專利名稱：檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針及合成方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及高選擇性，高靈敏度檢測(cè)肝素，尤其是檢測(cè)血液中肝素濃度含量的熒 光探針，以及該熒光探針的合成方法和用途。
背景技術(shù)：
眾所周知，肝素是能夠迅速達(dá)到抗凝血作用的首選藥物，可用于外科預(yù)防血栓形 成以及妊娠者的抗凝血治療，對(duì)于急性心肌梗死患者，可用肝素預(yù)防病人發(fā)生靜脈栓塞病， 并可預(yù)防大塊的前壁透壁性心肌梗死病人發(fā)生動(dòng)脈栓塞等。肝素的另一重要臨床應(yīng)用是在 心臟、手術(shù)和腎臟透析時(shí)維持血液體外循環(huán)暢通。此外，肝素用于治療各種原因引起的彌散 性血管內(nèi)凝血(DIC)，也用于治療腎小球腎炎、腎病綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。肝素的主要不良反應(yīng)是易引起自發(fā)性出血，表現(xiàn)為各種黏膜出血、關(guān)節(jié)腔積血和 傷口出血等，而肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥是一種藥物誘導(dǎo)的血小板減少癥，是肝素治療中 的一種嚴(yán)重并發(fā)癥。藥物所致的血小板減少癥主要分為兩型(1)骨髓被藥物毒性作用抑 制所致；(2)藥物通過(guò)免疫機(jī)制破壞血小板所致。后者中以肝素、奎寧、奎尼丁與磺胺類藥 物發(fā)病較高。臨床癥狀極不一致，血小板減少至(1.0 80)乂109/1，輕者無(wú)癥狀，重者可因 顱內(nèi)出血或因肝素導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的免疫損害，這些副作用合并在一起會(huì)引起危及生命的肺 栓塞與動(dòng)脈血栓。診斷主要依靠(1)藥物治療期間血小板減少；(2)停藥后血小板減少消 除。嚴(yán)重患者血清中可檢出藥物依賴性血小板抗體，但敏感性不高而常呈假陰性。治療的 關(guān)鍵是立即停用相關(guān)藥物，嚴(yán)重病例可使用輸注血小板、激素、丙球甚或血漿置換。肝素不 宜用于溶血尿毒綜合征。溶血尿毒綜合征(HUS)是小兒急性腎功能衰竭常見病因之一。兒 童期典型腹瀉后HUS90%由出血性大腸桿菌0157:H7引起。目前認(rèn)為HUS發(fā)病的中心環(huán)節(jié) 是內(nèi)毒素啟動(dòng)內(nèi)皮細(xì)胞受損，繼而出現(xiàn)凝血系統(tǒng)激活，炎癥介質(zhì)釋放，內(nèi)皮素-一氧化氮軸 紊亂等多環(huán)節(jié)參與發(fā)病。全身各器官均有不同程度受損，主要是腎臟，其次是腦。治療上強(qiáng) 調(diào)支持療法和早期透析，典型HUS的治療不提倡應(yīng)用肝素、抗生素和激素。不典型HUS可適 用血漿置換，有一定療效。鑒于肝素的這些嚴(yán)重副作用，迫切需要發(fā)展能夠高選擇性高靈敏 度的檢測(cè)肝素的熒光探針。光化學(xué)傳感器是近幾年來(lái)迅速發(fā)展起來(lái)的一個(gè)新的科學(xué)問(wèn)題，它的出現(xiàn)和超分子 科學(xué)的進(jìn)展諸如分子組裝，主客體化學(xué)，氫鍵作用，疏水作用，以及光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移過(guò)程，分 子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移等特性密切相關(guān)。它的發(fā)展也和許多科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域諸如生物化學(xué)，臨床醫(yī) 學(xué)，藥物化學(xué)以及環(huán)境科學(xué)中涉及的大量實(shí)際問(wèn)題密切相關(guān)。由于上述的種種原因，有力地 推動(dòng)了光化學(xué)傳感器的發(fā)展。光化學(xué)傳感器按照其信號(hào)檢測(cè)的不同，可以分為熒光化學(xué)傳 感器(Fluorescent Chemosensor)禾口 t匕色化學(xué)傳感器(ColorimetricChemosensor)。焚光 化學(xué)傳感器(熒光探針)主要是依靠熒光信號(hào)為檢測(cè)手段，通常有熒光的增強(qiáng)，淬滅或者發(fā) 光波長(zhǎng)的變化；比色化學(xué)傳感器則是借助于色調(diào)的變化，通過(guò)肉眼觀察就可檢測(cè)，實(shí)際應(yīng)用 方便。用來(lái)對(duì)外來(lái)物種進(jìn)行檢測(cè)的熒光化學(xué)傳感器的設(shè)計(jì)和研究，是近年來(lái)受到廣泛關(guān)注 的一個(gè)課題。熒光傳感器的檢測(cè)過(guò)程是通過(guò)器件接受體部分對(duì)外來(lái)物種(包括陽(yáng)離子，陰
4離子以及中性分子)進(jìn)行選擇性接納，然后經(jīng)過(guò)不同的機(jī)制如光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移(PET)或者 能量轉(zhuǎn)移(LMCT)，金屬-配體電荷轉(zhuǎn)移(MLCT)，分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移(ICT)，分子間的激基絡(luò)合 物，發(fā)生光學(xué)信號(hào)的變化，再通過(guò)器件的信號(hào)報(bào)告部分給出器件在接納物種過(guò)程中的信息變化。通過(guò)分子的發(fā)光現(xiàn)象和吸收光譜的變化來(lái)探測(cè)分子間的相互作用，其優(yōu)點(diǎn)可以概 括為以下幾個(gè)方面，(1)方便快捷，具有很高的靈敏度；(2)可以利用光纖技術(shù)實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞 的實(shí)時(shí)檢測(cè)；(3)如果在吸收光譜上有比較大的變化，可以在不借助于任何儀器的情況下， 直接通過(guò)顏色的變化來(lái)達(dá)到檢測(cè)的目的。許多分子結(jié)構(gòu)因素和它所處的環(huán)境因素都可用來(lái) 控制熒光發(fā)光效率和吸收光譜的變化。因此，如TICT發(fā)光、MLCT發(fā)光、LMCT發(fā)光、激基締合 物和激基復(fù)合物發(fā)光以及和重原子效應(yīng)、光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移、電子能量轉(zhuǎn)移等相關(guān)的光物理 和光化學(xué)特征等都已成功地用于化學(xué)敏感器的設(shè)計(jì)中。熒光化學(xué)傳感器由于其選擇性好，靈敏度高，響應(yīng)時(shí)間快等特點(diǎn)，目前在生物分子 的檢測(cè)中受到越來(lái)越廣泛的關(guān)注。對(duì)于大多數(shù)肝素的熒光化學(xué)傳感器，其設(shè)計(jì)機(jī)制主要是 通過(guò)陰——陽(yáng)離子靜電作用，或者多點(diǎn)識(shí)別來(lái)實(shí)現(xiàn)熒光檢測(cè)。蒽和芘分子是非常有用的熒光團(tuán)，它不僅顯示單體的精細(xì)結(jié)構(gòu)熒光發(fā)射光譜，而 且在一定條件下會(huì)在波長(zhǎng)較長(zhǎng)處顯示激基締合物的發(fā)射峰，其Stoke位移達(dá)到130納米，可 以完全避開單體的吸收。目前文獻(xiàn)報(bào)道的肝素化學(xué)傳感器很少，這些傳感器選擇性差，靈敏 度低，熒光發(fā)射波長(zhǎng)短，無(wú)法避免血液中其它熒光物質(zhì)的干擾，能夠?qū)嶋H應(yīng)用的幾乎沒(méi)有。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是克服現(xiàn)有技術(shù)中用于肝素檢測(cè)的熒光探針的性能和結(jié)構(gòu)上 的不足，提供一種性能優(yōu)良，適用于肝素檢測(cè)的以芘或者蒽為熒光團(tuán)，季銨鹽為母體的檢測(cè) 血液中肝素含量的熒光探針(熒光化學(xué)傳感器)，尤其是檢測(cè)血液中抗凝血藥物-肝素含量 的熒光探針。本發(fā)明的目的之二是提供檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針的合成方法。本發(fā)明的目的之三是提供檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針的用途。本發(fā)明的檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針是具有以下結(jié)構(gòu)的季銨鹽(即所述的 熒光探針為一個(gè)或者兩個(gè)季銨鹽構(gòu)成) 其中A1，R2, R3, R4可分別或者同時(shí)獨(dú)立的為1 18個(gè)碳的烷基，芳基，酯基或者醚基中的一種；n，m，g可分別或者同時(shí)獨(dú)立的為0 8 AnAi^Ar2分別或者同時(shí)獨(dú)立的為 苯，萘，蒽，芘，吲哚，香豆素，熒光素，咔唑，羅丹明，氰基染料，芴或喹啉中的一種；X_為F_， Cl—，Br—，Γ中的一種，@為正電荷。本發(fā)明的檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針的合成方法將帶有取代基為R1，R2，R3 的三級(jí)胺或者帶有取代基為R1，! 2，! 3，! 4的三級(jí)二胺溶解在有機(jī)溶劑中，加入鹵代烷基芳香 烴，其中，鹵代烷基芳香烴與帶有取代基為R1，R2，R3的三級(jí)胺或者帶有取代基為R1，R2，R3， R4的三級(jí)二胺的摩爾比值為0. 01 50 ；在反應(yīng)溫度為30 100°C下反應(yīng)0. 5 60小時(shí)； 反應(yīng)完全后將溶液濃縮，經(jīng)過(guò)硅膠柱層析得到具有上述(A)結(jié)構(gòu)的化合物或者(B)結(jié)構(gòu)的 化合物的黃色固體。其中所述的帶有取代基為R1，R2，R3的三級(jí)胺中的取代基R1，R2，R3是直接連接到 三級(jí)胺的氮原子上，所述的R1，R2，R3分別或者同時(shí)獨(dú)立的為1 18個(gè)碳的烷基，芳基，酯基 或者醚基中的一種。所述的帶有取代基為R1，R2，R3，R4的三級(jí)二胺中的取代基R1，R2，R3，R4是分別直接 連接到三級(jí)二胺的兩個(gè)氮原子上，所述的R1，R2，R3，R4分別或者同時(shí)獨(dú)立的為1 18個(gè)碳
的烷基，芳基，酯基或者醚基中的一種。所述的鹵代烷基芳香烴是含有1 8個(gè)碳的烷基的苯，萘，蒽，芘，吲哚，香豆素，熒 光素，咔唑，羅丹明，氰基染料，芴或喹啉中的一種，其中的1 8個(gè)碳的烷基被鹵素取代。所述的鹵素是F—，CF, Br—，I中的一種。所述的有機(jī)溶劑選自甲醇，乙醇，二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，二甲亞砜，乙腈， 二氧六環(huán)，二氯甲烷，苯，甲苯所組成的組中的至少一種。本發(fā)明的檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針能夠用于臨床上檢測(cè)血液中肝素的濃 度；也可用于化學(xué)模擬生物體系中肝素的檢測(cè)，臨床醫(yī)學(xué)上血液、血清或者組織中肝素的檢 測(cè)。本發(fā)明的檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針在使用時(shí)沒(méi)有特殊的限制，可以將探針 分子溶解在生理鹽水或羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)的緩沖水溶液中；或者將探針?lè)肿尤芙?在甲醇，乙醇、乙腈、二甲亞砜，二甲酰胺等有機(jī)溶劑中；或者水和上述有機(jī)溶劑任意比例的 混合溶劑，然后在溶解有探針?lè)肿拥纳鲜鋈芤褐屑尤牒嗡氐难鍢悠?。本發(fā)明提供了一種以季銨鹽為母體，用于檢測(cè)血液中肝素的熒光探針。該熒光探 針對(duì)肝素有很好的選擇性，人血清白蛋白，免疫球蛋白，透明質(zhì)酸，硫酸軟骨素，氨基酸等對(duì) 檢測(cè)沒(méi)有干擾，該熒光探針溶液的熒光強(qiáng)度與肝素的濃度在一定的濃度范圍內(nèi)(肝素濃度 范圍2X10_8到4X10_6摩爾/升)線性關(guān)系良好，表現(xiàn)出良好的實(shí)際應(yīng)用性。本發(fā)明的熒 光探針響應(yīng)時(shí)間短，測(cè)定靈敏度高，分子結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，合成方法簡(jiǎn)便，使得其極易實(shí)際推廣應(yīng) 用。


圖1.本發(fā)明實(shí)施例1中的熒光探針——化合物A對(duì)肝素的選擇性。圖2.本發(fā)明實(shí)施例1中的熒光探針——化合物A的熒光強(qiáng)度與肝素濃度的線形 關(guān)系，橫坐標(biāo)為肝素的濃度，縱坐標(biāo)為熒光強(qiáng)度。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1將三乙胺溶解在無(wú)水甲醇中，加入是三乙胺0.01倍摩爾量的芘甲基溴，100°C回 流反應(yīng)40小時(shí)，將反應(yīng)溶液濃縮后，以二氯甲烷和甲醇的混合溶劑(體積比為15 1)作 為淋洗劑，經(jīng)過(guò)硅膠柱層析得到黃色固體化合物A。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 1. 25(t,9H) ,3. 28(m,6H) ,4. 95(s,2H) ,7. 58 (m, 2H),
7.85 (d, 1H)，8. 18-8. 07 (m, 2H)，8. 33-8. 19 (m, 2H)，8. 50-8. 35 (m, 5H)，8. 53-8. 56 (d, 1H)，
8.85(d, 1H). 13C NMR(1 OOMHz, CDCl3) δ 14，2,28. 5,33. 1,42. 8，122. 5，124. 5，125. 1， 125. 3，126. 2，126. 8，127. 5，127. 9，129. 4，129. 7，130. 2, 131. 3, 132. 2，133. 2，133. 8， 136. 5. ESI-MS m/z = 365. 31M", calcd for C26H39N+365. 24。實(shí)施例2將三乙胺溶解在二氯甲烷和無(wú)水甲醇的混合溶劑中(二氯甲烷和無(wú)水甲醇的體 積比為3 2)，加入是三乙胺50.0倍摩爾量的芘甲基溴，于60°C反應(yīng)60小時(shí)，將反應(yīng)溶液 濃縮后，以二氯甲烷和甲醇的混合溶劑(體積比為15 1)作為淋洗劑，經(jīng)過(guò)硅膠柱層析得 到黃色固體化合物A。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 1. 25(t,9H) ,3. 28(m,6H) ,4. 95(s,2H) ,7. 58 (m, 2H),
7.85 (d, 1H)，8. 18-8. 07 (m, 2H)，8. 33-8. 19 (m, 2H)，8. 50-8. 35 (m, 5H)，8. 53-8. 56 (d, 1H)，
8.85(d, 1H). 13C NMR(100MHz, CDCl3) δ 14，2,28. 5,33. 1,42. 8，122. 5，124. 5，125. 1， 125. 3，126. 2，126. 8，127. 5，127. 9，129. 4，129. 7，130. 2, 131. 3, 132. 2，133. 2，133. 8， 136. 5. ESI-MS m/z = 365. 31M", calcd for C26H39N+365. 24。實(shí)施例3將三甲胺溶解在二氯甲烷和無(wú)水甲醇的混合溶劑中(二氯甲烷和無(wú)水甲醇的體 積比為1 6)，加入是三乙胺50倍摩爾量的蒽甲基溴，于30°C反應(yīng)0.5小時(shí)，將反應(yīng)溶液 濃縮后，以二氯甲烷和甲醇的混合溶劑(體積比為15 1)作為淋洗劑，經(jīng)過(guò)硅膠柱層析得 到黃色固體。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 3. 28 (m，9H)，4. 95 (s，2H)，7. 33 (m，2H)，7. 38 (m，2H)， 7. 85(d，2H)，7· 96(m，2H)，8· 19 (m, 1H) · 13C NMR(100MHz, CDCl3) δ 14，2,28. 5,33. 1,42. 8，
124.5，125. 3，126. 2，126. 8，130. 2，131. 3，132. 2，136. 5. ESI-MS m/z = 286. 27Μ+，calcd for C21H26N+286. 21。實(shí)施例4將N，N- 二甲基十八胺溶解在二氯甲烷和無(wú)水甲醇的混合溶劑中(二氯甲烷和無(wú) 水甲醇的體積比為3 2)，加入是N，N-二甲基十八胺50.0倍摩爾量的芘甲基溴，于60°C 反應(yīng)60小時(shí)，將反應(yīng)溶液濃縮后，以二氯甲烷和甲醇的混合溶劑(體積比為15 1)作為 淋洗劑，經(jīng)過(guò)硅膠柱層析得到黃色固體化合物。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 1. 25 (t，37H)，3. 28 (m，6H)，4. 95 (s，2H)，7. 58 (m，2H)，
7.85 (d, 1H)，8. 18-8. 07 (m, 2H)，8. 33-8. 19 (m, 2H)，8. 50-8. 35 (m, 5H)，8. 53-8. 56 (d, 1H)，
8.85(d, 1H). 13C NMR(1 OOMHz, CDCl3) δ 14，2,28. 5,33. 1,42. 8，122. 5，124. 5，125. 1，
125.3，126. 2，126. 8，127. 5，127. 9，129. 4，129. 7，130. 2, 131. 3, 132. 2，133. 2，133. 8， 136. 5. ESI-MS m/z = 561. 31M", calcd for C4。H59N+561. 24。
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實(shí)施例5將三乙胺溶解在二氯甲烷和無(wú)水甲醇的混合溶劑中(二氯甲烷和無(wú)水甲醇的體 積比為3 2)，加入是三乙胺50.0倍摩爾量的芘己基溴，于60°C反應(yīng)60小時(shí)，將反應(yīng)溶液 濃縮后，以二氯甲烷和甲醇的混合溶劑(體積比為15 1)作為淋洗劑，經(jīng)過(guò)硅膠柱層析得 到黃色固體化合物。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 1. 25(t，9H)，1. 73 (m, 10H) ,3. 28(m，6H) ,4. 95 (s， 2H)，7. 58 (m, 2H)，7. 85 (d, 1H)，8. 18-8. 07 (m, 2H)，8. 33-8. 19 (m, 2H)，8. 50-8. 35 (m, 5H)， 8. 53-8. 56 (d, 1H) ,8. 85 (d, 1H). 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 14，2,28. 5,33. 1,42. 8，122. 5， 124. 5，125. 1, 125. 3，126. 2，126. 8，127. 5，127. 9，129. 4，129. 7，130. 2，131. 3，132. 2， 133. 2，133. 8，136. 5. ESI-MS m/z = 365. 31M", calcd forC31H49N+435. 24。實(shí)施例6將四甲基乙二胺溶解在二氯甲烷和無(wú)水甲醇的混合溶劑中(二氯甲烷和無(wú)水甲 醇的體積比為1 6)，加入是四甲基乙二胺10倍摩爾量的蒽甲基溴，于50°C反應(yīng)0.5小時(shí)， 將反應(yīng)溶液濃縮后，以二氯甲烷和甲醇的混合溶劑(體積比為15 1)作為淋洗劑，經(jīng)過(guò)硅 膠柱層析得到黃色固體。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 3. 28 (m，12H)，3. 24 (t，4H)，4. 95 (s，2H)，7. 33 (m，4H)， 7. 38(m，4H)，7· 85(d，4H)，7· 96(m，4H)，8· 19(m,4H). 13C NMR (1 OOMHz, CDCl3) δ 55. 1,59. 2， 60. 4，124. 5，125. 3，126. 2，126. 8，130. 2，131. 3，132. 2，136. 5. ESI-MS m/z = 498. 37M2+， calcd for C36H38N22+498. 43。實(shí)施例7將四乙基辛二胺溶解在二氯甲烷和無(wú)水甲醇的混合溶劑中(二氯甲烷和無(wú)水甲 醇的體積比為1 6)，加入是四乙基己二胺10倍摩爾量的蒽甲基溴，于50°C反應(yīng)0.5小時(shí)， 將反應(yīng)溶液濃縮后，以二氯甲烷和甲醇的混合溶劑(體積比為15 1)作為淋洗劑，經(jīng)過(guò)硅 膠柱層析得到黃色固體。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 1. 25 (t，12H)，1. 29 (m，8H)，1. 73 (m，4H)，3. 28 (m，8H)， 3. 24 (t,4H)，4. 95 (s,4H)，7. 33 (m, 4H)，7. 38 (m, 4H)，7. 85 (d, 4H)，7. 96 (m, 4H)，8. 19 (m, 2H). 13C NMR(100MHz, CDCl3) δ 14，2,22. 5,28. 5,55. 1,59. 2,60. 4，124. 5，125. 3，126. 2， 126. 8，130. 2，131. 3，132. 2，136. 5. ESI-MS m/z = 610. 37M2+，calcd for C46H58N22+610. 43。實(shí)施例8請(qǐng)參見圖1。熒光探針對(duì)肝素的選擇性使用實(shí)施例1中的化合物A作為熒光探針，并評(píng)價(jià)該熒光探針對(duì)肝素的選擇性，該 熒光探針的激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，發(fā)射波長(zhǎng)為486nm。將化合物A溶解在HEPES緩沖溶液中 (pH =7.4),得到濃度為1. 0 X ΙΟ"5摩爾/升的化合物A溶液，該化合物A的熒光曲線在圖 1中以化合物A表示。當(dāng)向上述化合物A溶液中加入是化合物A 10倍摩爾量的磷酸根，單 磷酸腺苷、三磷酸腺苷、硫酸根、醋酸根、透明質(zhì)酸陰離子、谷氨酸陰離子或天冬氨酸陰離子 時(shí)，該化合物A溶液的熒光強(qiáng)度完全沒(méi)有變化(圖中以化合物A+陰離子表示)。當(dāng)向上述 化合物A溶液中加入的是化合物A 1倍摩爾量的肝素時(shí)，該化合物A溶液的熒光強(qiáng)度增強(qiáng) 近100倍(圖中以化合物A+肝素表示)。而加入是化合物A 10倍摩爾量的硫酸軟骨素時(shí)， 該化合物A溶液的熒光強(qiáng)度幾乎沒(méi)有明顯變化(圖中以化合物A+硫酸軟骨素表示)，由上
8述結(jié)果可說(shuō)明，在將該化合物A作為熒光探針時(shí)，該熒光探針對(duì)肝素有良好的選擇性識(shí)別 和實(shí)際應(yīng)用性。實(shí)施例9請(qǐng)參見圖2。熒光探針的熒光強(qiáng)度與肝素濃度的線形關(guān)系使用實(shí)施例1中的化合物A作為熒光探針，并評(píng)價(jià)該熒光探針的熒光強(qiáng)度與肝素 濃度的線形關(guān)系。將化合物A溶解在HEPES緩沖溶液中&!1 = 7.4)，得到濃度為1.0\10_5 摩爾/升的化合物A溶液。圖2是化合物A在最大發(fā)射波長(zhǎng)為486納米處的熒光強(qiáng)度隨肝 素濃度的變化曲線，結(jié)果表明化合物A溶液的熒光強(qiáng)度與肝素的濃度在2X 10_8到4X 10_6 摩爾/升的范圍內(nèi)線形關(guān)系良好，該濃度仍然低于正常的血液中肝素的含量2. 4X ΙΟ"6,表 現(xiàn)出良好的實(shí)際應(yīng)用性。
權(quán)利要求
一種檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針，其特征是，所述的熒光探針是具有以下結(jié)構(gòu)的季銨鹽其中R1，R2，R3，R4分別或者同時(shí)獨(dú)立的為1～18個(gè)碳的烷基，芳基，酯基或者醚基中的一種；n，m，g分別或者同時(shí)獨(dú)立的為0～8；Ar，Ar1，Ar2分別或者同時(shí)獨(dú)立的為苯，萘，蒽，芘，吲哚，香豆素，熒光素，咔唑，羅丹明，氰基染料，芴或喹啉中的一種；X 為F ，Cl ，Br ，I 中的一種，為正電荷。F2009100865320C0000011.tif,F2009100865320C0000012.tif
2. 一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針的合成方法，其特征 是將帶有取代基為RSR2，! 3的三級(jí)胺或者帶有取代基為R1，! 2，! 3，! 4的三級(jí)二胺溶解在有 機(jī)溶劑中，加入鹵代烷基芳香烴，其中，鹵代烷基芳香烴與帶有取代基為R1，R2，R3的三級(jí)胺 或者帶有取代基為R1，R2，R3，R4的三級(jí)二胺的摩爾比值為0. 01 50 ；在反應(yīng)溫度為30 100°C下反應(yīng)0. 5 60小時(shí)；反應(yīng)后將溶液濃縮，經(jīng)過(guò)硅膠柱層析得到具有下述(A)結(jié)構(gòu)的 化合物或者(B)結(jié)構(gòu)的化合物的黃色固體；其中所述的帶有取代基為R1，R2，R3的三級(jí)胺中的取代基R1，R2，R3是直接連接到三級(jí) 胺的氮原子上，所述的R1，R2，R3分別或者同時(shí)獨(dú)立的為1 18個(gè)碳的烷基，芳基，酯基或者 醚基中的一種；所述的帶有取代基為R1，R2，R3，R4的三級(jí)二胺中的取代基R1，R2，R3，R4是分別直接連接 到三級(jí)二胺的兩個(gè)氮原子上，所述的R1，R2，R3，R4分別或者同時(shí)獨(dú)立的為1 18個(gè)碳的烷 基，芳基，酯基或者醚基中的一種；所述的鹵代烷基芳香烴是含有1 8個(gè)碳的烷基的苯，萘，蒽，芘，吲哚，香豆素，熒光 素，咔唑，羅丹明，氰基染料，芴或喹啉中的一種，其中的1 16個(gè)碳的烷基被鹵素取代； 所述的鹵素是F_，Cl_，Br", Γ中的一種； (A)結(jié)構(gòu)的化合物或者⑶結(jié)構(gòu)的化合物中的R1，! 2，! 3，! 4分別或者同時(shí)獨(dú)立的為1 18個(gè)碳的烷基，芳基，酯基或者醚基中的一種；n，m，g分別或者同時(shí)獨(dú)立的為0 8 ；Ar, Ar1,Ar2分別或者同時(shí)獨(dú)立的為苯，萘，蒽，芘，吲哚，香豆素，熒光素，咔唑，羅丹明，氰基染料，芴 或喹啉中的一種-X為F_，Cl_，Br_，Γ中的一種，@為正電荷。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述的有機(jī)溶劑選自甲醇，乙醇，二甲基甲 酰胺，二甲基乙酰胺，二甲亞砜，乙腈，二氧六環(huán)，二氯甲烷，苯，甲苯所組成的組中的至少一 種。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針的用途，其特征是所 述的檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針能夠用于臨床上檢測(cè)血液中肝素的濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及高選擇性、高靈敏度檢測(cè)肝素，尤其是檢測(cè)血液中肝素含量的熒光探針及合成方法和用途。將帶有取代基R1，R2，R3的三級(jí)胺或者帶有取代基R1，R2，R3，R4的三級(jí)二胺溶解在有機(jī)溶劑中，加入鹵代烷基芳香烴，其中，鹵代烷基芳香烴與帶有取代基R1，R2，R3的三級(jí)胺或者帶有取代基R1，R2，R3，R4的三級(jí)二胺的摩爾比值為0.01～50；在反應(yīng)溫度為30～100℃下反應(yīng)0.5～60小時(shí)，將溶液濃縮后，利用硅膠柱層析得到(A)結(jié)構(gòu)或(B)結(jié)構(gòu)的化合物。本發(fā)明的熒光探針對(duì)肝素具有良好的選擇性，本身沒(méi)有毒副作用，對(duì)肝素的檢測(cè)限可以達(dá)到2.0×10-8摩爾/升，適用于血液中肝素的檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N21/64GK101906049SQ20091008653
公開日2010年12月8日 申請(qǐng)日期2009年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月5日
發(fā)明者代青, 莊曉青, 曾林濤, 汪鵬飛 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院理化技術(shù)研究所