù)先確定的數(shù)值或低于預(yù)先確定的數(shù) 值范圍，則該個(gè)體被確定為存在患胃腸道疾病的風(fēng)險(xiǎn)。
35.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù)值范圍代 表被確定為分泌者的個(gè)體群體中所述至少一種分泌者抗原的平均水平。
36.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中當(dāng)測(cè)定的至少一種分泌者抗原的水平比分泌者 對(duì)照群體中的平均水平低至少10%時(shí)，該個(gè)體被確定為存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。
37.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述至少一種抗原為H-2抗原。
38.根據(jù)權(quán)利要求22-37中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述胃腸道疾病為胃腸道炎癥。
39.根據(jù)權(quán)利要求22-37中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述胃腸道疾病為胃腸道感染。
40.根據(jù)權(quán)利要求22-37中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述疾病為遲發(fā)型膿毒癥。
41.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中所述胃腸道感染包括葡萄球菌屬的種、金黃色 葡萄球菌、大腸桿菌、鏈球菌屬的種、腸桿菌屬的種、克雷伯氏菌屬的種、芽孢桿菌屬的種、沙雷氏菌屬的種、念珠菌屬的種、諾瓦克和其它諾瓦克病毒、彎曲桿菌屬的種、霍亂弧菌、類 桿菌屬的種、梭菌科、賈第蟲屬中的一種或多種的感染。
42.一種方法，包括(a)測(cè)定個(gè)體生物樣品中至少一種分泌者抗原的水平，和(b)將測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù)值范 圍進(jìn)行比較，(c)如果測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平不同于預(yù)先確定的數(shù)值或在預(yù)先確定 的數(shù)值范圍之外，則確定所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)；和(d)如果確定所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)，則采取步驟來(lái)治療壞死性小 腸結(jié)腸炎或降低患該病的風(fēng)險(xiǎn)。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述步驟(d)包括向個(gè)體施用a1，2巖藻糖基 聚糖、益生生物體或益生素中的一種或多種。
44.一種確定存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，所述方法包括(a)測(cè)定患者生物樣品中FUT2蛋白質(zhì)或編碼FUT2的mRNA的水平；(b)將測(cè)定的FUT2蛋白質(zhì)或編碼FUT2的mRNA的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的 數(shù)值范圍進(jìn)行比較，其中，如果所述測(cè)定的FUT2蛋白質(zhì)或編碼FUT2的mRNA的水平低于預(yù)先確定的數(shù)值或 預(yù)先確定的數(shù)值范圍，則所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。
45.一種確定存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，所述方法包括(a)提供來(lái)自個(gè)體的生物樣品；(b)確定所述個(gè)體是否攜帶具有降低FUT2的表達(dá)或活性的遺傳改變的FUT2基因， 其中，如果所述個(gè)體攜帶具有降低FUT2的表達(dá)或活性的遺傳改變的FUT2基因，則所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。
46.一種確定存在死亡風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，所述方法包括(a)測(cè)定個(gè)體生物樣品中至少一種分泌者抗原的水平，和(b)將測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù)值范 圍進(jìn)行比較，其中，如果測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平不同于預(yù)先確定的數(shù)值或在預(yù)先確 定的數(shù)值范圍之外，則所述個(gè)體存在患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述個(gè)體為嬰兒。
全文摘要
通過(guò)測(cè)定個(gè)體生物樣品中至少一種分泌者抗原的水平和通過(guò)將測(cè)定的所述至少一種分泌者抗原的水平與預(yù)先確定的數(shù)值或預(yù)先確定的數(shù)值范圍進(jìn)行比較來(lái)確定具有患?jí)乃佬孕∧c結(jié)腸炎及相關(guān)疾病的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體?？蓽y(cè)定的分泌者抗原有H-1、H-2、Lewisb和Lewisy抗原及其衍生物(例如Lewis a、Lewis x、Lewis b、Lewis y的唾液酸化形式；H-1、H-2、Lewis a、Lewis x、Lewis b或Lewis y)。
文檔編號(hào)G01N33/53GK101855554SQ200880112257
公開日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2008年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月7日
發(fā)明者A·L·莫?jiǎng)? D·S·紐伯格, G·M·魯伊斯-帕拉希奧斯 申請(qǐng)人:兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)中心;總醫(yī)院有限公司;國(guó)立醫(yī)學(xué)科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)研究院