專利名稱：米格列醇純度的間接測試法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種米格列醇純度的間接測試法。
背景技術(shù)：
米格列醇是一種n型糖尿病抑制藥物，其結(jié)構(gòu)為(I):
oh
/oh 、
由于米格列醇為多羥基化合物，分子間作用力強(主要為氫鍵)，同時分子量較大，
揮發(fā)度低，而且極性強，不能直接進行氣相色譜(GC)檢測。目前關(guān)于米格列醇的檢測多用高效液相色譜法(HPLC)，其存在著以下不足之處(1)米格列醇對檢測器挑剔，因無紫外吸收，所以不能用靈敏度高的紫外檢測器；(2)現(xiàn)在一般用視差折光檢測器，卻存在著靈敏度低、易受環(huán)境溫度以及流動相影響的缺點，導(dǎo)致檢測結(jié)果誤差大；(3)該法對設(shè)備要求高，而且操作復(fù)雜。
與HPLC相比，GC具有檢測速度快、靈敏度高以及操作簡便、應(yīng)用廣泛的優(yōu)點，因此如果能利用GC來間接獲得米格列醇的純度就非常有必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種米格列醇純度的間接測試法。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種米格列醇純度的間接測試法，包括以下步驟:
1) 、以待測的米格列醇作為底物，醋酐作為乙酰化試劑進行乙?；磻?yīng)，醋酐米
格列醇的質(zhì)量比=3~30: 1，反應(yīng)溫度85 105'C，反應(yīng)時間l 3h;得含有乙酸-P-(3,4，5-三
乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液；
2) 、對含乙酸-e -(3，4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液進行氣相色譜分析，得到其各組分在氣相色譜中的保留時間以及峰面積，除去輕組分的峰面積后，根據(jù)歸一化法推算獲得米格列醇的純度。
作為本發(fā)明的米格列醇純度的間接測試法的改進，醋酐米格列醇的質(zhì)量比=10~13:1，反應(yīng)溫度90 100'C，反應(yīng)時間2h。
作為本發(fā)明的米格列醇純度的間接測試法的另一種改進，步驟l)采用無水吡啶作為
催化劑，無水吡啶米格列醇的質(zhì)量比=0.4~0.8: 1，反應(yīng)時間l 2.5h。
作為本發(fā)明的米格列醇純度的間接測試法的進一步改進，醋酐米格列醇的質(zhì)量比
=7~10: 1，反應(yīng)溫度90 10(TC，反應(yīng)時間2h。
本發(fā)明還同時提供了另一種米格列醇純度的間接測試法，包括以下步驟
1) 、以待測的米格列醇作為底物，丙酸酐作為?；噭?，在無水吡啶的催化作用下
進行?；磻?yīng)，丙酸酐:米格列醇的質(zhì)量比=8~12: 1 ，無水吡啶米格列醇的質(zhì)量比=0.4~0.8:
1，反應(yīng)溫度95 100。C，反應(yīng)時間2 2.5h;得含有丙酸-e-(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液；
2) 、對丙酸-e-(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液進行氣相色譜分析，得到其各組分在氣相色譜中的保留時間以及峰面積，除去輕組分的峰面積后，根據(jù)歸一化法推算獲得米格列醇的純度。
本發(fā)明方法的步驟l)，可如下式所示:
其中R = -CH3￡""-CH2CH:
本發(fā)明的米格列醇純度的間接測試法，由于首先將米格列醇酯化衍生，從而消除了分子鍵的氫鍵作用，因此能顯著改善其揮發(fā)度，以便于進行定量分析(氣相色譜檢測)。測試步驟可按下述方案進行取酯化反應(yīng)液作為樣品直接進氣相色譜儀檢測，得到的譜圖中除去羧酸、酸酐以及吡啶這些輕組份的峰后進行歸一化，即可得知米格列醇的純度。
綜上所述，本發(fā)明的米格列醇純度的間接測試法，利用氣相色譜檢測法進行定量分析，利用衍生法能有效提高米格列醇揮發(fā)度而在GC中被檢測到的性質(zhì)，解決了米格列醇不能
采用GC法檢測的問題。
本發(fā)明的米格列醇純度的間接測試法，其特點在于以低成本、高靈敏度的氣相色譜法，替代了原有的高成本、低靈敏度視差折光檢測器的液相色譜。因此，本發(fā)明具有測試方法簡單、測試結(jié)果準確的特點。
將本發(fā)明在步驟l)所得的米格列醇全酯化衍生物[即含有乙酸-P-(3，4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液或者含有丙酸-^(3，4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液]進行提取，可得到淺灰色粉末狀的乙酸-P -(3，4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯[或者是丙酸-0-(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯]。提取方法為將酯化反應(yīng)液減壓脫輕組分(生成的羧酸、未反應(yīng)完的酸酐、未反應(yīng)完的催化劑無水吡啶)至糖漿狀，加入2 5倍體積量去離子水，室溫下靜置l 2h析出固體，減壓過濾，水洗，固體5(TC烘干。


下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式
作進一步詳細說明。
圖1是本發(fā)明的乙酸-e-(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯(即五乙酸米格列醇酯)的H-NMR以及其中所采用的原子編號圖。
圖2是本發(fā)明的丙酸-e-(3，4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯(即五丙酸米格列醇酯)的H-NMR以及其中所采用的原子編號圖。
具體實施例方式
實施例l、 一種米格列醇純度的間接測試法，包括以下步驟
1) 、 50ml三口瓶中加入1.86g待測米格列醇白色粉末(為純品)，17ml醋酐，lml無水吡啶，機械攪拌，空氣冷凝管回流，控制加熱溫度93 97。C，反應(yīng)2h后停止反應(yīng)，得含有乙酸-P -(3，4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液(大約為20 25ml)。
2) 、對上述酯化反應(yīng)液直接取樣進行檢測，所用氣相色譜儀配套氫火焰監(jiān)測器以及程序升溫，得到含有乙酸-e-(3,4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯、輕組分(生成的乙酸、未反應(yīng)完的醋酐、未反應(yīng)完的催化劑無水吡啶)的氣相色譜圖，除去輕組分后對峰面積進行歸一化處理，從而得知乙酸-e -(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯質(zhì)量百分含量為99.9%，沒有其他雜質(zhì)。由于米格列醇全部轉(zhuǎn)變成了乙酸-e-(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌P定)-乙酯，推算得米格列醇純度為99.9%。
推算方法如下
將乙酸-e-(3,4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯的質(zhì)量百分含量換算為摩爾百分含量，此摩爾百分含量與待測樣品中米格列醇的摩爾百分含量一致，得到了摩爾百分含量，再將其換算為質(zhì)量百分含量，即為樣品米格列醇純度。 待測米格列醇樣實際純度為100%，測試準確度為99.9%。
將完全同實施例l的步驟l)所述方法獲得的含有乙酸-e-(3，4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧 甲基-l-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液進行提取，提取方法如下
將該酯化反應(yīng)液減壓脫輕組分(生成的乙酸、未反應(yīng)完的酸酐、未反應(yīng)完的催化劑 無水吡啶)至糖漿狀，加入2 5倍體積量的去離子水，室溫下靜置l 2h，析出固體，減壓 過濾，水洗，固體5(TC烘干。所得固體經(jīng)HNMR檢測，證明其結(jié)構(gòu)為乙酸-e-(3,4，5-三乙 酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯，HNMR圖譜及其原子編號圖如圖1所示，圖l中
HNMR(400MHz， d6-DMSO): 4.99~5.04(t， 1H, 4-H)， 4.83~4.88(t, 1H， 5-H), 4.75~4.81(m, 1H， 3-H), 4.03~4.17(m， 4H， 8國2H, 21-2H), 3.09~3.13(t, 1H, 6-H), 2.83~3.00(m, 3H， 2-H， 7-2H): 2.58~2.64(t, 1H， 2鄰,2.01(s， 3H, CH3), 2.00(s, 3H， CH3),1.99(s， 3H, CH3)， 1.98(s， 3H, CH3), 1.96(s， 3H, CH3)
結(jié)構(gòu)式如式l:
實施例2、 一種米格列醇純度的間接測試法，包括以下步驟
1) 、 50ml三口瓶中加入1.86g待測的米格列醇白色粉末(由1.60g純品米格列醇+0.26g 山梨醇組成)，20ml醋酐，機械攪拌，空氣冷凝管回流，控制加熱溫度93 97。C，反應(yīng)2h， 停止反應(yīng)，得含有乙酸-e-(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯(結(jié)構(gòu)式如式l) 的酯化反應(yīng)液。
2) 、對上述酯化反應(yīng)液直接取樣進行檢測，所用氣相色譜儀配套氫火焰監(jiān)測器以及 程序升溫，得到含有乙酸-e-(3，4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯、以及雜質(zhì)(山 梨醇酯化物)、輕組分(包括生成的乙酸、未反應(yīng)完的醋酐)的氣相色譜圖。除去輕組分
(式l)
6后對峰面積進行歸一化處理，得出乙酸-e -(3,4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯 質(zhì)量百分含量為84.7%，由于米格列醇全部轉(zhuǎn)變成了乙酸-e -(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲 基-l-哌啶)-乙酯，推算得米格列醇純度為86.7%。
待測米格列醇樣實際純度為86.0%，測試準確度為99.2%。
實施例3、 一種米格列醇純度的間接測試法，將實施例2中的1.86g待測的米格列醇白 色粉末改成由1.50g純品米格列醇+0.36g山梨醇組成，其余內(nèi)容同實施例2;所得結(jié)果如下
乙酸-e-(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯質(zhì)量百分含量為78.6。/。，由于 米格列醇全部轉(zhuǎn)變成了乙酸-e-(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯，推算得米 格列醇純度為81.2%。
待測米格列醇樣實際純度為80.6%，測試準確度為99.3%。
實施例4、 一種米格列醇純度的間接測試法，依次進行以下步驟
1) 、 50ml三口瓶中加入2.17g米格列醇白色粉末(為純品)，22ml丙酸酐，lml無水吡 啶，機械攪拌，空氣冷凝管回流，控制加熱溫度93 97'C，反應(yīng)2.5h，停止反應(yīng)，得含有 丙酸-e-(3，4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液。
2) 、對上述酯化反應(yīng)液直接取樣進行檢測，所用氣相色譜儀配套氫火焰監(jiān)測器以及 程序升溫，得到含有丙酸-e-(3,4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯、輕組分(生 成的丙酸、未反應(yīng)完的丙酸酐、未反應(yīng)完的催化劑無水吡啶)的氣相色譜圖，除去輕組分 后對峰面積進行歸一化處理，從而得知丙酸-P -(3,4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯質(zhì)量百分含量為99.9%。由于米格列醇全部轉(zhuǎn)變成了丙酸-e -(3,4，5-三乙酰氧基-2-乙酰 氧甲基-l-哌啶)-乙酯，推算得米格列醇純度為99.9%。
待測米格列醇樣實際純度為100%，測試準確度為99.9%。
同樣，將完全同實施例4的步驟1)所述方法獲得的含有丙酸-3-(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液進行提取方法，提取方法同上，所得固體經(jīng)HNMR 檢測，證明其結(jié)構(gòu)為丙酸-P-(3，4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯，其HNMR譜 圖以及原子編號圖如圖2所示，圖2中
HNMR(400MHz, d6-DMSO): 5.14~5.16(t, 1H, 4-H), 4.51~4.59(m， 2H, 3-H, 5-H), 4.16~4.28(m， 3H, 8-2H, 21-H)， 3.99~4.02(d, 1H, 21-H), 3.40~3.43(m， 1H， 6-H), 2.58~2.66(m,3H， 2-H, 7國2H), 2'33 2.39(t, 1H, 2陽H)，2.25 2.31(q, IOH， 5CH2), 1.10~1.17(t, 15H， 5CH3) 結(jié)構(gòu)式如式2所示
實施例5、 一種米格列醇純度的間接測試法，將實施例4中的2.17g待測的米格列醇改 成由1.918純品米格列醇+0.26§山梨醇組成，其余內(nèi)容同實施例4;所得結(jié)果如下
丙酸^-(3，4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯量百分含量為86.3%，由于米 格列醇全部轉(zhuǎn)變成了乙酸-e-(3，4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-l-哌啶)-乙酯，推算得米格 列醇純度為88.4%。
待測米格列醇樣實際純度為88.0%，測試準確度為99.5%。
最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個具體實施例。顯然，本發(fā)明 不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直 接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認為是本發(fā)明的保護范圍。
(式2)
8
權(quán)利要求
1、一種米格列醇純度的間接測試法，其特征是包括以下步驟1)、以待測的米格列醇作為底物，醋酐作為乙酰化試劑進行乙?；磻?yīng)，醋酐∶米格列醇的質(zhì)量比＝3～30∶1，反應(yīng)溫度85～105℃，反應(yīng)時間1～3h；得含有乙酸-β-(3，4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液；2)、對含乙酸-β-(3，4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液進行氣相色譜分析，得到其各組分在氣相色譜中的保留時間以及峰面積，除去輕組分的峰面積后，根據(jù)歸一化法推算獲得米格列醇的純度。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的米格列醇純度的間接測試法，其特征是醋酐米格列醇的質(zhì)量比=10~13: 1，反應(yīng)溫度90 100。C，反應(yīng)時間2h。
3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的米格列醇純度的間接測試法，其特征是所述步驟l)采用無水 吡啶作為催化劑，無水吡啶米格列醇的質(zhì)量比=0.4~0.8: 1，反應(yīng)時間l 2.5h。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的米格列醇純度的間接測試法，其特征是醋酐米格列醇的質(zhì)量比=7~10: 1，反應(yīng)溫度90 100。C,反應(yīng)時間2h。
5、 一種米格列醇純度的間接測試法，其特征是包括以下步驟1) 、以待測的米格列醇作為底物，丙酸酐作為?；噭跓o水吡啶的催化作用下進行?；磻?yīng)，丙酸酐米格列醇的質(zhì)量比=8~12: 1，無水吡啶米格列醇的質(zhì)量比=0.4~0.8: 1，反應(yīng)溫度95 10(TC，反應(yīng)時間2 2.5h;得含有丙酸-P-(3，4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌 啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液；2) 、對丙酸-P -(3,4,5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液進行氣相色譜分析，得到其各組分在氣相色譜中的保留時間以及峰面積，除去輕組分的峰面積后，根據(jù) 歸一化法推算獲得米格列醇的純度。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種米格列醇純度的間接測試法，包括以下步驟1)以待測的米格列醇作為底物，醋酐作為乙?；噭┻M行乙?；磻?yīng)，得含有乙酸-β-(3，4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液；或者以待測的米格列醇作為底物，丙酸酐作為?；噭跓o水吡啶的催化作用下進行?；磻?yīng)，得含有丙酸-β-(3，4，5-三乙酰氧基-2-乙酰氧甲基-1-哌啶)-乙酯的酯化反應(yīng)液；2)對上述酯化反應(yīng)液進行氣相色譜分析，得到其各組分在氣相色譜中的保留時間以及峰面積，除去輕組分的峰面積后，根據(jù)歸一化法推算獲得米格列醇的純度。本發(fā)明的間接測試法具有測試方法簡單、測試結(jié)果準確的特點。
文檔編號G01N30/00GK101487827SQ20091009619
公開日2009年7月22日 申請日期2009年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月19日
發(fā)明者旭 張, 帥 王, 陳新志 申請人:浙江大學(xué)