專(zhuān)利名稱(chēng)：異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑和異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑和異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
所謂的朊病毒病正成為嚴(yán)重的社會(huì)問(wèn)題。作為該朊病毒病，已知的有傳染性海綿 狀腦病(TSE)，例如羊瘙癢癥(scrapie)、牛海綿狀腦病(BSE)、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病 (CJD)等。由各種證據(jù)可知，這些朊病毒病是由于感染性朊病毒蛋白(異常型朊病毒蛋白) (PrPsc)而引起的。因此，為了避免人和動(dòng)物傳染朊病毒病、并確保醫(yī)藥品和食品的安全性，對(duì)試樣中 的感染性朊病毒蛋白(異常型朊病毒蛋白)的檢測(cè)進(jìn)行了各種嘗試。然而，人和動(dòng)物在生物體內(nèi)本來(lái)就具有不引起朊病毒病的非感染性朊病毒蛋白 (正常型朊病毒蛋白)(PrPe)。并且，令人驚奇的是，該正常型朊病毒蛋白與異常型朊病毒 蛋白具有相同的氨基酸序列(一級(jí)結(jié)構(gòu))，其不同之處僅在于由相同的氨基酸序列所形成 的高級(jí)結(jié)構(gòu)。通常，作為區(qū)分并檢測(cè)兩種蛋白質(zhì)的方法，有使用能夠區(qū)分這些蛋白質(zhì)的特異性 抗體的方法。然而，也許是因?yàn)槿缟纤霭被嵝蛄邢嗤两褚矝](méi)有獲得能夠區(qū)分異常型 朊病毒蛋白和正常型朊病毒蛋白的特異抗體。即，使用特異性抗體來(lái)檢測(cè)試樣中的感染性 朊病毒蛋白(異常型朊病毒蛋白)的方法尚未有實(shí)用化的可能性。因此，目前，異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法僅限于下面的大致2種方法。一種方法為將疑含有異常型朊病毒蛋白(感染性朊病毒蛋白)的試樣注入到試 驗(yàn)動(dòng)物的腦內(nèi)，然后進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的飼養(yǎng)，確認(rèn)所得到的腦標(biāo)本在神經(jīng)病理學(xué)上的變化。該方法雖然為能夠信賴(lài)的方法，但令人遺憾的是，由于需要花費(fèi)大量的時(shí)間和費(fèi) 用，因而除了作為各種檢測(cè)方法的校準(zhǔn)試驗(yàn)使用之外，尚未成為常用的檢測(cè)方法。另一種方法為使用蛋白酶K的方法。也許是因?yàn)槠涓呒?jí)結(jié)構(gòu)的原因，已知正常型 朊病毒蛋白容易被蛋白酶K分解(敏感性)，另一方面，異常型朊病毒蛋白難以被蛋白酶K 分解(耐受性)。因此，利用這種對(duì)于被蛋白酶K分解的敏感性(耐受性)的不同，例如，在 蛋白酶K處理后，若能通過(guò)使用了多克隆抗體的免疫印跡法等檢測(cè)到與處理前位置相同的 條帶，則判斷蛋白質(zhì)為異常型朊病毒蛋白，若對(duì)應(yīng)的條帶消失(沒(méi)有檢測(cè)到)，則判斷為正 常型朊病毒蛋白，從而能夠進(jìn)行檢測(cè)。使用了該蛋白酶K的檢測(cè)方法目前正被廣泛使用，并提出了許多變形(專(zhuān)利文獻(xiàn) 1 日本特開(kāi)平10-267928號(hào)公報(bào)，專(zhuān)利文獻(xiàn)2 日本特開(kāi)平11-32795號(hào)公報(bào)，專(zhuān)利文獻(xiàn)3 : 日本特開(kāi)2003-121448號(hào)公報(bào))。然而，該方法必須進(jìn)行酶處理，因而必須準(zhǔn)備適于酶反應(yīng)的條件，從這點(diǎn)來(lái)看非常 繁雜，而且進(jìn)行酶反應(yīng)需要花費(fèi)時(shí)間，其結(jié)果，在原理上存在迅速性和簡(jiǎn)易性不充分、作為 試劑需要比較昂貴的酶等缺點(diǎn)。
專(zhuān)利文獻(xiàn)1 日本特開(kāi)平10-267928號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)2 日本特開(kāi)平11-32795號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)3 日本特開(kāi)2003-121448號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問(wèn)題因此，要求一種能夠簡(jiǎn)便、迅速且以高靈敏度定量地從正常型朊病毒蛋白中區(qū)分 并檢測(cè)出異常型朊病毒蛋白而不需要利用蛋白酶K進(jìn)行酶處理的方法。S卩，本發(fā)明的目的在于提供一種能夠簡(jiǎn)便、迅速且以高靈敏度定量地從正常型朊 病毒蛋白中區(qū)分并檢測(cè)出異常型朊病毒蛋白而不需要利用蛋白酶K進(jìn)行酶處理的方法；以 及在該方法中使用的檢測(cè)劑。另外，為了在這種檢測(cè)方法中使用，要求一種不與正常型朊病毒蛋白結(jié)合、而與異 常型朊病毒蛋白特異性結(jié)合的試劑(結(jié)合劑)。S卩，本發(fā)明的目的還在于提供一種不與正常型朊病毒蛋白結(jié)合、而與異常型朊病 毒蛋白特異性結(jié)合的試劑(結(jié)合劑)。用于解決問(wèn)題的方案本發(fā)明人等為了達(dá)到上述目的，對(duì)異常型朊病毒蛋白的特異性檢測(cè)方法進(jìn)行了深 入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，屬于來(lái)源于哺乳動(dòng)物乳的蛋白質(zhì)的乳鐵蛋白，具有不與正常型朊病毒蛋 白結(jié)合、而僅與異常型朊病毒蛋白特異性結(jié)合的性質(zhì)，由此完成了本發(fā)明。S卩，乳鐵蛋白即為長(zhǎng)久以來(lái)一直要求的、不與正常型朊病毒蛋白結(jié)合而與異常型 朊病毒蛋白特異性結(jié)合的試劑(結(jié)合劑)，如果使用該乳鐵蛋白，則能夠從正常型朊病毒蛋 白中區(qū)分并檢測(cè)出異常型朊病毒蛋白而不需要利用蛋白酶K進(jìn)行酶處理。另外，通過(guò)利用乳鐵蛋白的與異常型朊病毒蛋白特異性結(jié)合的性質(zhì)，不僅能夠進(jìn) 行異常型朊病毒蛋白的特異性檢測(cè)，還能夠進(jìn)行異常型朊病毒蛋白的特異性分離(包括純 化和濃縮)、異常型朊病毒蛋白的特異性固定、異常型朊病毒蛋白的自締合的特異性抑制， 提供在利用蛋白酶K的酶處理的方法中不可能實(shí)現(xiàn)的新型的用途。即，本發(fā)明的異常型朊 病毒蛋白結(jié)合劑具有這種有用的用途。因此，本發(fā)明包含以下[1] [2]。[1] 一種異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其包含乳鐵蛋白。[2] 一種異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其具有由乳鐵蛋白構(gòu)成的異常型朊病毒蛋白 結(jié)合部位。另外，若將乳鐵蛋白固定在載體上而使用的話(huà)，特別適合進(jìn)行僅將異常型朊病毒 蛋白從正常型朊病毒蛋白中分離(包括純化和濃縮)而獲得；與異常型朊病毒蛋白結(jié)合而 將其固定；檢測(cè)異常型朊病毒蛋白。因此，本發(fā)明還包括以下[3] [6]。[3]根據(jù)[1] [2]中任一項(xiàng)所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其中，乳鐵蛋白被 固定在載體上。[4]根據(jù)[1] [2]中任一項(xiàng)所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其中，乳鐵蛋白作 為異常型朊病毒蛋白結(jié)合部位被固定在載體上。
[5]根據(jù)[3] [4]中任一項(xiàng)所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其中，載體為珠。[6]根據(jù)[5]所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其中，珠為能夠磁性化的珠。這種異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑能夠在檢測(cè)異常型朊病毒蛋白的用途中使用。因此，本發(fā)明還包括以下[7] [9]。
[7]根據(jù)[1] [6]中任一項(xiàng)所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其為異常型朊病毒 蛋白檢測(cè)劑。[8]根據(jù)[1] [6]中任一項(xiàng)所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其為具有由乳鐵蛋 白構(gòu)成的異常型朊病毒蛋白結(jié)合部位的異常型朊病毒蛋白檢測(cè)劑。[9]根據(jù)[1] [6]中任一項(xiàng)所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其為包含由乳鐵蛋 白構(gòu)成的異常型朊病毒蛋白結(jié)合部位、和標(biāo)記部位的異常型朊病毒蛋白檢測(cè)劑。此外，本發(fā)明還包括使用異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑、或異常型朊病毒蛋白檢測(cè)劑 來(lái)檢測(cè)、結(jié)合、分離(包括純化的方法和濃縮的方法)、固定異常型朊病毒蛋白的方法；或使 用異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑、或異常型朊病毒蛋白檢測(cè)劑來(lái)抑制異常型朊病毒蛋白的自締 合的方法。因此，本發(fā)明還包括以下[10] [18]。[10] 一種異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法，其包括如下工序使[3] [6]中任一項(xiàng)所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑與試樣接觸的工序；從與試樣接觸的該異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑分離所結(jié)合的成分的工序；檢測(cè)所分離的成分中所含的異常型朊病毒蛋白的工序。[11]根據(jù)[10]所述的方法，其中，檢測(cè)所分離的成分中所含的異常型朊病毒蛋白 的工序是通過(guò)免疫學(xué)檢測(cè)法檢測(cè)所分離的成分中所含的異常型朊病毒蛋白的工序。[12]根據(jù)[11]所述的方法，其中，免疫學(xué)檢測(cè)法為蛋白質(zhì)印跡(western blot) 法、ELISA (酶聯(lián)免疫分析，Enzyme-LinkedImmunosorbnent Assay)法、或免疫沉淀法。[13] 一種異常型朊病毒蛋白的分離方法，其包括如下工序使[3] [6]中任一項(xiàng)所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑與試樣接觸的工序；從與試樣接觸的該異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑分離所結(jié)合的成分的工序。[14]根據(jù)[10] [13]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，乳鐵蛋白固定在載體上而成的 異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑為乳鐵蛋白固定化珠。[15]根據(jù)[10] [13]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑為使 用能夠磁性化的珠的乳鐵蛋白固定化珠。[16]根據(jù)[10] [15]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，試樣為在動(dòng)物組織中添加表面 活性劑并使其均勻化而獲得的液體試樣。[17]根據(jù)[16]所述的方法，其中，動(dòng)物組織為哺乳動(dòng)物的腦、脊髓、眼和/或小腸。[18]根據(jù)[10] [17]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，分離所結(jié)合的成分的工序通過(guò) 用含有乳鐵蛋白的溶液使其溶出來(lái)進(jìn)行。此外，本發(fā)明還包括以下[19] [22]。[19] 一種異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法，其包括如下工序使乳鐵蛋白與異常型朊病毒蛋白結(jié)合的工序；檢測(cè)與異常型朊病毒蛋白結(jié)合的乳鐵蛋白的工序。
[20] 一種異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法，其包括如下工序使具有標(biāo)記部位的乳鐵蛋白與異常型朊病毒蛋白結(jié)合的工序；檢測(cè)與異常型朊病毒蛋白結(jié)合的乳鐵蛋白的標(biāo)記部位的工序。[21] 一種通過(guò)使乳鐵蛋白 與異常型朊病毒蛋白結(jié)合來(lái)抑制異常型朊病毒蛋白的 自締合的方法。[22] 一種異常型朊病毒蛋白的自締合抑制劑，其包含乳鐵蛋白。此外，本發(fā)明還包括乳鐵蛋白、具有標(biāo)記部位的乳鐵蛋白、或被固定在載體上的乳 鐵蛋白的、用于與異常型朊病毒蛋白結(jié)合的用途(use)。此外，本發(fā)明還包括乳鐵蛋白、具有標(biāo)記部位的乳鐵蛋白、或被固定在載體上的乳 鐵蛋白的、用于檢測(cè)異常型朊病毒蛋白的用途(use)。此外，本發(fā)明還包括乳鐵蛋白、具有標(biāo)記部位的乳鐵蛋白、或被固定在載體上的乳 鐵蛋白的、用于分離異常型朊病毒蛋白的用途(use)。此外，本發(fā)明還包括乳鐵蛋白、具有標(biāo)記部位的乳鐵蛋白、或被固定在載體上的乳 鐵蛋白的、用于抑制異常型朊病毒蛋白的自締合的用途(use)。發(fā)明的效果如本發(fā)明首次公開(kāi)的那樣，乳鐵蛋白不與正常型朊病毒蛋白結(jié)合而僅與異常型朊 病毒蛋白特異性結(jié)合，因此根據(jù)基于該見(jiàn)解的本發(fā)明，能夠簡(jiǎn)便、迅速且以高靈敏度定量地 從正常型朊病毒蛋白中區(qū)分并檢測(cè)出異常型朊病毒蛋白而不需要利用蛋白酶K進(jìn)行酶處理。S卩，根據(jù)本發(fā)明，不需要為了從正常型朊病毒蛋白中區(qū)分異常型朊病毒蛋白而利 用蛋白酶K進(jìn)行酶處理，因而不存在必須準(zhǔn)備適于酶反應(yīng)的條件的繁雜性，而且不需要用 于進(jìn)行酶反應(yīng)的時(shí)間。其結(jié)果，根據(jù)本發(fā)明，在原理上不會(huì)出現(xiàn)在利用蛋白酶K進(jìn)行酶處理 時(shí)所產(chǎn)生的迅速性和簡(jiǎn)易性不充分、作為試劑需要比較昂貴的酶等缺點(diǎn)。因此，根據(jù)本發(fā)明，對(duì)于使用了來(lái)源于動(dòng)物的原材料的飲食品和醫(yī)藥品，能夠比以 往更簡(jiǎn)便、迅速且以高靈敏度定量地、以更低成本進(jìn)行異常型朊病毒蛋白(感染性朊病毒 蛋白)所致的污染的檢查。另外，能夠比以往更簡(jiǎn)便、迅速且以高靈敏度定量地、以更低成 本進(jìn)行人和動(dòng)物的朊病毒病的診斷。由此，能夠順應(yīng)對(duì)人和動(dòng)物的朊病毒病的感染防止和 早期診斷等社會(huì)要求。此外，根據(jù)本發(fā)明，能夠從正常型朊病毒蛋白中分離回收并獲得異常型朊病毒蛋 白，由此，能夠?qū)崿F(xiàn)異常型朊病毒蛋白的分離、濃縮和純化。因此，通過(guò)對(duì)其進(jìn)行組合，能夠 更有效地進(jìn)行上述異常型朊病毒蛋白(感染性朊病毒蛋白)所致的污染的檢查、以及人和 動(dòng)物的朊病毒病的診斷。


圖1為表示異常型朊病毒蛋白在乳鐵蛋白固定化珠上特異性結(jié)合的免疫印跡的結(jié)果。圖2為表示利用現(xiàn)有方法即蛋白酶K處理來(lái)識(shí)別異常型朊病毒蛋白的免疫印跡的結(jié)果。
具體實(shí)施例方式接下來(lái)，詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方式。然而，本發(fā)明不限于以下的優(yōu)選的實(shí)施方式，可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)自由變更。另外，本說(shuō)明書(shū)中，如果沒(méi)有特別說(shuō)明則百分率 表示的是質(zhì)量百分率。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法，可以作為包含以 下工序的方法來(lái)實(shí)施使乳鐵蛋白固定在載體上而成的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑與試樣接觸的工序；從與試樣接觸的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑分離所結(jié)合的成分的工序；檢測(cè)所分離的成分中所含的異常型朊病毒蛋白的工序。根據(jù)該方法，利用固定在異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑中的乳鐵蛋白，能夠特異性結(jié) 合(吸附)試樣中所含的異常型朊病毒蛋白，接下來(lái)，能夠?qū)⑴c固定在異常型朊病毒結(jié)合劑 中的乳鐵蛋白結(jié)合的異常型朊病毒蛋白分離、回收，然后通過(guò)檢測(cè)這樣分離的異常型朊病 毒蛋白，能夠?qū)惓Ｐ碗貌《镜鞍着c正常型朊病毒蛋白區(qū)分、檢測(cè)。檢測(cè)所分離的成分中所含的異常型朊病毒蛋白的工序優(yōu)選是通過(guò)免疫學(xué)檢測(cè)法 檢測(cè)所分離的成分中所含的異常型朊病毒蛋白的工序。作為優(yōu)選的免疫學(xué)檢測(cè)法，可列舉出蛋白質(zhì)印跡法、ELISA法、或免疫沉淀法。在檢測(cè)所分離的成分中所含的異常型朊病毒蛋白的工序中進(jìn)行的檢測(cè)，只要是包 括上述免疫學(xué)檢測(cè)法在內(nèi)的、能夠檢測(cè)異常型朊病毒蛋白的方法即可，即便是無(wú)法區(qū)分異 常型朊病毒蛋白和正常型朊病毒蛋白的方法，也當(dāng)然可以使用。這是因?yàn)?，在本發(fā)明中，通 過(guò)在其之前的工序中進(jìn)行與乳鐵蛋白的結(jié)合，從而已經(jīng)確保了對(duì)于異常型朊病毒蛋白的特 異性。因此，在上述免疫學(xué)檢測(cè)法中，即便是無(wú)法區(qū)分異常型朊病毒蛋白和正常型朊病毒蛋 白的抗體，也當(dāng)然可以使用。乳鐵蛋白(lactoferrin 以下，有時(shí)簡(jiǎn)稱(chēng)為L(zhǎng)F。)是指主要包含在母乳中的分子 量約SOkDa的鐵結(jié)合性糖蛋白，已知的是其是一種對(duì)大腸桿菌、念珠菌、梭菌、葡萄球菌等 有害微生物具有抗菌作用且具有免疫激活作用、抗腫瘤作用等各種作用的乳蛋白質(zhì)。由于 乳鐵蛋白為來(lái)源于乳的糖蛋白質(zhì)，因而安全性高，能夠長(zhǎng)期連續(xù)使用，且其自身也基本上無(wú) 臭無(wú)味，作為各種食品、醫(yī)藥品、飼料的添加物的通用性較高。然而，至今還不了解其與異常 型朊病毒蛋白的特異性結(jié)合能力。在本發(fā)明中使用的乳鐵蛋白，可以使用市售的乳鐵蛋白、或如下制得的乳鐵蛋 白以哺乳動(dòng)物(例如，人、牛、山羊、綿羊、馬等。)的初乳、過(guò)渡乳、成熟乳、末期乳、或這些 乳的處理物即脫脂乳、乳清等為原料，通過(guò)例如離子交換色譜法等常規(guī)方法，由前述原料分 離而得到的乳鐵蛋白。其中，優(yōu)選使用以工業(yè)規(guī)模制造的市售的乳鐵蛋白(例如，森永乳業(yè) 公司制)。此外，也能夠使用利用基因工程的方法通過(guò)微生物、動(dòng)物細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等生產(chǎn) 的乳鐵蛋白。來(lái)源于牛乳的乳清能作為乳制品制造的副產(chǎn)物而穩(wěn)定且大量地獲得，由于該 優(yōu)點(diǎn)，因而尤其優(yōu)選作為在本發(fā)明中使用的乳鐵蛋白的原料。其中，以下示出乳鐵蛋白的調(diào)制(從乳等原料中分離、純化乳鐵蛋白)方法的一 個(gè)例子。首先，將離子交換體(例如CM-S印harose FF(商品名，Amersham pharmacia公司 制))填充到柱中，通入鹽酸，并水洗，以平衡離子交換體。接著，將冷卻到4°C的pH6.9的脫 脂牛乳通入柱中，回收透過(guò)液，再次同樣地將液體通入柱中。接著，向柱中通入蒸餾水，通入食鹽水，得到吸附到離子交換體上的堿性蛋白質(zhì)的洗脫液。向該洗脫液中添加飽和度80% 的硫酸銨，使蛋白質(zhì)沉淀，離心分離而回收沉淀物。用飽和度80%的硫酸銨溶液洗滌所回 收的沉淀物，添加去離子水進(jìn)行溶解，使用超濾膜組件(例如SLP0053 (商品名，旭化成公司 制))將所得到的溶液脫鹽，冷凍干燥，得到粉末狀牛乳鐵蛋白。這樣，得到純度在95質(zhì)量％ 以上的牛乳鐵蛋白。另外，本說(shuō)明書(shū)中的乳鐵蛋白的純度為通過(guò)液相色譜法測(cè)定所得的值。乳鐵蛋白與許多蛋白質(zhì)同樣地，當(dāng)然其基因會(huì)根據(jù)種、屬、個(gè)體等的差異而存在1 個(gè)或多個(gè)位置上的1個(gè)或多個(gè)堿基的置換、缺失、插入、添加或倒位等突變，具有這種突變 的基因所編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸中有時(shí)也會(huì)產(chǎn)生突變。在能夠用于本發(fā)明的乳鐵蛋白中， 在不損害與異常型朊病毒蛋白的特異性結(jié)合性的范圍內(nèi)，還包括包含這種突變的乳鐵蛋 白。能夠用于調(diào)制將乳鐵蛋白固定在載體上而成的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑的乳鐵 蛋白的固定方法，只要是不損害與異常型朊病毒蛋白的特異性結(jié)合性的方法即可，可以使 用通常的固定方法。作為這種方法，例如，可列舉出與多肽的伯氨基直接形成共價(jià)鍵的方 法；與多肽的硫氫基(巰基)直接形成共價(jià)鍵的方法等。
在將乳鐵蛋白固定在載體上而成的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑中，固定有乳鐵蛋白 的載體只要是在所期望的條件下能夠作為固體層操作的載體即可，只要是蛋白質(zhì)被固定而 使用的一般的載體則都能夠使用。作為這種載體，例如，可列舉出在表面具有親水性或疏水 性的樹(shù)脂的載體，作為其形狀，例如，可列舉出顆粒狀(珠狀)、膜狀、纖維狀、中空纖維狀、 網(wǎng)狀等。作為優(yōu)選的載體，可列舉出形狀為珠狀(顆粒狀)的載體。珠(顆粒)的粒徑(直 徑)可以根據(jù)目的來(lái)選擇，例如，通常可以使用0. 5 200 μ m、優(yōu)選為1.0 10(^111、進(jìn)一 步優(yōu)選為1. 0 50 μ m、進(jìn)一步優(yōu)選為1. 0 20 μ m、進(jìn)一步優(yōu)選為1. 0 10 μ m、尤其優(yōu)選 為1. 0 5. 0 μ m的范圍的粒徑(直徑)。在優(yōu)選的方式中，作為載體，可以使用表面具有疏水性或親水性的樹(shù)脂的珠(顆 粒)，此時(shí)，乳鐵蛋白固定在載體上而成的異常型朊病毒蛋白結(jié)合活性載體為乳鐵蛋白固定 化珠。若使用這種載體的話(huà)，一方面能在液體中懸浮并使其分散，另一方面也容易根據(jù)操作 上的需要而使其沉降并回收。在進(jìn)一步優(yōu)選的方式中，作為載體，可以使用在表面具有疏水性或親水性的樹(shù)脂 的珠(顆粒)、且其內(nèi)部(中心部)包含能夠磁性化的材料的載體，此時(shí)，乳鐵蛋白固定在載 體上而成的異常型朊病毒蛋白結(jié)合活性載體為使用能夠磁性化的珠的乳鐵蛋白固定化珠。 若使用這種載體的話(huà)，一方面能在液體中懸浮并使其分散，另一方面也容易根據(jù)操作上的 需要而利用磁體使其沉降并回收。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)操作上的要求，在將乳鐵蛋白 固定化珠與試樣接觸的工序、分離所結(jié)合的成分的工序等工序中或者在該工序的前后進(jìn)行 這種操作。試樣可以使用疑存在異常型朊病毒蛋白(感染性朊病毒蛋白)的所有液體試樣， 但在存在異常型朊病毒蛋白的情況下，優(yōu)選被充分分散而成的試樣。在檢查對(duì)象為動(dòng)物組 織的情況下，優(yōu)選其被充分增溶。作為這樣增溶的試樣，例如可列舉出在動(dòng)物組織中添加表 面活性劑并均勻化而得到的液體試樣。這種液體試樣的PH優(yōu)選為中性附近，通?？梢?xún)?yōu) 選使用PH5. 5 7. 8、優(yōu)選為pH6. 0 7. 7、尤其優(yōu)選為pH6. 5 7. 6的范圍的pH，但不限 于此。作為用于調(diào)制這種液體試樣而使用的表面活性劑，只要是通常用于使動(dòng)物組織增溶而使用的表面活性劑則都能夠使用，但從增溶與保持朊病毒蛋白的高級(jí)結(jié)構(gòu)的觀點(diǎn)來(lái)看， 優(yōu)選使用非離子性表面活性劑，作為能夠優(yōu)選使用的表面活性劑，例如可列舉出tween20、 tritonX-100、NP-40，優(yōu)選為 tween20、tritonX-100、NP_40，尤其優(yōu)選為 tween20、NP_40。為 了確保乳鐵蛋白與異常型朊病毒蛋白的特異性結(jié)合性，優(yōu)選在后述那樣的條件下，將試樣 調(diào)制成能夠與異常型朊病毒蛋白結(jié)合活性載體接觸的液體試樣。為了確保乳鐵蛋白與異常型朊病毒蛋白的特異性結(jié)合性，異常型朊病毒蛋白結(jié)合 活性載體與試樣的接觸通常適合在PH5. 5 7. 8、優(yōu)選為pH6. 0 7. 7、尤其優(yōu)選為pH6. 5 7. 6的范圍內(nèi)，通常在3 30°C、優(yōu)選為3°C 20 V、尤其優(yōu)選為3 5°C的范圍的溫度下， 通常在5 300分鐘、優(yōu)選為10 180分鐘、尤其優(yōu)選為15 90分鐘的范圍的接觸時(shí)間 的條件下進(jìn)行，但不限于這些條件。 作為被增溶的動(dòng)物組織，可以使用疑存在異常型朊病毒蛋白(感染性朊病毒蛋 白)的所有動(dòng)物組織，但為了早期診斷，優(yōu)選已知異常型朊病毒蛋白的蓄積較多的、哺乳動(dòng) 物的腦、脊髓、眼和/或小腸。在從與試樣接觸的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑分離所結(jié)合的成分的工序中，可以用 在通常用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用的解離中的條件之中比較強(qiáng)的解離條件進(jìn)行解離， 并分離和溶出所結(jié)合的成分。作為這種條件，例如，可列舉出在中性附近的PH下、通過(guò)含有 表面活性劑的溶液在3 30°C的范圍的溫度下進(jìn)行的條件。另外，為了使乳鐵蛋白與異常 型朊病毒蛋白的特異性結(jié)合解離，可以通過(guò)用含有乳鐵蛋白的溶液使其溶出來(lái)進(jìn)行。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，在使乳鐵蛋白固定在載體上而成的異常型朊病毒蛋白結(jié)合 劑與試樣接觸的工序之后、且在從與試樣接觸的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑分離所結(jié)合的成 分的工序之前，可以設(shè)置洗滌與試樣接觸的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑的工序。當(dāng)存在主要 是進(jìn)行非特異性吸附的成分時(shí)，該洗滌是為了將其從與試樣接觸的異常型朊病毒蛋白結(jié)合 劑中除去而進(jìn)行的，可以根據(jù)以這種目的所進(jìn)行的常規(guī)方法來(lái)進(jìn)行，例如，可以使用用于調(diào) 制與異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑接觸的試樣而使用的、不含被增溶的動(dòng)物組織等的溶液來(lái)進(jìn) 行洗滌，但不限于此。此外，本發(fā)明還包括異常型朊病毒蛋白的分離方法，關(guān)于本發(fā)明的異常型朊病毒 蛋白的分離方法，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以作為包含以下工序的方法來(lái)實(shí)施使乳鐵蛋白固定在載體上而成的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑與動(dòng)物組織被增溶的 試樣接觸的工序；從實(shí)施了試樣接觸處理工序的異常型朊病毒蛋白結(jié)合活性載體分離所結(jié)合的成 分的工序。根據(jù)該方法，能夠利用被固定在異常型朊病毒結(jié)合劑中的乳鐵蛋白來(lái)特異性結(jié)合 (吸附)試樣中所含的異常型朊病毒蛋白，接下來(lái)，能夠?qū)⑴c固定在異常型朊病毒結(jié)合劑中 的乳鐵蛋白結(jié)合的異常型朊病毒蛋白分離、回收。由此，能夠分離、濃縮、和純化異常型朊病 毒蛋白。上述本發(fā)明的異常型朊病毒蛋白的分離方法的實(shí)施方式能夠如下實(shí)施在作為本 發(fā)明的異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法的優(yōu)選實(shí)施方式而說(shuō)明的工序中，除了檢測(cè)所分離的 成分中所含的異常型朊病毒蛋白的工序以外，以同樣的工序來(lái)實(shí)施。因此，在異常型朊病毒 蛋白的檢測(cè)方法的優(yōu)選實(shí)施方式中已經(jīng)記載過(guò)的內(nèi)容，在異常型朊病毒蛋白的分離方法的實(shí)施方式中能夠直接適用。本發(fā)明的包含乳鐵蛋白的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，除了能夠作為將乳鐵蛋白固 定在載體上而成的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑而在上述那樣的實(shí)施方式中使用以外，還能夠 在以下那樣的實(shí)施方式中使用。S卩，作為本發(fā)明的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑的優(yōu)選使用方式，可列舉出包含以下 工序的異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法使乳鐵蛋白與異常型朊病毒蛋白結(jié)合的工序；檢測(cè)與異常型朊病毒蛋白結(jié)合的乳鐵蛋白的工序。根據(jù)該異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法，能夠使用乳鐵蛋白作為異常型朊病毒蛋白 結(jié)合劑而不需要進(jìn)行特別的修飾。異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)能夠通過(guò)所結(jié)合的乳鐵蛋白的 檢測(cè)來(lái)進(jìn)行。作為乳鐵蛋白的檢測(cè)法，可以使用通常使用的所有檢測(cè)方法，例如，可以使用利用 了針對(duì)乳鐵蛋白的抗體的免疫學(xué)檢測(cè)法。另外，作為本發(fā)明的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑的優(yōu)選使用方式，可列舉出包含以 下工序的異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法使具有標(biāo)記部位的乳鐵蛋白與異常型朊病毒蛋白結(jié)合的工序；檢測(cè)與異常型朊病毒蛋白結(jié)合的乳鐵蛋白的標(biāo)記部位的工序。根據(jù)該異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法，使乳鐵蛋白預(yù)先帶有標(biāo)記部位，并使用具 有該標(biāo)記部位的乳鐵蛋白作為異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑。異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)能夠通 過(guò)乳鐵蛋白上帶有的標(biāo)記部位的檢測(cè)來(lái)進(jìn)行。作為標(biāo)記部位，只要是通常對(duì)于生物高分子使用的標(biāo)記部位則都能夠使用。作 為這種標(biāo)記部位，例如，可列舉出熒光標(biāo)記、放射線(xiàn)標(biāo)記、酶標(biāo)記。作為熒光標(biāo)記，例如，可 列舉出AlexaFluor (注冊(cè)商標(biāo))(Becton, Dickinson and Company制)系列的染料、和 CyeDye (注冊(cè)商標(biāo))(Becton，Dickinson and Company制)系列的染料，例如，可列舉出 Alexa Fluor (注冊(cè)商標(biāo))488 和 AlexaFluor (注冊(cè)商標(biāo))647、或者 Cy3、Cy5. 5 和 Cy7 作為 優(yōu)選的例子。作為放射線(xiàn)標(biāo)記，例如，可列舉出使用了 14C和35S的標(biāo)記。作為酶標(biāo)記，例 如，可列舉出使用了辣根過(guò)氧化物酶(HRP,HorseRadish Peroxydase)或堿性磷酸酶(ALP， Alkaline Phosphatase)的標(biāo)記。本發(fā)明還包括使用異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑來(lái)抑制異常型朊病毒蛋白的自締合 的方法、和異常型朊病毒蛋白的自締合抑制劑。目前相信異常型朊病毒蛋白的多個(gè)分子會(huì) 自締合而形成多聚體、以及也許是因?yàn)檫@個(gè)原因而提高了朊病毒病的病原性，但本發(fā)明的 異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑能夠與異常型朊病毒蛋白特異性結(jié)合，從而抑制該自締合。另一 方面，本發(fā)明的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑由于不與正常型朊病毒蛋白結(jié)合，因而不必?fù)?dān)心 其對(duì)正常型朊病毒蛋白所具有的未知的生物體功能造成不良影響。實(shí)施例以下舉出實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。但本發(fā)明不限于以下的實(shí)施 例。[實(shí)施例1][利用乳鐵蛋白固定化珠從感染腦檢測(cè)異常型朊病毒蛋白]使用異常型朊病毒蛋白感染后的小鼠腦，如下所述利用乳鐵蛋白固定化珠進(jìn)行異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)。
(乳鐵蛋白固定化珠的制作)用ImL 的磷酸鹽緩沖液(PBS)對(duì) ImL 的 Dynabeads M_280Tosylactivated 進(jìn)行 2次洗滌后，向其中加入將Img乳鐵蛋白溶解到ImL 0. IM硼酸緩沖液中而得到的溶液，在 37°C下顛倒混合24小時(shí)。除去上清，用ImL的PBS洗滌Dynabeads 2次，向Dynabeads中 加入含有0. 1 %乳鐵蛋白的0. 2M Tris鹽酸緩沖液(pH8. 5) ImL,在37°C下顛倒混合4小時(shí)。接下來(lái)，除去上清，用ImL的含有0. 乳鐵蛋白的PBS洗滌Dynabeads 1次，接著 用含有0. 1 % Tween 20的PBS洗滌1次。接下來(lái)，除去上清，用ImL的含有0. 1 %乳鐵蛋白的PBS洗滌Dynabeads 1次，除 去上清，用ImL的含有0. 乳鐵蛋白的PBS保存如此獲得的乳鐵蛋白結(jié)合DynabeadM以 下，也稱(chēng)為乳鐵蛋白結(jié)合珠、或乳鐵蛋白固定化珠)。(將腦組織增溶的試樣(腦乳劑)的調(diào)制)從感染異常型朊病毒蛋白的小鼠中取出腦。將異常型朊病毒蛋白感染的小鼠腦 (以下，也稱(chēng)為感染腦)放入均質(zhì)器(BioMasher)中，以10，000 X g離心分離2分鐘，向回收 的顆粒(pellet)中加入NP-40 RIPA制成10% (w/v)腦乳劑。將其在4°C下孵育15分鐘 后，攪拌混合，以10，OOOXg離心分離2分鐘，回收上清。向回收的上清中加入NP-40 RIPA， 調(diào)制2% (w/v)腦乳劑(將腦組織增溶的試樣)。這樣，獲得了感染腦的腦乳劑(以下也稱(chēng) 為感染腦乳劑)。(利用乳鐵蛋白固定化珠分離異常型朊病毒蛋白)向腦乳劑500 μ 1中加入乳鐵蛋白結(jié)合Dynabeads 20 μ 1，在4°C下顛倒混合1小 時(shí)。之后，用ImL的NP-40 RIPA將珠洗滌10分鐘，洗滌3次，進(jìn)而用ImL的NP-40 RIPA通 宵洗滌?；厥障礈旌蟮娜殍F蛋白結(jié)合Dynabeads，加入20 μ 1中性緩沖液(NuPAGE LDS樣品 緩沖液(4Χ)，Invitrogen公司制)，在95°C下加熱10分鐘制成試驗(yàn)試樣。另外，由于珠為磁性體的珠，因而珠的回收在操作中使用適當(dāng)?shù)拇朋w來(lái)進(jìn)行。(利用免疫印跡法的檢測(cè))對(duì)所調(diào)制的試驗(yàn)試樣通過(guò)免疫印跡法進(jìn)行朊病毒蛋白質(zhì)的檢測(cè)。S卩，對(duì)試驗(yàn)試樣使用NuPAGE凝膠進(jìn)行電泳(40mA恒定電流，70分鐘)，接著，使用 槽式轉(zhuǎn)印(Tank blotter)裝置向PVDF膜轉(zhuǎn)印(220mA恒定電流，60分鐘)凝膠中的蛋白質(zhì)。轉(zhuǎn)印后的PVDF膜使用Block Ace(大日本制藥)在4°C下封閉30分鐘，接著，將以 包含0. Tween20的Block Ace稀釋至5，000倍的含有HRP結(jié)合抗朊病毒蛋白單克隆抗 體(T2-HRP)的溶液添加到PVDF膜上，在4°C下孵育1小時(shí)。與抗體反應(yīng)的PVDF膜用含有0. 1 % Tween20的PBS洗滌10分鐘，洗滌3次，用化 學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑展開(kāi)膜，使用圖像分析裝置檢測(cè)化學(xué)發(fā)光。[比較例1][利用乳鐵蛋白固定化珠從非感染腦檢測(cè)異常型朊病毒蛋白]使用正常的小鼠腦(以下，也稱(chēng)為正常腦或非感染腦)，如下所述利用乳鐵蛋白固 定化珠進(jìn)行異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)。
(乳鐵蛋白固定化珠的制作)與實(shí)施例1同樣進(jìn)行。
(將腦組織增溶的試樣(腦乳劑)的調(diào)制)代替感染異常型朊病毒蛋白的小鼠，使用從正常的小鼠(非感染小鼠)中取出的 腦，除此之外與實(shí)施例1同樣進(jìn)行，獲得了正常腦的腦乳劑(以下也稱(chēng)為正常腦乳劑、或非 感染腦乳劑)。(利用乳鐵蛋白固定化珠分離異常型朊病毒蛋白)代替感染腦乳劑，使用非感染腦乳劑，除此之外與實(shí)施例1同樣進(jìn)行，得到試驗(yàn)試樣。(利用免疫印跡法的檢測(cè))代替來(lái)源于感染腦乳劑的試驗(yàn)試樣，使用來(lái)源于非感染腦乳劑的試驗(yàn)試樣，除此 之外與實(shí)施例1同樣進(jìn)行。(結(jié)果)圖1為表示實(shí)施例1和比較例1中得到的免疫印跡的結(jié)果的圖。所有泳道均未實(shí) 施蛋白酶K處理(PK-)。泳道1、2和3為對(duì)感染腦乳劑利用乳鐵蛋白固定化珠進(jìn)行了異常型朊病毒蛋白的 分離而得的試驗(yàn)試樣(實(shí)施例1)。將泳道1的試樣稀釋10倍而進(jìn)行免疫印跡的泳道為泳 道2，泳道1的100倍稀釋為泳道3。泳道4為對(duì)非感染腦乳劑利用乳鐵蛋白固定化珠進(jìn)行 了異常型朊病毒蛋白的分離而得的試驗(yàn)試樣(比較例1)。在泳道1、2和3中，呈濃度依賴(lài)性地觀察到朊病毒蛋白的條帶，在泳道1的100倍 稀釋即泳道3中也明確地觀察到朊病毒蛋白的條帶。根據(jù)試樣的來(lái)源，這表示異常型朊病 毒蛋白。即，通過(guò)與乳鐵蛋白固定化珠的結(jié)合，來(lái)源于感染腦的異常型朊病毒蛋白被分離并 被檢測(cè)到。另一方面，在泳道4中，雖然在操作上為與泳道1同等程度的濃度的試樣，但沒(méi)有 觀察到朊病毒蛋白的條帶。即，通過(guò)與乳鐵蛋白固定化珠的結(jié)合，來(lái)源于非感染腦的正常型 朊病毒蛋白沒(méi)有被回收、且沒(méi)有被檢測(cè)到。由以上內(nèi)容可知，來(lái)源于感染腦的異常型朊病毒蛋白與乳鐵蛋白固定化珠特異性 結(jié)合，來(lái)源于非感染腦的正常型朊病毒蛋白不與乳鐵蛋白固定化珠結(jié)合。此外，使用乳鐵蛋 白固定化珠，能夠從正常型朊病毒蛋白分離回收并獲得異常型朊病毒蛋白，由此，可知能夠 檢測(cè)異常型朊病毒蛋白。[比較例2][使用蛋白酶K來(lái)檢測(cè)異常型朊病毒蛋白]根據(jù)使用蛋白酶K而進(jìn)行的現(xiàn)有方法，如下所述進(jìn)行從正常型朊病毒蛋白區(qū)分并 檢測(cè)異常型朊病毒蛋白的實(shí)驗(yàn)(比較例2)。(腦乳劑的調(diào)制)準(zhǔn)備感染了異常型朊病毒蛋白的小鼠的腦(以下也稱(chēng)為感染腦)和非感染小鼠 (正常小鼠)的腦(以下也稱(chēng)為非感染腦或正常腦)，將這些小鼠腦分別放入均質(zhì)器中，以 10，000Xg離心分離2分鐘，向回收的顆粒中加入NP-40 RIPA制成10% (w/v)腦乳劑。將 其在4°C下孵育15分鐘后，攪拌混合，以10，OOOXg離心分離2分鐘，回收上清。向回收的上清中加入NP-40 RIPA，調(diào)制0.5% (w/v)腦乳劑，獲得感染腦乳劑和非感染腦乳劑。(利用蛋白酶K的酶分解處理)向這些腦乳劑500 μ 1中添加蛋白酶K，使最終濃度為20yg/ml，在37°C下孵育30 分鐘。反應(yīng)后，加入蛋白酶K抑制劑(Pefablock) 5 μ 1，進(jìn)而加入丁醇-甲醇溶液250 μ 1， 攪拌混合后，以20，OOOXg離心分離10分鐘。離心分離后，向顆粒中加入50 μ 1中性緩沖 液(NuPAGE LDS樣品緩沖液(4Χ)，Invitrogen公司制)，在95°C下加熱10分鐘，分別獲得 來(lái)源于感染腦乳劑的試樣和來(lái)源于非感染腦乳劑的試樣。(利用免疫印跡法的檢測(cè))對(duì)于如上所述獲得的、利用蛋白酶K進(jìn)行了酶分解處理的感染腦乳劑(蛋白酶K 處理感染腦乳劑)、利用蛋白酶K進(jìn)行了酶分解處理的非感染腦乳劑(蛋白酶K處理非感染 腦乳劑)、以及沒(méi)有利用蛋白酶K進(jìn)行酶分解處理的感染腦乳劑(原本的感染腦乳劑)、沒(méi) 有利用蛋白酶K進(jìn)行酶分解處理的非感染腦乳劑(原本的非感染腦乳劑)這4種試樣，通 過(guò)免疫印跡法進(jìn)行朊病毒蛋白質(zhì)的檢測(cè)。S卩，對(duì)試樣使用NuPAGE凝膠進(jìn)行電泳(40mA恒定電流，70分鐘)，接著，使用槽式 轉(zhuǎn)印裝置向PVDF膜轉(zhuǎn)印(220mA恒定電流，60分鐘)凝膠中的蛋白質(zhì)。轉(zhuǎn)印后的PVDF膜使用Block Ace(大日本制藥)在4°C下封閉30分鐘，接著，將以 包含0. Tween20的Block Ace稀釋至5，000倍的含有HRP結(jié)合抗朊病毒蛋白單克隆抗 體(T2-HRP)的溶液添加到PVDF膜上，在4°C下孵育1小時(shí)。與抗體反應(yīng)的PVDF膜用含有0. 1 % Tween20的PBS洗滌10分鐘，洗滌3次，用化 學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑展開(kāi)膜，使用圖像分析裝置檢測(cè)化學(xué)發(fā)光。(結(jié)果)圖2為表示比較例2中得到的免疫印跡的結(jié)果的圖。泳道1和2為沒(méi)有利用蛋白 酶K進(jìn)行酶分解處理的泳道(PK-)，泳道3和4為利用蛋白酶K進(jìn)行了酶分解處理的(PK+) 泳道。泳道1為以沒(méi)有利用蛋白酶K進(jìn)行酶分解處理的感染腦乳劑(原本的感染腦乳 齊U)為試樣的泳道。泳道2為以沒(méi)有利用蛋白酶K進(jìn)行酶分解處理的非感染腦乳劑(原本 的非感染腦乳劑)為試樣的泳道。泳道3為以利用蛋白酶K進(jìn)行了酶分解處理的感染腦乳 劑(蛋白酶K處理感染腦乳劑)為試樣的泳道。泳道4為以利用蛋白酶K進(jìn)行了酶分解處 理的非感染腦乳劑(蛋白酶K處理非感染腦乳劑)為試樣的泳道。在泳道1和2中顯示，通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)到了朊病毒蛋白質(zhì)的條帶，在蛋白酶K 未處理的狀態(tài)下，無(wú)論是異常型朊病毒蛋白(泳道1)，還是正常型朊病毒蛋白(泳道2)，均 被檢測(cè)到。與此相對(duì)，在泳道3和4中，通過(guò)免疫印跡法僅在異常型朊病毒蛋白(泳道3) 中檢測(cè)到了條帶，在正常型朊病毒蛋白(泳道4)中沒(méi)有檢測(cè)到條帶，由此顯示，通過(guò)蛋白酶 K處理，能夠區(qū)分異常型朊病毒蛋白與正常型朊病毒蛋白，僅檢測(cè)異常型朊病毒蛋白。將以上所示的比較例2的結(jié)果(圖2)與實(shí)施例1和比較例1中得到的結(jié)果(圖 1)進(jìn)行比較，獲得了以下見(jiàn)解。即，可知利用乳鐵蛋白固定化珠的異常型朊病毒蛋白與正常 型朊病毒蛋白的辨別，具有與使用蛋白酶K的現(xiàn)有方法相比更高的準(zhǔn)確性和可靠性。產(chǎn)業(yè)上的可 利用性根據(jù)本發(fā)明，對(duì)于使用了來(lái)源于動(dòng)物的原材料的飲食品和醫(yī)藥品，能夠比以往更簡(jiǎn)便、迅速且以高靈敏度定量地 、以更低成本進(jìn)行異常型朊病毒蛋白(感染性朊病毒蛋白) 所致的污染的檢查。另外，能夠比以往更簡(jiǎn)便、迅速且以高靈敏度定量地、以更低成本進(jìn)行 人和動(dòng)物的朊病毒病的診斷。由此，能夠順應(yīng)對(duì)人和動(dòng)物的朊病毒病的感染防止和早期診 斷等社會(huì)要求。這樣，本發(fā)明具有產(chǎn)業(yè)上的可利用性。
權(quán)利要求
一種異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其包含乳鐵蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其中，乳鐵蛋白被固定在載體上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑，其為異常型朊病毒 蛋白檢測(cè)劑。
4.一種異常型朊病毒蛋白的檢測(cè)方法，其包括如下工序使權(quán)利要求2所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑與試樣接觸的工序； 從與試樣接觸的該異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑分離所結(jié)合的成分的工序； 檢測(cè)所分離的成分中所含的異常型朊病毒蛋白的工序。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，檢測(cè)所分離的成分中所含的異常型朊病毒蛋白 的工序是通過(guò)免疫學(xué)檢測(cè)法檢測(cè)所分離的成分中所含的異常型朊病毒蛋白的工序。
6.一種異常型朊病毒蛋白的分離方法，其包括如下工序使權(quán)利要求2所述的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑與試樣接觸的工序； 從與試樣接觸的該異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑分離所結(jié)合的成分的工序。
全文摘要
本發(fā)明提供一種能夠簡(jiǎn)便、迅速且以高靈敏度定量地從正常型朊病毒蛋白中區(qū)分并檢測(cè)出異常型朊病毒蛋白而不需要利用蛋白酶K進(jìn)行酶處理的方法；以及在該方法中使用的試劑。本發(fā)明提供一種包含乳鐵蛋白的異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑；以及使用異常型朊病毒蛋白結(jié)合劑來(lái)檢測(cè)異常型朊病毒蛋白的方法。
文檔編號(hào)G01N33/53GK101868726SQ20088011662
公開(kāi)日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2008年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月20日
發(fā)明者久原徹哉, 巖丸祥史 申請(qǐng)人:森永乳業(yè)株式會(huì)社