專利名稱：一種快速檢測(cè)藻毒素的免疫磁珠層析試紙條及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種快速檢測(cè)藻毒素的納米免疫磁珠層析試紙條及其制備方法，涉及藻毒 素檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，含有大量的氮、磷營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的污水進(jìn)入湖泊、水庫(kù)，使
水體富營(yíng)養(yǎng)化，致使藻類異常增殖，釋放次級(jí)代謝物藻毒素(Algae Toxins),威 脅人類的飲用水的安全和水體中其它生物的安全。其中微囊藻毒素 (Microcystins， MCs)的分布廣、危害大更應(yīng)引起重視，其是由某些種屬的淡水 藍(lán)藻，主要是銅綠微囊藻產(chǎn)生的一個(gè)結(jié)構(gòu)相似的環(huán)七肽家族，已知有60余種異 構(gòu)體。其結(jié)構(gòu)如下-
(6) D-Glu (iso) (7) dehydroAla
O COOH (2) variable
(3) D-Asp (iso)
其含有五個(gè)固定成分的氨基酸，兩個(gè)可變的氨基酸X、 Y。其中X和Y分別為L(zhǎng)eu 和Arg的最為常見(jiàn)、毒性也最大?；诖?，世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的飲水中的 藻毒素標(biāo)準(zhǔn)為1.0^ig/L，我國(guó)現(xiàn)頒布執(zhí)行的生活應(yīng)用水水質(zhì)衛(wèi)生規(guī)范(2001)藻毒 素為0.001mg/L、地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(GB3838-2002)微囊藻毒素-LR為 0.001mg/L。故對(duì)藻毒素準(zhǔn)確有效監(jiān)測(cè)尤為重要。
常用的檢測(cè)藻毒素的方法主要有儀器分析方法、生物化學(xué)法及免疫檢測(cè)法 等幾大類。儀器分析方法主要包括高效液相色譜法(HPLC)、質(zhì)譜、液質(zhì)聯(lián)用等， 這些方法雖然靈敏但其需要昂貴的儀器設(shè)備，專業(yè)的操作人員，對(duì)檢材的要求 也比較高，并且需要進(jìn)一步的樣本前處理才能進(jìn)行，這已經(jīng)不能達(dá)到現(xiàn)代檢測(cè) 對(duì)快速、方便、準(zhǔn)確的要求。生物化學(xué)法主要是蛋白磷酸酶抑制試驗(yàn)法，優(yōu)點(diǎn) 是快速，數(shù)小時(shí)即可實(shí)現(xiàn)對(duì)大量樣品的檢測(cè)，但其最大的不足之處在于特異性 蛋白磷酸酶等沒(méi)有商品供應(yīng)、特異性差。免疫分析化學(xué)方法具有快速，靈敏度 高，操作簡(jiǎn)單，專一性好等優(yōu)點(diǎn)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linkedImmunosorbent Assay,簡(jiǎn)稱為ELISA)和膠體金免疫層析法(Colloidal Gold Irnmuno-ChromatographyAssay,簡(jiǎn)稱為GICA)由于其廉價(jià)，特異，靈敏和快速 等特點(diǎn)，被廣泛地使用于藥物殘留的快速篩查中。但ELISA試劑需要專用的實(shí)驗(yàn) 室和專業(yè)人員進(jìn)行檢驗(yàn)，操作復(fù)雜，時(shí)間較長(zhǎng)；膠體金類試劑操作簡(jiǎn)便、快速、 適于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，但靈敏度稍低，結(jié)果用肉眼直接觀察會(huì)產(chǎn)生誤差，亦不能記錄。
納米免疫磁珠是含有鐵元素的超順磁納米顆粒，外面包覆著聚乙烯類高分 子物質(zhì)，并可帶有羧基或氨基，用于和蛋白質(zhì)分子交聯(lián)。免疫磁珠在細(xì)胞和大 分子分離、純化及診斷上都已得到應(yīng)用。
此納米免疫磁珠檢測(cè)試紙基本原理如下采用競(jìng)爭(zhēng)法，即樣品中的藻毒素 MC-LR和固定在包被膜上的包被抗原MC-LR-OVA競(jìng)爭(zhēng)磁珠標(biāo)記的抗藻毒素多 克隆抗體。
利用免疫磁珠標(biāo)記一種抗體，在試紙的NC膜上包被相應(yīng)的包被抗原和羊抗 兔二抗。當(dāng)試紙條以樣品墊末端浸入樣本后，樣品溶液沿著試紙條通過(guò)毛細(xì)管 作用從下往上泳動(dòng)，溶解磁標(biāo)墊上干燥的磁標(biāo)抗體，當(dāng)待測(cè)樣品中不存在待測(cè) 藥物，則磁標(biāo)抗體會(huì)直接泳動(dòng)到檢測(cè)線(T線)和硝酸纖維膜上的包被原 MC-LR-OVA發(fā)生免疫反應(yīng)，從而使磁珠顆粒發(fā)生聚集，形成黑色的線條，然后 其他未結(jié)合的磁標(biāo)抗體繼續(xù)通過(guò)毛細(xì)管作用向前泳動(dòng)，與控制線(C線)上的羊 抗兔二抗發(fā)生第二次免疫反應(yīng)，同樣形成黑色線條，這樣包被膜上就會(huì)有兩條 黑色線條，表示樣品為陰性。當(dāng)待測(cè)樣品中存在待測(cè)藥品，則磁標(biāo)抗體首先會(huì) 和樣品中的檢測(cè)物發(fā)生免疫反應(yīng)，當(dāng)未發(fā)生反應(yīng)的磁標(biāo)抗體有剩余時(shí)，才會(huì)在 檢測(cè)線上與MC-LR-OVA發(fā)生免疫反應(yīng)，形成黑色線條，其顏色強(qiáng)度弱于陰性 時(shí)的線條強(qiáng)度；而當(dāng)磁標(biāo)抗體全部和樣品中的待測(cè)藥品藻毒素MC-LR發(fā)生免疫 結(jié)合時(shí)，就不會(huì)再有抗體與檢測(cè)線包被原結(jié)合，從而檢測(cè)線就不會(huì)有黑色線條 出現(xiàn)?？刂凭€是為檢驗(yàn)磁標(biāo)免疫層析方法本身是否有效而設(shè)定的，所以無(wú)論樣 品中是否存在待測(cè)藥物藻毒素MC-LR，控制線都應(yīng)該顯現(xiàn)。如果控制線不顯色， 則說(shuō)明試紙條失效。最后通過(guò)測(cè)定檢測(cè)線上捕獲磁珠的含量實(shí)現(xiàn)結(jié)果的判定。 和膠體金試紙類相比，免疫磁珠檢測(cè)試紙最大的不同在于將標(biāo)記膠體金改為標(biāo) 記磁珠，檢測(cè)結(jié)果時(shí)用Magnetic Assay Reader對(duì)檢測(cè)線上的磁珠含量進(jìn)行檢測(cè) 并把磁信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，而不是依靠肉眼去總判定，這樣可使得結(jié)果判定更 為精確、靈敏、客觀和便于記錄保存。利用納米免疫磁珠研制藻毒素抗體檢測(cè) 快速診斷試紙尚無(wú)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)藻毒素的技術(shù)的不足和缺陷，提供一種基于 納米磁珠免疫技術(shù)的、靈敏度高、反應(yīng)時(shí)間短、儀器設(shè)備便宜的可快速檢測(cè)藻 毒素的檢測(cè)方法，使其能更加快速、靈敏、簡(jiǎn)便地檢測(cè)藻毒素的殘留。本發(fā)明的技術(shù)方案是 一種藻毒素免疫磁珠層析檢測(cè)試紙條，由襯板和在 襯板上依次銜接的樣品墊、磁標(biāo)結(jié)合墊、包被膜、吸水墊組成，磁標(biāo)結(jié)合墊為 吸附藻毒素磁標(biāo)抗體的玻璃纖維棉，在包被膜上有用藻毒素偶聯(lián)的載體蛋白溶 液印制的直線式隱形檢測(cè)線T線，用羊抗兔IgG溶液印制的直線式隱形對(duì)照線 C線；
所述的襯板為不吸水的硬質(zhì)塑膠條或硬紙條；樣品墊為玻璃纖維棉、尼龍
膜、聚偏二氟乙烯膜、或聚酯膜；包被膜為硝酸纖維素膜、純纖維素膜、或羧
化纖維素膜；吸水墊為吸水濾紙或?yàn)V油紙；
所述的藻毒素磁標(biāo)抗體為磁珠標(biāo)記的藻毒素的多克隆抗體； 所述的磁珠為表面修飾有羧基的Fe304磁珠；
所述的偶聯(lián)藻毒素的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、雞卵清白蛋白OVA。
所述藻毒素免疫磁珠層析檢測(cè)試紙條的制備方法
1) 藻毒素全抗原的合成及鑒定用碳化二亞胺法分別將BSA, OVA與藻毒 素MC-LR進(jìn)行偶聯(lián)，得到藻毒素的全抗原MC-LR-BSA以及MC-LR-OVA，并 利用紫外掃描儀進(jìn)行鑒定；
2) 多克隆抗體的制備與純化以MC-LR-BSA作為免疫原，免疫新西蘭兔， 按常規(guī)方法制備MC-LR多克隆抗體并以硫酸銨純化；
3) 免疫磁珠的制備將MC-LR抗體與帶羧基的納米磁珠偶聯(lián)，制備含 MC-LR抗體的免疫磁珠，即藻毒素磁標(biāo)抗體；以玻璃纖維棉吸附藻毒素磁標(biāo)抗 體制備磁標(biāo)結(jié)合墊；
4) 包埋MC-LR-OVA和羊抗兔IgG至硝酸纖維素膜用噴膜儀將選定濃度 的包被原MC-LR-OVA以及羊抗兔IgG分別噴載于包被膜的T線和C線上，37°C 烘箱干燥10min備用；
5) 檢測(cè)試紙條的制作將樣品墊、磁標(biāo)MC-LR抗體的結(jié)合墊、包埋包被 原MC-LR-OVA和羊抗兔IgG的包被膜、吸水墊依次銜接在襯板上，組成藻毒 素免疫磁珠層析檢測(cè)試紙條；
6) 樣品檢測(cè)將試紙條樣品墊插入待測(cè)樣品溶液，樣品溶液將通過(guò)層析作 用從試紙條上從下而上流過(guò)，10~20秒后取出試紙條，再于室溫下反應(yīng)15分鐘 后，將測(cè)試板放入EnvisoTM System的Magnetic Assay Reader進(jìn)行檢測(cè)，此檢測(cè) 儀器將已經(jīng)轉(zhuǎn)化成磁場(chǎng)信號(hào)的生物學(xué)反應(yīng)信號(hào)進(jìn)一步以電信號(hào)方式輸出；繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線后，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出待測(cè)樣品的藻毒素含量。
所述的免疫磁珠的制備將多克隆MC-LR抗體與納米磁珠偶聯(lián)，制備含
MC-LR抗體的免疫磁珠吸取適量磁珠至小試管中，離心使磁珠與r:存液分離，
去除貯存液并加入乙磺酸MES清洗緩沖液渦旋和超聲清洗并離心，重復(fù)幾次， 最后重懸磁珠，將一定體積的新鮮配置的水溶性碳化二亞胺EDC和N-羥基琥珀酰亞胺NHS加入磁珠懸液中活化羧基，使磁珠表面羧基與EDC和NHS的摩爾 比為1:4:3，渦旋混合后于室溫低速攪拌孵育反應(yīng)2小時(shí)，分別用MES清洗 緩沖液及硼酸清洗緩沖液清洗磁珠，隨后將MC-LR抗體緩慢滴加入磁珠懸液中 低速攪拌孵育反應(yīng)過(guò)夜，再逐滴加入質(zhì)量濃度5% BSA，使BSA的終濃度為1%， 持續(xù)攪拌5min，以飽和游離的磁珠，低速離心去除凝聚的磁珠沉淀，然后再用 硼酸清洗緩沖液清洗磁珠去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)，將磁珠轉(zhuǎn)移至新管，棄掉硼酸 清洗緩沖液，并用偶聯(lián)緩沖液重懸浮，放4°C冰箱存放，用定量加樣裝置將已 經(jīng)標(biāo)記有MC-LR抗體的磁珠加入磁標(biāo)結(jié)合墊，并放入37 °C烘箱干燥10min備 用組成檢測(cè)試紙條。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明是基于一種納米磁免疫技術(shù)進(jìn)行藻毒素的檢測(cè) 方法、它具有靈敏度高、反應(yīng)時(shí)間短、儀器設(shè)備便宜、方便易用等特點(diǎn)。


圖1、磁珠的TEM電鏡圖。
圖2、免疫磁珠試劑條結(jié)構(gòu)示意圖。
圖3、陽(yáng)性樣品的磁信號(hào)檢測(cè)示意圖。最高的尖峰代表檢測(cè)信號(hào)，第二高的 尖峰代表空白對(duì)照信號(hào)。
圖4、藻毒素0.05~100ppb時(shí)磁信號(hào)強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實(shí)施例方式
要制成藻毒素的免疫磁珠檢測(cè)試紙條，首先需要制備偶聯(lián)藻毒素載體蛋白，
用于制備相應(yīng)的檢測(cè)線(T線)和抗體；而且需要制備藻毒素磁標(biāo)抗原，用于制
備相應(yīng)的磁標(biāo)抗原纖維棉；另外需要制備羊抗兔IgG抗體，用于制備對(duì)照線(C 線)。
1) 藻毒素的全抗原的合成及鑒定先將藻毒素溶解在乙醇溶液中，再采用 碳化二亞胺(EDC)法合成抗原，并使用牛血清白蛋白BSA作為免疫抗原偶聯(lián) 載體，卵清蛋白OVA作為包被抗原偶聯(lián)載體，分別得到藻毒素的全抗原 MC-LR-BSA和MC-LR-OVA，并利用紫外掃描儀進(jìn)行鑒定；
2) 多克隆抗體的制備與純化以MC-LR-BSA作為免疫原，采用新西蘭大 白兔作為被免疫的動(dòng)物，首次免疫時(shí)將免疫源與等量的弗氏完全佐劑混合制成 乳化劑，在大白兔背部皮下多點(diǎn)注射，免疫劑量為lmg/只，間隔2-4周后，用 相同劑量免疫源加等量弗氏不完全佐劑混合制成乳化劑，加強(qiáng)免疫，免疫期間 監(jiān)測(cè)抗體效價(jià)及特異性，最后一次免疫不加佐劑。最后一次免疫7天后心臟放 血，經(jīng)硫酸銨分級(jí)沉淀得純化的MC-LR多克隆抗體。并以硫酸銨沉淀法純化抗 體；得到兔抗MC-LR的IgG。
3) 免疫磁珠的制備將MC-LR多克隆抗體與納米磁珠偶聯(lián)，制備含MC-LR 抗體的免疫磁珠；具體方法是吸取適量磁珠至小試管中，離心使磁珠與貯存
7液分離，去除貯存液并加入乙磺酸(MES)清洗緩沖液渦旋和超聲清洗并離心， 重復(fù)幾次，最后重懸磁珠，將一定體積的新鮮配置的水溶性碳化二亞胺(EDC) 和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS )加入磁珠溶液中活化羧基，使磁珠表面羧基與EDC 和NHS的摩爾比為1:4:3，渦旋混合后于室溫震蕩孵育反應(yīng)2小時(shí)，分別用 MES清洗緩沖液及硼酸清洗緩沖液清洗磁珠，隨后將MC-LR抗體緩慢滴加入磁 珠懸液中低速攪拌孵育反應(yīng)過(guò)夜，再逐滴加入質(zhì)量濃度5。/。BSA,使BSA的終濃 度為1%，持續(xù)攪拌5min，以飽和游離的磁珠。低速離心去除凝聚的磁珠沉淀， 然后再用硼酸清洗緩沖液清洗磁珠，即髙速離心，保留底部可流動(dòng)的暗黑色沉 淀而去除含有未結(jié)合的蛋白質(zhì)的上清液，重復(fù)幾次，最好將磁珠轉(zhuǎn)移至新管， 棄掉硼酸清洗緩沖液，并用偶聯(lián)緩沖液重懸浮，放4。C冰箱存放。用定量加樣裝 置將已經(jīng)標(biāo)記有MC-LR抗體的磁珠加入磁標(biāo)結(jié)合墊，并放入37nC烘箱干燥10min 備用以組成檢測(cè)試紙條。
4) 包被MC-LR-OVA抗原和羊抗兔IgG至硝酸纖維素膜(NC膜)分別用噴 膜儀將一定濃度的MC-LR-OVA噴載于硝酸纖維素膜(NC膜)的檢測(cè)線(T線)、 羊抗兔IgG噴載于硝酸纖維素膜(NC膜)的控制線(C線)上，37。C烘箱干燥 10min備用。
5) 檢測(cè)試紙條的制作分別將磁標(biāo)MC-LR多克隆抗體的偶聯(lián)墊、包埋抗原 和羊抗兔IgG的硝酸纖維素膜(NC膜)、樣品墊、吸水墊、覆蓋膜、測(cè)試板外卡
組成檢測(cè)試紙條(與金標(biāo)試紙條相似:)。
6) 樣品檢測(cè)將藻毒素免疫磁珠層析檢測(cè)試紙條的樣品端插入待測(cè)樣品液 中，插入深度不超過(guò)標(biāo)記線，樣品將通過(guò)毛細(xì)管層析作用從試紙條上流過(guò)，10~20 秒后取出試紙條，在室溫下反應(yīng)15分鐘以后，將測(cè)試板放入EnvisoTM System的 Magnetic Assay Reader進(jìn)行檢測(cè)，并且此檢測(cè)儀器可以將已經(jīng)轉(zhuǎn)化成磁場(chǎng)信號(hào)的 生物學(xué)反應(yīng)信號(hào)進(jìn)一步以電信號(hào)的方式輸出；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線后，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線 求出待測(cè)樣品內(nèi)藻毒素含量的具體值。得到該方法的檢測(cè)限為0.05ppb。
實(shí)施例l
稱取40mg太湖藍(lán)藻，然后用1.5mL的甲醇水溶液(體積比為75 : 25)超聲提 取10分鐘，再用10000rpm離心10分鐘，提取上清液。如此重復(fù)提取三次。將這 三次的上清提取液混合，并用0.2pm的微孔濾膜過(guò)濾，然后用氮?dú)獯蹈?，最后?緩沖液溶解吹干后的殘留物作為待測(cè)樣品液備用。最終用藻毒素的免疫磁珠層 析試紙條檢測(cè)待測(cè)的樣品液，插入深度不超過(guò)標(biāo)記線，樣品將通過(guò)毛細(xì)管層析 作用從試紙條上流過(guò)，10 20秒后取出試紙條，在室溫下反應(yīng)15分鐘以后，將測(cè) 試試紙條放入EnvisoTM System的Magnetic Assay Reader進(jìn)行檢測(cè)磁場(chǎng)信號(hào)。根據(jù) 事先用藻毒素標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)出的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出待測(cè)樣品內(nèi)藻毒素的含量為6ppb。
權(quán)利要求
1、一種藻毒素免疫磁珠層析檢測(cè)試紙條，其特征是由襯板和在襯板上依次銜接的樣品墊、磁標(biāo)結(jié)合墊、包被膜、吸水墊組成，磁標(biāo)結(jié)合墊為吸附藻毒素磁標(biāo)抗體的玻璃纖維棉，在包被膜上有用藻毒素偶聯(lián)的載體蛋白溶液印制的直線式隱形檢測(cè)線T線，用羊抗兔IgG溶液印制的直線式隱形對(duì)照線C線；所述的襯板為不吸水的硬質(zhì)塑膠條或硬紙條；樣品墊為玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜、或聚酯膜；包被膜為硝酸纖維素膜、純纖維素膜、或羧化纖維素膜；吸水墊為吸水濾紙或?yàn)V油紙；所述的藻毒素磁標(biāo)抗體為磁珠標(biāo)記的藻毒素的多克隆抗體；所述的磁珠為表面修飾有羧基的Fe3O4磁珠；所述的偶聯(lián)藻毒素的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、雞卵清白蛋白OVA。
2、 權(quán)利要求1所述藻毒素免疫磁珠層析檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征是1) 藻毒素全抗原的合成及鑒定用碳化二亞胺法分別將BSA, OVA與藻毒 素MC-LR進(jìn)行偶聯(lián)，得到藻毒素的全抗原MC-LR-BSA以及MC-LR-OVA，并 利用紫外掃描儀進(jìn)行鑒定；2) 多克隆抗體的制備與純化以MC-LR-BSA作為免疫原，免疫新西蘭兔， 按常規(guī)方法制備多克隆抗體并以硫酸銨純化；3) 免疫磁珠的制備將MC-LR抗體與帶羧基的納米磁珠偶聯(lián)，制備含 MC-LR抗體的免疫磁珠，即藻毒素磁標(biāo)抗體；以玻璃纖維棉吸附藻毒素磁標(biāo)抗 體制備磁標(biāo)結(jié)合墊；4) 包埋MC-LR-OVA和羊抗兔IgG至硝酸纖維素膜用噴膜儀將選定濃度 的包被原MC-LR-OVA以及羊抗兔IgG分別噴載于包被膜的T線和C線上，37°C 烘箱干燥10min備用；5) 檢測(cè)試紙條的制作將樣品墊、磁標(biāo)MC-LR抗體的結(jié)合墊、包埋包被 原MC-LR-OVA和羊抗兔IgG的包被膜、吸水墊依次銜接在襯板上，組成藻毒 素免疫磁珠層析檢測(cè)試紙條；6) 樣品檢測(cè)將試紙條樣品墊插入待測(cè)樣品溶液，樣品溶液將通過(guò)層析作 用從試紙條上從下而上流過(guò)，10 20秒后取出試紙條，再于室溫下反應(yīng)15分鐘 后，將測(cè)試板放入Enviso System的Magnetic Assay Reader進(jìn)行檢測(cè)，此檢測(cè) 儀器將已經(jīng)轉(zhuǎn)化成磁場(chǎng)信號(hào)的生物學(xué)反應(yīng)信號(hào)進(jìn)一步以電信號(hào)方式輸出；繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線后，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出待測(cè)樣品的藻毒素含量。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的免疫磁珠的制備 將多克隆MC-LR抗體與納米磁珠偶聯(lián)，制備含MC-LR抗體的免疫磁珠吸取適 量磁珠至小試管中，離心使磁珠與貯存液分離，去除貯存液并加入乙磺酸MES清洗緩沖液渦旋和超聲清洗并離心，重復(fù)幾次，最后重懸磁珠，將一定體積的新鮮配置的水溶性碳化二亞胺EDC和N-羥基琥珀酰亞胺NHS加入磁珠懸液中活 化羧基，使磁珠表面羧基與EDC和NHS的摩爾比為1:4:3,渦旋混合后于室 溫低速攪拌孵育反應(yīng)2小時(shí)，分別用MES清洗緩沖液及硼酸清洗緩沖液清洗磁 珠，隨后將MC-LR抗體緩慢滴加入磁珠懸液中低速攪拌孵育反應(yīng)過(guò)夜，再逐滴 加入質(zhì)量濃度5MBSA，使BSA的終濃度為1。/。，持續(xù)攪拌5 min，以飽和游離的 磁珠，低速離心去除凝聚的磁珠沉淀，然后再用硼酸清洗緩沖液清洗磁珠去除 未結(jié)合的蛋白質(zhì)，將磁珠轉(zhuǎn)移至新管，棄掉硼酸清洗緩沖液，并用偶聯(lián)緩沖液 重懸浮，放4。C冰箱存放，用定量加樣裝置將已經(jīng)標(biāo)記有MC-LR抗體的磁珠加入 磁標(biāo)結(jié)合墊，并放入37 。C烘箱干燥10min備用組成檢測(cè)試紙條。
全文摘要
一種快速檢測(cè)藻毒素的免疫磁珠層析試紙條及其制備方法，涉及藻毒素檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。該試紙條由襯板和在襯板上依次銜接的樣品墊、磁標(biāo)結(jié)合墊、包被膜、吸水墊組成，磁標(biāo)結(jié)合墊為吸附藻毒素磁標(biāo)抗體的玻璃纖維棉，在包被膜上有用藻毒素偶聯(lián)的載體蛋白溶液印制的隱形檢測(cè)線T線、用羊抗兔IgG溶液印制的隱形對(duì)照線C線。將試紙條樣品墊插入待測(cè)樣品溶液，10～20秒后取出，于室溫下反應(yīng)15分鐘，將試紙條放入磁信號(hào)檢測(cè)儀檢測(cè)，此檢測(cè)儀將已轉(zhuǎn)化成磁場(chǎng)信號(hào)的生物學(xué)反應(yīng)信號(hào)進(jìn)一步以電信號(hào)輸出；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線后，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出待測(cè)樣品中藻毒素含量。本發(fā)明是基于納米磁免疫技術(shù)進(jìn)行藻毒素的檢測(cè)方法、具有靈敏度高、反應(yīng)時(shí)間短、儀器設(shè)備便宜、方便易用等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/532GK101551390SQ20091002745
公開(kāi)日2009年10月7日 申請(qǐng)日期2009年5月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月7日
發(fā)明者劉麗強(qiáng), 徐麗廣, 李灼坤, 胥傳來(lái) 申請(qǐng)人:江南大學(xué)