專利名稱：針對(duì)非功能性P2X₇受體的抗體及其在癌癥和其它病情的診斷和治療中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及疾病的診斷和治療，包括胂瘤。本發(fā)明所涉及的疾病 類型包括來(lái)自于上皮細(xì)胞的腫瘤和惡性淋巴瘤。本發(fā)明還涉及其它病 情，如癌前狀態(tài)、腸道易激綜合癥以及病毒和其它感染。很有可能本 發(fā)明還適用于其它疾病和病情。
背景技術(shù)：
三磷酸腺苷(ATP)能活化配體門控的噪呤源受體，已知為P2X受 體。受體亞型從P2Xi到P2X7已被識(shí)別。已知不同的P2X受體亞型存 在于許多細(xì)胞中，包括上皮細(xì)胞和白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、巨 噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞。
P2X受體能透過(guò)鈣離子和一些其它陽(yáng)離子，如鉀離子和鈉離子。 鈣離子流通過(guò)P2X受體進(jìn)入細(xì)胞可能與細(xì)胞死亡相聯(lián)系。
在許多細(xì)胞型中，P2X7亞型^L認(rèn)為與細(xì)胞凋亡或程序化細(xì)胞死亡 有關(guān)。當(dāng)存在ATP時(shí)，表達(dá)于細(xì)胞表面上的P2X7受體能在1秒鐘內(nèi) 打開(kāi)鈣離子通道，通過(guò)細(xì)胞膜。繼續(xù)暴露在ATP中可在幾秒鐘到幾十 秒鐘內(nèi)導(dǎo)致大孔的形成，這些大孔可使細(xì)胞淹沒(méi)在過(guò)量的鈣中，誘導(dǎo) 細(xì)胞凋亡。
例如在上皮癌細(xì)胞中，暴露給ATP通常并不導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。已經(jīng) 發(fā)現(xiàn)某些細(xì)胞表達(dá)不能形成孔的P2X7受體。這些受體被認(rèn)為是非功 能性受體。
在人類癌細(xì)胞系，如前列腺PC3和乳腺M(fèi)CF7，以^動(dòng)物細(xì)胞系包 括嚙齒動(dòng)物雜交瘤中，P2X7受員發(fā)現(xiàn)在細(xì)M面上以非功能構(gòu)象存在。
惡性淋巴瘤患者的B細(xì)胞可表達(dá)非功能性P2X,受體。淋巴瘤由逃 避細(xì)胞溶解破壞的惡性克隆發(fā)展而成。該過(guò)程導(dǎo)致惡性B淋巴細(xì)胞漸
4漸積累并最終導(dǎo)致淋巴結(jié)病和/或脾腫大。 發(fā)明簡(jiǎn)述
本發(fā)明的第一方面提供了一種可用于檢測(cè)疾病或者病情的探針，
該探針適用于區(qū)別功能性P2X,受體和非功能性P2X7受體。優(yōu)選的， 該探針通過(guò)測(cè)定ATP與受體結(jié)合后的變化或者測(cè)定結(jié)合P2X,受體中 的孔形成所必需的一種或多種蛋白后的變化來(lái)區(qū)別功能性和非功能性 P2X7受體。在一種可替代的具體示例中，該探針可檢測(cè)在不存在結(jié)合 ATP時(shí)暴露的P2X,受體的一個(gè)或多個(gè)部分。該受體部分可能包括P2X7 單體。
本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)疾病或病情的方法，該方法包括以下步 驟用本發(fā)明的探針區(qū)別功能性P2X，受體和非功能性P2X7受體；提 供一種受體表達(dá)譜圖；和比較該受體表達(dá)鐠圖與正常鐠圖。可以像例 如前面就探針本身所提到的那樣檢測(cè)變化。
該探針可以是天然的或者是人工的。優(yōu)選的，該探針是一種抗 體，該抗體可以是多克隆、單克隆、重組的、人源化抗體或者是它們 的合適片段。該抗體優(yōu)選地針對(duì)于位于與ATP結(jié)合位點(diǎn)相鄰的胞外域 內(nèi)的表位。
在人P2X7受體的情況下，該探針優(yōu)選適于區(qū)別功能性受體和非功 能性受體，該功能性受體具有其中Pro210位于反式構(gòu)象的序列；該 非功能性受體具有其中Pro210位于順式構(gòu)象的序列。
該探針可用任何一種合適的技術(shù)制備，該技術(shù)很容易為本領(lǐng)域中 的熟練技術(shù)人員理解。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括該探針能通過(guò)檢測(cè)發(fā)生在ATP結(jié)合位點(diǎn) 的其它構(gòu)象變化來(lái)區(qū)別功能性和非功能性受體。例如，所測(cè)定的變化 可以是不同于上面所指的脯氨酸的氨基酸。這種氨基酸的示例之一是 Pro199。在另一個(gè)示例中，所測(cè)定的變化可以是其它方面。
該探針也可適用于檢測(cè)不受功能狀態(tài)改變的P2X7受體的其它區(qū) 域。當(dāng)選擇的表位可特異地檢測(cè)只有在未結(jié)合ATP時(shí)才易于接近的受 體表面區(qū)域的形狀時(shí)，缺乏結(jié)合型ATP的單體亞基的構(gòu)象可用該探針
5測(cè)定。該探針可檢測(cè)孔形成所必需的一種或多種蛋白如附屬蛋白或其 它蛋白結(jié)合的變化。這種蛋白的非限制性示例為層粘連蛋白，整聯(lián)蛋
白，p-肌動(dòng)蛋白，cx-輔肌動(dòng)蛋白和supervillin。
本發(fā)明中，P2X7亞型特異性抗體可用于特異地檢測(cè)或結(jié)合非功能 性P2X,受體，該非功能性P2X7受體表達(dá)在形成部分癌前組織，非常 早期的癌組織，發(fā)展的癌組織的細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞上，以及任何表達(dá)非功 能性P2X7受體的腫瘤細(xì)胞上。因此，只有處于緊密門控(close-gated)或非功能構(gòu)象時(shí)才能檢測(cè)或結(jié)合P2X 受體，盡管該P(yáng)2X,受體 通?？梢栽诩?xì)胞膜中表達(dá)，或者可部分地作為通道發(fā)揮功能。此外， 缺乏結(jié)合型ATP的單體亞基的構(gòu)象也可用抗體檢測(cè)，因?yàn)樗x擇的表 位可特異地檢測(cè)只有在不結(jié)合ATP時(shí)才易于接近的表面區(qū)域的形狀。
本發(fā)明中，該非功能性P2X7受體能夠用一種抗體檢測(cè)或與該抗體 結(jié)合，該抗體針對(duì)于能夠由功能性受體內(nèi)存在的結(jié)構(gòu)發(fā)生構(gòu)象變化的 表位。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)非功能性受體的氨基酸序列可與功能性受體的氨基酸 序列一致，因此受體的構(gòu)象變化的原因與受體和ATP的反應(yīng)相關(guān)。正 如上面所展示的，ATP分子可作為受體激動(dòng)劑，因此當(dāng)ATP結(jié)合到受 體上時(shí)，它們能夠打開(kāi)通過(guò)細(xì)胞膜的通道，使釣離子流入。因此，非 功能性是由于缺乏ATP激動(dòng)劑與受體的適當(dāng)結(jié)合而導(dǎo)致的，其原因可 能包括由于生產(chǎn)不足或降解速率提高而減少了 ATP局部可利用性。如 果ATP與受體的結(jié)合被打斷，受體構(gòu)象就會(huì)發(fā)生改變。這種構(gòu)象改變 可用 一種特異地設(shè)計(jì)用來(lái)結(jié)合受ATP結(jié)合影響的蛋白質(zhì)區(qū)域的抗體來(lái) 檢測(cè)。
在人P2X,受體的情況下，涉及構(gòu)象變化的特異序列可包括 Pro210,它在不存在結(jié)合的ATP時(shí)構(gòu)象會(huì)從反式變?yōu)轫樖?。因此，?人受體的情況下，必須就此產(chǎn)生抗體的適當(dāng)表位序列可包含 Pro210，且可向該殘基的另一端延伸到誘導(dǎo)抗體反應(yīng)所必須的合適范 圍。作為一個(gè)非限制性實(shí)例，該表位序列可包括從Gly200延伸到 Thr215的片段也可使用。而且，若可與人組織發(fā)生交叉反應(yīng)，來(lái)自 其它哺乳動(dòng)物如大鼠的同源片段。例如，可利用大鼠的從Gly200到Thr215的相同片段，雖然與人的序列相比，在大鼠序列中有兩個(gè)氨 基酸取代。
在非人類受體的情況下，該特異序列可用合適的實(shí)驗(yàn)確定。 根據(jù)本發(fā)明，非功能性P2X7受體的檢測(cè)可呈現(xiàn)一種其中功能性受 體(因此正常細(xì)胞)可保持基本未被標(biāo)記的分布圖鐠。但是，P2X7受 體的非功能性構(gòu)象可以在腫瘤發(fā)生前的非常早期的階段檢測(cè)到，最初 是在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。例如，在上皮細(xì)胞癌的情況下，利用本發(fā)明 的方法，有可能比用普通蘇木素和伊紅染色的活檢組織切片檢測(cè)的標(biāo) 準(zhǔn)腫瘤病理外觀相比更早幾年檢測(cè)到癌前病變。因此，用本發(fā)明的方 法，可以比用現(xiàn)行的方法更早檢測(cè)到腫瘤如前列腺癌，皮膚癌和乳腺 癌，有益于早期治療的介入。
能夠用本發(fā)明的探針和方法檢測(cè)的疾病和病情的全部范圍并沒(méi)有 確定。但是，已知這些疾病和病情包括上皮細(xì)胞癌，如前列腺癌、乳 腺癌、皮膚癌、肺癌、宮頸癌、子宮癌、胃癌、食管癌、膀胱癌、結(jié) 腸癌和陰道癌，和其它血液癌癥包括惡性淋巴瘤，腸道易激綜合癥和 病毒如HIV或者其它病原生物如結(jié)核分枝桿菌的感染。感染可直接通
過(guò)抑制功能性所需要的輔因子或者通過(guò)上調(diào)抑制上皮或其它細(xì)胞上的 P2X7功能的輔因子而引起非功能性受體表達(dá)，從而使被感染的細(xì)胞不 易受到凋亡損傷。
除非另有說(shuō)明，本發(fā)明中用的術(shù)語(yǔ)"疾病或病情'，包括所有那些 在上面段落中出現(xiàn)的特殊的疾病和病情。
在腸道易激綜合癥("IBS")的特殊情形中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，患有 這種病情的患者，通常在位于上皮組織下面的基質(zhì)中存在的大范圍分 布的淋巴細(xì)胞中表達(dá)P2X7受體的腸粘膜發(fā)生上調(diào)。在被感染的患者 中，可在從十二指腸到直腸粘膜中發(fā)現(xiàn)這種提高的表達(dá)。這種提高的 表達(dá)可在分離的區(qū)域中發(fā)現(xiàn)，或者在更極端的病例中一般可以在腸道 的全長(zhǎng)中均得到提高。
在最輕微感染的病例中，總P2X,受體上調(diào)，但這些受體都是功能 性受體，它們不能穿透到上皮組織中。在更嚴(yán)重的病例中，總P2X7受體的表達(dá)更高，腸道的受感染最深的部位出現(xiàn)非功能性受體。例 如，它們可能局限于盲腸的粘膜，并可穿透到上皮組織中。最嚴(yán)重的
病例是那些總P2X7受體的表達(dá)進(jìn)一步提高，且大部分受體是非功能 性受體并伴隨有上皮細(xì)胞穿透增加。
如上所述，P2X7受體的非功能性是由于缺乏ATP激動(dòng)劑與受體的 適當(dāng)結(jié)合。其原因可能包括因生產(chǎn)不足或經(jīng)表面ATP酶酶促降解ATP 的速率提高而減少了 ATP的局部可利用性。如果ATP與受體的結(jié)合被 打斷，如前所述，受體構(gòu)象就會(huì)發(fā)生改變，這種構(gòu)象變化可用本發(fā)明 的探針檢測(cè)。但是，總P2X7受體分布的檢測(cè)最好用不受ATP結(jié)合影 響的P2X7受體胞外域的其它區(qū)域的表位來(lái)達(dá)到。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括用一種或兩種P2X7亞型特異性抗體來(lái)特 異區(qū)別總P2X7的分布和在腸粘膜中表達(dá)的非功能性受體的比例。因 此這兩種抗體一起用時(shí)能檢測(cè)總受體水平和那些只以緊密門控 (close-gated)或非功能構(gòu)象存在的受體通道。第一抗體適用于檢 測(cè)總P2X,受體的表達(dá)。本發(fā)明中包含或附著了抗體的探針可提供用 來(lái)檢測(cè)IBS的第二抗體，它不僅能區(qū)別功能性和非功能性PM7受 體，而且可檢測(cè)受體中不受功能狀態(tài)改變的其它區(qū)域。這兩種抗體可 以分開(kāi)使用也可以一起使用。優(yōu)選的是，它們結(jié)合在一起使用。
分別檢測(cè)總P2X，受體和非功能性P2X7受體可確定病情的嚴(yán)重性。 胃腸粘膜中的非功能性P2X7受體的表達(dá)以正常細(xì)胞保持基本未被標(biāo) 記的方式進(jìn)行。隨后，P2X7的非功能構(gòu)象最初在上皮組織下面的基質(zhì) 中被檢測(cè)到，范圍包括從這種綜合癥的輕病例中的分散小塊到遍及胃 腸道全長(zhǎng)的大范圍表達(dá)(伴隨著非功能性受體的分散小塊浸潤(rùn)進(jìn)入到 上皮組織中)。
本發(fā)明還提供了一種診斷腸道易激綜合癥的方法，包括檢測(cè)細(xì)胞 和/或組織的P2X7表達(dá)鐠圖和比較該譜圖與預(yù)先確定的正常細(xì)胞和/ 或組織的表達(dá)語(yǔ)圖。優(yōu)選的，P2X7表達(dá)諳圖的檢測(cè)包括使用一種或多 種抗體。而且，優(yōu)選的是這種或這些抗體與本發(fā)明的探針不同，即它 們不能檢測(cè)和ATP與P2X7受體的結(jié)合相關(guān)的變化。這些抗體的制備對(duì)于本領(lǐng)域中的熟練技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將很容易理解。
本發(fā)明還包括一種或多種抗體在診斷腸道易激綜合癥中的應(yīng)用。 該診斷方法可被用于利用標(biāo)準(zhǔn)的免疫組化技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)顯微術(shù)中。 這種病情的治療連同本發(fā)明的第三個(gè)部分在下面討論。 用本發(fā)明的探針和方法進(jìn)行疾病或病情的診斷可用原位成像技術(shù) 檢測(cè)在機(jī)體組織的分布來(lái)實(shí)現(xiàn)。另外，可應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)顯微術(shù)，共聚焦顯 微術(shù)和熒光激活細(xì)胞分選術(shù)。測(cè)定淋巴、前列腺、乳腺、皮膚、肺、 宮頸、膀胱、子宮、胃、食管和相似的活檢組織，以及乳腺和其它組 織穿刺物以及細(xì)胞涂片(例如用于檢測(cè)宮頸癌的細(xì)胞涂片)的普通免 疫組化技術(shù)也可應(yīng)用。其它技術(shù)可與本發(fā)明的探針和方法一起應(yīng)用。 本發(fā)明提供了一種用于治療疾病或病情的抗體，該抗體適用于區(qū)
別功能性P2X7受體和非功能性P2X,受體，且僅適于結(jié)合非功能性受 體。優(yōu)選的是，該抗體通過(guò)檢測(cè)同ATP與受體的結(jié)合相關(guān)的變化或者 測(cè)定P2X7受體的孔形成所需的并僅適于結(jié)合非功能性受體的一種或 多種蛋白結(jié)合方面的變化來(lái)區(qū)別功能性和非功能性P2X,受體。在另 一個(gè)具體示例中，該抗體通過(guò)測(cè)定不存在結(jié)合型ATP時(shí)暴露的受體的 部分來(lái)區(qū)別功能性和非功能性受體。
用于治療疾病和病情的抗體可以與作為探針用來(lái)診斷疾病和病情 的抗體相同。例如，該抗體可用來(lái)局部治療皮膚癌。為了對(duì)癌癥進(jìn)行 系統(tǒng)的治療，抗體或其活性片段必需人源化以便將不合乎需要的免疫 反應(yīng)副作用減少到最小。
本發(fā)明的抗體可用于治療哺乳動(dòng)物，包括人類的疾病或病情。疾 病或病情的示例與本發(fā)明的探針一起已經(jīng)在上面出現(xiàn)過(guò)。
本發(fā)明還提供了一種能導(dǎo)致產(chǎn)生本發(fā)明第二方面所述的抗體的表 位。該表位優(yōu)選的包含Pro210，并涵蓋從Gly200到Thr215的區(qū)段 (存在于人受體的P2X,序列中)。該表位優(yōu)選附著了 C末端Cys殘 基，該Cys殘基通過(guò)化學(xué)交聯(lián)劑馬來(lái)酰亞胺己酰基一 N-羥基琥珀酰亞 胺(MCS)交聯(lián)了白喉毒素，因此被連接的表位肽段采取的構(gòu)象占據(jù) 穩(wěn)定的順式脯氨酸構(gòu)型。該特異肽構(gòu)象旨在遞呈給患有一種或多種疾病或病情的人類或動(dòng) 物，特別是上皮細(xì)胞癌，如前列腺癌、乳腺癌、皮膚癌、肺癌、宮頸 癌、子宮癌、胃癌、食管癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和陰道癌，以及惡性淋
巴瘤，腸道易激綜合癥和病毒如HIV或者其它病原生物體如結(jié)核分枝 桿菌的感染。優(yōu)選患者將對(duì)所施用的綴合表位產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從而產(chǎn) 生識(shí)別被感染細(xì)胞表面上的非功能性P2X,受體的抗體，并與它們相 結(jié)合，激發(fā)合適的免疫細(xì)胞去破壞復(fù)合的細(xì)胞。也可影響受到細(xì)胞死 亡引發(fā)的其它細(xì)胞。
應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的范圍并不局限于上述序列，還包括那些同樣能 產(chǎn)生特異免疫應(yīng)答的替代序列、載體和交聯(lián)物。這些物質(zhì)可產(chǎn)生特異 性免疫應(yīng)答優(yōu)選地產(chǎn)生只針對(duì)非功能性P2X7受體的免疫應(yīng)答，并優(yōu) 選地忽略表達(dá)于細(xì)胞表面上的所有功能性受體，從而能避免發(fā)生副作 用。
本發(fā)明的第二方面還提供了本發(fā)明的抗體作為治療患者中疾病或 者病情的治療載體的應(yīng)用。其中通過(guò)靶向于細(xì)胞表面表達(dá)的異?；蛘?非功能性P2X，受體，而使表達(dá)正常(功能性)受體的所有細(xì)胞不受 影響，由此來(lái)調(diào)節(jié)患者體內(nèi)的程序性細(xì)胞死亡。本發(fā)明還涉及用本發(fā) 明的表位產(chǎn)生抗體的應(yīng)用，如上所述。
本發(fā)明還提供一種用于治療或預(yù)防患者疾病或病情的藥物組合 物，該組合物包含藥用有效量的抗體，或者能產(chǎn)生該有效量的表位， 所述抗體能調(diào)節(jié)表面上表達(dá)有異?；蛘叻枪δ苄訮2X7受體的細(xì)胞的 程序性細(xì)胞死亡。
該抗體或表位的藥用有效量因患者和疾病或病情的特征而變化。 這些變量可由本領(lǐng)域中的熟練技術(shù)人員所確定。
本發(fā)明的藥物組合物可與合適的藥用栽體一起給藥，該載體可以 是本領(lǐng)域中所熟知的那些載體中的任何一種，或者可以是將來(lái)設(shè)計(jì)的 且適用于目的用途的類型。除栽體外，本發(fā)明的藥物組合物還可包含 有其它成份，例如染料，防腐劑，緩沖液和抗氧化劑。
本發(fā)明的藥物組合物可制備成任何想要的形式、且可以軟骨、乳骨、溶液、懸浮液、粉末、片劑、膠嚢、栓劑或子宮托的形式給藥。 本發(fā)明的藥物組合物可通過(guò)任何一種合適的方式給藥，這些方式
可包括口服、腸胃外、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下或局部給藥。
本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防患者疾病或病情的方法，該方法包括
對(duì)患者給與本發(fā)明的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了本發(fā)明的藥物組合物在治療或預(yù)防患者疾病或病
情中的應(yīng)'用。
對(duì)于本領(lǐng)域中的熟練技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，顯然，為了達(dá)到最好的療 效，本發(fā)明藥物組合物的應(yīng)用的方式可能需要改變。這就可能需要把 疾病或者病情的特征及其嚴(yán)重性考慮在內(nèi)。
本發(fā)明的第三個(gè)方面集中在控制向P2X7受體提供ATP的ATP酶的 表達(dá)，例如在患有惡性淋巴瘤的患者的B細(xì)胞中的表達(dá)。白細(xì)胞上的 P2X7受體的通道打開(kāi)由于胞外ATP酶和胞外ATP 二磷酸水解酶 (ecto-ATPDases )使ATP激動(dòng)劑迅速水解而被中止。這些酶調(diào)節(jié)許 多需要依賴于ATP的生理過(guò)程。淋巴細(xì)胞上的ATPase和ATPDases活 性的底物特異性顯示在淋巴細(xì)胞的表面存在不止一種類型，包括 CD39。 一種或多種這些ATPase或ATPDases的增殖可限制對(duì)控制P2X7 孔形成所需的ATP的供應(yīng)和限制對(duì)調(diào)節(jié)B細(xì)胞數(shù)目所需的后續(xù)程序性 細(xì)胞死亡。
同樣，在IBS病例中，ATPase的增殖也被認(rèn)為與激動(dòng)劑ATP與 P2X7受體的適當(dāng)結(jié)合的缺乏有關(guān)。
根據(jù)第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療或預(yù)防患者疾病或病情 的制劑，該制劑包含一種或多種物質(zhì)，該物質(zhì)適用于調(diào)節(jié)能控制患者 細(xì)胞或組織中將ATP提供給P2X7受體的ATPase的表達(dá)。本發(fā)明還提 供了治療或預(yù)防患者疾病或病情的方法，該方法包括對(duì)患者給予制劑 這一 步驟，該制劑包含適用于調(diào)節(jié)能控制患者細(xì)胞或組織中將ATP提 供給P2X,受體的ATPase的表達(dá)的一種或多種物質(zhì)。
這種ATPase的示例可以是CD39或CD73。
這樣的物質(zhì)可以是ATP類似物的形式。優(yōu)選的是不可水解，并且是P2X7特異性的，或者能夠抑制局部ATPase作用的其它物質(zhì)，所述 ATPase能使供給P2X7結(jié)合位點(diǎn)的ATP的利用性缺損。該制劑可能是 特異針對(duì)非功能性P2X7受體產(chǎn)生的人源化抗體的形式。
該類疾病或病情優(yōu)選的是惡性淋巴瘤或IBS，但本發(fā)明還可擴(kuò)展 到其它疾病或病情，包括其它上皮細(xì)胞癌或血液癌癥或者病毒和其它 病原性感染。
在惡性淋巴瘤病例中，ATPase可控制ATP向P2X7受體的局部供 給，從而減少可供P2X,受體結(jié)合的ATP的濃度，去除它們的活性， 導(dǎo)致大量地減少程序性B細(xì)胞死亡。這些ATPase可能B細(xì)胞表面上 特異表達(dá)，在惡性淋巴瘤中似乎上調(diào)。優(yōu)選施用特異的ATPase抑制 劑用來(lái)調(diào)節(jié)P2X,受體上ATP的可利用性，從而調(diào)節(jié)程序性B細(xì)胞死 亡。
對(duì)于惡性淋巴瘤的治療，該物質(zhì)可能包括能阻斷ATPase或 ATPDases的合成激動(dòng)劑，該激動(dòng)劑可以是不可水解的P2X7激動(dòng)劑的 形式。
關(guān)于腸道易激綜合癥，本發(fā)明的制劑的給藥方式目的在于恢復(fù)受 體的功能，該功能可能由于粘膜被感染區(qū)域下面的肌肉的活動(dòng)過(guò)度而 被耗盡。本發(fā)明的制劑可作用于粘膜，直接除去這些非功能性受體， 從而恢復(fù)局部正常胃腸分泌機(jī)制。治療的目的在于恢復(fù)ATP對(duì)非功能 性受體的局部供應(yīng)，以便恢復(fù)正常受體功能?？刂剖荏w功能的結(jié)果包 括恢復(fù)胃腸的分泌和蠕動(dòng)的正常控制。這可通過(guò)應(yīng)用合成P2l特異 性激動(dòng)劑的腸內(nèi)或系統(tǒng)性供應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)(該激動(dòng)劑優(yōu)選的是不可被 ATPase水解)，或者通過(guò)系統(tǒng)性應(yīng)用針對(duì)非功能性P2X7受體產(chǎn)生的 抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)，優(yōu)選的是小的人源化特異性抗體，以除去非功能性受 體，只留下功能性受體。
如果其下平滑肌的蠕動(dòng)異常導(dǎo)致了供正常P2X,受體結(jié)合的ATP的 局部可利用性缺損，那么治療可能包括恢復(fù)這種激動(dòng)劑的正常供給， 這可通過(guò)施加處理以暫時(shí)性限制腸道運(yùn)動(dòng)、由此限制平滑肌攝取或利 用ATP來(lái)實(shí)現(xiàn)。
12本發(fā)明還提供了治療疾病或病情的藥物組合物，該組合物包含藥
用有效量的一種或多種適用于調(diào)節(jié)控制將ATP供給P2X7受體的 ATPase的表達(dá)的物質(zhì)。
本發(fā)明的所有方面可擴(kuò)展到其它一些醫(yī)學(xué)狀況中可實(shí)施的相似應(yīng) 用中，在所述醫(yī)學(xué)狀況中，由于病毒感染的結(jié)果而牽涉到了異常的 P2X7受體，其中，被感染的細(xì)胞中該病毒通過(guò)上調(diào)非功能性P2X7受體 而得到保護(hù)，或者這類受體從正常細(xì)胞狀況得到上調(diào)。
本發(fā)明還提供了一種治療腸道易激綜合癥的方法，包括向患者提 供如上面定義的藥物組合物。
本發(fā)明還提供該種藥物組合物在治療腸易激綜合癥中的應(yīng)用。
一種或多種上述藥用有效制劑的應(yīng)用方式可能需要改變以獲得最 佳的效果。
另外，本發(fā)明提供了一種治療腸易激綜合癥的方法，該方法包括 給予適用于恢復(fù)P2X,受體功能的組合物。受體的功能可能通過(guò)粘膜 中受感染區(qū)域下面的肌肉的過(guò)度活動(dòng)而已經(jīng)被耗盡。該組合物可能與 上面就包含在本發(fā)明制劑中的物質(zhì)相同所述的相同。
在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了一種用于區(qū)別蛋白質(zhì)的不同構(gòu)象 的方法，其中利用能夠引起抗體產(chǎn)生的表位或抗體本身，從而由與具 有所選擇構(gòu)象的所有蛋白質(zhì)成員的結(jié)合獲得特定的藥學(xué)效果(主動(dòng)以 及被動(dòng)免疫接種)。它的一個(gè)示例是具有可導(dǎo)致vCJD病情的構(gòu)象的 朊病毒。該蛋白的異常形式是特異抗體或能產(chǎn)生該抗體的表位的靶 點(diǎn)，優(yōu)選該抗體是人源化的并為了達(dá)到最佳的藥用效果而尺寸減小。 發(fā)明詳述 診斷應(yīng)用
此處用實(shí)施例來(lái)描述，其中用動(dòng)物特異的非功能性P2X7抗體，以
證實(shí)本發(fā)明的探針和方法在診斷大量人類和其它哺乳動(dòng)物腫瘤的普遍 應(yīng)用。
在人類和哺乳動(dòng)物如貓和狗的前列腺組織中，當(dāng)本發(fā)明的抗體用 來(lái)診斷時(shí)，在不存在癌癥或癌前病灶時(shí)并不出現(xiàn)標(biāo)記。但是，本發(fā)明
13的診斷方法顯示了瘤性變化的最初征兆，而此時(shí)用H&E染色仍不能 檢測(cè)到有關(guān)的形態(tài)學(xué)變化。
在這一階段，需要對(duì)最初出現(xiàn)在上皮細(xì)胞核中的受體單位進(jìn)行染 色。這些受體單位在疾病的后期遷移到細(xì)胞質(zhì)中，在整個(gè)前列腺中發(fā) 揮場(chǎng)效應(yīng)，因此，僅需活檢更少組織以確定腫瘤的存在。在疾病的后 期，染色更加局限在頂端的上皮組織中。
相同地，在其它組織中不再有明顯的場(chǎng)效應(yīng)時(shí)，這些其它上皮細(xì) 胞癌如人類和哺乳動(dòng)物如貓和狗的乳腺、肺、結(jié)腸和皮膚癌可檢測(cè) 到，并顯示邊緣。
相同階段的發(fā)展可在這些其它組織中看到，如乳腺和宮頸，其中 核染色早于細(xì)胞質(zhì)染色，而正常組織不被染色。乳腺組織中被感染的 導(dǎo)管和小葉能根據(jù)乳腺個(gè)別被感染的導(dǎo)管系統(tǒng)的局部場(chǎng)效應(yīng)而容易被 檢測(cè)到，甚至在普通形態(tài)學(xué)揭示不存在癌癥時(shí)即可如此。鄰近的未被 感染的導(dǎo)管顯現(xiàn)未被染色。相似地，直接對(duì)含有腫瘤的組織進(jìn)行引流
此，守衛(wèi)的淋巴結(jié)可在沒(méi)有向淋巴結(jié)進(jìn)行任何轉(zhuǎn)移性細(xì)胞擴(kuò)散時(shí)就可 檢測(cè)到。
皮膚癌，如基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌以及惡性黑素瘤在角質(zhì)細(xì)胞 和黑素細(xì)胞層中顯示非功能性受體和通道成員(單體)的陽(yáng)性染色， 并且具有明顯的邊緣，在邊緣之外正常皮膚在表皮的兩面和深入到真 皮里面并沒(méi)有被標(biāo)記。
所有實(shí)驗(yàn)用的哺乳動(dòng)物腫瘤細(xì)胞系如人前列腺(PC3)和乳腺
(MCF7)以及嚙齒類雜交瘤對(duì)細(xì)胞表面上的非功能性受體是陽(yáng)性的， 因此這些腫瘤細(xì)胞的凋亡被抑制。這種診斷法的通常應(yīng)用由小鼠雜交 瘤細(xì)胞上的相同標(biāo)記而可見(jiàn)一斑，顯示除了人類以外，還在其它類型 的動(dòng)物中普遍存在該受體。正常人B淋巴細(xì)胞顯示功能性P2X 受體 在細(xì)胞表面表達(dá)，因此在必要的時(shí)候能導(dǎo)致凋亡，但是惡性淋巴瘤患 者的人B淋巴細(xì)胞顯示在細(xì)胞表面表達(dá)非功能性P2X 受體，因此減 少了細(xì)胞凋亡。治療應(yīng)用
以這種明顯普遍存在的表達(dá)于癌細(xì)胞表面的P2X7非功能異構(gòu)體為 靶點(diǎn)、試圖導(dǎo)致凋亡的策略可用于治療人類和其它哺乳動(dòng)物的大部分 腫瘤。實(shí)施例如下 實(shí)施例1
小鼠雜交瘤細(xì)胞在存在和不存在非功能P2X7的親和純化抗體的情 況下生長(zhǎng)在巨噬細(xì)胞基質(zhì)上。細(xì)計(jì)數(shù)顯示，在4天中，細(xì)胞在只有純 化的普通IgG中生長(zhǎng)時(shí)由lxl(T增殖到7xl04,而非功能性P2l抗體 的存在使細(xì)胞計(jì)數(shù)維持在僅1. 5X104。
將雜交瘤細(xì)胞與作為對(duì)照的普通IgG或非功能P2X7的親和純化抗 體一起注射到小鼠體內(nèi)。106個(gè)雜交瘤細(xì)胞與針對(duì)非功能性(ATP-耗 盡的)P2X7產(chǎn)生的抗體(G蛋白純化而不是親和純化)或IgG在 0. 5ml體積中以相同濃度一起預(yù)孵育6小時(shí)，然后注射到小鼠組中。 第二天進(jìn)行相同的第二次注射。
腫瘤的重量在第十一天測(cè)量。10只對(duì)照組小鼠的平均腫瘤重量為 4. Og， 10小鼠有9只長(zhǎng)腫瘤，但在10只注射P2X7抗體的小鼠組中， 平均腫瘤重量只有l(wèi).lg，該組中也有9只長(zhǎng)有腫瘤。 實(shí)施例2
特異性親和純化的抗體(以便大大地提高特異性)被施用于3例 人基底細(xì)胞癌(BCC),其或者以保持7天的液體形式，或者以懸浮 在二甲聚硅氧烷乳狀基質(zhì)中的形式給藥。治療后，沒(méi)有檢測(cè)到BCC病 灶的痕跡，對(duì)照皮膚則完全不受影響，因?yàn)椴淮嬖诘鞍装悬c(diǎn)。
已知通常對(duì)患者的應(yīng)用將涉及人源單克隆抗體(如hercepUn) 的生產(chǎn)，以便內(nèi)部癌癥能以與局部給藥相同的功效得到治療。所有表 達(dá)在細(xì)胞如淋巴細(xì)胞表面的正常功能性P2X7需要存在該抗體以保持 不受影響從而避免副效應(yīng)。因此抗體需只結(jié)合表達(dá)于試圖但不能開(kāi)始 凋亡的細(xì)胞表面上的蛋白。故所有靶向的細(xì)胞只是那些試圖通過(guò)程序 性細(xì)胞死亡而殺死自身的細(xì)胞，包括癌細(xì)胞。這些細(xì)胞特別是癌細(xì)胞 上的P2X,受體必需處于一種非功能性或ATP-耗盡的狀態(tài)。主動(dòng)免疫
主動(dòng)免疫可用于治療的目的。這種情況中，人或其它哺乳動(dòng)物需 要針對(duì)特定的表位進(jìn)行免疫接種，所述表位處于模擬只被細(xì)胞表面的
非功能性(ATP-耗盡的)形狀的受體采取的構(gòu)象。應(yīng)當(dāng)避免包括存在 于功能性受體的表位形狀部分暴露的構(gòu)象靈活性。例如，表位 Gly200 -Thr215的順式構(gòu)型必需在經(jīng)合適的方法使用之前固定。證 明這個(gè)觀念比較合理的另一證據(jù)是觀察到大量用來(lái)產(chǎn)生抗體的動(dòng)物 (包括小鼠、兔子和羊)并沒(méi)有受到免疫損害。這些動(dòng)物沒(méi)有一種曾 經(jīng)產(chǎn)生過(guò)任何腫瘤。 工業(yè)應(yīng)用
本發(fā)明的所有方面可應(yīng)用于人和獸類醫(yī)藥和健康領(lǐng)域，具有能早 期和準(zhǔn)確診斷疾病和有效治療的可能性，在許多情況中，與現(xiàn)有技術(shù) 中可獲得的技術(shù)相比，其侵入性或創(chuàng)傷性小得多。本說(shuō)明書(shū)還包括以下內(nèi)容
1、 一種用于檢測(cè)疾病或者病情的探針，該探針適用于區(qū)別功能 性P2X7受體和非功能性P2X,受體。
2、 項(xiàng)目1的探針，其中所述探針適用于通過(guò)檢測(cè)同ATP與受體 的結(jié)合相關(guān)的變化來(lái)區(qū)別功能性P2X,受體和非功能性P2X，受體。
3、 項(xiàng)目1的探針，其中所述探針適用于通過(guò)檢測(cè)P2X,受體中孔 形成所必需的一種或多種蛋白質(zhì)結(jié)合方面的變化來(lái)區(qū)別功能性P2X7 受體和非功能性P2X,受體。
4、 項(xiàng)目3的探針，其中所述探針適用于通過(guò)檢測(cè)在沒(méi)有結(jié)合的 ATP時(shí)暴露的受體的一個(gè)或多個(gè)部分來(lái)區(qū)別功能性P2X7受體和非功能 性P2X7受體。
5、 項(xiàng)目4的探針，其中所迷部分包括P2X7單體。
6、 項(xiàng)目1到5中任一項(xiàng)的探針，它是天然的或者是人造的探針。
7、 項(xiàng)目1到5任一項(xiàng)的探針，其中所述疾病或病情選自下組 前列腺癌、乳腺癌、皮膚癌、肺癌、宮頸癌、子宮癌、胃癌、食管 癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和陰道癌，其它上皮細(xì)胞癌，惡性淋巴瘤，其它 血液癌癥，腸道易激綜合癥和病毒或者其它病原生物體的感染。
8、 項(xiàng)目7的探針，其中所述抗體針對(duì)的是每一受體位于鄰近 ATP結(jié)合位點(diǎn)的胞外域內(nèi)的表位。
9、 項(xiàng)目1到5任一項(xiàng)的探針，其中所述受體是哺乳動(dòng)物的P2X7 受體，所述探針適用于區(qū)別功能性受體和非功能性受體，該功能性受 體具有其中pro210位于反式構(gòu)象的序列；該非功能性受體具有其中 Pro210位于順式構(gòu)象的序列。
10、 項(xiàng)目1到5任一項(xiàng)的探針，其中所迷受體是哺乳動(dòng)物P2X7 受體，所述探針適用于區(qū)別功能性受體和非功能性受體，該功能性受 體具有其中proi99位于反式構(gòu)象的序列；該非功能性受體具有其中 Pro199位于順式構(gòu)象的序列。
11、 項(xiàng)目9的探針，其中所述探針是或者包含一種抗體，該抗體
17是針對(duì)P2X7受體中從Gly200延伸到Thr215的表位序列產(chǎn)生的。
12、 項(xiàng)目1到11任一項(xiàng)的探針，其中所述疾病或病情選自下 組前列腺癌、乳腺癌、皮膚癌、肺癌、宮頸癌、子宮癌、胃癌、食 管癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和陰道癌，其它上皮細(xì)胞癌，惡性淋巴瘤，其 它血液癌癥，腸道易激綜合癥和病毒或者其它病原生物體的感染。
13、 項(xiàng)目12的探針，其中所述病毒或生物體是HIV或結(jié)核分枝 桿菌(Mycobacterium tuberculosis)。
14、 項(xiàng)目7的探針，其中所述病情為腸道易激綜合癥，所述抗體 也能夠檢測(cè)P2X7受體中不受功能狀態(tài)改變的其它區(qū)域。
15、 項(xiàng)目7或14的探針，其中所述病情為腸道易激綜合癥，所 述抗體與能檢測(cè)總P2X7表達(dá)的二抗結(jié)合使用。
16、 一種用于檢測(cè)疾病或者病情的方法，該方法包括以下步驟
1) 用項(xiàng)目1到10中任何一項(xiàng)所迷探針區(qū)別功能性P2X7受體和非 功能性P2X7受體；
2) 提供受體表達(dá)譜圖，和
3) 比較該受體表達(dá)圖譜與正常譜圖。
17、 項(xiàng)目16的方法，其中所述受體表達(dá)譜圖是非功能性受體的 表達(dá)譜圖。
18、 項(xiàng)目16的方法，其中所迷探針適用于通過(guò)檢測(cè)同ATP與受 體的結(jié)合相關(guān)的變化來(lái)區(qū)別功能性P2X,受體和非功能性P2X7受體。
19、 項(xiàng)目16的方法，其中所述探針適用于通過(guò)檢測(cè)PM,受體上 孔形成所必需的一種或多種蛋白質(zhì)結(jié)合方面的變化來(lái)區(qū)別功能性P2X7
受體和非功能性P2X7受體。
20、 項(xiàng)目16的方法，其中所迷探針適用于通過(guò)檢測(cè)所述受體在 沒(méi)有結(jié)合的ATP時(shí)暴露的一個(gè)或多個(gè)部分來(lái)區(qū)別功能性PH 受體和 非功能性P2X7受體。
21、 項(xiàng)目16的方法，其中所述部分包括PH7單體。
22、 項(xiàng)目16到21任一項(xiàng)的方法，其中所述受體表達(dá)譜圖是由原 位成像技術(shù)提供的。23、 項(xiàng)目16到21中任一項(xiàng)的方法，其中所述受體表達(dá)譜圖是由 顯微術(shù)、共聚焦顯微術(shù)或熒光激活細(xì)胞分選技術(shù)提供的。
24、 項(xiàng)目1到15中任何一項(xiàng)所述探針在檢測(cè)疾病或病情中的應(yīng)用。
25、 一種與項(xiàng)目1到15中任何一項(xiàng)所述探針復(fù)合的分離的細(xì)胞 或組織樣品。
26、 一種診斷腸道易激綜合癥的方法，該方法包括檢測(cè)細(xì)胞和/ 或組織的P2X7表達(dá)i昝圖，和將該謙圖與正常細(xì)胞和/或組織的預(yù)先測(cè) 定的表達(dá)譜圖相比較。
27、 項(xiàng)目26的方法，其中P2X7表達(dá)讒圖的檢測(cè)包括一種或多種 抗體的應(yīng)用。
28、 一種或多種抗體在診斷腸道易激綜合癥中的應(yīng)用。
29、 一種治療腸道易激綜合癥的方法，該方法包括用適用于恢復(fù) P2X7受體功能的組合物進(jìn)行給藥。
30、 一種用于治療或預(yù)防疾病或病情的抗體，該抗體適用于區(qū)別 功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體，且只與非功能性受體結(jié)合。
31、 項(xiàng)目30的抗體，其中所述抗體適用于通過(guò)檢測(cè)同ATP與受 體的結(jié)合相關(guān)的變化來(lái)區(qū)別功能性P2X7受體和非功能性P2X,受體。
32、 項(xiàng)目30的抗體，其中所述抗體適用于通過(guò)檢測(cè)P2X7受體上 孔形成所必需的一種或多種蛋白質(zhì)結(jié)合方面的變化來(lái)區(qū)別功能性P2X7 受體和非功能性P2X7受體。
33、 項(xiàng)目30的抗體，其中所述抗體適用于通過(guò)檢測(cè)受體中在沒(méi) 有結(jié)合的ATP時(shí)暴露的一個(gè)或多個(gè)部分來(lái)區(qū)別功能性P2X7受體和非 功能P2X;受體。
34、 項(xiàng)目30的抗體，其中所述部分包括P2X7單體。
35、 項(xiàng)目30到34中任何一項(xiàng)所述的抗體，它是多克隆的，單克 隆的，重組的，人源化抗體或者是它們的合適片段。
36、 項(xiàng)目30到34中任何一項(xiàng)所述的抗體，其中所述受體是哺乳 動(dòng)物P2X7受體，所述抗體適用于區(qū)別功能性受體和非功能性受體，該功能性受體具有其中Pro210位于反式構(gòu)象的序列；該非功能性受 體具有其中Pro210位于順式構(gòu)象的序列。
37、 項(xiàng)目36的抗體，該抗體是針對(duì)P2X7受體的從Gly200延伸 到Thr215的表位序列產(chǎn)生的。
38、 項(xiàng)目30到34中任何一項(xiàng)所述的抗體，其中所述受體是哺乳 動(dòng)物P2X,受體，所述抗體適用于區(qū)別功能性受體和非功能性受體， 該功能性受體具有其中Pro199位于反式構(gòu)象的序列；該非功能性受 體具有其中Prol99位于順式構(gòu)象的序列。
39、 項(xiàng)目30到37中任何一項(xiàng)所述的抗體，其中所述疾病或病情 選自下組前列腺癌、乳腺癌、皮膚癌、肺癌、宮頸癌、子宮癌、胃 癌、食管癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和陰道癌，其它上皮細(xì)胞癌，惡性淋巴 瘤，其它血液癌癥，腸道易激綜合癥和病毒或者其它病原生物體的感 染。
40、 項(xiàng)目39的抗體，其中所述病毒或生物體是HIV或結(jié)核分枝 桿菌。
41、 一種適于引起項(xiàng)目30到40中任何一項(xiàng)所述抗體產(chǎn)生的表位。
42、 項(xiàng)目41的表位，該表位附著了 C末端Cys殘基，該Cys殘 基通過(guò)化學(xué)交聯(lián)劑馬來(lái)酰亞胺己?；?N-羥基琥珀酰亞胺(MCS)交聯(lián) 了白喉毒素，從而被連接的表位肽采取的構(gòu)象采取穩(wěn)定的順式脯氨酸 構(gòu)型。
43、 項(xiàng)目30到40中任何一項(xiàng)所述的抗體作為治療載體用于治療 患者疾病或者病情以調(diào)節(jié)程序性細(xì)胞死亡的應(yīng)用，該抗體通過(guò)靶向于 表達(dá)在細(xì)胞表面上的異?；蛘叻枪δ苄訮M7受體，而使表達(dá)正常
(功能性)受體的所有細(xì)胞不受影響來(lái)起作用。
44、 項(xiàng)目41或42的表位在引起項(xiàng)目30到40中任何一項(xiàng)所述抗 體的產(chǎn)生中的應(yīng)用。
45、 一種用于治療或預(yù)防患者疾病或病情的藥物組合物，該組合 物包含藥學(xué)有效量的項(xiàng)目30到40中任何一項(xiàng)所限定的抗體，或者能
20產(chǎn)生這種量的表位，它們能調(diào)節(jié)細(xì)胞表面上表達(dá)有異常或者非功能性
P2^受體的細(xì)胞的程序性細(xì)胞死亡，
46、 一種治療或預(yù)防患者的疾病或病情的制劑，該制劑包含一種 或多種物質(zhì)，所述物質(zhì)適用于調(diào)節(jié)能控制向患者細(xì)胞或組織中的P2X7 受體供給ATP的ATPase的表達(dá)。
47、 一種治療或預(yù)防患者疾病或病情的方法，該方法包括對(duì)患者 施用包含一種或多種物質(zhì)的制劑這一步驟，所述物質(zhì)適用于調(diào)節(jié)能控 制向患者細(xì)胞或組織中的P2X7受體供給ATP的ATPase的表達(dá)。
48、 項(xiàng)目46的制劑，其中所述疾病或病情選自下組前列腺 癌、乳腺癌、皮膚癌、肺癌、宮頸癌、子宮癌、胃癌、食管癌、膀胱 癌、結(jié)腸癌和陰道癌，其它上皮細(xì)胞癌，惡性淋巴瘤，其它血液癌 癥，腸道易激綜合癥和病毒或者其它病原生物體的感染。
49、 項(xiàng)目47的方法，其中所述疾病或病情選自下組前列腺 癌、乳腺癌、皮膚癌、肺癌、宮頸癌、子宮癌、胃癌、食管癌、膀胱 癌、結(jié)腸癌和陰道癌，其它上皮細(xì)胞癌，惡性淋巴瘤，其它血液癌 癥，腸道易激綜合癥和病毒或者其它病原生物體的感染。
權(quán)利要求
1.結(jié)合具有SEQ ID NO1所示氨基酸序列、且其中Pro210處于順式構(gòu)象的P2X7受體的胞外域的抗體，且其中所述抗體不結(jié)合Pro210位于反式構(gòu)象的具有SEQ ID NO1所示氨基酸序列的P2X7受體的胞外域。
2. 權(quán)利要求l的抗體，其中所述抗體結(jié)合包括SEQ ID NO: l的 Pro210的P2X7受體的表位。
3. 權(quán)利要求1或2的抗體，其中所述抗體結(jié)合包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列Gly200 — Thr215的表位。
4. 以上權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體選自多克隆抗 體、單克隆抗體、重組抗體、人源化抗體、人抗體和抗體片段。
5. 用于產(chǎn)生以上權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體的肽，其中所述肽包 含SEQ ID NO: 1的氨基酸片段，其特征在于，所述肽包括位于順式 構(gòu)象的Pro210。
6. 權(quán)利要求5的肽，其中所述氨基酸片段包含SEQ ID NO: l的 Gly200 -Thr215。
7. 權(quán)利要求l-4中任一項(xiàng)的抗體，用于檢測(cè)疾病或病情。
8. 權(quán)利要求l-4中任一項(xiàng)的抗體在制備用于檢測(cè)癌前病變的藥 物中的用途。
9. 權(quán)利要求1 一 4中任一項(xiàng)的抗體在制備用于檢測(cè)上皮細(xì)胞癌的 藥物中的用途。
10. 權(quán)利要求10的用途，其中所述上皮細(xì)胞癌選自前列腺癌、 乳腺癌、皮膚癌、肺癌、宮頸癌、子宮癌、胃癌、食管癌、膀胱癌、 結(jié)腸癌和陰道癌。
11. 權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的抗體在制備用于檢測(cè)血液癌癥的 藥物中的用途。
12. 權(quán)利要求ll的用途，其中所述血液癌癥是惡性淋巴瘤。
13. 權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的抗體在制備用于檢測(cè)腸道易激綜合征的藥物中的用途。
14. 權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的抗體在制備用于檢測(cè)HIV或結(jié)核 分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)感染的藥物中的用途。
15. 權(quán)利要求1 - 4中任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求5或6的肽，用 于治療或預(yù)防疾病或病情。
16. 權(quán)利要求1 - 4中任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求5或6的肽在制 備用于治療或預(yù)防癌前病變的藥物中的用途。
17. 權(quán)利要求1 - 4中任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求5或6的肽在制 備用于治療或預(yù)防上皮細(xì)胞癌的藥物中的用途。
18. 權(quán)利要求17的用途，其中所述上皮細(xì)胞癌選自前列腺癌、 乳腺癌、皮膚癌、肺癌、宮頸癌、子宮癌、胃癌、食管癌、膀胱癌、 結(jié)腸癌和陰道癌。
19. 權(quán)利要求1 - 4中任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求5或6的肽在制 備用于治療或預(yù)防血液癌癥的藥物中的用途。
20. 權(quán)利要求19的用途，其中所述血液癌癥是惡性淋巴瘤。
21. 權(quán)利要求1 - 4中任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求5或6的肽在制備用于治療或預(yù)防腸道易激綜合征的藥物中的用途。
22. 權(quán)利要求1 - 4中任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求5或6的肽在制 備用于治療或預(yù)防HIV或結(jié)核分枝桿菌感染的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及了大范圍的疾病和病情，包括癌癥。本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)這種疾病或病情的探針。該探針能區(qū)別功能性P2X₇受體和非功能性P2X₇受體。該探針可通過(guò)多種途徑實(shí)現(xiàn)這種功能，其中之一是檢測(cè)同ATP與受體的結(jié)合相關(guān)的變化。本發(fā)明還提供了用該探針檢測(cè)疾病或病情的方法。本發(fā)明擴(kuò)展到用抗體或能產(chǎn)生該抗體的表位對(duì)疾病或病情進(jìn)行治療，該抗體能區(qū)別功能性P2X₇受體和非功能性P2X₇受體，并與非功能性受體結(jié)合。本發(fā)明還包括治療方法，藥物組合物以及探針和抗體的應(yīng)用。
文檔編號(hào)G01N33/53GK101555283SQ20091013280
公開(kāi)日2009年10月14日 申請(qǐng)日期2002年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月17日
發(fā)明者A·基得利-拜爾德, J·A·巴登 申請(qǐng)人:因特里特控股有限公司