專利名稱：一種血細(xì)胞染液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及染料領(lǐng)域，具體涉及一種血細(xì)胞染液。
背景技術(shù)：
在疾病的診斷過程中，經(jīng)常需要觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，識別各種細(xì) 胞及其異常變化，常需要對血涂片進(jìn)行染色，細(xì)胞的染色過程既有物 理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同， 對各種染料的親和力也不一樣。目前常用瑞氏染料進(jìn)行瑞氏染色。
用瑞氏染料液染色后，在同一血涂片上，可以看到各種不同的顏 色，例如血紅蛋白，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)果，
染粉紅色；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天 青結(jié)合，染紫藍(lán)色；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染 淡紫色。
瑞氏染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞曱藍(lán)組成的復(fù)合染料。 亞甲藍(lán)為四曱基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)，通常為氯鹽， 即氯化美藍(lán)。伊紅通常為鈉鹽，伊紅和美藍(lán)混合后，產(chǎn)生一種難溶性 膠體伊紅美藍(lán)中性沉淀。
瑞氏染料對氫離子濃度是十分敏感的，據(jù)觀察pH值的改變，可使 蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新離解，由于細(xì)胞中各種蛋白質(zhì)均為兩 性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液pH而定。對一蛋白質(zhì)而言，如環(huán)境pfKpI(蛋 白質(zhì)的等電點(diǎn))，則該蛋白質(zhì)帶正電荷，即在酸性環(huán)境中正電荷增多. 易與酸性伊紅結(jié)合，染色偏紅；相反，則易與美藍(lán)結(jié)合，染色偏藍(lán)。 故緩沖液須保持一定的pH使染色穩(wěn)定，要求pH —般在6. 4-6. 8,偏堿性染料可與緩沖液中酸基起中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的堿
基起中和作用，使pH恒定。
瑞氏染料配制的過程是先稱干燥的瑞氏染料經(jīng)多次研磨至細(xì)粉 末，加曱醇研磨呈一面鏡光亮，靜置后，將上層液體倒入清潔儲存瓶 內(nèi)，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就
越好， 一般需儲存3個(gè)月以上。
瑞氏染料是臨床細(xì)胞學(xué)分析中最基本和常用的染料，在臨床實(shí)驗(yàn) 室細(xì)胞學(xué)尤其是骨髓細(xì)胞學(xué)的研究中起到舉足輕重的作用，因其著色 效果佳，操作方便等特點(diǎn)，在臨床實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用，且用量很大。
瑞氏染料的配制需經(jīng)過多次研磨、稀釋和沖洗等多種工序，而且
要用到大量曱醇，曱醇有毒，服入IO毫升能使雙目失明，30毫升則 能致死。當(dāng)廢舊染液排出后，必將嚴(yán)重污染環(huán)境，造成社會危害。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有的瑞氏染料需提前配制且用量大、消耗快的缺陷， 提供一種即配即用、且可重復(fù)使用的血細(xì)胞染液。
為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案 一種血細(xì)胞染液，包括
A液:伊紅l-3g/L，磷酸二氫鉀10-15g/L，磷酸氫二鈉8-12g/L, 石石友酸10-20 ml/L;
B液亞甲藍(lán)l-3g/L，磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉9-13 g/L， 天青l(xiāng)-4g/L,高錳酸鉀2-4g/L。
作為優(yōu)選，本發(fā)明所述血細(xì)胞染液的A液組成為伊紅2g/L，磷 酸二氫鉀12-13g/L,磷酸氫二鈉10g/L,石碳酸20 ml/L;B液亞甲藍(lán)1. 6g/L，磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉10 g/L, 天青2g/L，高錳酸鉀2. 4g/L。
更優(yōu)選的，本發(fā)明所述血細(xì)胞染液的組成為
A液伊紅2g/L，磷酸二氫鉀13g/L,磷酸氫二鈉10g/L,石碳 酸20 ml/L;
B液亞曱藍(lán)1.6g/L，磷酸二氫鉀13g/L，磷酸氫二鈉10 g/L， 天青l(xiāng)g/L,高錳酸鉀2. 4g/L。
本發(fā)明所述血細(xì)胞染液的使用方法如下 (1)取干燥血涂片浸入A液中靜置10-20秒鐘，水洗、吸干； (2 )將步驟(1)的血涂片浸入所述B液中，靜置2-3分鐘，水洗、 吸干備鏡檢。
本發(fā)明所述血細(xì)胞染液染色原理與瑞氏染液相同，但加強(qiáng)了天青 的作用。其對單核細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞 的染色結(jié)果分別如圖1、圖3、圖5、圖7所示，其對各種類型的血細(xì) 胞的染色特點(diǎn)如下
紅細(xì)胞染色后呈淡灰藍(lán)色，中央有相當(dāng)于細(xì)胞直徑1/3-2/5的淡 染區(qū)；
血小板為圓形或不規(guī)則形，呈淡紫紅色，內(nèi)含細(xì)小的嗜天青顆粒； 白細(xì)胞核著深紫色，程度適中，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)和色澤清晰艷麗，對
核結(jié)構(gòu)的識別較佳，對胞漿著色偏酸，色澤偏紅，對細(xì)胞漿內(nèi)顆粒特
別是嗜天青顆粒及嗜中性顆粒著色較差。
以上特點(diǎn)與瑞氏染液對血細(xì)胞染色特點(diǎn)一致，且效果相當(dāng)。 本發(fā)明所述染料與現(xiàn)有的瑞氏染料相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)
1、 配制步驟簡單，即配即用；
2、 本發(fā)明所述染料的A液和B液均可重復(fù)使用，節(jié)省資源；3、 無需用到有害物質(zhì)甲醇，減少污染；
4、 染色效果與瑞氏染液相當(dāng)，染色時(shí)間大大縮短，僅需2-3分鐘， 可很好地滿足臨床對于血液檢驗(yàn)報(bào)告及時(shí)性的需要。


圖1箭頭示用本發(fā)明所述血細(xì)胞染液染色的單核細(xì)胞；
圖2箭頭示瑞氏染料染色的單核細(xì)胞；
圖3箭頭示用本發(fā)明所述血細(xì)胞染液染色的紅細(xì)胞和血小板；
圖4箭頭示瑞氏染料染色的紅細(xì)胞和血小板；
圖5箭頭示用本發(fā)明所述血細(xì)胞染液染色的淋巴細(xì)胞；
圖6箭頭示用瑞氏染料染色的淋巴細(xì)胞；
圖7箭頭示用本發(fā)明所述血細(xì)胞染液染色的嗜酸性粒細(xì)胞；
圖8箭頭示用瑞氏染料染色的嗜酸性粒細(xì)胞。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明
實(shí)施例1:本發(fā)明所述血細(xì)胞染液的配制
準(zhǔn)確稱取伊紅0.5g，磷酸二氬鉀5g，磷酸氫二鈉4g,石碳酸5 ml， 加水至500ml，即配置為A液。
準(zhǔn)確稱取亞曱藍(lán)0.5g，磷酸二氫鉀6g，磷酸氫二鈉4.5g,天青0.5g, 高錳酸鉀1.0 g,加水至500ml，即配制為B液。
實(shí)施例2:本發(fā)明所述血細(xì)胞染液的配制
準(zhǔn)確稱取伊紅1.5g,磷酸二氫鉀7.5g,磷酸氫二鈉6g,石碳酸10ml,加水至500ml,即配置為A液。
準(zhǔn)確稱取亞曱藍(lán)1.5g,磷酸二氫鉀6.5g,磷酸氫二鈉6.5g,天青 2g,高錳酸鉀2.0g,加水至500ml，即配制為B液。
實(shí)施例3:本發(fā)明所述染液的染色方法
(1)取自然干燥的待檢血涂片，浸入實(shí)施例1或?qū)嵤├?制備的A 液中靜置10秒鐘，水洗、吸干；此步驟中用過的A液可重復(fù)使用。
(2 )把步驟(1)的血涂片浸入實(shí)施例1或?qū)嵤├?制備的B液中， 靜置2分鐘，水洗、吸干，此步驟中用過的B液可重復(fù)使用。
(3)血涂片鏡檢。
實(shí)施例4:本發(fā)明所述血細(xì)胞染液的配制
準(zhǔn)確稱取伊紅lg,磷酸二氫鉀6.5g,磷酸氫二鈉5g,石碳酸10 ml， 加水至500ml,即配置為A液。
準(zhǔn)確稱取亞甲藍(lán)0.8g,磷酸二氫鉀6.5g，磷酸氫二鈉5g，天青0.5g， 高錳酸鉀1.2 g,加水至500ml,即配制為B液。
實(shí)施例5:本發(fā)明所述染液與瑞氏染液的染色效果比4交
取同一批制作的血涂片，分別用實(shí)施例1、實(shí)施例2或?qū)嵤├? 制備的血細(xì)胞染液和市售瑞氏染料進(jìn)行染色。 瑞氏染色法步驟如下 (1)取自然干燥的血涂片，滴加瑞氏染液染1分鐘，固定標(biāo)本； (2 )加等量PH6. 4的磷酸鹽緩沖液輕輕晃動玻片，混勻靜置l5分鐘; (3)水洗、吸干、鏡檢。
本發(fā)明所述染液的染色方法參照實(shí)施例3。本發(fā)明所述血細(xì)胞染液的對單核細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板、淋巴細(xì) 胞、嗜酸性粒細(xì)胞的染色結(jié)果分別如圖1、圖3、圖5、圖7所示，瑞 氏染料對單核細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞的染
色結(jié)果分別如圖2、圖4、圖6、圖8所示。 效果大致相當(dāng)
紅細(xì)胞染色后呈淡灰藍(lán)色，中央有相當(dāng)于細(xì)胞直徑1/3-2/5的淡 染區(qū)；
血小板為圓形或不規(guī)則形，呈淡紫紅色，內(nèi)含細(xì)小的嗜天青顆粒； 白細(xì)胞核著深紫色，程度適中，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)和色澤清晰艷麗，對核
結(jié)構(gòu)的識別較佳，對胞漿著色偏酸，色澤偏紅，對細(xì)胞漿內(nèi)顆粒特別是
嗜天青顆粒及嗜中性顆粒著色較差。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出 若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1、一種血細(xì)胞染液，包括A液伊紅1-3g/L，磷酸二氫鉀10-15g/L，磷酸氫二鈉8-12g/L，石碳酸10-20ml/L；B液亞甲藍(lán)1-3g/L，磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉9-13g/L，天青1-4g/L，高錳酸鉀2-4g/L。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血細(xì)胞染液，其特征在于，A液伊紅2g/L,磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉10g/L，石 碳酸20 ml/L;B液亞甲藍(lán)1. 6g/L，磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉10 g/L, 天青2g/L,高錳酸鉀2. 4g/L。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血細(xì)胞染液，其特征在于，A液伊紅2g/L,磷酸二氫鉀13g/L,磷酸氫二鈉10g/L，石碳 酸20 ml/L;B液亞曱藍(lán)1.6g/L,磷酸二氫鉀13g/L,磷酸氫二鈉10 g/L, 天青l(xiāng)g/L,高錳酸鉀2. 4g/L。
4、 一種血細(xì)胞染色方法，包含以下步驟(1 )取干燥血涂片浸入權(quán)利要求1所述A液中靜置10-30秒鐘，水 洗、吸干；(2 )將血涂片浸入權(quán)利要求1所述B液中，靜置2-3分鐘，水洗、 吸干備鏡檢。
全文摘要
本發(fā)明涉及染料領(lǐng)域，公開了一種血細(xì)胞染液，包括A液和B液，A液的組成為伊紅1-3g/L，磷酸二氫鉀10-15g/L，磷酸氫二鈉8-12g/L，石碳酸10-20ml/L；B液的組成為亞甲藍(lán)1-3g/L，磷酸二氫鉀12-13g/L，磷酸氫二鈉9-13g/L，天青1-4g/L，高錳酸鉀2-4g/L。本發(fā)明所述血細(xì)胞染液染色效果與瑞氏染液相當(dāng)，即配即用，同時(shí)縮短了染色時(shí)間，且可重復(fù)使用，節(jié)省資源，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景。
文檔編號G01N1/30GK101587039SQ20091014021
公開日2009年11月25日 申請日期2009年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月7日
發(fā)明者杜春蘭, 蒲曉允, 衡 閻, 項(xiàng)貴明 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院