專利名稱：檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生物工程技術領域的尿液代謝物的檢測方法，特別是涉及 一種檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法。
背景技術：
三甲基氯化錫為晶狀固體，具有腐敗青草氣味，常溫下易揮發(fā)。工業(yè)上接 觸到的三甲基氯化錫主要是來源于有機錫塑料穩(wěn)定劑，三甲基氯化錫是生產(chǎn)有 機錫穩(wěn)定劑中所產(chǎn)生的副產(chǎn)品，具有高度毒性，可通過呼吸道、消化道和皮膚 黏膜進入機體。生活中用到的有機錫塑料都會含有三甲基氯化錫，人體接觸到 的概率非常高，存在相當大的危害。
氯丙嗪為乳白色粉末，微臭，味極苦，有吸濕性，遇光漸變色，水溶液呈 酸性。氯丙嗪作為一種鎮(zhèn)靜劑，除了臨床上通常用于抗精神藥物外，還可作為 獸藥用做動物鎮(zhèn)靜劑。隨著集約化畜牧業(yè)的發(fā)展,獸藥的使用量也在日漸增加。 在給畜牧業(yè)帶來方便的同時，也給環(huán)境及人類健康帶來了負面的影響。首先,獸 藥原形或代謝^物可能蓄積、貯存在動物的細胞、組織、器官或可食性產(chǎn)品(如 蛋、奶)中，產(chǎn)生獸藥殘留。獸藥殘留對人類的健康存在著較大的潛在危害。除 了在動物性食品中的殘留外,獸藥還可以隨動物的糞便、尿液排出體外,造成水 體和土壤環(huán)境的污染。由于土壤的淋溶作用，獸藥又可以在土壤中遷移，使地下 水受到污染，進而有可能對整個生態(tài)系統(tǒng)造成不良效應。
鑒于環(huán)境污染的形勢非常嚴峻，建立環(huán)境污染對人體危害的預警體系非常 有必要。通過查閱文獻我們發(fā)現(xiàn)，目前國內(nèi)學者對環(huán)境污染物三甲基氯化錫和
氯丙嗪內(nèi)暴露代謝物的研究所采用的方法有很多，包括GC、 HPLC、 GC-MS、酶 聯(lián)免疫吸附法標等；方法中使用的儀器型號也種類不一，以GC-MS為例，使用 日本島津GC-14A和美國安捷倫6890N-5973MSD等的兼而有之；并無專門的機構對環(huán)境污染物質及其代謝產(chǎn)物的人體內(nèi)暴露進行檢測。大部分研究致力于對單 項污染物質進行檢測，同種物質采用的方法也不盡相同，而且關注重點在于提 高污染物質的回收率，忽視了檢測種類的全面性和綜合性，檢測成本較高，難 以系統(tǒng)化全面評價人體的污染物接觸程度，不利于產(chǎn)業(yè)化推廣到普通人群。
在所采用的檢測方法當中，與其他方法相比，用氣質聯(lián)用檢測樣本，檢測 靈敏度高，能定性定量，為檢測低濃度代謝物提供條件，并且其自動化檢測更 容易進行大批量的測定。方法方便，快捷，準確。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種方法簡便、快捷、結果可靠、自動 化程度高、便于產(chǎn)業(yè)化應用的檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法。 本發(fā)明方法是通過以下技術方案實現(xiàn)的，其特征在于包括以下步驟 第一步，將收集的尿液離心后保存；
第二步，取第一步得到的尿液，加入氫氧化鈉和氯化鈉，再加入乙酸乙酯，
蝸旋，離心進行萃??；
第三步，吸出有機相，加入無水硫酸鈉除水，常溫常壓下用氮氣濃縮； 第四步取第三步中的濃縮液用于氣相色譜質譜聯(lián)用測定。 本發(fā)明具有以下優(yōu)點
1. 本發(fā)明采用尿樣作為檢測樣本，對人體無損傷，方便且易獲得。
2. 在面對同樣的環(huán)境污染條件下，個人受損傷程度并不一致。本發(fā)明致力 于對人環(huán)境污染物質內(nèi)暴露(尿樣)水平的測定，能真實反映暴露水平和個人 損傷程度。不僅反映了多種途徑暴露的總水平，而且能避免由環(huán)境外暴露劑量 估計暴露水平時吸收率的個體差異性的影響。
3. 用氣質聯(lián)用檢測樣本，檢測靈敏度高，能定性定量，為檢測低濃度代謝 物提供條件，并且其自動化檢測更容易進行大批量的測定。方法方便，快捷， 準確。
4. 本發(fā)明以盡可能少的步驟同時檢測三甲基氯化錫和氯丙嗪，檢測成本低， 能系統(tǒng)化全面評價人體的污染物接觸程度，有利于產(chǎn)業(yè)化推廣到普通人群。5. 本發(fā)明通過同時檢測三甲基氯化錫和氯丙嗪內(nèi)暴露對人的健康危害，建 立這兩種污染物內(nèi)暴露對健康危害程度評價的參考標準。通過這個檢測方法的 建立，人們能對自身健康迸行評價，知道這些環(huán)境污染物對自己的危害程度， 為診斷或預測其患有某種疾病的可能性和發(fā)展趨勢提供科學依據(jù)。
6. 在同時檢測三甲基氯化錫和氯丙嗪內(nèi)暴露健康危害的同時，還進行跟蹤 和干預。對有安全隱患的個體進行飲食、作息、生活習慣等等各種因素的調(diào)整， 把威脅隱患降到最低。
圖1是本發(fā)明實施例1所得用乙酸乙酯萃取1號人體尿液所得氣相質譜選 擇離子流圖。
圖2是本發(fā)明實施例1所得用乙酸乙酯萃取2號人體尿液所得氣相質譜選 擇離子流圖。
圖3是本發(fā)明實施例1所得用乙酸乙酯萃取3號人體尿液所得氣相質譜選 擇離子流圖。_
具體實施例方式
本發(fā)明方法的各個步驟如下
第一步，將收集的尿液離心后保存，保存溫度為-20 °C;
第二步，取第一步得到的尿液，加入氫氧化鈉和氯化鈉，再加入乙酸乙酯， 蝸旋，離心進行萃取；
所述取尿液的體積為10ml，所述氫氧化鈉加入的量為200ul，質量分數(shù)為 5%;氯化鈉加入的量為3g，乙酸乙酯加入的量為10ml。所述蝸旋的轉速為 1500rpm，時間為5min。所述離心的轉速為3000rpm，時間為4min。
第三步，吸出有機相，加入無水硫酸鈉除水，常溫常壓下用氮氣濃縮；
所述無水硫酸鈉的用量為5g，濃縮后最后定容至500ul。
第四步取第三步中的濃縮液用于氣相色譜質譜聯(lián)用測定。 所取濃縮液迸樣體積為1 5ul，優(yōu)選2ul。
所述用于氣相色譜質譜聯(lián)用測定的條件為色譜柱選擇中等極性或非極性色譜柱中的一種，電離方式為El源電離，電離電壓為70eV ，離子源溫度在 220 250°C ，迸樣口溫度在250 °C 280 °C。 實施例1
取-20 "C保存的3份尿樣，分別標記為1、 2、 3號，自然解凍后離心，分 別同時進行以下實驗操作步驟吸取10 ml尿樣于萃取瓶中，加5%NaOH 200ul， 3 g氯化鈉，再加入10ml乙酸乙酯進行萃取，1500rpm蝸旋5min， 3000rpm離心 4min，吸出有機相，加入5g無水硫酸鈉除水后，常溫常壓下用氮氣濃縮，濃縮 后最后定容至500ul進樣分析。取lul反應液用于氣相色譜質譜聯(lián)用測定。GC/MS 條件為采用DB-5ms柱，EI離子源，電壓為70eV，離子源溫度為230°C,進 樣口溫度為280 T。采用SIM方式采集實驗結果。結果如附圖l、 2、 3所示。 圖1為1號尿樣SIM色譜圖，從中同時分析出了三甲基氯化錫和氯丙嗪。圖2 為2號尿樣SIM色譜圖，從中分析出了氯丙嗪。圖3為3號尿樣SIM色譜圖， 從中分析出了三甲基氯化錫。
本方法可用于人體尿液中三甲基氯化錫的檢測，也可以用于人體尿液中氯 丙嗪的檢測，還可以用于同時檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪。通過對 人體樣本的檢測，反映個體的三甲基氯化錫和氯丙嗪的內(nèi)暴露情況，可以預防 三甲基氯化錫和氯丙嗪這兩種環(huán)境污染物對人造成的危害和疾病，從而說明個 體的環(huán)境污染物接觸情況，提示個體改善生活習慣方式，減少污染物的接觸， 提高健康水平。同時本方法還可以作為環(huán)境監(jiān)測的指標，來對人們的居住環(huán)境 進行評價。
權利要求
1. 檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法，其特征在于，包括以下步驟第一步，將收集的尿液離心后保存；第二步，取第一步得到的尿液，加入氫氧化鈉和氯化鈉，再加入乙酸乙酯，蝸旋，離心進行萃??；第三步，吸出有機相，加入無水硫酸鈉除水，常溫常壓下用氮氣濃縮；第四步取第三步中的濃縮液用于氣相色譜質譜聯(lián)用測定。
2. 如權利要求l所述的檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法，其 特征是，第一步中，所述尿液離心后保存的溫度為-20 °C 。
3. 如權利要求l所述的檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法，其 特征是，第二步中，所述取尿液的體積為10ml，所述氫氧化鈉加入的量為200ul， 質量分數(shù)為5%;氯化鈉加入的量為3g，乙酸乙酯加入的量為10ml。
4. 如權利要求l所述的檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法，其 特征是，第二步中，所述蝸旋的轉速為1500rpin，時間為5min。所述離心的轉 速為3000rpm，時間為4min。
5. 如權利要求l所述的檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法，其 特征是，第三步中，所述無水硫酸鈉的用量為5g，濃縮后最后定容至500ul。
6. 如權利要求l所述的檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法，其 特征是，第四步中，所取濃縮液進樣體積為1 5ul。
7. 如權利要求1所述的檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法，其 特征是所述用于氣相色譜質譜聯(lián)用測定的條件為色譜柱選擇中等極性或非極 性色譜柱中的一種，電離方式為E1源電離，電離電壓為70eV ，離子源溫度在 220 250°C ，進樣口溫度在250 。C 28Q 。C。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物工程技術領域的尿液代謝物的檢測方法，特別是涉及一種檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法；其特征在于包括以下步驟第一步，將收集的尿液離心后保存；第二步，取第一步得到的尿液，加入氫氧化鈉和氯化鈉，再加入乙酸乙酯，蝸旋，離心進行萃?。坏谌?，吸出有機相，加入無水硫酸鈉除水，常溫常壓下用氮氣濃縮；第四步取第三步中的濃縮液用于氣相色譜質譜聯(lián)用測定；本發(fā)明具有簡便、快捷、結果可靠、自動化程度高、便于產(chǎn)業(yè)化應用的檢測人體尿液中三甲基氯化錫和氯丙嗪的方法。
文檔編號G01N30/00GK101487830SQ20091009606
公開日2009年7月22日 申請日期2009年2月6日 優(yōu)先權日2009年2月6日
發(fā)明者吳鴛鴦, 陳樞青 申請人:陳樞青;施衛(wèi)星;柳志明