專(zhuān)利名稱(chēng)：一種測(cè)定環(huán)吡酮胺的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種測(cè)定環(huán)吡酮胺的方法，更具體的說(shuō)是一種通
過(guò)環(huán)糊精包合環(huán)吡酮胺來(lái)測(cè)定環(huán)吡酮胺乳膏中環(huán)吡酮胺的高效液相色譜方法。
背景技術(shù)：
環(huán)吡酮胺又名環(huán)吡司胺、環(huán)匹羅司胺。分子式為(:14112^03，其結(jié)構(gòu)式如下
0H
CH3 分子量為268. 36，具有低毒性和強(qiáng)力的血清滲透的特點(diǎn)，它對(duì)皮膚真菌、白色念珠菌等有強(qiáng)力的滅菌作用，在治療真菌引起的皮膚角質(zhì)化疾病上有較好的效果。其濃度為4 8 g/ml時(shí)可抑制皮膚真菌和酵母菌，較高濃度(16 78 ii g/ml)時(shí)對(duì)大腸桿菌、變形桿菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等也有抑制作用(引自文獻(xiàn)1 :United StatesPharmacopoeia 28—NF23, United States Pharmacopoeia Convention, Inc. ， Rockville，MD，2005，p. 470.)。由此可知，環(huán)吡酮胺的濃度對(duì)于抑制表皮或黏膜的淺表真菌和白色念珠菌感染是非常重要的。目前定量檢測(cè)環(huán)比酮胺濃度的方法有如下幾種
分光光度法測(cè)定環(huán)吡酮胺雖然是最常用的檢測(cè)技術(shù)(引自文獻(xiàn)2 :艾玉鎖，環(huán)吡酮胺乳膏含量的分光光度法測(cè)定；西北藥學(xué)雜志.19905(1)2 3)，但由于其在精確定量和在同類(lèi)化合物中特異性測(cè)定環(huán)吡酮胺的不足，該方法不能應(yīng)用于穩(wěn)定性研究及藥物生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制。另有文獻(xiàn)(引自文獻(xiàn)3 :Escarrone， A. L. V. et al LC-UV method withpre_columnderivatization for the determination of ciclopirox olamine in rawmaterial andtopical solution Chromatogr即hia 200867(11-12)967-971)介紹，使用高效液相色譜柱前衍生的辦法定量檢測(cè)環(huán)吡酮胺，必須經(jīng)過(guò)復(fù)雜的柱前衍生步驟，但衍生化過(guò)程使得其它組分不穩(wěn)定，并不適用于藥物生產(chǎn)過(guò)程中的快速檢測(cè)。 美國(guó)藥典(USP)有一種用高效液相色譜法檢測(cè)環(huán)吡酮胺的方法(引自文獻(xiàn)1 :United States Pharmacopoeia 28—NF23, United States PharmacopoeiaConvention，Inc. ， Rockville, MD，2005， p. 470.)，在其條件下，由于伯羥基基團(tuán)與金屬鹽離子的強(qiáng)烈螯合效應(yīng)，環(huán)吡酮胺的物質(zhì)峰有嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象。為了降低螯合效應(yīng)，在實(shí)驗(yàn)前，先用水乙
腈冰醋酸乙酰丙酮(500 : 500 : i : i)的混合洗脫液，沖洗色譜柱至少ish，再用流動(dòng)相沖洗至少5h。但是，即使經(jīng)過(guò)了如此長(zhǎng)時(shí)間的沖洗，這個(gè)方法仍然不能成功的檢測(cè)環(huán)吡酮胺。
發(fā)明內(nèi)容
在上述前人工作的基礎(chǔ)上，本發(fā)明的目的在于提供一種測(cè)定環(huán)吡酮胺的方法。該方法利用e-環(huán)糊精的包合作用，將e-環(huán)糊精添加到高效液相色譜的流動(dòng)相中，使其與環(huán)吡酮胺形成特殊的包合物，降低其在色譜柱上的吸附作用，利用紫外檢測(cè)器檢測(cè)環(huán)吡酮胺。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)
—種測(cè)定環(huán)吡酮胺的方法，其步驟是
a.環(huán)吡酮胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 用乙腈作為溶劑配制環(huán)吡酮胺標(biāo)準(zhǔn)品貯備液移取一定體積的貯備液，用乙腈稀釋至若干份不同濃度的溶液，然后將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液置于紫外燈下照射，制得標(biāo)準(zhǔn)溶液；
b.樣品的預(yù)處理 準(zhǔn)確稱(chēng)取適量環(huán)吡酮胺乳膏，置于10mL容量瓶中，加入無(wú)水乙醇7mL，超聲20min后用無(wú)水乙醇定容，繼續(xù)超聲5min，用0. 45iim有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，移取1. OmL濾液于10mL容量瓶中，用乙腈定容搖勻，然后將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液置于紫外燈下照射，進(jìn)樣前用0. 45 m有機(jī)膜過(guò)濾； c.液相色譜的測(cè)定 采用C18親水填料的色譜柱，以pH—定的13 -環(huán)糊精水溶液為水相與有機(jī)相乙腈混合作為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為lmL/min，柱溫為30 5(TC，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為298±5nm ;進(jìn)樣量為20i！ L，分別進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，采用峰面積對(duì)濃度繪制工作曲線(xiàn)，得到線(xiàn)性回歸方程為y二ax+b，利用樣品溶液峰面積A結(jié)合上述工作曲線(xiàn)計(jì)算出環(huán)吡酮胺軟膏中環(huán)吡酮胺的含量，計(jì)算公式如下 樣品溶液濃度C二- (ppm) (1)
■ ■ " rr (1)式中A是樣品溶液峰面積；a、 b分別是線(xiàn)性回歸方程為y = ax+b中的斜率和截距； 環(huán)吡酮胺軟膏中環(huán)吡酮胺的百分含量W = ，xlOO% (2)
(2)式中C是樣品溶液濃度；M是環(huán)吡酮胺乳膏質(zhì)量； 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)該發(fā)明作為一種測(cè)定環(huán)吡酮胺方法，將P-環(huán)糊精添加到流動(dòng)相中，利用e-環(huán)糊精對(duì)環(huán)吡酮胺的包合作用，克服了環(huán)吡酮胺在色譜柱上強(qiáng)烈吸附不能夠被洗脫導(dǎo)致其無(wú)法定量測(cè)定的缺點(diǎn)，從而找到一種有效測(cè)定環(huán)吡酮胺的方法。該發(fā)明具有檢測(cè)限低(檢測(cè)限可達(dá)到0. Olppm)，線(xiàn)性范圍寬(0. 31 75. OO卯m)，回收率為95. 9%，RSD=4. 38% ，其線(xiàn)性范圍很好的覆蓋了環(huán)吡酮胺的用藥濃度范圍(4 8 g/ml)，因此可以很好的用于藥物生產(chǎn)過(guò)程中環(huán)吡酮胺的快速檢測(cè)及臨床用藥監(jiān)測(cè)。
圖1是|3 _環(huán)糊精包合環(huán)吡酮胺結(jié)構(gòu)示意圖。
圖2是環(huán)吡酮胺純品標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。
圖3是環(huán)吡酮胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)。 圖4是環(huán)吡酮胺乳膏實(shí)際樣品色譜圖，1為樣品1的峰，2為樣品2的峰。
具體實(shí)施方法 本發(fā)明采用Varian高效液相色譜(包括ProStar 210泵，7725i進(jìn)樣閥為20 ii L進(jìn)樣環(huán)，紫外檢測(cè)器為ProStar325，色譜數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)為StarWS)禾PAE. LICHROM C18 5 ii m150X4. 6mm色譜柱； —種測(cè)定環(huán)吡酮胺的方法，其實(shí)施過(guò)程分為以下四個(gè)步驟
a.環(huán)吡酮胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 取5. 0mg環(huán)吡酮胺標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈定容于5mL容量瓶中，制得lmg/mL的貯備液；分別移取體積為1. 55ii L、3. 15ii L、6. 25ii L、12. 50ii L、25. OOii L、50. OOii L、跳00 ii L、250. 005ii L、375. 00 y L的貯備液，用乙腈稀釋至濃度分別為0. 31卯m、0. 63卯m、1. 25卯m、2. 50ppm、5. 00卯m、10. 00卯m、20. 00卯m、50. 00卯m、75. OO卯m的溶液。然后將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液置于紫外燈下照射24小時(shí)，制得標(biāo)準(zhǔn)溶液。
b.樣品的預(yù)處理 準(zhǔn)確稱(chēng)取環(huán)吡酮胺乳膏0. 10g、0. 20g(湖北科田藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，分別標(biāo)記為樣品1、樣品2 ;然后分別置于10mL容量瓶中，加入無(wú)水乙醇7mL，超聲20min后用無(wú)水乙醇定容，繼續(xù)超聲5min，用0. 45 ii m有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，移取1. OmL濾液于待用的10mL容量瓶中，用乙腈定容并搖勻，然后將上述定容溶液置于紫外燈下照射24小時(shí)，進(jìn)樣前將溶液用0. 45iim有機(jī)膜過(guò)濾。
c.工作曲線(xiàn)的繪制 本發(fā)明的工作曲線(xiàn)的繪制，采用C18親水填料的色譜柱，以pH = 4. 0的13. 2mmo1/L的P-環(huán)糊精水溶液乙腈=50 : 50(V/V)為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為lmL/min，柱溫為40°C ，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為298nm ;依次進(jìn)樣a步驟中制備好的一定濃度標(biāo)準(zhǔn)環(huán)吡酮胺標(biāo)準(zhǔn)溶液20 i！ L， 13 -環(huán)糊精與環(huán)吡酮胺形成包合物，被流動(dòng)相洗脫，然后采用峰面積對(duì)濃度繪制工作曲線(xiàn)，線(xiàn)性回歸方程為y = 9. 6519x+2. 3721，線(xiàn)性范圍為0. 31 75. OO卯m，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R2 = 0. 9994，工作曲線(xiàn)見(jiàn)圖3。
d.樣品的測(cè)定 取20 ii L處理好的環(huán)吡酮胺乳膏樣品進(jìn)樣，在上述c步驟條件下進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)公式(D、公式(2)，用峰面積結(jié)合上述工作曲線(xiàn)計(jì)算出環(huán)吡酮胺軟膏中環(huán)吡酮胺的百分含 由圖4樣品色譜圖可知，譜圖中樣品峰1與樣品峰2的面積之比等于b步驟中樣品1與樣品2的質(zhì)量比，可見(jiàn)在0. 31 75. OOppm的線(xiàn)性范圍內(nèi)，環(huán)吡酮胺的定量測(cè)定是準(zhǔn)確的；進(jìn)而結(jié)合樣品1和樣品2的質(zhì)量計(jì)算出環(huán)吡酮胺軟膏中環(huán)吡酮胺的百分含量均為1%，與該軟膏的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)是一致的。
權(quán)利要求
一種測(cè)定環(huán)吡酮胺的方法，其步驟是a.環(huán)吡酮胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備用乙腈作為溶劑配制環(huán)吡酮胺標(biāo)準(zhǔn)品貯備液移取一定體積的貯備液，用乙腈稀釋至若干份不同濃度的溶液，然后將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液置于紫外燈下照射，制得標(biāo)準(zhǔn)溶液；b.樣品的預(yù)處理準(zhǔn)確稱(chēng)取適量環(huán)吡酮胺乳膏，置于10mL容量瓶中，加入無(wú)水乙醇7mL，超聲20min后用無(wú)水乙醇定容，繼續(xù)超聲5min，用0.45μm有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，移取1.0mL濾液于10mL容量瓶中，用乙腈定容搖勻，然后將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液置于紫外燈下照射，進(jìn)樣前用0.45μm有機(jī)膜過(guò)濾；c.液相色譜的測(cè)定采用C18親水填料的色譜柱，以pH一定的β-環(huán)糊精水溶液為水相與有機(jī)相乙腈混合作為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為1mL/min，柱溫為30～50℃，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為298±5nm；進(jìn)樣量為20μL，分別進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，采用峰面積對(duì)濃度繪制工作曲線(xiàn)，得到線(xiàn)性回歸方程為y＝ax+b，利用樣品溶液峰面積A結(jié)合上述工作曲線(xiàn)計(jì)算出環(huán)吡酮胺軟膏中環(huán)吡酮胺的百分含量，計(jì)算公式如下樣品溶液濃度 <mrow><mi>c</mi><mo>=</mo><mfrac> <mrow><mi>A</mi><mo>-</mo><mi>b</mi> </mrow> <mi>a</mi></mfrac><mrow> <mo>(</mo> <mi>ppm</mi> <mo>)</mo></mrow><mo>-</mo><mo>-</mo><mo>-</mo><mrow> <mo>(</mo> <mn>1</mn> <mo>)</mo></mrow> </mrow>(1)式中A是樣品溶液峰面積；a、b分別是線(xiàn)性回歸方程為y＝ax+b中的斜率和截距；環(huán)吡酮胺軟膏中環(huán)吡酮胺的百分含量 <mrow><mi>w</mi><mo>=</mo><mfrac> <mrow><mn>100</mn><mi>c</mi> </mrow> <mi>M</mi></mfrac><mo>×</mo><mn>100</mn><mo>%</mo><mo>-</mo><mo>-</mo><mo>-</mo><mrow> <mo>(</mo> <mn>2</mn> <mo>)</mo></mrow> </mrow>(2)式中c是樣品溶液濃度；M是環(huán)吡酮胺乳膏質(zhì)量。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定環(huán)吡酮胺的方法。本方法選用C18親水填料的色譜柱，利用β-環(huán)糊精對(duì)環(huán)吡酮胺的包合作用，以β-環(huán)糊精水溶液和乙腈的混合溶液作為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器，可用于環(huán)吡酮胺乳膏中有效成分環(huán)吡酮胺的定量測(cè)定。本發(fā)明具有檢測(cè)限低，線(xiàn)性范圍寬，其線(xiàn)性范圍很好的覆蓋了環(huán)吡酮胺的用藥濃度范圍，因此可以很好的用于藥物生產(chǎn)過(guò)程中環(huán)吡酮胺的快速檢測(cè)及臨床用藥監(jiān)測(cè)。
文檔編號(hào)G01N30/02GK101750457SQ20091011770
公開(kāi)日2010年6月23日 申請(qǐng)日期2009年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月4日
發(fā)明者張海霞, 祝新月, 袁圣柳 申請(qǐng)人:蘭州大學(xué)