專利名稱：用于在免疫或酶法測定中定量被分析物的系統(tǒng)和方法
用于在免疫或酶法測定中定量被分析物的系統(tǒng)和方法發(fā)明人埃曼努埃爾·姆波克(Emmanuel Mpock)和威爾瑪·曼甘(WilmaMangan)。 發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于定性或定量測定流體樣品中一種或多種被分析物的存在的測試 試劑盒和裝置。
背景技術(shù)：
典型情況下，免疫測定方法導(dǎo)致信號標(biāo)記物在結(jié)合在特異性結(jié)合對成員的復(fù)合物 中的信號標(biāo)記物與未結(jié)合的信號標(biāo)記物之間分配。結(jié)合與未結(jié)合信號標(biāo)記物之間的差異， 可能是結(jié)合與未結(jié)合信號標(biāo)記物的物理分離或可檢測信號在結(jié)合與未結(jié)合信號標(biāo)記物之 間調(diào)節(jié)的結(jié)果。通過觀察在一個或多個捕獲區(qū)積累的標(biāo)記物的圖式，并將圖式與樣品中被 分析物的量相關(guān)聯(lián)，來進(jìn)行定量。測定的結(jié)果通過電磁手段、特別是光投射穿過檢驗條來確 定。類似地，在典型的夾心測定形式中，將樣品與用于被分析物的標(biāo)記的特異性結(jié)合 對成員混合，并允許其橫越側(cè)向流基質(zhì)，通過位于基質(zhì)上的一個或多個捕獲區(qū)。如果樣品中 存在被分析物，標(biāo)記的特異性結(jié)合對成員將與被分析物結(jié)合，得到的被分析物-標(biāo)記的復(fù) 合物將被運(yùn)送到并通過捕獲區(qū)。被分析物與標(biāo)記的特異性結(jié)合對成員之間復(fù)合物形成的程 度，與樣品中存在的被分析物的量直接成比例。在每個捕獲區(qū)上固定化有能夠結(jié)合被分析 物-標(biāo)記復(fù)合物的第二特異性結(jié)合對成員。該第二特異性結(jié)合對成員不能結(jié)合標(biāo)記的特異 性結(jié)合對成員，除非后者與被分析物結(jié)合。因此，積累在捕獲區(qū)上的標(biāo)記的特異性結(jié)合對成 員的量，與樣品中存在的被分析物的量直接成比例。典型的側(cè)向流裝置是硝酸纖維素條。將樣品施加到施用區(qū)，所述樣品從那里通過 毛細(xì)作用流過含有對被分析物特異的可視標(biāo)記的抗體的區(qū)域。游離和結(jié)合的標(biāo)記物繼續(xù)遷 移到捕獲區(qū)，固定化的特異性針對被分析物的抗體在捕獲區(qū)與被分析物_標(biāo)記物復(fù)合物相 結(jié)合。游離的標(biāo)記物(未結(jié)合抗體)繼續(xù)遷移，在捕獲區(qū)中留下被分析物特異性信號。被 分析物-標(biāo)記物復(fù)合物的捕獲由固定化的試劑介導(dǎo)，該試劑典型為特異性針對被分析物的 抗體。例如，EP653625公開了側(cè)向流測定檢驗條，在檢驗條上特定標(biāo)記物的結(jié)合程度使 用測定讀取器光學(xué)測定。美國專利No. 7，239，394公開了用于檢測標(biāo)記的被分析物/試劑 復(fù)合物與固定化在側(cè)向流測定棒檢測區(qū)中的特異性結(jié)合試劑的結(jié)合的讀取器，在側(cè)向流測 定棒上讀取器檢測積累在檢測區(qū)中的標(biāo)記物的信號。國際專利申請公開W000/20866公開了用于測定被分析物的裝置，包含標(biāo)記物能 夠在其中與被分析物結(jié)合的標(biāo)記區(qū)，與捕獲區(qū)連通，其中捕獲區(qū)的孔徑使得沒有與被分析 物結(jié)合的標(biāo)記物能夠遷移過去，而與被分析物結(jié)合的標(biāo)記物不能。因此，在從標(biāo)記區(qū)向捕獲 區(qū)的遷移過程中，未結(jié)合的標(biāo)記物能夠進(jìn)入并通過捕獲區(qū)，而結(jié)合的標(biāo)記物將被捕獲在標(biāo) 記區(qū)與捕獲區(qū)的接合處。因此，該公開物公開了使用減小的孔徑用于條上的固定化而不是使用常規(guī)的免疫捕獲技術(shù)。這些方法要求將被檢測的標(biāo)記物固定化在檢測區(qū)中。這并不總是方便的，并增加 了測定系統(tǒng)的復(fù)雜性。因此，對于不使用固定化區(qū)域來檢測標(biāo)記的復(fù)合物，存在著需求。發(fā)明簡述本發(fā)明提供了不需捕獲區(qū)進(jìn)行測定的裝置和方法。本發(fā)明的方法和裝置比傳統(tǒng)方 法更加耐用和可靠；減少了測定時間；增加了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性；為使用微量被分析物濃度進(jìn) 行定量測定提供了更好的控制；并改進(jìn)了可制造性，具有最小的批次間差異。本發(fā)明的方法和裝置提供了被分析物與用于被分析物的標(biāo)記的特異性結(jié)合對成 員的混合，以提供均質(zhì)的溶液。可以使由此獲得的均質(zhì)溶液以恒定的流速流過讀取點(diǎn)。結(jié) 合的被分析物/標(biāo)記物復(fù)合物可以使用比色計、電學(xué)手段或本技術(shù)領(lǐng)域已知的其他方法來 檢測。在參考了下面的詳細(xì)描述之后，本發(fā)明的這些以及其他方面將變得明顯。此外，在 本文中提出了多個參考文獻(xiàn)，它們更詳細(xì)地描述了某些步驟或組成，因此以其全文引為參考。


圖1顯示了本發(fā)明的一次性條的透視圖。圖2顯示了不使用捕獲區(qū)的微粒的檢測。圖2A顯示了使用Avie Alc計量器X7 作為檢測器測量的作為時間函數(shù)的信號的圖。圖2B顯示了使用Avie Alc計量器X8作為 檢測器測量的作為時間函數(shù)的信號的圖。圖2C顯示了使用Avie Alc計量器X9作為檢測 器測量的作為時間函數(shù)的信號的圖。詳細(xì)描述本文引用的所有出版物、專利和專利申請，無論是見上文還是見下文，在此都以其 全文引為參考。除非另有說明，否則在本申請包括說明書和權(quán)利要求書中使用的下列術(shù)語，都具 有下面給出的定義。必須指出，說明書和隨附的權(quán)利要求書中使用的單數(shù)形式包括了復(fù)數(shù) 指稱物，除非上下文明確表明不是這樣。在本文中使用的術(shù)語“對象”包含哺乳動物和非哺乳動物。哺乳動物的例子包括 但不限于哺乳綱的任何成員人類，非人類靈長動物例如黑猩猩，以及其他猿和猴物種；農(nóng) 場動物例如牛、馬、綿羊、山羊、豬；家養(yǎng)動物例如兔、狗和貓；實(shí)驗室動物包括嚙齒動物，例 如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳動物的例子包括但不限于禽類、魚等。該術(shù)語不指稱具體的 年齡或性別。本文中使用的術(shù)語“抗體”包括但不限于基本上由免疫球蛋白基因或多個免疫球 蛋白基因或其片段編碼的、特異性結(jié)合和識別被分析物(抗原)的多肽。“抗體”也包括但 不限于基本上由免疫球蛋白基因或多個免疫球蛋白基因或其片段編碼的、特異性結(jié)合和識 別由宿主對暴露于毛滴蟲抗原做出響應(yīng)所產(chǎn)生的抗體的抗原特異性結(jié)合區(qū)(獨(dú)特型)的多 肽。例子包括多克隆、單克隆、嵌合、人源化和單鏈抗體等。免疫球蛋白片段包括Fab片段 和由表達(dá)文庫、包括噬菌體展示所產(chǎn)生的片段。對于抗體的結(jié)構(gòu)和術(shù)語，參見例如Paul的 《基礎(chǔ)免疫學(xué)》(第三版)(Fundamental Immunology, 3rdEd.), 1993, Raven Press, NewYork0
術(shù)語“與…特異性結(jié)合”或“與…發(fā)生特異性免疫反應(yīng)”是指在存在蛋白和其他生 物物質(zhì)的異源群的情況下，對靶被分析物的存在具有鑒別性的結(jié)合反應(yīng)。因此，在指定測定 條件下，特異性結(jié)合部分優(yōu)選與特定靶被分析物結(jié)合，并且不以顯著的量與測試樣品中存 在的其他成分結(jié)合。在這樣的條件下與靶被分析物的特異性結(jié)合，可能需要選擇對特定靶 被分析物具有特異性的結(jié)合部分?？梢允褂枚喾N免疫測定形式來選擇與特定抗原發(fā)生特異 性免疫反應(yīng)的抗體。例如，固相ELISA免疫測定方法通常被用于選擇與被分析物發(fā)生特異 性免疫反應(yīng)的單克隆抗體。對于可用于確定特異性免疫反應(yīng)性的免疫測定形式和條件的描 述，參見 Harlow 和 Lane (1988)的《抗體實(shí)驗指南》(Antibodies，A Laboratory Manual), Cold Spring Harbor Publications, New York。典型情況下，特異性或選擇性反應(yīng)將提供 至少兩倍于背景、更典型比背景高10到100倍以上的信噪比。本文中使用的術(shù)語“標(biāo)記物”和“可檢測標(biāo)記物”是指能夠檢測的分子，包括但不限 于放射性同位素、熒光劑、化學(xué)發(fā)光劑、發(fā)色團(tuán)、酶、酶的底物、酶的輔助因子、酶的抑制劑、 發(fā)色團(tuán)、染料、金屬離子、金屬溶膠、配體(例如生物素、親和素、鏈親和素或半抗原)等。本文中使用的“固相支持物”是指固相表面例如塑料板、磁珠、乳膠珠、微滴定板的 孔、玻璃板、尼龍、瓊脂糖、丙烯酰胺等。在指稱兩種分子或一種分子與分子復(fù)合物的結(jié)合時，“特異的”是指一種對另一種 的特異性識別以及穩(wěn)定復(fù)合物的形成，與此相比對其他分子的識別明顯較低，并缺少與這 些其他分子的穩(wěn)定復(fù)合物的形成。特異性結(jié)合的例子是抗體_抗原相互作用、酶-底物相 互作用、多核苷酸雜交和/或雙鏈體形成、細(xì)胞受體_配體相互作用，等等。II.概述本發(fā)明提供了用于測定被分析物的方法和裝置。方法包括含有用于被分析物的標(biāo) 記物的容器。將被分析物與標(biāo)記物混合以提供均質(zhì)溶液?？梢匀芜x地使均質(zhì)溶液流過濾器， 在濾器中不想要的物質(zhì)可以被部分或完全除去。均質(zhì)溶液或濾液可以受控的流速計量流過 讀取區(qū)，并檢測顆粒。本發(fā)明的方法和裝置不需要使用捕獲區(qū)。因此，本發(fā)明的方法和裝置具有下述優(yōu) 點(diǎn)比傳統(tǒng)方法更加耐用和可靠；減少了測定時間；增加了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性；為使用微量被分 析物濃度進(jìn)行定量測定提供了更好的控制；以及改進(jìn)了可制造性，具有最小的批次間差異。 本發(fā)明的方法可以與使用離子或共價柱的液相色譜一起使用，可以與磁珠一起使用，可以 與根據(jù)孔徑排除顆粒物的膜一起使用，或與跨過濾器的電極化場等一起使用。III.微機(jī)械系統(tǒng)使用微機(jī)械系統(tǒng)對本發(fā)明的方法進(jìn)行了說明，盡管在本發(fā)明的實(shí)施中可以使用任 何其他用于檢測被分析物的分析方法。例如，在本發(fā)明的方法的實(shí)施中，可以使用在共同 待決和共同擁有的題為“用于執(zhí)行測定的微機(jī)械方法和系統(tǒng)”(Micro Mechanical Methods and Systemsfor Performing Assays)的美國專利申請 No. 10/976，651 中公開的微機(jī)械 系統(tǒng)，或在共同待決或共同擁有的題為“用于測量血液凝集的方法和裝置”(Methods And Apparatus For Measuring Blood Coagulation)的美國臨時專禾Ij 申請 No. 60/945，290 中 公開的微機(jī)械系統(tǒng)。示例性的微機(jī)械系統(tǒng)顯示在圖1中。微機(jī)械系統(tǒng)可以通過將兩個或多 個固相支持物連接在一起而制成，其中在至少一個支持物中存在溝槽。固相支持物可以是 矩形、圓形、橢圓形或任何形狀。支持物可以由合適的材料制成，所述材料根據(jù)其性質(zhì)進(jìn)行
5選擇，例如良好的導(dǎo)熱性、對光透射的澄明度、易于焊接的機(jī)械性質(zhì)、允許均勻涂層和試劑 穩(wěn)定的表面性質(zhì)，以及防止干擾測定的對液體介質(zhì)的中性。為此目的，適合的塑料包括具 有高自由表面能和低吸水率的塑料，包括PETG、聚酯(Mylar )、聚碳酸酯(Lexan )、聚 氯乙烯、聚苯乙烯、SAN、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)、特別是由Borg Warner以商品名 Cycolac供應(yīng)的ABS，等等。當(dāng)固相支持物是疏水塑料時，它可以用本技術(shù)領(lǐng)域已知的方法 進(jìn)行處理以賦予表面親水性，例如通過等離子體蝕刻或通過電暈處理?？商孢x地和等價地， 在本發(fā)明的實(shí)施中可以使用可商購的模制固相支持物。出于說明的目的，參考通過將兩個固相支持物相連而形成的微機(jī)械系統(tǒng)10，對本 發(fā)明的該實(shí)施方案進(jìn)行描述。至少一個固相支持物具有用作樣品室20的溝槽或空腔，反應(yīng) 室30和毛細(xì)管路40和50。溝槽可以具有任何幾何形狀，優(yōu)選為圓形或矩形。溝槽的維度 使其具有足夠的體積容納樣品并允許反應(yīng)發(fā)生。因此，取決于支持材料的長度和寬度，圓形 溝槽可以具有大約0.01mm到大約IOOmm之間的直徑，取決于支持材料的厚度，可以具有大 約0. OOlmm到大約4mm的高度。溝槽的直徑和高度可以由本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員容易地確 定。在本發(fā)明的一個方面，一個或多個孔可以安置在一個或多個支持物上，在那里允許孔通 向樣品室20所在的位置，樣品可以放置在該樣品室20中。在將兩個部件連接之前，可以將 可移動元件60放置在所需反應(yīng)室30中?？梢苿釉?0可以使用不銹鋼或不銹鋼與任何其他所需材料的組合來制造，以 便它能夠被外部磁動裝置吸引并驅(qū)動。材料可以是任何形式的可磁化合金，帶有不銹覆蓋 層以防止腐蝕，或進(jìn)行了特殊涂覆用于結(jié)合特定分子?？梢苿釉暮穸热Q于反應(yīng)室的 高度。它必須足夠小，以便與反應(yīng)室匹配并自由移動。對于高度為0.010英寸的反應(yīng)室空 腔來說，可移動元件的厚度可以在大約0. 007到大約0. 008英寸之間。在本發(fā)明的一個方面，微機(jī)械系統(tǒng)10可以放置在加熱器組件頂部，加熱器組件可 以容納包埋在其中或緊鄰的傳感器(發(fā)射器或檢測器)，但傳感器的排列使得信號通過檢 測區(qū)70。應(yīng)該理解，取決于使用的檢測機(jī)制，反射束排列、檢測器和發(fā)射器可以在檢驗條的 同一側(cè)。檢測機(jī)制不限于光學(xué)檢測方法，而是也可以使用其他方法例如電、放射性和其他方 法。供本發(fā)明的裝置和相關(guān)方法使用的用于自動檢測的檢測系統(tǒng)的例子，包含激發(fā) 源、單色器(或任何能夠?qū)饨M分進(jìn)行光譜解析的裝置，或一組窄帶濾光器)以及檢測器陣 列。激發(fā)源可以包含紅外、藍(lán)光或紫外波長，激發(fā)波長可以短于待檢測的發(fā)射波長。檢測系 統(tǒng)可以是寬帶UV光源，例如前方帶有濾光器的氘燈；白色光源例如氙燈或氘燈在通過單 色器以提取出所需波長后的輸出；或多種連續(xù)波(CW)氣體激光的任一種，包括但不限于任 何氬離子激光器譜線(457、488、514nm等)或HeCd激光器；藍(lán)光固態(tài)二極管激光器例如基 于GaN和GaAs (雙重)的激光器或基于YAG或YLF的激光器的雙重或三重輸出；或任何輸 出藍(lán)光的脈沖式激光器。來自反應(yīng)孔中的樣品或反應(yīng)物的發(fā)射光，可以用提供底物的光譜信息的裝置例如 光柵分光計、棱鏡分光計、成像分光計等，或使用干涉(帶通)濾光器進(jìn)行檢測。使用二維 區(qū)域成像儀例如CCD相機(jī)，可以對許多物體同時成像。可以經(jīng)不同的帶通、長通或短通濾光 器(干涉濾光器或可電調(diào)諧的濾光器是適合的)收集一張以上的圖像來產(chǎn)生光譜信息?？?以使用一個以上的成像儀通過專用濾光器同時收集數(shù)據(jù)，或者可以改變單個成像儀前面的濾光器?；诔上竦南到y(tǒng)例如Biometric成像系統(tǒng)，對表面進(jìn)行掃描以發(fā)現(xiàn)熒光信號。因此，本發(fā)明的方法包含將樣品與試劑在反應(yīng)室30中混合?；旌峡梢允褂每梢苿?元件60和外部磁源來進(jìn)行。試劑可以是例如固定化在顆粒上的抗體或凝固劑。適合用于 與抗體偶聯(lián)的顆粒物包括例如乳膠珠、包被有乳膠的桿狀體、含有染料的顆粒、膠體顆粒、 金屬顆粒、微粒和納米粒、熒光化合物、化學(xué)發(fā)光化合物以及磁珠。在本發(fā)明的一個方面，顆 粒物是乳膠珠。乳膠珠典型地具有大約50到大約500納米、優(yōu)選為大約100到大約350納 米的平均直徑。磁珠的平均直徑為大約50到大約350納米，優(yōu)選為大約100到大約300納 米。混合優(yōu)選持續(xù)到獲得均質(zhì)溶液。因此，混合可以從大約5秒到大約5分鐘，優(yōu)選為大約 10秒到大約4分鐘，更優(yōu)選為大約20秒到大約150秒。正如專業(yè)技術(shù)人員將會認(rèn)識到的， 混合時間將取決于目標(biāo)被分析物和試劑，時間可以很容易地確定。均勻混合的溶液可以任選被過濾。因此，在本發(fā)明的可替選方面，微機(jī)械系統(tǒng)包括 與反應(yīng)室30和檢測區(qū)70流體連通的濾器80?？梢允咕鶆蚧旌系臉悠妨鬟^濾器80或施加 到其上。濾器80可以接收流體樣品，并可以允許它流入檢測區(qū)70。濾器80也可以用于移 除可能干擾測定的較大顆粒。濾器80可以包含任何適合的材料例如網(wǎng)紗、纖維素、乙酸纖 維素、其他聚酯和其他有孔膜。此外，濾器可以捕集未結(jié)合抗體、凝固劑等。微機(jī)械裝置10可以具有檢測區(qū)70(圖1)，可以在其中檢測結(jié)合的被分析物的量。 可以使任選被過濾的均質(zhì)溶液以恒定的流速流過檢測區(qū)70，可以在檢測區(qū)70中檢測與抗 原結(jié)合的反應(yīng)物。典型情況下，被分析物與固定化在顆粒上的標(biāo)記物的結(jié)合將提供溶液中的顆粒。 因此，在本發(fā)明的一個方面，在檢測區(qū)70中的檢測使用顆粒計數(shù)器。在本文中使用的術(shù)語 “顆粒計數(shù)器”是指包含傳感器、并能夠用于對液體中的顆粒計數(shù)并任選地確定顆粒尺寸的 裝置。傳感器可以是光源，并包含對于收集顆粒所反射的光來說可能必需的反射鏡、透鏡、 光檢測器等。在本發(fā)明的一個方面，可以對整個樣品中顆粒的數(shù)量進(jìn)行計數(shù)。因此，例如，可以 使均勻混合的溶液的整個體積流過檢測區(qū)，并對顆粒進(jìn)行計數(shù)。在另一個方面，只使用了流 過檢測區(qū)的一部分均勻混合的溶液進(jìn)行顆粒計數(shù)，然后可以通過已知方法推斷樣品中的顆 粒數(shù)量。用于推斷顆粒數(shù)量的手段包括例如顆粒濃度對計量讀數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線、統(tǒng)計學(xué)方法 等。因此，可以使用運(yùn)送過檢測區(qū)裝置的5%或以下的樣品、優(yōu)選運(yùn)送過檢測區(qū)的大約90% 或以上的樣品、或運(yùn)送過檢測區(qū)的大約10%、20%、30%、50%或其他百分率的樣品進(jìn)行測 量。在本發(fā)明的一個方面，提供了用于測量血液凝固時間的方法和微流體裝置。血樣 可以通過傳統(tǒng)手段例如靜脈穿刺或手指扎刺從患者獲得。樣品可以放置在樣品室20中。在 本發(fā)明的一個方面，從患者獲得的血液樣品可以不用附加操作即用于本發(fā)明的方法和裝置 中?；蛘?，從患者獲得的血液樣品可以被處理，以完全或部分除去紅細(xì)胞。紅細(xì)胞可以通過 任何已知方法，例如離心、將樣品與紅細(xì)胞凝集素反應(yīng)、或通過使用紅細(xì)胞濾器除去。在執(zhí) 行方法中使用血漿，通過例如允許成像系統(tǒng)更好地監(jiān)測在血液中發(fā)生的物理變化、例如纖 維蛋白原物理聚合成纖維蛋白，可以提供更好的準(zhǔn)確性和精確性。在圖1中顯示的微流體裝置中，反應(yīng)室30可以具有包被有一種或多種凝固劑例如 組織因子或其他凝固劑的乳膠珠。將一滴血液或等價物放置在樣品室20中。任選地，可以將稀釋劑放入儲液器90中，由此血樣與稀釋劑的混合可以任選地提供稀釋的血樣。稀釋 劑可以簡單地是水性溶液，或者它可以是非水性溶液，并任選地可以包含多種添加劑，例如 鹽、蛋白、糖、糖類、金屬離子例如鈣、鎂、鑭系元素等。某些稀釋劑的制劑可以包括含有明膠 的成分和乳液。典型情況下，稀釋劑是緩沖溶液，例如檸檬酸鹽緩沖液。然后可以將血樣與凝固劑在反應(yīng)室30中相接觸，凝固劑和血液可以使用可移動 元件60進(jìn)行混合，以提供均質(zhì)溶液。本發(fā)明的凝固測定包括凝血酶原時間(PT)、部分促凝 血酶原激酶時間(PTT)、活化的部分促凝血酶原激酶時間(APTT)、凝血酶凝固時間(TCT)、 纖維蛋白原、肝素管理檢驗(HMT)、魚精蛋白響應(yīng)時間(PRT)、肝素響應(yīng)時間(HRT)、低分子 量肝素(LMWH)、低范圍肝素管理檢驗(LHMT)和蛇靜脈酶(ecarin)凝固時間(ECT)，其中用 于每種這些測試的試劑如本技術(shù)領(lǐng)域中所描述。用于一種或多種測定方法的試劑可以放置 在反應(yīng)室30中，其中凝固劑優(yōu)選固定在乳膠珠上。通過將血液和凝固劑混合而獲得的均質(zhì)溶液可以被過濾，并將如此獲得的溶液以 恒定的流速計量通過檢測區(qū)70。血液凝固的量可以通過檢測液體樣品在與血液凝固試劑接 觸后發(fā)生的物理變化的程度來測量。物理變化可以是任何變化，例如濁度(包括吸光度)、 黏度、介電常數(shù)等。優(yōu)選情況下，物理變化通過光學(xué)測量檢測波的運(yùn)動或通過濁度(或吸光 度)來檢測。除了光學(xué)方法之外的其他方法可用于檢測凝固的血樣。例如，液體樣品的濁度 (或吸光度)可以通過光學(xué)方法容易地監(jiān)測，濁度變化程度的檢測可以使用可商購裝置容 易地進(jìn)行，所述可商購裝置例如為STAT IMUNO SYSTEM Quick Turbo II (由A&T Corp.制 造)、自動化分析儀多化學(xué)單元(Multiple Chemistry Unit) 502X(由A&T Corp.制造)、自 動化分析儀Automatic Analyzer 7070 (由日立公司(HitachiLtd.)制造)等。例如，濁度測量可以使用自動化分析儀多化學(xué)單元(MultipleChemistry Unit) 502X來進(jìn)行，其中可以選擇340到795nm之間的兩種波長作為用于測量的波長。通過 在數(shù)秒內(nèi)進(jìn)行的間歇測量，可以同時測量所選的兩種波長。
實(shí)施例下面是用于執(zhí)行本發(fā)明的具體實(shí)施方案的例子。提供的例子僅用于說明的目的， 不打算以任何方式限制本發(fā)明的范圍。已經(jīng)進(jìn)行了努力以確保使用的數(shù)字(例如量、溫度 等)的準(zhǔn)確性，但是某些實(shí)驗誤差和偏差當(dāng)然將是允許的。實(shí)施例1下面的實(shí)施例顯示了使用在檢測區(qū)之前缺少捕獲區(qū)的側(cè)向流免疫條構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲 線。為了構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，將固定化在微粒(MP)上的Alc抗原特異性抗體與稀釋劑混合，直 到獲得均質(zhì)混合物。然后允許該混合物芯吸(wick up)到側(cè)向流免疫檢驗條上并通過過濾區(qū)。過濾區(qū) 是用于過濾樣品的膜，由此當(dāng)樣品混合物芯吸到檢驗條上時檢測未捕獲的MP偶聯(lián)物。顆粒 的檢測使用可以從MECDynamics (Sunnyvale, CA)獲得的Avie計量器X7進(jìn)行，使用固定在 微粒上的已知濃度的Alc抗原特異性抗體的結(jié)果顯示在下表1中。表 1Avie 計量器 X7
8
標(biāo)準(zhǔn)曲線使用已知濃度的顆粒產(chǎn)生。對于每種顆粒濃度，使用都可以從MEC Dynamics獲得的計量器X7、X8或X9獲取三個讀數(shù)。獲得的數(shù)據(jù)分別顯示在表2、3和4中。表 2
表3 表 4
使用上述方法和Avie計量器X7、X8和X9獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線顯示在圖2中。實(shí)施例2使用固定在微粒(MP)上的Alc抗原特異性抗體重復(fù)了實(shí)施例1的步驟，所述微粒 與來自患者的血樣混合，直到獲得均質(zhì)混合物。然后允許該混合物芯吸在側(cè)向流免疫條上 并通過過濾區(qū)。過濾區(qū)是用于過濾樣品的膜，由此當(dāng)樣品混合物芯吸到條上時檢測未捕獲 的MP偶聯(lián)物。顆粒的檢測使用Avie計量器X7進(jìn)行。然后將來自計量器的讀數(shù)使用在圖 2顯示的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，以估算血樣中Alc的濃度。盡管已經(jīng)參考優(yōu)選實(shí)施方案和各種不同可替選實(shí)施方案對本發(fā)明進(jìn)行了具體的 顯示和描述，但相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員將會理解，可以在其中對形式和詳細(xì)情況進(jìn)行各 種不同的改變，而不背離本發(fā)明的精神和范圍。所有在本申請中引用的出版的專利和出版 物，在此以其全文引入本文作為參考。
權(quán)利要求
用于檢測樣品中的被分析物的方法，所述方法包括將含有被分析物的樣品與反應(yīng)物混合，其中獲得了均質(zhì)溶液；以及將均質(zhì)溶液流過檢測區(qū)，并檢測溶液中的顆粒。
2.權(quán)利要求1的方法，其中反應(yīng)物與顆粒偶聯(lián)。
3.權(quán)利要求2的方法，其中顆粒是乳膠珠、包被有乳膠的桿狀體、膠體顆粒、金屬顆粒、 微粒、納米粒、熒光化合物、化學(xué)發(fā)光化合物或磁珠。
4.權(quán)利要求2的方法，其中反應(yīng)物包含抗體或凝固劑。
5.權(quán)利要求4的方法，其中抗體是HbAlc特異性抗體。
6.權(quán)利要求4的方法，其中凝固劑用于測定，所述測定選自測定凝血酶原時間(PT)、部 分促凝血酶原激酶時間(PTT)、活化的部分促凝血酶原激酶時間(APTT)、凝血酶凝固時間 (TCT)、纖維蛋白原、肝素管理檢驗(HMT)、魚精蛋白響應(yīng)時間(PRT)、肝素響應(yīng)時間(HRT)、 低分子量肝素(LMWH)、低范圍肝素管理檢驗(LHMT)、蛇靜脈酶凝固時間(ECT)及其組合。
7.權(quán)利要求5的方法，其中測定是測定PT。
8.權(quán)利要求5的方法，其中測定是測定APTT。
9.權(quán)利要求1的方法，還包括在檢測前將均質(zhì)溶液流過濾器。
10.權(quán)利要求9的方法，其中濾器包含網(wǎng)紗、纖維素、乙酸纖維素、有孔膜或能夠除去不 與被分析物結(jié)合的反應(yīng)物的固定化部分。
11.權(quán)利要求1的方法，其中檢測使用顆粒計數(shù)器進(jìn)行。
12.權(quán)利要求11的方法，其中檢測通過UV、IR或其組合進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于執(zhí)行測定、以確定樣品中被分析物的存在和/或?qū)ζ溥M(jìn)行定量的裝置和方法。將被分析物與優(yōu)選固定化在顆粒上的標(biāo)記物混合，以提供均質(zhì)溶液。任選地，可以使均質(zhì)溶液流過濾器。均質(zhì)溶液或濾液可以受控的流速計量流過讀取區(qū)，可以檢測標(biāo)記物的存在或顆粒的存在。本發(fā)明的方法和裝置不需要使用捕獲區(qū)。
文檔編號G01N33/50GK101918835SQ200880124227
公開日2010年12月15日 申請日期2008年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月7日
發(fā)明者埃曼努埃爾·C·姆波克, 威爾瑪·曼甘 申請人:Mec戴內(nèi)米克公司